从山楂叶中提取黄酮

现代中药制药课程论文 论文题目：从山楂叶中提取黄酮的研究 班 级：生研1001班 * **** 学 号：********** 日 期：2010年10月10日 从山楂叶中提取黄酮的研究 摘要：山楂叶黄酮是一种天然药物，具有广泛的药理作用，对心血管疾病有显著疗效。本文简单介绍了山楂叶黄酮各种提取方法的原理、基本流程、优缺点及研究实例，其中重点介绍了酶法提取山楂叶黄酮及其方法的改进。 关键词：山楂叶黄酮；提取方法。

1 引言 山楂，也称红果，蔷薇科山楂属植物，是起源于我国的特产果树，有3000多年的栽培历史[1]。山楂叶为山楂的干燥叶，含有多种化学成份，主要有黄酮和三萜两大类[2]。国内自20世纪50年代，就开始了对山楂叶的研究，随着中药提取和分析技术的现代化，山楂叶提取物的研究取得了很大的进展，其制剂益心酮片、胶囊、滴丸等已广泛应用于临床[2]。药理及临床试验表明：山楂叶中黄酮类化合物具有降血压、调血脂、增加冠脉流量、改善心肌供血供氧等作用，对高血压、高血脂、冠心病及心绞痛等心血管疾病均具有显著疗效[3]。此外，山楂叶黄酮还具有抗氧化[4]、抑制肿瘤细胞增殖的作用[5]。山楂叶最佳采收期应为6月中旬至8月初[2]，在山楂叶黄酮含量的高峰期采集山楂叶，可充分利用资源，保证其收率和质量，提高利用价值。

2 山楂叶黄酮的提取方法 提取山楂叶黄酮的方法有很多，如浸渍法、超声提取法、大孔吸附树脂法、酶法和微波辅助萃取法等。下面将对山楂叶黄酮的各种提取方法的原理、工艺过程、优缺点和研究实例择要进行综述，其中重点介绍酶法提取山楂叶黄酮。

2.1 浸渍法 浸渍法[6]是最为传统的提取方法，是利用一定量的溶剂，在一定温度下，将药材浸泡一定的时间，以提取药材成分。 2.1.1 水浸提法 水浸提法是最早用于从山楂叶中提取黄酮的方法[7]。其基本流程[7]是： 山楂叶—>除去杂质—>烘干粉碎—>水浸煮(2次)—>过滤—>滤液浓缩—>沉淀—>过滤—>滤液浓缩—>干燥。 用水浸提法生产黄酮，尽管黄酮的提取率稍低、提取液的杂质含量较高，但投资成本低、可操作性强，并且对环境的污染小，因此具有一定的工业化前景[8]。 张黎明[8]等人考察了山楂叶黄酮的水浸提法工艺，试验结果表明：山楂叶黄酮的最优水提工艺参数是：料液比为1:20(g／mL)，浸提时间为120min，提取次数2次，黄酮的提取率达到87.2％。 2.1.2 有机溶剂萃取法 最适于提取山楂叶黄酮的有机溶剂是乙醇。其工艺流程[2]是：取山楂叶，粉碎成粗粉，用乙醇浸渍，进行渗漉，收集漉液，减压浓缩，加水稀释后，用石油醚除去色素，分出水层，用乙酸乙酯振摇提取，提取液减压浓缩至干。 用乙醇提取山楂叶黄酮是药典收载的方法[2]，工艺较成熟稳定，提取物中总黄酮含量高，但也具有操作温度高，时间长，乙醇消耗大，成本高等缺点。 何改[9]通过单因素和正交试验，得到了乙醇提取山楂叶黄酮的最佳提取条件。结果表明：用6倍于叶重体积的60％的乙醇，在80℃浸提两次，每次3h，可将叶中95.74％的黄酮类物质提取出来。

2.2 超声提取法 超声波提取法[6]是利用超声波的空化作用，增强物质在溶剂中的溶解能力，加速和增加药材成分提取的一种浸提方法。其基本流程[10]是：取山楂叶，粉碎成粗粉，加入乙醇水溶液，然后在相应温度下超声提取一定的时间，过滤，滤渣重复提取，将提取液合并。 超声提取法[6]所用溶剂量少，提取时间短，产率较高，在室温下便可进行，设备简单，操作方便，成本小，是提取山楂叶黄酮的一种便捷高效的方法。 吕帮玉[10]等人对影响超声波提取山楂叶黄酮的多个因子进行单因素和正交试验分析，得出超声波法的提取最佳条件为：70％乙醇，料液比l:20，温度70℃，时间50 min，2次，总黄酮的提取率高达98．87％。

2.3 大孔吸附树脂法 用大孔吸附树脂对山楂叶黄酮进行分离和纯化，具有良好的效果，很多研究者都在这方面进行了有益的探索。其基本方法是先用其它方法制备山楂提取液，然后用树脂分离纯化。 闫磊[11]等人用乙醇回流提取制备山楂叶样品，然后采用正交试验和单因素考察相结合的方法考察多个工艺参数，研究了大孔吸附树脂分离纯化山楂总黄酮的工艺条件。结果表明：D101型大孔树脂对山楂的黄酮有良好的吸附，其吸附分离工艺条件的药液浓度0.1g/mL，pH3-4，上样量为4倍柱体积，以lmL/min的吸附速率进行吸附，4.5倍柱体积的80％乙醇洗脱效果最佳。 2.4 微波辅助萃取法 当微波加热时，细胞内极性物质尤其是水分子吸收微波能，产生大量的热量使胞内温度迅速上升，液态水汽化产生的压力将细胞膜和细胞壁冲破，形成微小的孔洞，使胞外溶剂容易进入细胞内，溶解并释放出胞内产物 [12]。 微波辅助提取山楂叶黄酮的基本流程[13]是： 山楂叶—>粉碎—>加水浸润—>微波辐射—>70%的乙醇提取—>过滤—>回收乙醇—>膏状物。 微波[13]具有选择性高、加热效率高、升温速度快、控制方便、受热体系温度均匀、安全无污染等特点，将微波应用于浸提方面，能强化浸提过程，提高产率和提取物的纯度。 王立娟[13]利用微波辅助提取山楂叶黄酮，探讨出最佳提取条件为：1 g粒度为0.212-0.55mm的山楂叶粉，微波功率210 W，辐射处理15 min，料液比1：10(g：mL)，70％ 乙醇75℃回流提取4次，每次0.5h。在此条件下，山楂叶黄酮的平均得率为8.38％。

2.5 酶法 酶法提取[14]是在传统的溶剂提取方法的基础上，利用酶反应具有高度专一性等特性，根据植物药材细胞壁的构成，选择相应的酶，将细胞壁的组成成分水解或降解，破坏细胞壁结构，使有效成分充分暴露出来，溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取细胞内有效成分的目的。酶法提取的基本工艺流程[15]是： 干山楂叶—>破碎—>酶解—>保湿浸提—>离心—>上清液—>大孔树脂吸附—>50%乙醇溶液洗脱—>减压浓缩—>烘干—>粉碎。 由于山楂叶黄酮几乎都被纤维素为主体的细胞壁所包围，这些细胞尚有原果胶粘结，因此王晓[15]等人应用纤维素酶和果胶酶的复台酶液对山楂叶进行酶解，然后用水提取，确定最佳的提取条件为：酶浓度为0.2mg／mL的纤维素酶和0.1mg/L的果胶酶，酶解温度为50℃，提取温度为90℃，提取pH4.5，提取时间为90min。相比传统的浸渍法，提取率提高了16%，提取条件温和，在低成本下大大提高了总黄酮的得率。 张黎明等人[16]针对酶解法只有在酶和原料充分接触的基础上才能发挥酶催化效率高，因此要求的颗粒大小要比常规提取法要细，给后续分离纯化带来了困难的缺点，用ZTC—II型天然澄清剂处理山楂叶酶解液，提出酶解—吸附澄清法的新工艺。得出在固定料液比为1:20的条件下，较佳提取工艺条件为：酶解温度55℃，酶质量浓度0.15 mg／mL，酶解时间125min，酶解pH值5.0；在酸性或近中性的酶液中，先加入ZTC—II型天然澄清剂B，在40℃下作用40min，然后加入ZTC—II型天然澄清剂A，再在40℃下保温作用40min，澄清剂B和A的用量分别为1.2g／L和0.6 g／L。酶法提取步骤结束后，加入ZTC—II型天然澄清剂在适宜的温度下澄清，不仅有利于提取液中蛋白质、鞣脂等杂质的絮凝，而且有利于山楂叶总黄酮的浸出。

3 结论 在我国，山楂叶价廉易得，从山楂叶中提取黄酮，在减少资源浪费的同时，降低了黄酮的生产成本，对于黄酮的资源开发有着十分重要的意义[17]。山楂叶[2]提取物和化学药物相比，作用温和，毒副作用小，安全低毒；山楂叶提取物药理作用广泛、疗效确切，值得临床推广应用，山楂叶黄酮现临床主要应用于治疗冠心病心绞痛等心血管疾病，但因其成份较多，尚有许多机理不甚明确，其临床应用还有待于深入研究。

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