不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响浅析

快速脱钙液在骨组织脱钙中的应用效果-病理学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——含有骨质的肿瘤，钙化组织及骨髓穿刺组织都很坚硬，要想制成几微米的漂亮HE 切片是很困难的。

脱钙液是决定骨骼、牙齿、病理性钙化或骨化组织切片质量、染色效果的关键技术之一。

目前使用的脱钙液大多数是无机强酸类制剂，虽然脱钙效果好，但造成组织形态，特别是细胞结构的破坏。

因此，在本实验中我们选择了传统的脱钙液和快速脱钙液两种脱钙液进行比较，进而寻找一种更适合于骨组织脱钙的方法。

研究中发现快速脱钙液在不破坏组织结构及影响染色的同时，它可促进脱钙并加快脱钙速度，防止纤维性组织过度膨胀，并且保证了切片的质量，现报道如下。

1 材料与方法1．1 材料收集内蒙古医科大学附属医院2009 －2011 年手术切除的骨肿瘤、病变骨及骨髓穿刺病人标本共40 例。

根据标本的不同将骨组织取成体积为1．5cm 1．5 cm 0．5 cm 的薄片( 骨髓一般直径均为0．1 cm) ，放入10% 中性福尔马林固定24 h，用于脱钙实验。

1．2 普通脱钙液及脱钙方法与步骤普通脱钙液是5%的硝酸，即5 ml 硝酸加入95ml 蒸馏水配制而成。

具体脱钙步骤: ①先把大块骨组织标本切成小段，小块骨组织标本不用改刀，然后放入10%中性福尔马林中固定24 h 左右后再进行脱钙。

②将待脱钙的标本放入5% 硝酸脱钙液中，脱钙液不少于待脱钙标本总体积的10 倍。

③室温下进行脱钙: 骨髓穿刺标本需30 －60 min，肋骨、指趾骨需3 －6 d，皮质骨需要5 －7 d。

④脱钙后的组织经流水冲洗后进行取材、脱水、透明、常规石蜡包埋、制片。

1．3 快速脱钙液及脱钙方法与步骤快速脱钙液是由36% －38% 盐酸8 ml、冰醋酸5 ml、水杨酸10 g 、蒸馏水87 ml 混合而成。

用微波炉进行微波时，微波辐射可加速组织内部分子运动，加快脱钙速度，因标本在酸性溶液中滞留的时间短，所以对组织的损伤小。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响作者：张大贵等来源：《中国现代医生》2012年第24期[摘要] 目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。

方法选择12例骨组织，随机分为3组。

A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。

结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。

PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。

结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。

但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。

硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

[关键词] 脱钙液；骨组织；免疫组化染色[中图分类号] R446.4+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701（2012）24—0101—03骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。

如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。

本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。

1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。

方法选择12例骨组织，随机分为3组。

A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。

结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。

PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。

结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。

但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。

硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。

如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。

本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。

1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。

③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。

文章编号：1000-5404（2009）23-2399-02短篇论著临床病理检验常用骨组织脱钙液效果的比较曹颖（第三军医大学西南医院病理学研究所，重庆400038）摘要：目的比较几种骨组织的脱钙溶液与脱钙方法的效果，获得快捷、简便、适用于临床病理检验的脱钙技术。

方法考察在常温、恒温、搅拌状态下，几种常用的脱钙液对猪干骨中段脱钙、染色效果。

结果40ħ恒温搅拌条件下，盐酸-氯化钠脱钙液（脱钙液Ⅰ）、高浓度盐酸-甲酸-氯化钠脱钙液（脱钙液Ⅳ）、低浓度盐酸-甲酸-氯化钠脱钙液（脱钙液Ⅶ）、Plank-Rycho 脱钙液（脱钙液Ⅸ），都具有脱钙时间短、组织损伤小、不影响染色效果。

结论恒温搅拌条件下，脱钙液Ⅰ是最适合于临床病理检验的脱钙溶液。

关键词：脱钙液；骨组织；临床病理中图法分类号：R446文献标识码：A脱钙是决定骨骼、牙齿、病理性钙化或骨化组织切片质量、染色效果的重要技术关键之一。

简单、便捷、快速、有效的骨组织脱钙方法，有利于保持骨组织结构和组织中的抗原物质，对于临床正确诊断具有重要的意义。

目前报道的脱钙液和脱钙方法比较多［1－8］，但尚无公认的理想方法［2］，为此我们拟在恒温搅拌条件下，对几种备受推崇的脱钙液进行实验比较，期望获得适合于临床病理检验的骨组织脱钙液组成与脱钙方法。

报告如下。

作者简介：曹颖，女，湖南省长沙市人，主管技师，主要从事临床病理技术方面的研究。

电话：（023）68765462，E-mail ：chenji63@ 收稿日期：2009-06-22；修回日期：2009-07-131材料与方法1.1材料取新鲜的猪干骨，手术刀去除软组织与骨膜，大量水漂洗，用骨锯切取干骨中段，获得组织体积为10mm ˑ5mm ˑ1.5mm 的骨块，在4%中性甲醛液内固定24h ，用于脱钙实验。

1.2脱钙液组成选取文献报道比较多的几种脱钙溶液，用于考察操作条件、脱钙溶液组成对骨组织的脱钙效果。

各种脱钙溶液的组成及配制如下：盐酸-氯化钠脱钙液（脱钙液Ⅰ）：5ml HCl +15g NaCl +H 2O 至100ml 。

大鼠关节组织硝酸＼EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较标签：大鼠关节组织;硝酸脱钙;EDTA脱钙;石蜡制片骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一。

它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的。

适用组织化学、免疫组化等技术的染色。

大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败。

现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10%硝酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色。

对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果。

1 材料与方法1.1 材料大鼠30只、出生10周,平均体质量400 g(购自中山大学动物实验)。

雌雄不限,随机分组。

在麻醉状态下经心脏注射生理盐水及1%多聚甲醛处死动物,取关节组织、标本置10%甲醛固定液中固定24 h。

10%的硝酸脱钙液。

EDTA脱钙液,微波炉。

1.2 方法10%硝酸脱钙液的配制及脱钙方法将1份的硝酸溶液加入到9份的蒸馏水中搅拌均匀即可。

将大鼠关节组织放入是组织体积20倍量的10%硝酸溶液中,浸泡16～18 h,浸泡中无需更换脱钙液,用针能刺入即可。

取出组织置流水中冲洗碱化2 h。

取材,入脱水机石蜡包埋、切片、染色。

1.3 EDTA脱钙液的配制及脱钙方法用PBS缓冲液(pH7.2)100 ml、加NaOH 搅拌溶解至饱合状态,再加入EDTA10 g溶解后用1 mol/L Hcl调节pH值至7.2,加甲醛15 ml即可。

把脱钙液装入小烧杯中,将大鼠关节组织放置其中,脱钙液需充足。

放入微波炉中调节微波功率50℃,微波照射50 s即可达到脱钙的目的。

取出无需流水冲洗、直接取材、入脱水机、石蜡包埋、切片、染色。

2 结果10%硝酸脱钙处理的大鼠关节组织切片组织结构尚完整,组织块也能顺利连续切片,镜下:细胞形态、结构尚清,HE着色较淡,有时细胞核仁及膜边界不太清晰,分界不清,对比度不强。

在特殊染色和免疫组化染色中,着色较困难,效果欠佳。

不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用作者：罗灿峤莫木琼钟觉民来源：《中国实用医药》2011年第19期【摘要】目的比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对HE染色的影响。

方法选取50例手术切除的新鲜骨标本，运用4种常用的脱钙液(14%硝酸、10%盐酸、20%甲盐酸和EDTA脱钙液)进行脱钙，比较其脱钙效果和对HE染色的影响。

结果不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别。

结论 14%硝酸脱钙能力最强，用时间最短，染色的效果最差；10%盐酸对骨组织的损伤小，HE染色的效果最好，但用时较长；20%甲盐酸脱钙能力和HE染色效果都介于10%盐酸和EDTA脱钙液之间；EDTA脱钙液脱钙用时最长, 对骨组织的损伤最小。

【关键词】脱钙液;HE染色;骨组织Comparison of the application of the different decalcifying solution in the bone tissueLUO Can-qiao, MO Mu-qiong, ZHONG Jue-min. Department of Pathology, The First Hospital Affiliated to Sun Yat-Seen University, Guangdong 510085, China【Abstract】 Objective To investigate the different ability of four different decalcifying solutions to decalcify and their influence of HE stain and immunohistochemistry. Methods 50 cases of fresh human bone example are selected. The bones had been decalcified with four kinds of decalcifying solution (including 14% nitric acid, 10% hydrochloric acid, 20% a hydrochloric acid and EDTA). Results Different decalcifying solutions had the different decalcified ability and the influence of HE stain and immunohistochemistry. Conclusion 14% nitric acid can decalcify strongly and rapidly. But its deficiency is the infection of HE coloration and immunohistochemistry. 10% hydrochloric acid doesn't destroy the tissue and has the best influence for HE stain. The effect of 20% a hydrochloric acid and HE stain between 10% hydrochloric acid and EDTA decalcifying acid. EDTA can decalcify for a long , have the minimum damage for bone tissue.【Key words】 Decalcifying solution; HE stain; Bone tissue骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成，骨基质内含大量无机盐，主要是羟磷灰石-磷酸钙和碳酸钙。

对比骨组织的表面脱钙法和常规脱钙法对免疫组化抗原的影响发布时间：2021-04-15T05:57:28.848Z 来源：《健康世界》2021年2期作者：鞠学萍[导读] 目的对比骨组织的表面脱钙法和常规脱钙法对免疫组化抗原的影响。

方法选取本院21例骨肿瘤患者标本开展本次研究，时间2019年01月-2020年01月，21例患者分别给予常规脱钙法（对照组）和表面脱钙法（观察组），比较两组对免疫组化抗原的影响。

结果观察组的骨松质脱钙时间、骨密质脱钙时间和光密度值均明显优于对照组（P＜0.05）；鞠学萍大庆市第四医院 163712摘要：目的对比骨组织的表面脱钙法和常规脱钙法对免疫组化抗原的影响。

方法选取本院21例骨肿瘤患者标本开展本次研究，时间2019年01月-2020年01月，21例患者分别给予常规脱钙法（对照组）和表面脱钙法（观察组），比较两组对免疫组化抗原的影响。

结果观察组的骨松质脱钙时间、骨密质脱钙时间和光密度值均明显优于对照组（P＜0.05）；与对照组的ki-67阳性率和Vimentin阳性率相比，观察组均明显偏高（P＜0.05）。

结论相对比于常规脱钙法来说，表面脱钙法更有利于保存免疫组化抗原，脱钙效果更理想，具有推广价值。

关键词：骨组织；表面脱钙法；免疫组化抗原 [Abstract] Objective To compare the effect of surface decalcification and conventional decalcification on immunohistochemical antigen of bone tissue.Methods 21 cases of bone tumor patients in our hospital were selected to carry out this study from January 2019 to January 2020.21 cases were given conventional decalcification method（control group）and surface decalcification method（observation group），and the influence of two groups on immunohistochemical antigen was compared.Results the cancellous decalcification time，dense decalcification time and optical density value of the observation group were significantly better than those of the control group（P < 0.05）；compared with the Ki-67 positive rate and vimentin positive rate of the control group，the observation group was significantly higher（P < 0.05）.Conclusion compared with the conventional decalcification method，the surface decalcification method is more conducive to the preservation of immunohistochemical antigen，and the decalcification effect is more ideal. [Key words] bone tissue；surface decalcification；immunohistochemical antigen骨组织是人体中存在的一种非常坚硬的结缔组织，基质中存在大量钙盐是骨组织存在的最突出特点【1】。

混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析目的比较不同脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对HE染色的影响。

方法选取16例大鼠胫骨标本，运用两种常用的脱钙液（混合脱钙液和EDTA 脱钙液）进行脱钙，比较其脱钙效果和对HE染色的影响。

结果两种脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别。

结论混合脱钙液时间最短，但切片和染色效果最差；EDTA脱钙液对骨组织损伤小，HE染色效果最好，但用时较长。

Abstract：Objective To compare the difference of different decalcifying fluid on bone decalcification ability，and to investigate its effect on HE staining.Methods 16 cases of rat tibia specimens，using two kinds of decalcifying fluid（mixture of decalcifying fluid and EDTA decalcifying fluid）were decalcified，compare the decalcification effect and the effects on HE staining.Results Two decalcification of bone tissue decalcification ability，HE staining effect has significant difference.Conclusion Mixed decalcifying fluid in the shortest time，but the sectioning and staining effect is the worst；EDTA decalcification of bone HE staining had the best effect，but with a longer time.Key words：Mixed decalcification solution；EDTA decalcification liquid；HE staining骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成。

比较四种脱钙法对人牙免疫组化染色抗原性的影响作者：陈洪伟刘英群温黎明冯晓杰李任来源：《中国美容医学》2012年第06期[摘要]目的：比较四种脱钙方法对人牙牙体组织免疫组化染色抗原活性的影响。

方法：40颗人牙随机分为四组，分别在微波、超声、微波-超声联合及常温下用10%乙二胺四乙酸二钠溶液(EDTA-2Na)脱钙。

应用SABC免疫组化染色技术检测Ⅰ型胶原蛋白、纤维粘连蛋白在各组牙体组织中的表达情况。

结果：在微波-超声联合组脱钙所需时间最短，且免疫组化染色效果最好﹙P＜0.05﹚；微波组脱钙时间较超声组略短，但二者免疫组化染色效果无显著差异（P ＞0.05）。

常温组所需脱钙时间最长且免疫组化染色效果最差。

结论：微波-超声联合法脱钙速度较快，免疫组化染色效果较好，是一种较为理想的脱钙方法。

[关键词]微波；超声；牙齿；脱钙方法；免疫组化[中图分类号]R783.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2012）06-0955-03牙体组织结构较为特殊，其硬组织中含有大量钙盐（洛氏硬度值达340）[1]，是全身最坚硬的组织，不易切片极易脱片，因此在病理制片过程中首先要脱去其中的钙盐再进行制片，而位于牙体硬组织中心的牙髓为柔软的结缔组织，在制片过程中易受挤压、牵拉而至变形、分离甚至脱落流失，脱钙不佳也会影响组织细胞染色效果或使组织抗原丢失[2]，从而影响对病变组织的病理诊断或科学研究工作。

因此合适的脱钙方法成为牙体组织制片，进行免疫组化染色实验首先要解决的难题。

本实验中对微波、超声、微波-超声联合脱钙法的脱钙效果，及不同脱钙方法对牙体组织免疫组化染色抗原的影响程度进行了初步检测，旨在寻找出更适合牙体组织免疫组化染色实验的脱钙方法。

1 材料和方法1.1 材料：收集因正畸拔除的健康人前磨牙40颗,患者年龄17～25岁,牙齿完好。

经生理盐水冲洗后,入4%多聚甲醛溶液固定24h。

1.2 仪器试剂：微光波炉（WG700TL20Ⅱ-k6,广东格兰仕集团有限公司）；KQ118型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Ⅰ型胶原蛋白抗体(武汉博士德公司)；纤维粘连蛋白抗体(武汉博士德公司)；SABC试剂盒(武汉博士德公司)。

三种不同脱钙液在骨组织石蜡切片中的应用比较杜洪;金荣【摘要】目的:比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力,优化骨组织石蜡切片的制作流程.方法:选取15例手术切除的新鲜骨标本,运用3种不同的脱钙液(Jenkins脱钙液、14％硝酸水溶液、14％硝酸甲醛生理盐水溶液)进行脱钙,记录脱钙时间,常规脱水、切片、HE染色,镜下观察,对比3种脱钙液对骨和骨髓组织常规病理切片质量和HE染色效果.结果:14％硝酸甲醛生理盐水溶液组脱钙能力最强,脱钙最均匀,耗时最短,既能有效完全除去骨皮质中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞的形态完好,切片质量和HE染色的效果最佳;14％硝酸水溶液组脱钙液,使骨组织疏松发泡,组织变黄,对组织的损伤大,脱钙不均匀,组织切片不完整,制片质量和HE的效果最差;Jenkins脱钙液组对组织的脱钙能力、损伤程度、制片质量和HE染色效果良好,14％硝酸甲醛生理盐水溶液组和14％硝酸水溶液组之间.结论:3种脱钙液对骨和骨髓组织都具有良好的脱钙能力,制片质量及HE染色效果比较,14％硝酸甲醛生理盐水溶液＞ Jenkins脱钙液＞14％硝酸水溶液;14％硝酸甲醛生理盐水溶液最适用于临床常规病理制片中骨和骨髓组织的脱钙.【期刊名称】《甘肃医药》【年(卷),期】2016(035)005【总页数】3页(P368-370)【关键词】骨组织;脱钙液;HE染色【作者】杜洪;金荣【作者单位】730050 甘肃兰州,甘肃省肿瘤医院病理科;730050 甘肃兰州,甘肃省肿瘤医院病理科【正文语种】中文骨组织是由骨细胞和骨基质组成的坚硬的结缔组织，骨基质富含以磷酸钙和碳酸钙为主的无机钙盐，二者的存在造成骨组织的硬度较大，不易切片且极易脱片，即便能够勉强制成切片，在蓝色钙盐背景下也难以看清细胞结构，对病理诊断工作造成很大的不便，因此在临床病理活检或实验性动物研究中必须要进行脱钙处理才能进行常规制片和观察［1］。

但是，如果骨组织脱钙过度又会严重影响组织细胞染色效果，或使组织抗原丢失，从而影响对病变组织的病理诊断或科学实验工作［2］。

技术方法两种组织脱钙法对免疫组织化学染色影响比较杜 娟,柳剑英,苏 静(北京大学基础医学院病理学系,北京 100191)[摘 要]目的:了解1%(体积分数)盐酸和10%(体积分数)硝酸脱钙液对多种抗原免疫组织化学染色效果的影响。

方法:选择伴有灶状钙化的软组织标本包括甲状腺乳头状癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和淋巴结各3例,骨组织标本包括活检和尸检病例共9例,将样本分为3组,一组分别用10%(体积分数)硝酸处理24、42和48h ,另一组分别用1%(体积分数)盐酸处理1、2和3h ,还有一组不用酸处理作为对照组,同时进行多种抗原免疫组织化学染色,其中乳腺癌组织作ER 、PR 和K -i 67染色,甲状腺癌组织作TT F -1染色,前列腺癌作34 E12和P504s 染色,结肠癌作AE1/AE3、P504s 和K -i 67染色,淋巴结作CD 3、CD 20和K -i 67染色,骨组织作CD3、CD 20、CD68、CD 235a 、M PO 、K -i 67、A E1/A E3和TTF-1染色。

结果:伴有钙化的软组织和骨组织内多种抗原免疫组织化学染色阳性程度均随酸处理时间的延长而有不同程度的下降,骨组织对酸处理的耐受力比软组织强;不同抗原对酸处理的敏感性不同,TTF-1和K -i 67最为敏感,ER 、CD3、和CD 20耐受性较好。

结论:大多数情况下,盐酸和硝酸处理都会降低组织免疫组织化学染色的敏感性,但是对不同抗原的影响程度不同。

大块骨组织可以采用10%(体积分数)硝酸脱钙,软组织比例较高的骨组织和骨髓活检组织尽可能使用1%(体积分数)盐酸脱钙。

[关键词]脱钙技术;盐酸;硝酸;免疫组织化学[中图分类号]R36-33 [文献标志码]A [文章编号]1671-167X (2011)02-0290-05do:i 10.3969/.j issn .1671-167X.2011.02.025Co m parison of t wo different tissue decalcification m ethods for i m m unohistoche m istryDU Juan ,L I U Ji an -y ing ,S U Ji ng(D epa rt m en t of Patho l ogy ,Peking U n i versity Schoo l of Basic M ed i ca l Sc i ences ,Be ijing 100191,Ch i na)ABSTRACTObjective :To i n vestigate t h e effects of 1%hydr och loric ac i d and 10%n itric ac i d on i m m u -nohistoche m ica l sta i n i n g for several antigens .M et hods :F ifteen cases o f foca lly ca lcified soft tum ors i n -c l u di n g three cases of t h yro i d papillary carc i n o m a ,three o f breast i n vasi v e ducta l carcino m a ,three of prostate cancer ,three of colon adenocarc i n co m a and t h ree o f nor m a l ly m ph nodes ,w ere selected i n th is study ,and so w ere n i n e cases of bone and bone m arro w tissue fr o m b i o psy and au topsy .T issue sa m ples w ere div i d ed i n to three groups .One group w as each soaked i n to 10%nitric acid for 24,42and 48h,another group w as each incubated i n 1%hydr och l o ric ac i d for 1,2and 3h .The o t h er g r oup w hich w as no t treated w ith ac i d w as regarded as contro.l Then i m munoh istoche m ical sta i n i n g w as conducted i n these sa m ples for an ti g ens as fo llo w s :ER,PR and K -i 67in breast invasive ducta l carc i n o m a ;TTF -1i n thyroid papillar y carci n o m a ;34 E12and P504s i n prostate cancer ;AE1/AE3,P504s and K -i 67i n co l o n ade -nocarcinco m a ;CD3,CD20and K-i 67i n ly m ph nodes ;CD3,CD20,CD68,CD235a ,MPO,K -i 67,AE1/AE3and TTF-1in bone tissue .R esults :A fter the tissues deca lcificated in bo th acid so l u ti o ns for so m e ti m e ,t h e numbers o f positi v e cells decreased and the i n tensity of i m m unosta i n i n g beca m e w eaker ,wh ich w as proportionate to ti m e .Bone tissue w as less i n fluenced than calc ified soft ti s sue .D ifferent antigens sho w ed d ifferent sensiti v ity to the sa m e ac i d treat m en.t TTF -1and K -i 67w ere the t w o m ost vu l n erable an -tigens a m ong t h e m;wh ile ER,CD3and CD20w ere the least influenced .The effects o f decalcifica ti o n on i m m unostai n i n g o f one antigen w ere the sa m e i n d ifferent tissues .Conc l u sion :I n m ost cases ,both hy -drochloric acid and n itric acid deca lcificati o n can lo w er the sensitivity o f i m munoh istoche m ical sta i n i n g ,but have different effects on different anti g ens .It is better to use 10%nitric aci d for decalc ification of relati v ely lar ge bone tissue and to use 1%hydrochloric ac i d for bone m arro w tissues and bone tissues con -ta i n i n g m uch m ore so ft tissue .KEY W ORDS Decalcification techn i q ue ;H ydrochloric acid ;N itric acid ;I m m unoh i s toche m istry基金项目:国家重点基础研究发展计划(973计划,2007CB815602-5)资助Supported by the N ati on al Basic Res earch P rogra m of Ch i n a (973Progra m,2007CB815602-5)C orrespond i ng au t hor s e -m ai,l li u ji anyi ng @b j m u 网络出版时间:2011-3-17 15 37 00 网络出版地址:htt p ://k.i net/k c m s /d etail/11.4691.R.20110317.1537.004.h t m l骨组织和钙化软组织内含有大量以磷酸钙和碳酸钙为主的无机钙盐,组织质地较硬,往往难以直接制片[1-4],即便能够勉强制成切片,在蓝色钙盐背景下也难以看清细胞结构,对病理诊断工作造成很大290 J OURNAL OF PEK I NG UN I VERSITY(H EALT H SC IENCES ) V o.l 43 No .2 Apr .2011的不便,因此这类组织需要脱钙处理后才能进行常规制片和观察。

组织脱钙名词解释一、组织脱钙的定义组织脱钙就是把硬组织（像骨头、牙齿这些）里面的钙盐去除掉的一个过程。

为啥要这么做呢？这是因为在进行一些病理检查或者组织学研究的时候，钙盐会影响切片制作还有染色等操作。

就好比你要研究一块石头里面的东西，但是石头太硬了，不好操作，就得先把那些让它变硬的东西去掉一些，这样才能更好地深入研究。

二、组织脱钙的常见方法1. 酸脱钙法这是最常用的方法。

比如说用硝酸、盐酸这些酸。

硝酸脱钙速度比较快，但是它对组织的损伤也比较大，就像一个急性子的人做事，虽然快但是可能会有点粗糙。

盐酸脱钙相对温和一些，不过脱钙的时间会长一点。

在使用酸脱钙的时候，要注意控制酸的浓度和脱钙的时间。

如果酸的浓度太高或者脱钙时间太长，就会把组织腐蚀得太厉害，就像把肉煮过头了一样，最后得到的组织就不适合做研究啦。

2. 螯合剂脱钙法像乙二胺四乙酸（EDTA）这种螯合剂就可以用来脱钙。

它的优点是对组织的损伤比较小，能够很好地保持组织的结构和抗原性。

不过呢，它的脱钙速度超级慢，就像乌龟爬行一样，可能需要几周甚至几个月的时间。

但是在一些对组织要求比较高，比如要做免疫组化研究的时候，这种方法就很有用。

三、组织脱钙后的处理脱钙完成后，不能就这么不管了。

得把组织进行充分的水洗，把脱钙液残留的东西都洗干净。

如果不洗干净，残留的酸或者螯合剂可能会对后续的染色等操作产生不良影响。

就像你洗碗，如果洗洁精没冲干净，下次吃饭的时候就会吃到洗洁精的味道，那可不好。

然后就可以按照常规的组织处理方法进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等操作，这样就能得到适合做切片和染色研究的组织样本了。

骨组织免疫组织化学染色特点及其质量控制
袁永辉
【期刊名称】《实验室研究与探索》
【年(卷),期】2008(027)004
【摘要】为了建立骨组织的制片与免疫组织化学染色的标准化实验方法,达到免疫组织化学检测的质控要求,详细介绍了骨组织的取材、固定、脱钙、切片、免疫组织化学和TUNEL染色及其质量控制环节.用此法制备的免疫组织化学切片具有阳性结果呈颗粒状的棕黄色,定位准确,对比明显,背景浅,组织结构与细胞轮廓完整、清晰,适合显微照相以及染色结果稳定可靠,特异性强、敏感性高.该方法可作为骨组织的制片与免疫组织化学的标准化实验方法应用.
【总页数】3页(P21-23)
【作者】袁永辉
【作者单位】华中科技大学,同济医学院附属同济医院病理研究所,湖北,武
汉,430030
【正文语种】中文
【中图分类】R322.7+1
【相关文献】
1.光波-微波-硝酸快速脱钙技术对骨组织免疫组织化学染色的影响 [J], 熊正文;李德炳;冯骥良;黄勇;苏红;胡海霞;李宏伟
2.大体骨组织免疫组织化学染色的比较 [J], 韩长伶;寇成方;邢志书
3.不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响 [J], 熊正文;李德炳;冯骥良;黄勇;李宏伟;苏红;胡海霞
4.不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响 [J], 熊正文;李德炳;冯骥良;黄勇;李宏伟;苏红;胡海霞
5.不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响浅析 [J], 朱淑玲;武彤彤;吴惠如;杨清绪
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微波辐射下不同种脱钙液对病理切片骨组织结构的影响黄爱民【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(036)003【总页数】1页(P499)【作者】黄爱民【作者单位】温州医学院附属第二医院病理科,浙江,温州,325027【正文语种】中文骨组织必须经过脱钙处理才能制作切片。

传统的脱钙方法脱钙效果好，但易引起组织结构的严重破坏，选择适当的脱钙液与骨组织的制片质量有密切关系。

本文作者选择4种不同脱钙液进行比较研究，现报道如下。

1 材料与方法1.1 标本与仪器选取本院手术切除活检标本36例，其中骨肉瘤6例，肋骨9例，胫骨9例，股骨18例，根据标本的不同处理为1.0 cm×1.0 cm×0.2 cm的薄片，微波炉为广东格兰仕集团生产的WD800ASL23K1。

1.2 脱钙液配制 A液：EDTA(北京化学试剂公司)10 g，PBS缓冲液(上海试剂四厂)100 mL,加NaOH搅拌溶解后，用1 mol·L-1HCl调pH 7.2～7.5，再加甲醛15 mL；B液：甲酸钠(天津福晨化学试剂厂)，甲醛10 mL,蒸馏水75 mL；C液：硝酸5 mL,甲醛10 mL,蒸馏水85 mL；D液：甲酸10 mL,硝酸3 mL,盐酸5 mL,冰酷酸2 mL,蒸馏水70 mL。

1.3 脱钙方法将上述标本分为4组，脱水后放入分别装有A、B、C、D液的平底烧杯内，表面加一层液体石蜡，以微波4档间歇脱钙，每次辐射1～2 min，然后移开室温冷却5 min，每隔1 h更换1次脱钙液，以大头针能轻轻刺进骨密质、脱钙液内无气泡产生为完成标准。

脱钙后的标本经流水冲洗后，再按常规石蜡制片方法处理。

2 结果2.1 对骨组织的影响脱钙后的骨组织对保持组织完整结构以A液最好，B液较好，对骨组织几乎无损害。

C液和D液对骨组织破坏严重，或结构不清，或出现部分软组织崩解。

2.2 脱钙时间不同的骨组织所需脱钙时间不同，A液为1 min×20次～24 h×7次，B液为1 min×6次～24 h×2次，C液为1 min×6次～24 h×1次，D液为1min×4次～24 h×1次。