骨组织脱钙液介绍
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快速脱钙液在骨组织脱钙中的应用效果-病理学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档,下载后可直接编辑使用亦可打印——含有骨质的肿瘤,钙化组织及骨髓穿刺组织都很坚硬,要想制成几微米的漂亮HE 切片是很困难的。
脱钙液是决定骨骼、牙齿、病理性钙化或骨化组织切片质量、染色效果的关键技术之一。
目前使用的脱钙液大多数是无机强酸类制剂,虽然脱钙效果好,但造成组织形态,特别是细胞结构的破坏。
因此,在本实验中我们选择了传统的脱钙液和快速脱钙液两种脱钙液进行比较,进而寻找一种更适合于骨组织脱钙的方法。
研究中发现快速脱钙液在不破坏组织结构及影响染色的同时,它可促进脱钙并加快脱钙速度,防止纤维性组织过度膨胀,并且保证了切片的质量,现报道如下。
1 材料与方法1.1 材料收集内蒙古医科大学附属医院2009 -2011 年手术切除的骨肿瘤、病变骨及骨髓穿刺病人标本共40 例。
根据标本的不同将骨组织取成体积为1.5cm 1.5 cm 0.5 cm 的薄片( 骨髓一般直径均为0.1 cm) ,放入10% 中性福尔马林固定24 h,用于脱钙实验。
1.2 普通脱钙液及脱钙方法与步骤普通脱钙液是5%的硝酸,即5 ml 硝酸加入95ml 蒸馏水配制而成。
具体脱钙步骤: ①先把大块骨组织标本切成小段,小块骨组织标本不用改刀,然后放入10%中性福尔马林中固定24 h 左右后再进行脱钙。
②将待脱钙的标本放入5% 硝酸脱钙液中,脱钙液不少于待脱钙标本总体积的10 倍。
③室温下进行脱钙: 骨髓穿刺标本需30 -60 min,肋骨、指趾骨需3 -6 d,皮质骨需要5 -7 d。
④脱钙后的组织经流水冲洗后进行取材、脱水、透明、常规石蜡包埋、制片。
1.3 快速脱钙液及脱钙方法与步骤快速脱钙液是由36% -38% 盐酸8 ml、冰醋酸5 ml、水杨酸10 g 、蒸馏水87 ml 混合而成。
用微波炉进行微波时,微波辐射可加速组织内部分子运动,加快脱钙速度,因标本在酸性溶液中滞留的时间短,所以对组织的损伤小。
EDTA脱钙液使用说明书储存条件:常温保存,有效期1年。
产品内容:Components SL1500 EDTA脱钙液(pH7.2-7.4)500mL说明书1份产品说明:1.在病理实验制作切片时,我们会经常碰到一些含钙组织,而且钙十分坚硬。
由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同,含钙的组织一般不能直接制作切片。
骨组织含钙量最多。
除了骨组织之外其它组织也可发生钙化,在组织中形成钙化区,所以需要经过脱钙过程。
脱钙是制作骨组织切片的重要环节,尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
2.为达到骨组织既充分脱钙,又保护骨组织中的抗原不受破坏,需要对含钙的组织固定之后再进行脱钙。
然后再行常规制片。
3.EDTA与羟基磷灰石结晶的外层钙结合,形成可溶性的非离子化合物,同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。
借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解,pH中性时可起螯合作用。
其特点是脱钙时间长,对骨组织的损伤少,酶活性(碱性磷酸酶)和细胞抗原性保存较好,制作的切片可用于组织化学和免疫组化分析。
4.主要用途:用于骨组织、牙齿等脱钙。
使用说明:1.骨组织脱钙时,取材不易过厚,一般大约5mm。
2.组织固定后,用PBS清洗3次,每次20min。
3.组织用蒸馏水洗清洗3次,每次20min。
4.组织转移至20~30倍体积的EDTA脱钙液中,脱钙10~30天或更长时间。
如果想加快脱钙速度,可以置于37℃进行脱钙。
如果必要,更换新的EDTA脱钙液继续脱钙,多数组织脱钙2周~3个月即可,每周更换一次,直至终点。
亦可采用微波快速脱钙法:微波炉设在200W左右的档位,每次加热5min,依据组织厚度和密度重复3~5min,中间间隔3~5min。
5.用蒸馏水冲洗数次。
6.常规脱水、包埋。
注意事项:1.为使脱钙更为充分,每次最好更换新液,这既弃去脱掉的钙盐,增加脱钙强度,又起到降低脱钙的温度。
2.脱钙时间以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。
3.脱钙温度不要太高,一般以室温(25℃)为宜,高温可加快脱钙速度,但可破坏组织中的核酸而影响染色效果。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响作者:张大贵等来源:《中国现代医生》2012年第24期[摘要] 目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织,随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大。
PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好。
结论室温条件下,三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差。
[关键词] 脱钙液;骨组织;免疫组化染色[中图分类号] R446.4+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701(2012)24—0101—03骨组织内含有大量无机钙盐,结缔组织坚硬,难以直接制片[1]。
如果强制切片,在蓝色钙盐背景下,往往无法看清细胞结构,所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%(体积分数)硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响,以期寻找一种效果比较理想的脱钙液,对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院,切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块,在福尔马林中性液内固定24 h,用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ:14%(体积分数)硝酸脱钙液,配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水;②脱钙液Ⅱ:EDTA脱钙液,配制方法为EDTA10 g,蒸馏水100 mL,加NaOH充分搅拌溶解,在用10 mol/L的HCl调pH为8.0,最后加入4%甲醛15 mL。
骨组织脱钙方法
一、化学脱钙法
化学脱钙法是一种常用的骨组织脱钙方法,通过使用酸性溶液或者强酸来溶解骨组织中的钙盐,从而去除骨组织中的钙离子。
常用的化学脱钙溶液包括盐酸、硝酸、硫酸等。
这种方法的优点是操作简单、脱钙效果好,但同时也存在一些缺点,如酸性溶液对骨组织本身有一定的损伤,且脱钙过程中会产生有毒气体,需要良好的通风设施。
二、酶解脱钙法
酶解脱钙法是一种较为温和的骨组织脱钙方法,通过使用酶制剂来分解骨组织中的胶原蛋白和钙盐,从而达到脱钙的目的。
常用的酶制剂包括胶原酶、弹性蛋白酶等。
酶解脱钙法的优点是操作简单、对骨组织损伤小、不产生有毒气体,但同时也存在一些缺点,如脱钙速度较慢,需要较长时间才能完成脱钙。
三、微波脱钙法
微波脱钙法是一种新型的骨组织脱钙方法,通过使用微波辐射来加速骨组织中的水分子运动,产生热量使骨组织内部的温度升高,从而加
速骨组织中的钙盐溶解和脱钙过程。
微波脱钙法的优点是脱钙效果好、速度快、对骨组织损伤小,但同时也存在一些缺点,如需要使用特殊的微波设备,且操作技术要求较高。
综上所述,不同的骨组织脱钙方法各有优缺点,应根据实际需求和实验条件选择适合的脱钙方法。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织,随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大。
PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好。
结论室温条件下,三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK 脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差。
标签:脱钙液;骨组织;免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐,结缔组织坚硬,难以直接制片[1]。
如果强制切片,在蓝色钙盐背景下,往往无法看清细胞结构,所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%(体积分数)硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响,以期寻找一种效果比较理想的脱钙液,对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院,切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块,在福尔马林中性液内固定24 h,用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ:14%(体积分数)硝酸脱钙液,配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水;②脱钙液Ⅱ:EDTA脱钙液,配制方法为EDTA10 g,蒸馏水100 mL,加NaOH充分搅拌溶解,在用10 mol/L的HCl调pH为8.0,最后加入4%甲醛15 mL。
③脱钙液Ⅲ:PLANK脱钙液,配制方法为氯化铝10 g,甲酸50 mL,10%福尔马林10 mL,冰乙酸1.5 mL,加蒸馏水至总体积100 mL。
脱钙液(一)酸性溶液脱钙法1.硝酸-间苯三酚液:浓硝酸10ml,间苯三酚1g,通风橱内混合。
混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。
然后加10%硝酸100ml。
骨组织块5mm 厚脱钙时间12-24 小时。
优点:该液脱钙速度非常快,大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。
缺点:(1)细胞核染色很差。
(2)如果脱钙时间太长对组织有较大的损害。
(3)用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少24小时。
(4)用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
2.硝酸水溶液:浓硝酸5-10ml,蒸馏水加至100ml。
厚度5mm 骨组织块脱钙12-24 小时。
优点:(1)硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。
(2)对组织损害较少,细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。
(3)组织可直接通过70%乙醇去除酸。
缺点:脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。
3.福尔马林-硝酸液:40%甲醛5ml,浓硝酸10ml,蒸馏水85ml。
5mm 厚的骨组织块脱钙时间需要1-3 天。
优点(1)福尔马林-硝酸液是一种迅速的脱钙液。
(2)该液脱钙的组织比间苯三酚-硝酸液细胞核染色好。
(3)可作为紧急活检脱钙用。
(4)该液和5-10%硝酸水溶液一样对组织几乎没有损害。
缺点:(1)该液对细胞核作用较慢,使细胞核着色较差。
(2)用5%硫酸钠液中和,然后充分流水冲洗至少12小时。
4.Perenyi’s 液:10%硝酸4 份,0.5%铬酸3 份,无水乙醇3 份。
5mm 厚的骨组织块脱钙时间需要2-7 天。
优点:(1)该液是一种温和的脱钙液,可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。
(2)细胞核和细胞浆细微结构着色均好。
(3)推荐该液作为常规脱钙使用。
(4)组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。
脱钙组织直接移到90% 乙醇中。
缺点:(1)脱钙较慢,因此,紧急情况下不能使用。
(2)用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
5.Von Ebener’s 液:饱和水溶液氯化钠50ml,蒸馏水50 ml,浓盐酸8 ml。
脱钙液配制30%盐酸溶液1000 ml(10%中性福尔马林液700 ml+浓盐酸300 ml)加入140 g 氯化钠,待其完全溶解后再加入20 ml冰醋酸。
在日常病理技术工作中,有多种对骨骼的脱钙方法和脱钙组织切片的制作方法,本文所述脱钙方法和脱钙液从脱钙速度,对组织的损伤程度以及切片染色等方面效果都比较理想,这种脱钙液与其他酸类脱钙液相比较,对组织损伤小,脱钙时间短,并作用温和,其中30%的盐酸溶液对脱钙组织造成的损害较小,对组织不膨胀,不至于导致脱钙过程缓慢,但核染色不佳。
加入氯化钠可以防止脱钙组织因经过盐酸脱钙后导致的切片染色偏红,加入冰醋酸可使脱钙组织软化,有利于切片,从而使制片效果更加理想。
对照组以单纯30%盐酸为主的脱钙液与新方法脱钙液对同等体积、大小、部位相同的骨组织同时进行脱钙,前者制作的骨骼切片不平整,染色偏红,胞核红染,核质不清晰,切片整体组织结构显示不清。
经新方法脱钙后所制作的切片组织结构显示清晰,切片中的软组织和骨组织结构均可完整显示,细胞染色清晰,核质对比鲜明,制片中所用的固定剂、脱水剂、透明剂等都为日常技术工作必备试剂,而且制作出的切片效果很好,在本方法中所用的固定、脱水、透明、浸蜡、染色试剂都可以数次重复使用,试剂配制和操作方法简单,值得临床推广应用。
王淑兰,制作骨骼组织切片的新脱钙液改良的Plank·Rycho脱钙液的配制:氯化铝7g ,盐酸815ml ,甲酸5ml ,甲醛15ml ,TritonX-1000.5ml ,蒸馏水100ml。
为了保持良好的骨组织形态结构,达到脱钙目的,我们在Plank·Rycho脱钙液中加入甲醛和TritonX-100 ,更加充分发挥各自的作用,使固定、脱脂、脱钙同时进行。
甲醛不仅是优良的固定剂,还可适度保护组织免受酸的侵蚀。
TritonX-100 (聚乙醇辛基苯基醚)是一种表面活性剂,虽不具备脱钙作用,但能溶解脂质,改善细胞膜的通透性〔1 ,2〕,使骨组织中的脂质在短时间内脱去,加快了脱钙速度。
骨及钙化组织切片的复方脱钙液的配制及脱钙方法作者:温娜唐泽波王爽朱辛为来源:《中国医药导报》2008年第27期[关键词] 骨及钙化组织;复方脱钙液;脱钙方法;改良除酸[中图分类号]R816.8 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210(2008)09(c)-116-01骨及钙化组织非常坚硬,将其制成几微米薄切片难度较大。
常用的方法是先脱钙,使组织变软后再切片,所以脱钙是非常关键的技术。
目前使用的脱钙剂多为无机强酸类制剂,虽脱钙效果较好,但常造成组织形态,特别是细胞结构的破坏,影响骨组织形态观察和研究。
为此,我们使用复方脱钙液脱钙,不仅能够保持组织形态良好,亦能用于特殊染色及切片,现介绍如下:1 材料临床医学生对狗行外科手术后,取胫骨分别锯成1 cm长,再沿胫骨纵向劈成四段。
用生理盐水或0.1 mol/L的PBS(pH7.2~7.4)缓冲液洗2次,然后入3%戊二醛和4%多聚甲醛1:1混合液固定4 h;SHARP3A65型微波炉(日本,最大功率850 W,分5档可调)。
复方脱钙液:盐酸8 ml,醋酸5 ml和水杨酸10 g;依次加入蒸馏水87 ml中混合,配制成复方脱钙液。
2 方法2.1 脱钙方法将装标本的塑料提篮放在中型平底烧杯内加入复方脱钙液,再将其放入装有冰水的大平底烧杯或微波炉专用的塑料容器内,入微波炉2档10 min,取出更换经冰水制冷的脱钙液及吸热用的冷水,置炉内继续重复进行。
判断脱钙情况,决定是否再次重复,操作致脱钙完成。
脱钙过程中要随时检测脱钙液温度以不超过40℃为宜,并视情况更换脱钙液和检查脱钙程度。
该法是众多加速脱钙法中效果最显著,应用最多的方法[1]。
2.2 脱钙终点判定脱钙完成即应终止,以免脱钙过度,造成不应有的损伤。
脱钙未完成即终止,脱钙不净在切片时标本破碎,影响切片质量。
因此,如何判定脱钙终点很重要。
从理论上讲,脱钙终点的测定方法有物理、化学及X线照相技术等。
在实际工作中我们常采用针刺法,该法简单方便,易于掌握,唯其用于刺戳之针应采用针灸用体针为宜。
大鼠关节组织硝酸\EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较标签:大鼠关节组织;硝酸脱钙;EDTA脱钙;石蜡制片骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一。
它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的。
适用组织化学、免疫组化等技术的染色。
大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败。
现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10%硝酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色。
对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果。
1 材料与方法1.1 材料大鼠30只、出生10周,平均体质量400 g(购自中山大学动物实验)。
雌雄不限,随机分组。
在麻醉状态下经心脏注射生理盐水及1%多聚甲醛处死动物,取关节组织、标本置10%甲醛固定液中固定24 h。
10%的硝酸脱钙液。
EDTA脱钙液,微波炉。
1.2 方法10%硝酸脱钙液的配制及脱钙方法将1份的硝酸溶液加入到9份的蒸馏水中搅拌均匀即可。
将大鼠关节组织放入是组织体积20倍量的10%硝酸溶液中,浸泡16~18 h,浸泡中无需更换脱钙液,用针能刺入即可。
取出组织置流水中冲洗碱化2 h。
取材,入脱水机石蜡包埋、切片、染色。
1.3 EDTA脱钙液的配制及脱钙方法用PBS缓冲液(pH7.2)100 ml、加NaOH 搅拌溶解至饱合状态,再加入EDTA10 g溶解后用1 mol/L Hcl调节pH值至7.2,加甲醛15 ml即可。
把脱钙液装入小烧杯中,将大鼠关节组织放置其中,脱钙液需充足。
放入微波炉中调节微波功率50℃,微波照射50 s即可达到脱钙的目的。
取出无需流水冲洗、直接取材、入脱水机、石蜡包埋、切片、染色。
2 结果10%硝酸脱钙处理的大鼠关节组织切片组织结构尚完整,组织块也能顺利连续切片,镜下:细胞形态、结构尚清,HE着色较淡,有时细胞核仁及膜边界不太清晰,分界不清,对比度不强。
在特殊染色和免疫组化染色中,着色较困难,效果欠佳。
组织学技术脱钙切片标本制作含钙的组织,骨、牙1 脱钙剂常用:硝酸、盐酸、硫酸、甲酸(蚁酸)、枸橼酸(柠檬酸)、三氯醋酸(三氯乙酸)、乙二胺四乙酸(EDTA)最常用的无机酸为硝酸,最常用的有机酸为EDTA。
(1)硝酸脱钙快,效果好一般用5%硝酸水溶液,不超过10%2毫米厚的骨片脱钙2~3天(2)甲酸良好的脱钙剂。
脱钙较慢,对骨组织结构破坏较轻2~3毫米厚骨片,松质骨约48小时,密质骨7~10天,经常换液染色效果比硝酸好脱钙时加入尿素等试剂,防止纤维性组织过度肿胀而使组织受破坏(3)乙二胺四乙酸(EDTA)很好的脱钙剂,对组织破坏极小,长期脱钙也无明显破坏脱钙后的染色效果好脱钙时间长。
2周以上甚至3个月。
加温至37℃可加快脱钙常用15%水溶液。
2 脱钙液(1)单纯脱钙液:一种脱钙剂浓硝酸5毫升,尿素3~5克,蒸馏水100毫升浓硝酸5毫升,甲醛5毫升,甘油5毫升,蒸馏水100毫升浓甲酸50毫升,70%酒精 50毫升5%甲酸水溶液5毫升,蒸馏水95毫升三氯醋酸5克,10%甲醛100毫升浓盐酸15毫升,氯化钠175克,蒸馏水1000毫升。
用时每200毫升每天加浓盐酸1亳(von Ebner)EDTA15克,蒸馏水100毫升(2)混合脱钙液枸橼酸甲酸液:枸橼酸钠结晶10克,90%甲酸25毫升,蒸馏水75毫升甲酸三氯醋酸液:85%甲酸50毫升,95%酒精50毫升,枸橼酸钠结晶10克,三氯醋酸0.5克,蒸馏水50毫升3 脱钙基本方法⑴取新鲜骨固定于10%甲醛水溶液或稍久。
⑵脱钙(针刺能顺利进入组织),充分水洗(中止脱钙)。
⑶入5%硫酸钠水溶液12~24小时(中和),流水冲洗过夜。
⑷脱水、透明、浸蜡、包埋、切片50%、70%、80%、90%、95%酒精、冬青油透明1、冬青油透明2、二甲苯洗去冬青油(70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、正丁醇1、正丁醇2、软蜡、硬蜡、包埋、切片)切片10微米左右。
⑸苏木精伊红染色。
14%硝酸脱钙液成分
14%硝酸脱钙液通常是指含有14%硝酸(HNO3)的水溶液,这种溶液用于脱除组织中的钙离子,以便于后续的固定、切片和显微镜观察。
硝酸脱钙液的主要成分是硝酸,但为了防止组织中的蛋白质和其他有机物质与硝酸反应,通常还会加入一些辅助成分,如:
1.乙二胺四乙酸(EDTA):一种常用的螯合剂,能够与钙离子形成稳定的螯合物,从而帮助去除钙离子。
2.蔗糖:作为渗透压调节剂,有助于维持组织细胞的稳定。
3.柠檬酸:有时用于调节溶液的pH值,使其更适合脱钙过程。
4.PBS(磷酸盐缓冲液):用于维持溶液的pH值稳定,防止过酸或过碱对组织造成损伤。
5.其他添加剂:根据不同的应用和制造商的配方,可能还会添加其他成分,如稳定剂、防腐剂等。
在使用14%硝酸脱钙液时,应严格按照说明书或实验室的标准操作流程进行,以确保脱钙效果和组织的完整性。
此外,由于硝酸具有腐蚀性,使用时应在通风良好的环境中进行,并采取适当的安全措施。
三种不同脱钙液在骨组织石蜡切片中的应用比较杜洪;金荣【摘要】目的:比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力,优化骨组织石蜡切片的制作流程.方法:选取15例手术切除的新鲜骨标本,运用3种不同的脱钙液(Jenkins脱钙液、14%硝酸水溶液、14%硝酸甲醛生理盐水溶液)进行脱钙,记录脱钙时间,常规脱水、切片、HE染色,镜下观察,对比3种脱钙液对骨和骨髓组织常规病理切片质量和HE染色效果.结果:14%硝酸甲醛生理盐水溶液组脱钙能力最强,脱钙最均匀,耗时最短,既能有效完全除去骨皮质中的钙质,又能保护骨髓组织及细胞的形态完好,切片质量和HE染色的效果最佳;14%硝酸水溶液组脱钙液,使骨组织疏松发泡,组织变黄,对组织的损伤大,脱钙不均匀,组织切片不完整,制片质量和HE的效果最差;Jenkins脱钙液组对组织的脱钙能力、损伤程度、制片质量和HE染色效果良好,14%硝酸甲醛生理盐水溶液组和14%硝酸水溶液组之间.结论:3种脱钙液对骨和骨髓组织都具有良好的脱钙能力,制片质量及HE染色效果比较,14%硝酸甲醛生理盐水溶液> Jenkins脱钙液>14%硝酸水溶液;14%硝酸甲醛生理盐水溶液最适用于临床常规病理制片中骨和骨髓组织的脱钙.【期刊名称】《甘肃医药》【年(卷),期】2016(035)005【总页数】3页(P368-370)【关键词】骨组织;脱钙液;HE染色【作者】杜洪;金荣【作者单位】730050 甘肃兰州,甘肃省肿瘤医院病理科;730050 甘肃兰州,甘肃省肿瘤医院病理科【正文语种】中文骨组织是由骨细胞和骨基质组成的坚硬的结缔组织,骨基质富含以磷酸钙和碳酸钙为主的无机钙盐,二者的存在造成骨组织的硬度较大,不易切片且极易脱片,即便能够勉强制成切片,在蓝色钙盐背景下也难以看清细胞结构,对病理诊断工作造成很大的不便,因此在临床病理活检或实验性动物研究中必须要进行脱钙处理才能进行常规制片和观察[1]。
但是,如果骨组织脱钙过度又会严重影响组织细胞染色效果,或使组织抗原丢失,从而影响对病变组织的病理诊断或科学实验工作[2]。
骨组织脱钙液介绍
骨组织脱钙液概述
在病理实验制作切片时,我们会经常碰到一些含钙组织,而且钙十分坚硬。
由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同,含钙的组织一般不能直接制作切片。
骨组织含钙量最多。
除了骨组织之外其它组织也可发生钙化,在组织中形成钙化区,所以需要经过脱钙过程。
脱钙是制作骨组织切片的重要环节,尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
为达到骨组织既充分脱钙,又保护骨组织的抗原不受破坏,需要对含钙的织固定之后再进行脱钙或采用固定兼有脱钙的液体处理,固定并脱钙。
然后再行常规制片。
用于脱钙的试剂很多,脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid EDTA)除此之外还有电解脱钙法。
强有机酸,如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙,在短时间内可除去大量的钙。
令人遗憾的是这些强酸对组织形态会产生不良影响,脱钙作用强对组织破坏性大。
细小的组织,例如,骨髓组织不推荐用强酸脱钙。
虽然可以使用各种附加剂,如缓冲液具有保护组织的作用,但也降低了脱钙速度。
因此,各种脱钙液的配方都围绕着脱钙速度和消除对组织的不良影响而设计。
在酸类脱钙液中醋酸和甲酸比较适合于骨髓组织脱钙。
甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂。
甲酸脱钙 10% 浓度比较合适。
醋酸和甲酸的作用比较弱,脱钙速度比较慢,它们不适合密皮质骨的脱钙。
EDTA 是一种比较温和的脱钙剂(EDTA 不是酸)。
对组织的渗透性差,作用慢。
大剂量使用价格较贵。
电解脱钙对组织损害最小,因为它的脱钙速度太慢,所以,不适合常规使用。
不同的脱钙液对骨组织的脱钙作用不同,脱钙效果也不完全相同。
为了达到良好的脱钙效果,建议使用EDTA脱钙液,该脱钙液对组织损伤较小,缺点就是脱钙时间会比较长些,但脱钙时间也要根据组织块
大小而定。
目前国内生产EDTA脱钙液的公司也很少,个人感觉上海舜百生物的EDTA脱钙液使用效果还不错,脱钙脱的比较彻底,而且对组织损伤很小,就是周期长了些。
EDTA 是一种相对较好螯合脱钙剂,对组织结构影响最小,可以较好的保存组织抗原性。
经EDTA 脱钙的组织可以进行免
疫组化和原位杂交染色,缺点是脱钙速度比较慢。
一般脱钙时间需要数周至数月。
为了提高EDTA 的脱钙速度,骨组织取材尽量取薄0.3mm,采用微波脱钙。
用微波炉辅助脱钙可以大大缩短脱钙时间,只要设置好脱钙程序,严格控制好温度和脱钙时间,一般不会对组织造成不良影响,据资料介绍微波炉脱钙,骨髓组织EDTA 脱钙,只需要花费3-4 个小时。
这样的脱钙时间完全可以满足常规使用。
另外,使用 EDTA 可以避免强酸脱钙所造成组织结构不良的影响。
EDTA可用于各种骨组织、牙齿等的脱钙,是一种比较理想的脱钙剂。