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多糖含量测定的几种不同方法比较系别:信息学院专业:生物工程学号:姓名:指导教师:指导教师职称: 讲师多糖含量测定的几种不同方法比较摘要：本文综述了多糖含量测定的几种常用方法，主要有苯酚-硫酸法、3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)、蒽酮-硫酸法、色谱法、红外光谱定量分析多糖法等。
并对这些方法的优缺点进行了分析和比较。
这些方法可为多糖含量测定提供一定的参考，并为多糖含量测定的更深入研究提供一定的理论基础。
关键词：多糖；含量；测定；方法A review of different methodsto the determination of polysaccharidesAbstract: Paper reviewed some different methods to the determination of polysaccharides, in it phenol-vitriol method, 3, 5-two nitro salicylic acid (DNS) method, anthrone-vitriol method, chromatography, infrared spectrum quantitative analysis and etc had been dealed with. And the advantages and disadvantages of these methods are analyzed and compared. It provided some related information and based theories to the determination of polysaccharides content.Key words：polysaccharides; content; determination; methods目录中文摘要 (I)英文摘要 (II)1前言 (1)2化学法测定多糖含量 (1)2.1苯酚-硫酸法 (1)2.2 3, 5-二硝基水杨酸法(简称DNS法) (2)2.3蒽酮-硫酸法 (2)3色谱法测定多糖含量的研究 (3)3.1气相色谱法(GC) (3)3.2 液相色谱法(HPLC) (3)3.3薄层色谱法(TLC) (4)4其他方法 (4)4.1红外光谱定量分析多糖法 (4)4.2生物传感器法 (5)5结论 (5)6展望 (6)参考文献 (6)致谢 (9)1前言多糖(polysaccharides，PS)是由10个以上的单糖聚合而成的生物高分子[1]。
液相色谱-串联质谱法测定血液、尿液中乙基葡萄糖醛酸苷赵晖;卓先义;严慧;沈保华【摘要】目的建立血液、尿液中乙基葡萄糖醛酸苷(ethyl glucuronide,EtG)的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法.方法血液、尿液用乙腈沉淀蛋白,离心后取上清液用LC-MS/MS检测.结果血液、尿液中EtG的检出限均为0.05 μg/mL,线性范围均为0.10～5.00 μg/mL(r>0.999),检测方法准确度为95%～109%,日间及日内精密度＜12%.对送检案例血液中EtG进行检测,效果良好.结论本方法适用于血液、尿液中EtG的检测.【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2010(026)004【总页数】4页(P269-272)【关键词】法医毒理学;血液;尿;液相色谱-串联质谱法;乙基葡萄糖醛酸苷【作者】赵晖;卓先义;严慧;沈保华【作者单位】复旦大学,上海医学院,上海,200032;司法部司法鉴定科学技术研究所,上海市法医学重点实验室,上海,200063;司法部司法鉴定科学技术研究所,上海市法医学重点实验室,上海,200063;司法部司法鉴定科学技术研究所,上海市法医学重点实验室,上海,200063【正文语种】中文【中图分类】DF795.1乙醇进入人体后，少量乙醇（＜0.1%）与尿嘧啶核苷-5’-二磷-葡萄糖醛酸结合生成乙基葡萄糖醛酸苷（ethyl glucuronide，EtG）从尿液中排出体外[1-3]。
EtG 是乙醇体内代谢的标志性代谢物，与乙醇相比，EtG在血液或尿液中具有更长的检测时限，是检测乙醇滥用的良好指标，可为解决酒后驾车逃逸后归案时已无法检出乙醇案件的判断提供科学依据。
同时尿液中EtG的检测结果可广泛应用于临床医学、征兵、招工、驾驶能力测试等活动中。
血液中EtG的测定方法主要有液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法和气相色谱-质谱联用（GC-MS）法。
用GC-MS 分析，样品需衍生化，花费时间长[1，4-6]，而用LC-MS/MS法无需衍生化[7-12]。
血糖脱氢酶法和氧化酶法
血糖脱氢酶法和氧化酶法是两种常用的测定血糖的方法。
血糖脱氢酶法是利用葡萄糖脱氢酶将葡萄糖氧化为葡萄糖醛酸，再通过比色法或荧光法测定其浓度，从而确定血糖浓度。
这种方法的优点是灵敏度高、结果准确，但需要使用昂贵的试剂和设备。
氧化酶法则是利用葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖醛酸，再通过电化学法或光学法测定生成的氧化还原电位或反应光强度，从而确定血糖浓度。
这种方法的优点是操作简单、试剂成本低，但灵敏度略低。
无论使用哪种方法，都需要注意影响测定结果的因素，如血红蛋白变异、胆固醇、药物等。
- 1 -。
血液和尿液中酒精代谢指标物乙基葡萄糖醛酸苷的GC-MS检测方法【摘要】目的：探讨血液和尿液中酒精代谢指标物乙基葡萄糖醛酸苷的GC-MS检测方法。
方法：血液和尿液以乙腈沉淀蛋白，离心，取上清液，以0.22 μm滤膜过滤后进样分析。
以保留时间和离子对相对丰度比为定性依据，空白血液中加标制作外标法校准曲线，来定量检测样品中乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）含量。
结果：EtG 在血液样品的回收率范围为 95.86%~101.88%，准确度标准偏差（SD）为1.52~2.91，在尿样的回收率为 98.10%~102.71%。
结论：GC-MS检测方法灵敏度和准确度高，适合血液和尿液中的乙基葡萄糖醛酸苷检测，值得临床进一步推广。
【关键词】血液；尿液；酒精代谢指标物；乙基葡萄糖醛酸苷；GC-MS检测方法多年来，国内外学者们都在致力寻找研究合适的生物学标记物，用以评估酒精滥用情况，其中乙基葡萄糖醛酸酯（EtG）就是近年来被广泛关注的一种重要的酒精滥用判断指标。
EtG含量与乙醇摄入量的相互关系，利用EtG作为乙醇摄入特征性指标推断饮酒时间，利用EtG含量区分是否酗酒以及判断尸体中乙醇来源等具有重要意义[1]。
本研究探析了血液和尿液中酒精代谢指标物乙基葡萄糖醛酸苷的GC-MS检测方法，报道如下。
1资料和方法1.1一般资料血液和尿液以乙腈沉淀蛋白，离心，取上清液，以0.22 μm滤膜过滤后进样分析。
以保留时间和离子对相对丰度比为定性依据，空白血液中加标制作外标法校准曲线，来定量检测样品中乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）含量。
1.2方法1.2.1材料、试剂及仪器试剂：乙醇（色谱级）购自美国Sigma -Aldrich 公司。
仪器：气相色谱质谱联用仪，Agilent6890/5975 。
采用液－液萃取以及新近的固相萃取技术可以分离血清和尿液中的EtG，代谢物可用气相质谱仪（GC-MS）和液相/质谱仪（LC/MS-MS）进行定量，检测限值为0.03mg/L-0.05mg/L。
β-葡萄糖醛酸苷酶（β-GD）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1910规格：50T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入5mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：液体37.5mL×1瓶，4℃保存；试剂四：1μmol/mL标准储备液10mL，4℃保存；产品说明：β-GD广泛存在于动物组织中，是一种参与肿瘤侵袭和转移过程的基质降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。
该酶在肝细胞中含量较高。
此外在胃癌组织中含量丰富，测定胃液β-GD活性对于研究胃癌具有重要的意义。
β-GD催化苯酚β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞，通过测定苯酚含量反应该酶活性高低。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样品测定的前处理按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP管中加入下列试剂）试剂名称（μL）加样孔测定管标准管空白管试剂一100100100试剂二100100100样本501μmol/mL50蒸馏水50混匀后，37℃水浴30min试剂三750750750混匀，540nm下测定各管吸光值注意：标准管和空白管只需测一次。
三、β-GD活性计算（1）按样本鲜重计算：单位定义：每小时每g鲜重样品中催化产生1μmol酚酞的量为一个活力单位。
β-GD（μmol/h/g鲜重）=(C标准管×V1)×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷(W ×V1÷V2)÷T=2×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷W（2）按样本蛋白浓度计算：单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol酚酞的量为一个活力单位。
总糖含量的测定苯酚硫酸法
总糖含量的测定苯酚-硫酸法的实验原理为：苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起显色反应，己糖在490nm处（戊糖及糖醛酸在480nm）有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
实验材料包括葡萄糖试剂、试剂盒、浓硫酸、苯酚等，实验步骤如下：
1. 材料处理：将0.5～1g所测的材料捣碎，用适量蒸馏水、玻璃碾磨器碾磨并分次抽提，混合液离心得抽提液即样品液。
2. 标准曲线制作：取50μg/ml的己糖标准溶液0ml，0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml于试管中，用水补足到0.5ml，加0.3ml 5%酚溶液，混匀后快速加入1.8ml浓硫酸，振荡混匀，室温放置20min即可出现橙黄色，以第一管调零点，可于490nm处比色测定读OD值。
以糖含量为横坐标，相应的OD值为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品含量测定：取0.5ml内含2～25μg糖量，同样加入0.3ml 5%酚溶液，混匀后立刻沿管壁加入浓硫酸1.8ml，振荡混匀，达室温后，可测490nm处的OD值，从标准曲线上查相应糖含量。
该方法不需要沸水浴加热，且蛋白质的存在对显色反应影响不大，故也可用于糖蛋白中的己糖测定，还可用于己糖甲基化衍生物和6-脱氧核糖、戊糖的测定。
除此之外，该方法的热量来自浓硫酸与水的混合，因此加浓硫酸时反应快，且应立即混匀，试管应大一些，以免烫手。
林下参片中总糖、还原糖及糖醛酸的含量测定
王翠竹;李平亚;张楠淇;王振洲;朱海林;祁增;郑炳真;张浩;孟研;刘金平
【期刊名称】《特产研究》
【年(卷),期】2016(038)003
【摘要】采用紫外分光光度法测定林下参片中总糖、还原糖及糖醛酸的含量，结果显示，其含量分别为66.35％、12.58％及1.19％。
本研究为首次通过紫外分光光度法对林下参片中的糖类成分进行含量测定，为林下参片的科学评价提供了科学依据。
【总页数】4页(P54-57)
【作者】王翠竹;李平亚;张楠淇;王振洲;朱海林;祁增;郑炳真;张浩;孟研;刘金平【作者单位】吉林大学药学院，长春 130021;吉林大学药学院，长春 130021;吉林大学药学院，长春 130021;吉林大学药学院，长春 130021;吉林大学药学院，长春 130021;吉林大学药学院，长春 130021;吉林大学药学院，长春 130021;江苏恒瑞医药股份有限公司，江苏连云港 222047;吉林大学药学院，长春 130021;吉林大学药学院，长春 130021
【正文语种】中文
【中图分类】R917
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柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法李卫燕;李萍;曹蔚【摘要】首次建立柱前衍生化高效液相色谱法分析当归酸性多糖中糖醛酸、氨基糖和中性糖的方法.D-甘露糖、D-葡萄糖胺、L-鼠李糖、D-半乳糖胺、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-岩藻糖等10种单糖经柱前衍生化法处理后作为标准品.色谱条件:Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm i.d.×250 mm,5μm),流动相由乙酸铵水溶液(100 nmol/L,pH =5.0)、乙腈和四氢呋喃以81:17:2的体积比组成,流动相流速1.0 mL/min,检测波长250 nm,柱温25℃.实验结果表明,当归酸性总多糖是由D-甘露糖、D-葡萄糖胺、L-鼠李糖、D-半乳糖胺、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸和D-葡萄糖以1.5:14.1:1.7:1.6:2.0:2.3:1.0的摩尔比例组成.【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2015(015)010【总页数】4页(P151-154)【关键词】当归;多糖;高效液相色谱;柱前衍生化;单糖【作者】李卫燕;李萍;曹蔚【作者单位】第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032;第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032;第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032【正文语种】中文【中图分类】R284.2中药当归是伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.) Diels的干燥根，主产于甘肃岷县，为常用中药，具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功效。
近十几年来，经过国内外学者的研究，发现多糖是当归的主要成分之一[1]。
药理学研究表明，当归多糖具有抗血栓及改善血液流变、保护心血管系统、抑菌、抗肿瘤、保护肺部组织细胞、利胆保肝、补血等生物活性[2]。
多糖的单糖组成分析是控制多糖质量和分析多糖结构的重要环节。
QSDMR 0006 S-2014 山东明仁福瑞达制药有限公司保健食品悦己牌悦己靓丽胶囊山东明仁福瑞达制药有限公司企业标准Q/SDMR 0 006S-2014代替Q/ SDMR 0001S-2011保健食品悦己牌悦己靓丽胶囊2014-01-05公布2014-01-17实施山东明仁福瑞达制药股份有限公司公布前言按照《中华人民共和国食品安全法》制定本标准。
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本标准由山东明仁福瑞达制药股份有限公司提出并起草。
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生产单位：名称：山东明仁福瑞达制药股份有限公司。
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悦己牌悦己靓丽胶囊1 范畴本标准规定了悦己牌悦己靓丽胶囊的技术要求、食品营养强化剂、生产加工过程卫生要求、检验方法、检验规则、标志、包装、运输与贮存。
本标准适用于以鸡冠提取物、鱼蛋白、维生素C、维生素E为原料，经配料、混匀、填充、包装等要紧工艺加工制成的具有美容（改善皮肤水分）保健作用的保健食品悦己牌悦己靓丽胶囊。
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GB/T 191 包装储运图示标志GB 2760 食品添加剂使用标准GB/T 601 化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T 602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB/T 603 化学试剂试验方法中所用制剂及其制品的制备GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定GB 4789.2 食品微生物学检验菌落总数测定GB 4789.3 食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.4 食品微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.5 食品微生物学检验志贺氏菌检验GB 4789.10 食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB/T 4789.11 食品微生物学检验溶血性链球菌计数GB 4789.15 食品微生物学检验霉菌和酵母计数GB 5009.3 食品中水分的测定GB 5009.4 食品中灰分的测定GB 5009.5 食品中蛋白质的测定GB/T 5009.11 食品中总砷及无机砷的测定GB 5009.12 食品中铅的测定GB/T 5009.17 食品中总汞及有机汞的测定GB 5749 生活饮用水卫生标准GB/T 6543 运输包装用单瓦楞纸箱和双瓦楞纸箱GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 7718 预包装食品标签通则GB 14880 食品营养强化剂使用卫生标准GB 16740 保健（功能）食品通用标准GB 17405 保健食品良好生产规范GB 14881 食品安全国家标准食品企业通用卫生规范GB 14754 食品安全国家标准食品添加剂维生素C（抗坏血酸）Q/HJT0001S-2011 胶原蛋白粉Q/WSS 006-2007 食品添加剂维生素E醋酸酯粉500CWSYBB 00122002 口服固体药用高密度聚乙烯瓶JJF 1070 定量包装商品净含量计量检验规则国家质量监督检验检疫总局[2005]第75号令《定量包装商品计量监督治理方法》《中华人民共和国药典》2010年版3 技术要求3.1 原料3.1.1 鸡冠提取物应符合企业标准的规定。
虫草发酵多糖的提取,结构分析及生物活性研究付海田;邓超;王敏;陈敬华【摘要】采用热水浸提法从虫草发酵菌粉中获得水溶性虫草发酵多糖(CY),该多糖以中性糖为主要成分,分子量为9.3×103 g/mol,主链由β糖苷键连接,单糖组成为木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖.利用还原力、羟基自由基和DPPH体系对提取得到的多糖进行体外抗氧化活性测定,并以小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7模型对其进行免疫增强作用的测定.结果表明,该多糖具有较好的抗氧化性,并且呈现出一定的量效关系;能促进小鼠单核巨噬细胞增殖,并增强巨噬细胞分泌NO和TNF-α、IL-1、IL-6、IL-12等细胞因子的能力,提示该多糖具有一定的免疫增强功能.【期刊名称】《天然产物研究与开发》【年(卷),期】2014(026)001【总页数】6页(P111-116)【关键词】虫草发酵菌粉;多糖;抗氧化;免疫增强【作者】付海田;邓超;王敏;陈敬华【作者单位】江南大学药学院,无锡214122;江南大学药学院,无锡214122;江南大学药学院,无锡214122;江南大学药学院,无锡214122【正文语种】中文【中图分类】R285.5虫草又称冬虫夏草，原为野生珍稀真菌，分布于我国青海、西藏、四川、甘肃、云南等地，在秘精益气、止血化痰、滋补强壮等方面有独特的疗效［1］。
虫草潜在的生理活性与其多糖成分有着密切的关系。
真菌多糖具有提高免疫力、抗肿瘤、延缓衰老、降血糖、降血压、降血脂等生理功效，并且对正常细胞不产生毒副作用［2］，因此可作为潜在的机体保健成分、免疫增强剂和抗衰老药物加以开发。
目前已有人工培植虫草子实体，但因其生长环境极其严格复杂，难以模拟，而且栽培时间长，收获量极少，因此不能被大规模的应用到医用事业中。
而采用人工发酵技术，很大程度上降低了成本投入，可获得较多的成品，如菌丝体和发酵菌粉等。
本文从虫草发酵菌粉中通过热水浸提法得到一种虫草发酵多糖，测定了其分子量、糖苷键构型及单糖组成，并对该多糖的抗氧化和免疫增强活性进行了研究，为虫草多糖的进一步开发利用提供了一定的理论基础。
糖醛酸测定方法
一．间羟基联苯比色法
1.原理：多聚己糖醛酸与含四硼酸钠的硫酸溶液在高温作用下水解, 水解产物进一步与间羟基联苯反应, 生成粉红色衍生物, 产生紫外吸收, 且在一定浓度范围内, 该衍生物吸收值与糖醛酸含量呈线性关系, 可通过比色法对糖醛酸含量进行计算。
2.试剂配制：
间羟基联苯溶液：称取0.15g间羟基联苯溶于5 mg/mL氢氧化钠溶液中, 定容至100mL, 其质量浓度为1.5mg/mL.
四硼酸钠/硫酸溶液：0.478g四硼酸钠溶于100mL浓硫酸中, 备用。
葡萄糖溶液：称取葡萄糖25.00mg,加水溶解并定容至25mL混匀, 成1mg/mL的标准溶液。
(排除中性糖对测定结果的影响)
半乳糖醛酸标准溶液：称取干燥至恒重的半乳糖醛酸25.00 mg, 加水溶解并定容至25mL, 混匀, 成1mg/mL的标准溶液。
3. 波长扫描：取半乳糖醛酸标准溶液0.50mL, 置10 mL容量瓶中, 用水定容至刻度, 摇匀( 质量浓度为0.05 mg/mL）。
量取溶液1.00 mL 置于20 mL具塞试管, 置冰水浴中, 加入四硼酸钠/硫酸溶液6 mL, 待全部加完后, 用旋涡混合器混匀, 于沸水浴中加热5 min, 冰水浴中冷却后用微量加样枪加入1.5 mg/mL间羟基联苯溶液100 μL, 混匀后振摇5 min, 超声除去气泡。
以1 mL蒸馏水同上操作制得空白液调零, 用UV-2450 型紫外可见分光光度计在200 nm~ 800 nm波长范围内扫描, 确定最大吸收波长。
4.标准曲线的制备：取1mg/mL 半乳糖醛酸标准溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL和0.6 mL置于10 mL容量瓶中, 加水定容, 再分别取上述各配制溶液1.0mL至于20mL具塞试管，置冰水浴中, 加入四硼酸钠/硫酸溶液6 mL, 待全部加完后, 用旋涡混合器混匀, 于沸水浴中加热5 min, 冰水浴中冷却后用微量加样枪加入1.5 mg/mL间羟基联苯溶液100 μL, 混匀后振摇5 min, 超声除去气泡。
以1 mL蒸馏水同上操作制得空白液调零,在最大吸收波长处测定吸光度。
5.样品测定：取样品5 mg置100 mL容量瓶, 加水溶解定容至刻度。
取溶液1.00 mL 按标准曲线项方法操作。
6.中性糖影响：在一定浓度半乳糖醛酸标准溶液中, 添加不同质量的中性糖（以葡萄糖为例）, 测得加入不同质量浓度的中性糖对半乳糖醛酸溶液吸光度的影响。
二．高效液相色谱法A
1.标准溶液的制备：
精密称取半乳糖醛酸对照品205. 4 mg,置50mL容量瓶中,加超纯水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每1 mL中含半乳糖醛酸4. 108 mg) 。
精密吸取上述对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0mL置于25 mL容量瓶中,加超纯水稀释至刻度,摇匀,制得0.116432、0.132864、0.149296、0.165728、0.18216、0.198592、
1.115024、1.131456、1.147888 mg/mL的系列标准溶液。
2.标准曲线的绘制：
取配制好的半乳糖醛酸系列标准溶液,分别进样20μL,按下面色谱条件测定半乳糖醛酸峰面积,以半乳糖醛酸峰面积为纵坐标, 对照品浓度(mg/mL)为横坐标,绘制标准曲线。
求得回归方程。
3.色谱条件
色谱柱: Sugar-PakⅠ(300 mm ×6. 5 mm) ,流动相: 0. 0001 mol/L EDTA水溶液,流速: 0. 6 mL /min,示差检测器,柱温: 90 ℃,示差检测池温度: 40 ℃,进样量: 20μL。
理论板数:以半乳糖醛酸峰计算,不得低于3000。
高效液相色谱法B
色谱条件色谱柱：ZORBAX SAX 4.6×250mm 5-Micron Agilent ；柱温：40℃；流动相：0.7mol/l乙酸；流速：1.0ml/min；测定波长：示差检测；示差检测器温度：40℃；进样量：20μL。
标准曲线的绘制：称取古洛糖醛酸标准品，用重蒸水溶解，配制成浓度为1.07、2.14、3.21、5.35、10.7mg/mL的标准溶液。
分别进样10μL进行HPLC测定，以峰面积为纵坐标，相应标准溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线进行线性回归。
样品处理与检测：准确称取300mg（精确至±0.0001）海藻酸钠或者海藻，加入72%硫酸溶液3.5mL，于研钵中研磨2h，用100mL 蒸馏水将其转移至250mL三角瓶，100℃沸水浴加热2.5h，于自来水中冷却至室温，加入过量BaCO3粉末，充分反应至溶液pH 为7左右，3000r/min离心，沉淀用150mL 蒸馏水洗涤3次，将上清液和洗涤液合并在一起，45℃真空旋转浓缩后，定容至10mL，进样10μL进行HPLC测定。
依据样品测定的峰面积和出峰时间，在相应的标准曲线查出所测组分的量，结合所取样品的质量和定容体积，计算出各组分的含量。
三．咔唑—硫酸比色法（修改后）
1. 原理：半乳糖醛酸在硫酸中与咔唑试剂发生缩合反应，生成紫红色化合物，其呈色强度与半乳糖醛酸含量成正比，可比色定量。
2. 对照品溶液的配制：精密称取干燥至恒重的半乳糖醛酸19. 8 mg，用适量的蒸
馏水溶解，并定容于100 ml 容量瓶中，配成198 μg /ml 的对照品溶液。
使用时稀释至99μg/ml。
四硼酸钠-硫酸溶液的配制:精密称取0.956 g 四硼酸钠溶解于200 ml 浓硫酸中，超声溶解，备用。
咔唑溶液的配制：精密称取咔唑100 mg，溶解于100 ml无水乙醇中，配制成0.1%的咔唑溶液备用。
4.半乳糖醛酸标准曲线制备：分别精密吸取对照品0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml溶液置于10 ml 具塞试管中，各管加水至0.5 ml，分别在冰水浴中加入四硼酸钠－硫酸溶液3ml，用漩涡混合器混匀，于沸水浴中加热5 min，取出后立即冷却至室温，加0.1%咔唑溶液0.1 ml，摇匀，煮沸5min，冷却至室温后在530nm处测定其吸光度。
以浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标进行线性回归。
方法学考察：
⑤精密度试验取同一对照品溶液,重复测定5 次。
⑥稳定性试验取同一供试品溶液,每隔30min 测定1 次，共测定2h 。
⑦重现性试验取同一批号样品多糖5 份,按测定法操作。
⑧加样回收率试验精密称取已知含量多糖5份,分别精密加入葡萄糖醛酸对照品适量,测定吸收度,计算回收率。
