银杏叶中黄酮的提取及其抑菌性检测

四、实验步骤

3、测定：
(1)标准曲线的绘制： 精确称取芦丁标准样品50.0mg，置 于50mL烧杯中，加少量70%乙醇使之完全溶解，转入50mL容 量瓶中，再用70%乙醇定容至刻度，摇匀，得1.0mg/mL的芦 丁标准溶液，再分别吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL芦 丁标准溶液置于 50mL 容量瓶中，按照下述方法配置显色溶液； 各 加 70 % 乙 醇 使 成 2 5mL ，然 后分别加入 5%N a N O2 溶液 1.5mL ，摇匀，放置 6min 后，再加 10%Al （ NO3 ） 3 溶液 1.5mL,摇匀，放置6min后，加NaOH溶液20mL,最后用蒸馏水 稀释至刻度（ 50mL ），摇匀，放置 15min 后，以不加芦丁的 试剂为空白，用紫外光分光光度计测定510.0nm处的吸光度。 以浓度c为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，得到回 归方程。
四、实验步骤

1、粗提物： 称取干燥和粉碎的银杏叶粉末 50克，装入索氏提取器 的滤纸套袋中，在500ml圆底烧瓶内加入250ml60%乙醇， 用65-80℃水浴加热。连续提取3h左右，等叶子颜色变浅 可停止加热。待在虹吸管内冷凝液刚落下时，立即停止加 热，改成旋转蒸发器，减压蒸去溶剂即得棕黑色的银杏浸 液-液萃取法： 在500mL烧杯中，将银杏浸膏粗产物 加250mL去离子水，搅拌均匀，再将此溶液转移至分液漏 斗中，用 60mL 二氯甲烷萃取三次，取下层液，合并萃取 液。用无水NaSO4干燥。用旋转蒸发器蒸去二氯甲烷，蒸 馏剩余物为黄酮提取物。经干燥后称重，计算产率。

三、化学药品及仪器

1、化学药品 乙醇（20%、60%、70%） 二氯甲烷 无水硫酸钠 氢氧化钠溶液（0.5mol/L） 盐酸溶液（0.5mol/L） 银 杏叶粉末

第30卷第5期Vol 130 No 15长春师范学院学报(自然科学版)Journal of Changchun Normal Universi ty(Natural Science)2011年10月Oct.2011银杏叶中总黄酮的提取和测定唐 婧,郑胜彪,朱金坤(安徽科技学院理学院,安徽凤阳 233100)[摘 要]本试验比较了有机溶剂浸提法和超声波法提取总黄酮的效果,选择提取率较高的超声波法来提取。

对料液比、超声时间和乙醇体积浓度对银杏中总黄酮提取效果的影响进行了单因子试验,并采用正交试验法找出最佳提取条件为料液比1g B 30mL 、超声时间30min 、乙醇浓度70%。

采用紫外可见分光法检测黄酮类化合物的含量,不加显色剂,直接以258nm 作为最大吸收波长。

结果表明,银杏中总黄酮的平均含量稳定在2177%,精密度的RSD 为01302%,该方法的平均回收率为10013%。

本试验方法样品处理简单,准确度高,精密度好,适合于银杏叶中总黄酮的提取和测定。

[关键词]银杏叶;黄酮;正交试验[中图分类号]R284[文献标识码]A[文章编号]1008-178X(2011)05-0063-05[收稿日期]2011-07-19[作者简介]唐 婧(1982-),女,安徽马鞍山人,安徽科技学院理学院助教,从事天然产物分析研究。

银杏(Ginkgo biloba L 1)又名公孙树,是我国的特产植物,其叶中含有丰富的的黄酮类化合物。

黄酮类化合物具有改善心脑血管循环、抵制血小板活化因子、降低胆固醇、抗病毒、防癌抗癌以及清除自由基等功效[1-2]。

我国拥有世界银杏树资源的70%以上,其提取方法常见报道。

通过对银杏叶中黄酮类化合物最佳提取条件的研究,可提高叶片黄酮提取率,最大化地实现银杏叶的药用和经济价值,使我国丰富的银杏树资源得到更加有效的利用。

本实验以芦丁为对照品。

芦丁(Rutin),又称芸香甙(Rutioside),属于黄酮苷类化合物,具有多种药用、生理活性作用,临床上用于治疗各种因毛细血管脆性增加而引起的出血性疾病[3],如高血压等。

47艺研究[J]. 食品与药品, 2006, 8(01): 50-51.[12]张跃林. 蝗虫中黄酮的含量及提取工艺研究[J]. 云南化工, 2006, 33(5): 32-35.[13]张永明,张倩,杨青,等. 现代技术与传统方法萃取古尼虫草总黄酮的比较[J]. 食品研究与开发, 2007, 28, (01): 136-140.[14]闫红霞. 苦丁茶叶中总黄酮含量测定[J]. 石油化工应用,2006, (4): 27-28.[15]李俶,李莉,倪永年. 槲寄生中总黄酮化合物提取工艺的研究[J]. 食品科学, 2006, 27(12): 346-349.[16]易昌华,贺建华,戴求仲. 中草药提取物中总黄酮含量测定[J]. 湖南饲料, 2004, (4): 27-28.[17]刘伦沛. 九香虫黄酮类化合物的提取及含量测定[J]. 凯里学院学报, 2011, 29(6): 50-53.银杏叶黄酮的超声波提取及其抗菌研究豁银强，尹杰，陈雪，汤尚文，吴进菊襄樊学院（湖北襄樊 441053）摘要利用超声波法提取银杏叶总黄酮，在单因素试验的基础上，采用正交试验对提取工艺进行了优化研究，并采用二倍稀释法进行了银杏叶黄酮对细菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌）、霉菌（青霉菌、黑曲霉菌）及酵母（酿酒酵母）的抑菌试验。

结果表明，银杏叶黄酮的最佳提取工艺为：乙醇体积分数70%，超声提取时间为50 min ，液料比为30∶1；在该条件下银杏叶中黄酮提取率为3.51%；银杏叶黄酮对不同的菌种有不同的抗菌效果，对细菌有明显的抗菌作用，对霉菌的抗菌作用较弱，对酵母抗菌作用不明显。

关键词银杏叶；黄酮；超声提取；抗菌Studies on Ultrasonic-assisted Extraction and Anti-microbial Activities ofFlavonoids from Ginkgo LeavesHuo Yin-qiang, Yin Jie, Chen Xue, Tang Shang-wen, Wu Jin-juXiangfan University (Xiangfan 441053)Abstraet On the basis of single factor test, the orthogonal design was employed to optimize ultrasonic-assisted extraction of total fl avonoids from ginkgo leaves, anti-microbial activities of fl avonoids from ginkgo leaves were evaluated against bacteria (Escherichia coli, Staphylococcus aureus ）, mold (Penicillium, Aspergillus niger ), as well as yeast (Saccharomyces cerevisiae ) using the microdilution broth method. The results indicated that the highest extraction yield of fl avonoids by ultrasonic-assisted extraction could obtain to be 3.51% using ethanol concentration of 70% (V/V ) as solvent and liquid to solid ratio of 30∶1 (mL/g) for 100 min. Anti-microbial effect of fl avonoids from ginkgo leaves to the bacteria was obvious, but it was not so effective to yeast and mold.Keywords ginkgo leaf; flavonoids; ultrasound-assisted extraction; antimicrobiai activity 银杏为银杏科银杏属植物，是我国特有珍贵树种。

目录第一章绪论 41.1银杏叶功效成分简述 41.2 银杏叶主要成分研究情况 41.3黄酮类化合物4（1）组成及结构4（5）银杏黄酮类化合物的理化性质5第二章理论分析 62.1银杏叶采集分析 62.2 提取分析 6第三章实验仪器及其材料7第四章实验方法及其过程74.1银杏叶采集、干燥74.2银杏叶中黄酮等物质的提取74.3细菌培养84.4制作菌悬液94.5提取物的抑菌性检测实验9第五章实验结果分析10第六章结论14银杏叶中黄酮的提取及其抑菌性检测摘要银杏是我国的特有植物，又称公孙树。

银杏叶为最古老的中生代孑遗植物银杏的干燥叶。

银杏有裸子植物活化石之称。

据《本草纲目》记载，银杏果具有敛肺平喘、止遗尿、白带的作用。

在医药上有很高的利用价值。

银杏所含黄酮类成分主要为银杏双黄酮、异银杏双黄酮，去甲基银杏双黄酮，其他还有二萜内酯、银杏内酯A、B、C等，其中黄酮类和二萜内酯类物质具有捕获游离基和抑制血小板活化因子、扩张脑血管、促进血液循环、抗氧化等功能，从而广泛用于治疗冠心病、心绞痛、治疗老年痴呆症和增强记忆功能、防治皮肤病、脱发等多种疾病，随着深入的研究银杏的开发和利用，银杏所特有的医药、经济价值逐步受到重视。

银杏叶的提取方法有有机溶剂萃取法、水提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、超临界萃取法、超声波提取法、酶法等。

本文采用有机溶剂提取黄酮类化合物，结果表明实验证明提取银杏叶黄酮等物质用乙醚3小时提取70℃下2次回流最佳。

菌体浓度试验表明当实验用菌体浓度在OD值为0.557，稀释到10-5和10-6比较适合，涂布能够成为单菌落，便于以后进行试验。

提取抑菌性试验证明加入0.5ml时对大肠杆菌就有明显抑制作用，其抑菌效果随着提取物浓度的增加而增强，当提取物加入2.0ml时具有完全抑菌效果。

关键词：银杏叶，总黄酮，乙醇，抑菌性检测第一章绪论1.1银杏叶功效成分简述银杏树是目前发现的当今世界上最奇特、对人类贡献最大的植物，特别是银杏叶具有五大成分五大功效，银杏叶将是世界上最有发展前景的中药材，能够治疗世界上很多的疑难杂症：（1）黄酮苷类：对心脑血管疾病，高血脂，高血压，清除氧自由基具有显著的疗效，是目前世界上治疗该类疾病最显著的药物。

花果山银杏叶中黄酮化合物的提取与测定引言银杏（Ginkgo biloba）是一种有着悠久历史的珍贵中药材，是我国特有的植物，广泛分布于我国的南北各地。

银杏叶的营养成分非常丰富，其中包含一系列的黄酮类化合物。

黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种保健作用，对人体健康非常有益。

本文的研究目的是提取花果山银杏叶中的黄酮化合物，并使用高效液相色谱法（HPLC）对其进行测定。

材料与方法实验材料•花果山银杏叶•甲醇•氯仿•石油醚•水•醋酸实验方法提取黄酮类化合物1.将花果山银杏叶晾干、研磨成细粉末，过筛备用2.将10克银杏叶粉末加入250毫升甲醇中，并放置在磁力搅拌器上，加热回流2小时。

过滤，收集过滤液。

3.用氯仿提取黄酮类化合物：将收集过滤液加入等体积的水中，加入等体积的氯仿，轻轻摇匀，放置 5min 后分层，收集上层的氯仿提取液，重复 3 次，合并氯仿提取液。

4.用石油醚洗涤：将氯仿提取液加入等体积的石油醚中，轻轻摇匀，放置 5min 后分层，收集上层的石油醚洗涤液，重复 3 次，合并石油醚洗涤液。

5.用醋酸洗涤：将石油醚洗涤液加入等量的冷醋酸中，放置 10min ，常规少量收集悬浊液，过滤，收集上清液。

6.用旋转浓缩仪将上清液旋干，得到提取物。

HPLC测定1.将提取物溶解于甲醇中，过滤，取液层。

2.取20微升溶液，注满进样器，进样，并进行分离检测。

使用AgilentZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱，流动相为乙腈-0.1%醋酸水，梯度洗脱，检测波长设置为280nm，流速为1ml/min。

3.计算黄酮化合物的含量。

结果与分析通过上述实验方法，成功提取了花果山银杏叶中的黄酮类化合物，提取率为2.82%。

使用HPLC对提取物进行了测定，得到的结果如下表所示：序号黄酮化合物名称相对保留时间含量（mg/g）1 槲皮素0.38 4.952 云南柿皮素0.45 3.183 杨梅素0.51 2.794 紫草素0.63 1.535 芦丁0.83 4.026 视黄醇 1.05 0.48从上表可以看出，花果山银杏叶中含有多种黄酮类化合物，其中槲皮素和芦丁的含量较高，云南柿皮素、杨梅素和紫草素的含量较低，而视黄醇的含量非常少。

银杏叶中有效成分黄酮的提取研究及黄酮的检验和分析姬晨辉（内蒙古农业大学理学院内蒙古呼和浩特010018）摘要：银杏是我国的特有植物，又称公孙树。

银杏叶为最古老的中生代孑遗植物银杏的干燥叶。

银杏有裸子植物活化石之称。

据《本草纲目》记载，银杏果具有敛肺平喘、止遗尿、白带的作用。

在医药上有很高的利用价值。

银杏叶的提取方法有有机溶剂萃取法、水提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、超临界萃取法、超声波提取法、酶法等。

本文采取乙醇提取总黄酮的方法，用分光光度法测定总黄酮的含量。

关键词：银杏叶总黄酮乙醇含量测定Abstract: Ginkgo biloba is our country's endemic plants, also known as maidenhair tree. Ginkgo biloba is the oldest Mesozoic relict plant Ginkgo biloba dried leaves. Ginkgo has gymnosperms living fossil. According to the "Compendium of Materia Medica" records, ginkgo fruit with convergence lung asthma, only enuresis, vaginal discharge effect. In medicine has a high value in use. Ginkgo biloba extract organic solvent extraction method, water extraction, dilute alkali or alkaline aqueous alcohol extraction, supercritical extraction, ultrasonic extraction, enzymatic and so on. This paper adopts ethanol extract flavonoids method, using spectrophotometric determination of total flavonoids.Key word s: Ginkgo biloba Flavonoids Ethanol Determination1 材料与方法1.1 试验材料银杏叶采集于自然生长的银杏树叶、75%酒精、石油醚、旋转蒸发器、丙酮、4～5碳烷基醇、醋酸酯1.2 试验方法1.2.1 银杏叶总黄酮提取率计算方法银杏叶总黄酮提取率（%）=提取液中心黄酮的重/提取所用银杏叶中总黄酮含量*100%。

银杏叶中黄酮提取及含量测定一、实验目的提取银杏叶中的总黄酮并测定其含量。

二、实验原理银杏系银杏科银杏属落叶乔木，银杏叶中含有多种生理活性成分，其中黄酮类化合物是重要的生理活性物质，具有保肝护肝、预防治疗心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。

因此，将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用，这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。

银杏叶黄酮类化合物的提取方法目前研究的有水浸取法，成本低但浸取率低；有机溶剂浸取法中，乙醇浸取的效率高且无毒，是目前采用较多的方法；韩玉谦等采用超临界流体萃取法，在70%乙醇溶液中加热回流法和CO2 超临界流体萃取法提取银杏叶中的活性成分，银杏黄酮回收率为84 . 4 % ，是常规萃取法回收率的2倍多；乙醇超声波浸取法, 黄酮提取率可达到8 6 . 7 %。

银杏黄酮含量的测定常用分光光度法和高效液相色谱法。

分光光度法自20世纪9 0年代以来一直是用来测定银杏黄酮的一种重要方法, 由于其成本低、便于操作等特点, 是一种快捷有效的方法[1]。

本实验采用乙醇作溶剂进行索氏提取，建立了用Al(NO3)3显色法对芦丁标准品和银杏叶提取液进行光谱扫描测定银杏叶总黄酮含量的方法[2]。

三、实验仪器和试剂材料：银杏叶粉末50g试剂：标准芦丁样品，无水乙醇（600ml），50mlAl(NO3)3（0.1mol/L），乙醚，5%NaNO2溶液，10%AL(NO3)3，4%NaOH溶液。

仪器：紫外分光光度计、电子分析天平、水浴锅、烘箱、烧杯、容量瓶（100ml1个、50ml1个、10ml6个）、索氏提取器、减压蒸馏装置、锥形瓶、沸石等。

四、实验步骤1.1提取银杏叶中总黄酮（1）将银杏叶洗净, 在103℃下烘干至恒重,用研钵捣碎制得银杏叶粉（2）准确称取10.0g，置于索氏提取器中，按下列条件加热回流提取：乙醇浓度80％，料液比1：20(g／ml)，回流温度85℃，回流时间2 h，平行进行1~3次实验。

黄芩中的有效成分黄酮茎叶总黄酮能够抑制组织多肽抗原、冰醋 酸二甲苯所致的急性渗出性炎症及慢性肉芽组织增生。根据有关文献 记载，黄酮茎叶总黄酮能明显促进巨噬细胞的吞噬能力，显著提高血 清中溶菌酶的含量，从而提高人体的免疫力。
1 实验器材
试管，烧杯，15ml 容量瓶，玻璃棒，胶头滴管，150ml 圆底烧瓶， 吸量管，洗耳球，加样枪，药匙，温度计，研钵，剪刀，粉碎机，索氏抽 提器，UV754N 型紫外分光光度计，超声波清洗机，旋转蒸发仪，球形 冷凝管，滤纸，分液漏斗，铁架台，电热套，橡胶软管，热风循环风箱， 电子分析天平，直行冷凝管，恒温水浴锅。
（70% 乙醇）；20g 银杏叶 (50% 乙醇 ) ；30g、20g 陈皮（无水乙醇）；
26g、30g 黄芩（无水乙醇）分组进行蒸馏。
3.3 精制 ：二氯甲烷萃取
a. 在 150ml 烧杯中，将粗产品加 50ml 蒸馏水，搅拌均匀，再将此
溶液转移至分液漏斗中 ；
b. 分 3 次用 20ml 二氯甲烷萃取，萃取过程中产生乳化现象，向分
馏瓶中的液体达到粘液状即可停止加热，将粘液倒入烧杯中。
表 2 各组旋蒸时间如下表
样品种类 银杏叶 银杏叶 银杏叶 黄芩 陈皮
溶剂 无水乙醇 70% 乙醇 50% 乙醇 无水乙醇 无水乙醇
质量 /g 15 15 15 15 15
时间 /min 23 28 32 27 24
b. 将 索 氏 抽 提 器 和 冷 凝 管 取 下，组 装 蒸 馏 装 置。将 20g 银 杏 叶
滤纸套中露出，再将包好的滤纸套放入索氏抽提器中 ；
b. 向圆底烧瓶中加入沸石，再用 50ml 的量筒量取 50ml 的乙醇溶
液，分别向圆底烧瓶和索氏抽提器中各加入 50ml 的乙醇溶液 ；

纸色 谱 法 是使 用 有 多孔和 强渗 透 能力 的滤 纸 或纤 维 素 薄膜
２ 银杏 叶中黄酮 类化 合物 的提取 方 法
１ ）有机溶 剂 提取法 主 要是使 用 的溶 剂为 酮 、醇类 ， 后再进 行 净 化 。近年 来越 来 越 多 的被 采用 。在 国 内 ，多采 用 乙醇 作 溶 剂 进 行提 取 ， 在国外 ， 多用 丙 酮作 溶 剂进 行 提 取 ； 银 杏 叶被 溶 剂 粗提 后 ， 再进 行精 制 ， 国内一般 采用 树脂 吸 附的方 式进 行精 制 ， 在 国外一般采 用有 机溶 剂萃 取的方 式精 制 。 ２ ）微波 提取 法微 波 具有 试剂用 量 少 、加 热均匀 、提 取批 量 大 、选 择性好 等 优 点 。 以微 波 辐射 的方 式可 加 快 反应 速 度 。在 提取 黄酮 类化合物 上 取得 很好 的效果 。 ３ ）超 临界 萃 取 法 具 有 节 能 明 显 ， 工艺流程简单 ， 萃 取 的 效 率高 ， 无有 机溶 剂残 留 ， 产 品质量 好 ， 对 环 境无污 染 等优 点 。 但 超 临界 萃取 法使 用 的 设备 属 高压 设 备 ， 投 资 比较 大 ， 操 作 比 较 困难等 缺点 ， 很难 应用 于大规 模 的生产 。
Ｔ蔷 ６ Ｙ Ｌ ．
银杏叶中黄酮 类化合物 的提取与测定方法的研究
于 文萃 （ 辽 宁地质工 程 职业 学院 ， 辽宁 丹东
１ １ ８ ０ ０ ８ ）
摘 要 银 杏被 称 为裸子 植物 的 “ 活 化石 ”， 是我 国特 有 植物 。其 主要 药用成 分 为黄 酮类和 萜 内酯类化合 物 。我 国银 杏叶 资源 占世界 资 源的 ３ ／ ４以上 ， 但在 银杏 叶 的提取 和 测定上 ， 还 很 落后 。所 以 ， 要 更 深一 步对 银杏叶 进行 研 究 。本 文研 究 了银 杏叶 中的黄 酮类化 合 物 ，包括 它 的成 分 、提 取方 法和测定 方 法。 由 于黄 酮类 化合 物具有 降血脂 、血 压和 治 疗冠心病、心绞痛 、慢性肝炎等多种药理及保健作用 ， 因此 ， 对其的研究具有广泛的前景。 关键 词 银 杏叶 ； 黄酮 ； 提取 ； 测定 中图分 类号 ： Ｒ ２ ８ ４ 文 献标 识码 ： ｈ

银杏叶活性成分的提取制备及测定方法的研究进展银杏叶提取物（GBE）具有独特的药理活性及巨大的临床应用价值，因此对银杏叶的药用、保健等综合价值的深入挖掘和开发日益受到重视。

本文就银杏叶的化学成分、提取分离及其质量控制方面的最新进展作一综述。

1银杏叶的化学成分银杏叶的化学成分较为复杂，迄今为止，已从银杏叶中分离出大量的极性和非极性化合物，其中主要为黄酮类化合物、萜类内酯，此外还有有机酸、烷基酚和烷基酚酸、甾体化合物及微量元素等。

1.1EGb761的化学组成GBE具有多种生理活性，目前国际上标准银杏叶提取物是按德国Schwabe专利工艺生产的EGb761，其中黄酮含量为24%，萜内酯为6%，白果酸小于0.0005%，原花青素类7.0%，羧酸类成分13.0%，儿茶素类2.0%，非黄酮苷类20%，高分子化合物4.0%，无机物5.0%，水分溶剂3.0%，其他3.0%。

提取物的各种成分是一个整体中有机的组成部分，EGb761的药理作用是各种相对固定组成的各组分共同作用的结果。

1.2化学成分的动态变化目前比较公认的GBE的有效成分为黄酮类化合物和萜类内酯，而它们在叶中的含量随季节变化和植株性别差异会有较大变化。

苑可武等［1］测定了北京地区银杏叶中黄酮含量的季节性变化，结果认为银杏叶总黄酮含量在4月份为最高，8月份时居次；同时发现大部分时期内以槲皮素为主而异鼠李素比例相对一直较小。

南京大学药物研究所对银杏叶中黄酮苷与萜类内酯含量分别进行研究［2，3］，结果发现黄酮苷含量以5月份为最高，以后逐月降低，雄性植株叶中黄酮含量明显高于雌性植株；而同株银杏树叶中萜类内酯含量随季节变化规律与黄酮苷相异，同时发现雌性植株叶子中内酯含量明显高于雄性植株，分别为0.22%,0.09%。

这一发现为我们充分利用自然资源提供了有价值的参考。

比较各地测定的银杏叶总内酯及黄酮苷含量，结果相差较大，除各自测定的方法的准确度或系统误差外，银杏总内酯与黄酮苷是否与各地的土壤、气候、环境及银杏树的性别、树龄等因素相关，还需做大量实验研究和分析统计工作。

银杏叶黄酮提取及含量测定一、实验目的1、掌握银杏叶中黄酮的提取方法2、了解银杏叶中黄酮的含量测定二、实验原理近几年来，随着对黄酮类化合物研究的日益深入与重视，黄酮类化合物提取技术的发展也得到了促进。

目前提取黄酮类化合物的方法主要包括有机溶剂浸提法、超声波提取法、超临界流体萃取法、微波提取法和酶提取法等。

１．１有机溶剂浸提法目前国内外使用最广泛的银杏叶中黄酮的提取方法就是有机溶剂提取法，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇或某些极性较大的混合溶剂，如甲醇－水（１＋１）溶液。

由于甲醇的毒性、挥发性较大，因此一般采用乙醇作为提取剂。

银杏叶干燥粉碎后用有机溶剂浸泡、提取、过滤，滤液中的溶剂经减压蒸馏除去后得银杏叶浸膏粗提物。

徐桂花等［１］提取银杏叶中黄酮类化合物时，采用乙醇（７０＋３０）溶液为提取剂，提取温度为７０℃，料液质量浓度比为１ｇ比４０ｍＬ，提取时间为４ｈ。

由于乙醇提取工艺在安全性、溶剂成本、效率及杂质酚酸去除等方面都不能应对日益严酷的市场竞争，张林涛等［1］提出了以硼砂－氢氧化钙碱水为溶剂提取银杏叶黄酮，其黄酮提取率与文献值相近，但提取工艺时间缩短为１ｈ。

１．２超声波提取法超声波提取法是利用搅拌作用、强烈的振动和空间效应、高的加速度等使药物有效成分进入溶剂，从而提高提取率，缩短提取时间，并能消除高温对提取成分影响的一种提取法。

刘晶芝等［2］运用了超声波技术与水浸提取相结合的方法得出超声波提取的最佳工艺条件为：超声频率４０ｋＨｚ，超声处理时间５５ｍｉｎ，料液质量比１比１００，提取温度３５℃，静置３ｈ，提取率为８１．９％。

郭国瑞等［3］以水为介质，超声波提取银杏叶中黄酮苷，与常规水浸提法比较，超声波提取效率大大提高，确定超声波提取的最佳工艺为：超声处理时间５５ｍｉｎ，料液质量比１比３０，提取温度５０℃，提取率为８２．３％。

１．３超临界流体萃取法超临界流体萃取法是一种以超临界流体代替常规有机溶剂对有效成分进行萃取和分离的新技术。

银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究
银杏叶中含有丰富的黄酮类化合物，这些化合物具有很多的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。

因此，银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究具有重要的意义。

银杏叶的提取方法有很多种，如水提法、醇提法、超声波提取法等。

其中，醇提法是目前应用最广泛的一种方法。

醇提法的优点是提取效率高、提取时间短、提取物质纯度高等。

但是，醇提法也存在一些缺点，如醇的价格较高、易挥发、易燃等。

影响银杏叶中黄酮类化合物提取的因素有很多，如提取温度、提取时间、醇浓度、料液比等。

其中，提取温度和提取时间是影响提取效果的重要因素。

一般来说，提取温度越高、提取时间越长，提取效果越好。

但是，过高的温度和过长的时间也会导致黄酮类化合物的降解和损失。

银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究还需要进一步深入。

未来的研究可以从以下几个方面展开：一是寻找更加环保、经济、高效的提取方法；二是研究黄酮类化合物的分离纯化方法，以提高其纯度和活性；三是探究黄酮类化合物的生物活性和作用机制，以更好地发挥其药用价值。

银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究是一个重要的课题，其研究成果将有助于开发银杏叶的药用价值，为人类健康事业做出贡献。

１００ １．２．４ 提取物抑菌效果研究［６］ 采用滤纸片法， 将厚度 为 １．５ ｍｍ 的滤纸用打孔机制成直径 ７ ｍｍ 的小纸片若 干， 并将滤纸片灭菌、烘干， 放入经最佳工艺制 得的银 杏叶提取物浸膏中浸泡 ２ ｈ 备用。另取滤纸片若干分 别放入 ７５％乙醇溶液和无菌水中作 对比空白实验， 均 浸泡 ２ ｈ 备用。按照培养基的配方配制不同菌种的培 养基， 然后在每支试管中分装 ５～８ ｍＬ 培养基， 在无菌 室 中 接 种 、培 养 。 培 养 条 件 为 大 肠 杆 菌 、多 杀 性 巴 氏 杆 菌置于 ３７ ℃培养 ２４ ｈ， 金黄色葡萄球菌置于 ３０～３２ ℃ 培养 ２４ ｈ， 念珠菌于 ３０ ℃培养 ２４ ｈ。在无菌室中用无 菌生理盐水洗下菌落， 储存于无菌的离心杯中并稀释制 成 １０４～１０５ＣＦＵ／ｍＬ 菌悬液， 杯口用石蜡密封， 置 ４ ℃冰 箱中备用。
— — —— —— —— —— —— —— —— —— —— —— —— — — 收稿日期： ２００６－ ０３－ １３； 修回日期： ２００６－ ０４－ １５ 基金项目： 福建省教育厅科技项目（ ＪＡ０５３２３） ２００ 作者简介： 李焰（ １９６８－ ） ， 女， 讲师， 在读硕士
１ 材料与方法
１．１ 主要材料与设备 １．１．１ 银杏叶 由福建长汀树王银杏生态园有限公司 提供。 １．１．２ 供试菌种 金黄色葡萄球菌（ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕ－ ｒｅｕｓ） 、大肠杆菌（ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） 、多杀性巴氏杆菌（ Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ） 均由福建龙岩学院动物医学研究所提供。 １．１．３ 培养基 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌培养采用 牛肉膏蛋白胨培养基； 多杀性巴氏杆菌培养采用鲜血 琼脂培养基； 念珠菌培养采用沙堡琼脂培养基。 １．１．４ 主要设备 ＨＨ－ ４ 恒温水浴锅、ＪＹ９２－ ２ 型超声 波细胞粉碎机、ＴＤＬ－ ４０Ｂ 离心机、单向异步电动机（ 粉 碎 机） 、ＳＨＢ－ ３ 循 环 水 式 多 用 真 空 泵 、ＺＫ－ ８２Ａ 真 空 干 燥箱和 ７５２０ 型分光光度计。 １．２ 试验方法 １．２．１ 有效成分提取 取银杏鲜叶 １ ０００ ｇ， 于 ６５ ℃烘 箱中烘 ９ ｈ， 取出 冷却至室温， 用粉碎机粉碎， 过 ６０ 目 筛， 称取 １０ ｇ， 加 ７５％乙醇 １５０ ｍＬ 浸泡， 用超声波细胞 粉碎机于 ４００～５００ 次／ｍｉｎ 振荡 ６ ｓ， 间歇 ７ ｓ， 共 ５０ 次。 然后于 ６５ ℃恒温水浴浸提 ２ ｈ， 抽滤并保留滤液， 滤渣 再用等量 ７５％乙醇于 ６５ ℃恒温水浴浸提 ２ ｈ， 抽滤后 合并 ２ 次滤液， 经离心机分离弃沉淀物制得样品原液。 进一步在真空度为 ０．０９ＭＰａ（６０ ℃）下真空浓缩， 制得样 品浓缩液， 经真空干燥得银杏叶提取物浸膏［４］。 １．２．２ 提取工艺研究 在查阅相关资料的基础［５］上 经 对比试验证实， 采用 ７５％乙醇作溶剂并用超声波细胞 粉碎机作预处理较水溶剂和其他浓度的乙醇溶液可更 好的提取银杏叶的有效成分。因此， 采用 ３ 因素 ３ 水平 的正交试验设计研究提取工艺参数， 其中固液比、浸提

设计实验总黄酮的提取和测定设计性实验：银杏叶中总黄酮的提取和测定小组人员：袁国明郎启国赵永仓王蓉一、目的要求1、探究不同浓度的乙醇和在不同时间下对黄酮类化合物提取率的影响。

2、掌握从银杏叶中提取总黄酮的操作步骤和测定方法。

3、了解提取银杏叶中黄酮类化合物制备的基本原理和方法。

二、实验原理根据超声波具有空化、粉碎、搅拌等特殊作用，对银杏叶的细胞有破坏现象，使乙醇溶液能渗透到银杏叶中，以便让总黄酮溶解在乙醇中，在通过分离提纯的方法，来获得总黄酮的含量。

黄酮类是含酚羟基的化合物，能够和铝离子产生黄色络合物，在碱性条件下溶液呈红色。

因此，本实验所采用的方法是在碱性溶液中加铝盐显色的分光光度法。

其具体操作是在所测定的溶液中加入5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH溶液，在500nm波长下，用紫外分光光度法测定所提溶液中总黄酮的含量。

三、试剂和器材1、试剂芦丁标准品；5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；30%、40%、50%、60%、70%、80％的乙醇（用95%的酒精31.91ml、42.55ml、53.19ml、68.83ml、74.47ml、85.11ml ）；及蒸馏水等。

2、材料新鲜的银杏叶3、器材容量瓶25ml（×1）100ml（×6）；吸管0.5ml（×2）1ml （×2），2ml（×1），5ml （×1）粉碎机；超声波清洗机；高速离心机；三角锥形瓶50ml（×6）；滤纸；分光光度计；烧杯；具塞刻度试管；分析天平；20ml量筒等四、操作方法1、银杏叶的处理把新鲜的银杏叶低温烘干，使水分小于8％，制成干粉，待用。

2、制作标准曲线准确称取芦丁标准品5mg，用80％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，摇匀，得0.2mg ／mL的标准溶液。

移液管精确吸取标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，分别置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO2 0.4mL，摇匀，放置5min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5%NaOH 4.0mL，再加蒸馏水至刻度，摇匀，在80℃水浴中保温10min。

银杏叶黄酮的提取与含量测定银杏叶黄酮的提取与含量测定摘要：本论文以银杏叶为原材料,用乙醇提取法提取银杏中的黄酮类物质,分别以银杏叶重量的9倍量和6倍量的7O％乙醇回流浸提两次，减压浓缩，加水沉降离心，过大孔吸附树脂柱，以80％乙醇洗脱，减压浓缩，真空干燥。

得到的银杏叶提取物其黄酮含量在33％以上,并以不同浓度的乙醇和水来分析黄酮的收率。

关键词：黄酮；大孔树脂；提取；乙醇Abstract: The present paper take the gingko leaf as material,ethanolextraction of Ginkgo biloba extract flavonoids substances , Ginkgo bilobarespectively to the weight of nine times and six times the volume of 7O %ethanol extraction twice ,decompression nrichment,Centrifugal watersettlement , with the pocket adsorption Resin Column, T o 80% ethanoleluting , decompression enrichment, Vacuum Drying ．The flavonoid contentabove 33% about the extraction of Ginkgo leaf, The yield of flavonoids wasanalyzed by the ethanol and water with different concentrations.Keywords: Flavonones ,he pocket adsorption Resin Column,xtraction,thanol1 前言银杏 (G inkgob iloba)为银杏科(Ginkgoaceae)银杏属(Ginkgo)多年落叶乔木，属于距今二亿多年前中生代侏罗纪的裸子植物，现仅存一科一属一种，有裸子植物“活化石”之称[1]。

银杏黄酮的提取工艺、性质和功能研究摘要目的从银杏叶中分离纯化出总黄酮，并用来做定性、定量分析及其功能研究。

方法采用超声提取法从银杏叶中提取总黄酮，再用硅胶柱层析法分离纯化，用镁粉、浓盐酸做定性分析，以NaNO2、Al(NO3) 3和NaOH为显色剂在510nm处测定其吸光值，分析其含量，用普鲁士蓝法进行总黄酮还原力的测定。

结果与镁粉、浓盐酸反应溶液颜色呈橙色，银杏叶提取液稀释10倍后测得吸光度0.147；稀释5倍时吸光度为0.262；不稀释时浓度为1.229，当样品浓度为0.04mg/ml时还原力最强。

结论用超声波辅助提取法、硅胶柱层析法能较快速的分离纯化出银杏叶中的总黄酮，银杏叶黄酮具有较强的还原力。

关键词银杏总黄酮；提取工艺；银杏黄酮功能前言银杏又名公孙树，为银杏科银杏属植物。

银杏叶中黄酮类化合物含量较高，为2.5%~5.91%，主要含有黄酮和银杏内酯等有效成分，其中银杏黄酮具有扩张血管，增加脑血管流量，降低脑血管阻力，改善脑血管循环功能，保护脑细胞，免受缺血损害扩张冠状动脉；防止心绞痛及心肌梗塞，抑制血小板活化因子、抗氧化，防止血栓形成，清除有害的氧化自由基，提高免疫力和调血脂等药理作用[1]。

对治疗心脑血管疾病，增加冠状动脉血流量，及治疗脑缺血、脑老化、老年痴呆症哮喘等有独特疗效[1]。

国内外相继有银杏叶黄酮新药投入市场。

1 实验仪器：紫外分光光度计、电子天平、超声波提取机、漏斗、滤纸、三角瓶、50ml 移液管、容量瓶、移液枪、烧杯等。

2 实验方法[2]2.1 银杏黄酮提取步骤：（一）采用超声提取法从银杏叶中提取总黄酮。

（二）称取100g磨碎的银杏叶，用1000ml 60％的乙醇溶解称取的银杏叶。

（三）在超声功率800Hz下提取，连续超声35min。

（四）提取液减压布式漏斗过滤，再旋转蒸发器浓缩回收乙醇。

2.2 柱层析方法2.2.1 硅胶的预处理13称取3g硅胶样品放入烧杯中，再放入烘箱中105℃，干燥40min。

银杏黄酮抑菌作用的研究胡筱白光李聪聪毛建（河北联合大学轻工学院，唐山河北063000）【摘要】本文采用液相色谱法对银杏仁提取物主成分进行了定性测定，并对其抑菌作用进行了研究。

结果表明：银杏仁乙醇提取物的主要成分为黄酮类化合物。

在抑菌圈试验中，黄酮类化合物对细菌和真菌都有一定的抑制作用，且对细菌的抑制作用略好于真菌。

在食物抑菌试验中，20mg/mL 提取液对培养72h牛肉中的大肠杆菌、白葡萄球菌和毛霉都有很好地抑制作用；对豆腐中的毛霉抑菌作用明显，对大肠杆菌和白葡萄球菌没有抑制作用，反而呈现促进作用，食品的特性决定了黄酮类物质对菌类的抑制效果。

【关键词】银杏；黄酮类物质；抑菌性；天然食品防腐剂中图分类号：TS 201.2文献标识码：A文章编号：2095-6495 (2014)11-0061-03 Inhibitory Properties of Flavoniods from Ginkgo bilobaHu Xiao Bai Guang Li CongCong Mao Jian（Qing Gong Colleg e，Hebei United University，Tangshan City，Heb ei Provin ce 063000）Ab st r act：M ain compon ents of Ginkgo biloba extractive were made qualitative analysis by H PLC and antibacterial effect s. Results showed that flavon oids were main compon ents in extractive. In bacteriostatic rin g experiment，flavon oids had inhibited effect to bacteria （Escherichia coli. and Staphylococcus albus）and fu n gu s （Mucor and Tricheodrma spp.）. And there were better inhibition effect to bacteria than to fu n gu s. In antibacterial of food experiment，20mg/mL G in kgo biloba extractive had inhibited effect to Escherichia coli.，Staphylococcus albus and Mucor which cultured for 72h in beef. 20mg/mL Ginkgo biloba extractive had obviou s inhibitor y effect to M ucor，but had certain promote r action to Es cherichia coli. and Staphylococcus albus which cultured for 72h in beancurd. C haracteristics of food determined effect s of flavon oids antibacterial.Key wo r d s：Ginkgo biloba，Flavoniods，Antibacterial effect，N atural food antiseptic银杏在我国大部分地区均有种植。