3-甲基腺嘌呤对蛋白酶体抑制剂MG132抗卵巢癌A2870细胞作用的影响刘川;王华芹;高雁艳;林蓓【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2013(021)004【摘要】目的:研究PI3K通路自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对蛋白酶体抑制剂MG132抗卵巢癌A2870细胞作用的影响.方法:不同浓度MG132处理A2870细胞后,MTT法及Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞的生存率及凋亡改变,吖啶橙(AO)染色和Western-Blot法检测酸性自噬泡的形成及自噬特异性蛋白LC3的变化.3-MA联合MG132处理A2870细胞,MTT法检测细胞的生存率,AO染色和Western blot法检测自噬的改变.结果:MG132可诱导A2870卵巢癌细胞发生增殖抑制及凋亡,同时,酸性自噬泡形成及LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化增强.而3-MA联合MG132明显降低A2870细胞的生存率,但不改变MG132诱导的A2870细胞的自噬水平.结论:3-MA对MG132抗A2870卵巢癌细胞的增强作用与自噬无关.MG132诱导A2870细胞发生的自噬与PI3K通路无关.%Objective: To investigate the effect of 3 -methyladenine on cytotoxicity of ovarian cancer A2870 cells induced by proteasome inhibitor MG132. Methods: A2870 cells were treated with different doses of MG132 for 24h, cell viability was assessed by methyl thiazolyl tetrazolium( MTT) assay, and apoptosis was observed with Annexin V -FITC and PI double staining followed by flowcytometry. The acidic vesicular organelles were observed using fluorescent microscope by acridine orange ( AO) staining.The transition of autophagy - specific protein LC3 ( microtubule -associated protein 1 light chain 3) were detected by Western Blot. A2870 cells were cotreated with MG132 and 3 -MA,cell viability and autophagy were assessed by MTT assay, AO staining and Western Blot. Results;MG132 suppressed cell viability and induced apoptosis in A2870 cells. MG132 increased accumulation of acidic vacuoles and transition of LC3 - Ⅰ to LC3 -Ⅱ . 3 - MA enhanced the cytotoxicity of A2870 cells mediated by MG132,but demonstrated no obvious effect on autophagy induced by MG132. Conclusion: The enhancement of 3 - MA on cytotoxicity of A2870 cells induced by MG132 was not associated with autophagy. MG132 induced PI3K - independent autophagy in A2870 cells.【总页数】4页(P682-685)【作者】刘川;王华芹;高雁艳;林蓓【作者单位】中国医科大学附属盛京医院妇产科学教研室,辽宁沈阳110004;中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,辽宁沈阳110001;中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,辽宁沈阳110001;中国医科大学附属盛京医院妇产科学教研室,辽宁沈阳110004【正文语种】中文【中图分类】R73-36;R737.31【相关文献】1.蛋白酶体抑制剂MG132诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡和自噬的作用机制 [J], 郭娜;彭芝兰2.Beclin1在MG132抗OVCAR3卵巢癌细胞中的变化及作用研究 [J], 刘川;胡珍华;谭明子;刘宝琴;英天舒;林蓓3.3-甲基腺嘌呤诱发HeLa细胞自噬及抑制辐照细胞自噬的双重作用 [J], 杨艳丽;刘玲;王豫;刘晓丹;周平坤4.3-甲基腺嘌呤对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡影响的研究 [J], 张石云;段振玲;徐琳5.3-甲基腺嘌呤对低氧状态下上皮性卵巢癌细胞自噬、迁移和侵袭的影响 [J], 唐中园;张宁;狄文;李卫平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
3-甲基腺嘌呤（3-MA）作用机理哎，说起这个3-甲基腺嘌呤，咱们四川人也叫它3-MA，它在科学界里头可是个明星分子哦。
3-MA嘛，就是PI3K（磷脂酰肌醇3-激酶）的一个抑制剂，专门跟PI3K较劲，不让它好好干活。
你看嘛，3-MA它主要是去抑制classⅢPI3K，这样一来，自噬体就形成不了，自噬过程就被它给拦住了。
不过，这个3-MA还有点儿两面派，在营养多的时候，它长时间处理反而能促进自噬；但在没得吃，饿肚子的时候，它就出来抑制自噬了。
这是为啥子呢？原来它对Ⅰ型和Ⅲ型PI3K的影响不一样，对Ⅰ型PI3K的抑制是长期的，对Ⅲ型PI3K就是一阵风，过会儿就没了。
在科研里头，3-MA可是个好东西，研究自噬、信号传导、细胞生物学这些方面都离不开它。
比如说，它可以用来研究
PI3K/Akt/mTOR信号通路的功能和调控，这样我们就更清楚这些通路在细胞长啊、繁殖啊、代谢啊这些过程中的作用了。
还有哦，肿瘤细胞里头，自噬可是个大事儿，关系到肿瘤细胞的活路和耐药性。
所以，3-MA也经常用来研究自噬抑制对肿瘤细胞的影响，看能不能找到新的抗癌治疗办法。
总而言之，3-MA这个分子在科学界里头可是个宝，帮我们揭示了好多生命的奥秘。
虽然它现在还不能直接用到人或者动物的治疗上，但相信以后科学家们肯定能找到更多它的用处，为人类健康做出贡献。
生物活性推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)激酶实验: [4]细胞试验: [2]动物实验: [5]不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于FDA指南）动物A (mg/kg) = 动物B (mg/kg) ×动物B的K m系数动物A的K m系数例如，依据体表面积折算法，将白藜芦醇用于小鼠的剂量22.4 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将22.4 mg/kg 乘以小鼠的K m系数（3），再除以大鼠的K m系数（6），得到白藜芦醇用于大鼠的等效剂量为11.2 mg/kg。
大鼠剂量(mg/kg) = 小鼠剂量(22.4 mg/kg) ×小鼠的K m系数(3)= 11.2 mg/kg 大鼠的K m系数(6)1参考文献[1] Miller S, et al. Autophagy. 2010, 6(6), 805-807.[2] Hou H, et al. PLoS One. 2012, 7(4), e35665.view more化学数据点击下载3-Methyladenine (3-MA) (SDF格式文件)分子量149.15化学式C6H7N5CAS号5142-23-4稳定性3年-20℃粉状6个月-80℃溶于溶剂别名NSC 66389制备储备液客户使用Selleck 产品的实验数据(1)点击放大Be(2)-C human neuroblastoma cells were treated for 6, 24 and 48 h with 40 μM sulforaphane (SFN) and/or 10 mM3-methyladenine (3MA). 评级数据来源于方法细胞系浓度处理时间结果客户使用Selleck产品发表的文献(2)Dramatic antitumor effects of the dual mTORC1 and mTORC2 inhibitor AZD2014 in hepatocellular carcinoma.[ Liao H, et al. Am J Cancer Res 2015 ; 5(1):125-139 ]∙Autophagosome-Mediated EGFR Down-Regulation Induced by the CK2 Inhibitor Enhances the Efficacy ofEGFR-TKI on EGFR-Mutant Lung Cancer Cells with Resistance by T790M. [ So KS, et al. PLoS One 2014 ;9(12):e114000 ]∙3-Methyladenine (3-MA)（NSC 66389）, >99%【同义名】：(3-MA)（NSC 66389）【中文名】：3-甲基腺嘌呤订购信息：（原装进口，常备现货）产品描述：3-Methyladenine (3-MA, NSC 66389)是一种广泛应用的细胞自噬抑制剂，可以抑制PI3K活性，具有限制性抑制作用，对PI3K Vps34的抑制作用强于PI3Kγ，IC50分别为25 μM，60 μM[1]。
1153Vps34干扰自噬形成[4]。
本研究使用不同浓度3-MA预处理低氧环境下的EOC细胞株，经Western blotting技术观察自噬相关分子LC3蛋白表达水平变化；透射电子显微镜（简称透射电镜）观察自噬体的形成，并通过噻唑蓝（MTT）比色法、黏附试验、Transwell迁移试验和Matrigel侵袭试验分别测定其对EOC细胞增殖、黏附、迁移和侵袭能力的影响。
1材料与方法1.1 细胞株实验所用细胞株为人EOC细胞系HO8910PM，购自中国科学院上海细胞所。
HO8910PM拥有较高的转移特性，并且保留了原人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞的形态特征和分泌功能[5-6]。
1.2 实验材料3-MA购自美国Sigma公司，MTT购自美国Promega 公司，Matrigel基质胶购自美国BD公司。
抗LC3B总蛋白抗体购自美国Cell Signaling Technology公司，抗β-肌动蛋白抗体购自美国Abcam公司。
1.3 实验方法1.3.1实验分组①常氧组：20% O2。
②低氧组：1% O2。
③低浓度3-MA+低氧组：1.25 mmol/L 3-MA+1% O2。
④中浓度3-MA+低氧组：2.50 mmol/L 3-MA+1% O2。
⑤高浓度3-MA+低氧组：5.00 mmol/L 3-MA+1% O2。
1.3.2Western blotting检测一抗稀释度分别为抗LC3B 抗体（1:500）、抗β肌动蛋白抗体（1:4 000）。
化学发光成像仪（ImageQuant Las 4000 mini，美国GE公司），经30～180 s扫描曝光。
1.3.3透射电镜检测透射电镜（CM-120，荷兰PHILIP 公司）观察经处理的EOC细胞并摄片。
1.3.4 MTT比色法按试剂盒说明书操作，在各组细胞中加入MTT溶液、DMSO，最后在酶标仪上测定490 nm 处的吸光度值[D （490 nm）]，按下述公式计算细胞存活率。
