新城疫病毒的鸡胚培养与病毒滴度检测

禽流感病鸡胰腺存在出血现象，新城疫病鸡胰腺无。 禽流感病鸡卵泡萎缩同时存在出血现象，不断液化，最 终形成筋膜。卵泡上可见黄色纤维素性渗出物，输卵管可见 脓性或者凝蛋清样的分泌物，新城疫病鸡输卵管内部存在分 泌物。 禽流感病鸡肠道黏膜存在脱落现象，新城疫病鸡无。 禽流感病鸡十二指肠以及回肠淋巴滤泡暴露，但是新城 疫病鸡十二指肠、回肠以及卵黄蒂下端部位淋巴滤泡存在肿 大现象以及出血症状，如果病情较为严重，还会出现呈纽扣 状的坏死灶。 禽流感病鸡颈部皮下、食道黏膜以及食道乳头均存在出 血现象，新城疫病鸡无。 禽流感病鸡腺胃乳头存在肿大出血现象，同时其腺胃黏 膜存在出血现象，新城疫病鸡腺胃乳头、腺胃以及肌胃交界 处、腺胃以及食道交界处均存在出血以及溃疡。 新城疫病鸡气管上部以及气管黏膜存在出血现象，同时 可见粘液，禽流感病鸡器官不存在明显变化， 禽流感病鸡头部皮下可见胶样或者干酪样的渗出物，新 城疫病鸡无。 禽流感病鸡喉头部位不存在明显变化，新城疫病鸡喉头 水肿并出血。 2.1.4 实验室诊断 禽流感病毒可以对马、山羊以及绵羊红 细胞进行凝集，新城疫病毒不能。
进行二次免疫，所以在养殖过程中，防
养禽
鸡新城疫的实验室诊断及鉴别
郭敏
（河南省济源市动物卫生监督所，河南 济源 454650)
关键词：鸡新城疫；实验室诊断；鉴别 DOI:10援3969/J.ISSN援1671-6027援2020援05.152
鸡新城疫是养鸡业发病率较高的传染病，一旦发生会造 成较为严重的损失。鸡新城疫的症状与禽流感、鸡霍乱较为 相似，只有对这几种疾病进行有效区分和治疗，才能降低经 济损失，保证养殖户安全。 1 实验室诊断
如果抗鸡新城疫血清能够对可疑病毒产生的红细胞凝 集作用进行有效抑制，则该病毒判为鸡新城疫病毒。反过来 也可用鸡新城疫病毒判断病愈鸡血清内是否存在抗体，进而 诊断病鸡是否感染新城疫。如果可疑病鸡血清能对新城疫病 毒的血红细胞的凝集作用进行有效抑制，即可确定该鸡曾经 患有新城疫。通常情况下，对急性病鸡，其死亡前的血液中不 存在抗体，如果病程达 5~6d，病鸡血液中存在血凝抑制抗 体；如果病程超过 10d，其抗体效价可达 1：1280。

实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测实验报告病毒的鸡胚培养及梯度检测篇一:实验五十动物病毒的鸡胚培养实验五十一动物病毒的鸡胚培养三、器材1(病毒痘苗病毒(Vaccinia virus)，鸡新城疫病毒(Necastle distase virus)。

2.仪器或其他用具孵卵器，检卵灯，齿钻，磨壳器，钢针，蛋座木架，注射器，2.5,碘酒，70,乙醇，镊子，剪刀，封蜡(固体石蜡加1,4凡士林，溶化)，灭菌培养板，灭菌盖玻片等。

3.白壳受精卵 (自产出后不超过10d，以5d以内的卵为最好)。

四、操作步骤1(准备蛋胚孵育前的鸡卵先用清水以布洗净，再用干布擦干，放入孵卵器内进行孵育(37?，相对湿度是45%~60%)，孵育3d后，鸡卵每日翻动1~2次。

孵至第4d，用检卵灯观察鸡胚发育情况，未受精卵，只见模糊的卵黄黑影，不见鸡胚的形迹，这种鸡卵应淘汰。

活胚可看到清晰的血管和鸡胚的暗影，比较大一些的可以看见胚动，随后每日观察一次，将胚动呆滞的或没有运动的、血管昏暗模糊者，即可能是已死或将死的鸡胚，要随时加以淘汰。

生长良好的蛋胚一直孵育到接种前，具体胚龄视所拟培养的病毒种类和接种途径而定。

鸡卵孵化期间，箱内应保持新鲜空气流通，特别是孵化5~6d后，鸡胚发育加快，氧气需要量加大，空气供应不足，会导致鸡胚大量死亡。

2.接种(1)绒毛尿囊膜接种?将孵育10~12d的蛋胚放到检卵灯上，用铅笔勾出其实与胚胎略近气室端的绒毛尿囊膜发育的好的地方。

?用碘酒消毒气室顶端与绒毛尿囊膜记号处，并用磨壳器或齿钻在记号处的卵壳上磨开一三角形或正方形(每边约5~6mm)的小窗，不可弄破下面的壳膜。

在气室顶端钻一小孔。

?用小镊子轻轻揭去所开小窗处的卵壳，露出壳下的壳膜，在壳膜上滴一滴生理盐水，用针尖小心地划破壳膜，但注意切勿伤及紧贴在下面的绒毛尿囊膜，以利两膜分离。

?用针刺破其实小孔处的壳膜，再用橡皮乳头吸出气室内的空气，是绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室(图?—4)。

实验九 新城疫病毒的鸡胚培养 与病毒滴度检测
扬州大学兽医学院 成大荣
2009年5月4日星期一来自一、目的要求1. 掌握鸡胚接种的常规方法； 2. 学习NDV的分离培养及其鉴定方法。
二、背景知识介绍
1. 病毒的鸡胚培养
① 鸡胚是正在发育的活体：
• 组织分化程度低； • 细胞代谢旺盛； • 适于许多病毒的生长增殖， 尤其是禽类病毒。
④ 血凝性：可凝集人、鸡、豚鼠和小白鼠的红细胞。 ⑤ 病毒分离培养：9~11日龄鸡胚尿囊腔接种。
三、实验材料
1. 2. 3. 4. 5. 常规接种工具：注射器、打孔器、酒精灯等； 待接种的新城疫病毒材料； 9~11日龄鸡胚（1个/人）； 灭菌生理盐水； 其他： • 镊子、照蛋器； • 酒精棉球、碘酊棉球； • 固体石蜡； • 灭菌瓶子、灭菌吸管 等。
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种 ：
2. 新城疫病毒
① 副粘病毒科/副粘病毒亚科/禽腮腺炎病毒属。 ② 新城疫的病原体。 ③ 形态： • • • • • 病毒子多呈球形； 单股负股RNA； 核衣壳螺旋形对称； 有囊膜； 囊膜表面有纤突。
7. 病毒的收获与鸡胚的观察
① 收集24h后死亡鸡胚，置4℃冰箱过夜，以免收获时流血; ② 取出冷却的鸡胚，消毒气室端卵壳表面； ③ 用镊子击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜； ④ 以眼科镊镊住绒毛尿囊膜，用吸管吸取 尿囊液，置无菌容器中保存备用。 一般能尿囊液6-10mL。 ⑤ 取出鸡胚胎，于平皿内观察胚胎有无病 理变化，如出血、蜷缩、侏儒胚等。
4. 注入病毒材料
• 用1mL注射器抽取接种物； • 针头垂直刺入注射部位1-1.2cm即达尿囊腔内； • 注入待接种的新城疫病毒：接种量为0.1~0.2mL。

二、RRT-PCR检测新城疫强毒株
快速地诊断强病毒是有效控制病情进一步扩散的关键。在2002年美国暴发疫情期间，人们广泛地使用F基因探针从禽场棉拭子中检测出新城疫强毒株,所用的引物探针与2002年加利福尼亚州暴发的新城疫病毒的基因组很相近。不过，这个试验不经意间检测出全球范围内的新城疫病毒强毒株。在最初的试验期间，这试验可从世界不同的地区鉴别出各种不同的病毒分离株，除了一种鸽子内的病毒,这种病毒是在2000年意大利维罗那的一种羽衣甘蓝的鸽子体内分离到。这种鸽子的病毒在系统进化上与其他鸽源新城疫病毒有关联，并在氨基酸裂解位点第114位由谷丙氨酸（Q）替换为赖氨酸（K），这与芬兰和德国已经报道的从鸽子分离得到的新城疫病毒特点相一致。具有这种裂解位点的分离株代表着一种PPMV-1新城疫病毒独特的亚型。由于所有经鉴定的PPMV-1可通过F基因试验来检测，因此需要进一步的研究来确定为什么这种鸽子病毒能够逃避检测。通过序列分析鉴定得出这种病毒与F基因探针序列有4个核苷酸不同，分别在第1、6、13和14位。这种病毒株与探针之间4个不同的核苷酸可能是造成试验失败的主要原因。
简述新城疫病兽医导刊》 2013年第10期
黎先伟 编译
新城疫病毒的实验室诊断一般是接种SPF鸡胚分离病原，通过血凝抑制性实验（HI）或者快速实时逆转录聚合酶链反应试验（RRT-PCR）来进行确诊。众所周知，新城疫病毒可在鸡胚的尿囊腔内复制繁殖，而鸡胚平均致死时间（MDT）取决于病毒毒力的强弱。血凝抑制试验（HI）常被用来判断一种未知病毒是否属于新城疫病毒，单克隆抗体试验可进一步对新城疫病毒进行分型。当没有唯一的单克隆抗体来确定新城疫病毒的毒性时，可用一组单克隆抗体来区分病毒的差异，例如，可以从PPMV-1中区分出低毒力的新城疫病毒。此外，单克隆抗体试验对于快速鉴定Ⅰ型新城疫病毒的效果并不佳，绝大多数单克隆抗体已经过改良并适用于识别Ⅱ型新城疫病毒，但并不能识别Ⅰ型新城疫病毒。由于单克隆抗体直接作用于单一特异的抗原表位，因此它们检测不同病毒的能力往往是有限的。而其他血清学的方法，如ELISA也常用于实验室诊断，以用来评估疫苗接种后的抗体反应。不过，这对于疾病的监测和诊断方面的价值非常有限，主要因为家禽使用疫苗的情况非常普遍。