多糖中糖醛酸含量测定方法的研究进展

实验一硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2．方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。

3．主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。

４．掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。

５．试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。

2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。

6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。

以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。

用exceL软件求得回归方程2）待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。

多糖含量测定的方法综述
多糖是一类由多个单糖分子组成的生物大分子，在生物体内具有重要的生理功能和生
物活性。

对多糖含量的测定是生物化学研究中的重要内容之一，也是食品、医药、环境、
农业等应用领域中的常见分析任务。

本文将综述多糖含量测定的一些常用方法。

1. 加热法测定：多糖溶液在高温下能够形成胶体物质，形成胶体物质的温度范围称
为胶化温度。

多糖溶液的胶化温度与多糖含量呈正相关关系。

可以通过测定多糖溶液胶化
温度来间接评估多糖含量。

2. 光密度法测定：多糖在特定波长下会吸收特定的光线，可以通过测定多糖溶液的
吸光度来计算多糖的含量。

这种方法需要使用特定的光密度仪器来进行测定。

3. 盐酸水解法测定：多糖可以通过与酸进行水解来得到单糖，再通过选择性的反应
来检测单糖的含量。

盐酸水解法可以利用酸来降解多糖，然后通过比色法或高效液相色谱
法来测定水解产物中的单糖含量。

5. 高效液相色谱法测定：高效液相色谱法是一种高效、灵敏的分离和测定方法，可
以用于测定多糖中的单糖含量。

在高效液相色谱仪上，多糖可以通过色谱柱进行分离，并
通过检测器进行检测和定量。

6. 离子色谱法测定：离子色谱法是一种常用的分析方法，在测定多糖含量方面也有
应用。

多糖中的单糖可以转化为对应的酸性或碱性离子，然后通过离子色谱仪进行分离和
测定。

多糖含量测定的方法包括加热法、光密度法、盐酸水解法、酶解法、高效液相色谱法、离子色谱法和比色法等。

根据实际需要和实验条件的不同，可以选择合适的方法来进行多
糖含量的测定。

多糖含量测定的方法综述多糖是一类具有多种生物活性的化合物，广泛存在于植物、真菌和藻类等生物体中。

由于其具有抗氧化、抗炎、调节免疫功能等多种生物活性，因此对多糖含量的测定具有重要意义。

目前，常用的多糖含量测定方法主要包括酚-硫酸法、酚酸法、甲醇-硫酸法、糖酶法、紫外-可见分光光度法等。

本文将对这些方法进行综述，以便更好地了解多糖含量的测定方法及其特点。

酚-硫酸法是一种常用的多糖含量测定方法。

该方法利用硫酸在酚的存在下与多糖产生浓度相关的颜色反应，然后通过测定颜色的吸光度来计算多糖的含量。

这种方法简单、快速，并且对一定范围内的多糖都有较好的灵敏度，因此被广泛应用于多糖含量的测定。

与硫酸反应产生的热量大，操作时需要小心操作，同时硫酸具有腐蚀性，易造成伤害。

因此在使用该方法时需要十分小心，并采取相应的安全措施。

甲醇-硫酸法是一种利用甲醇和硫酸处理多糖样品后，测定多糖含量的方法。

该方法可以有效地将多糖降解成单糖，然后通过测定单糖的含量来间接计算多糖的含量。

甲醇-硫酸法对多糖的种类和结构较不敏感，操作简便，因此也被广泛用于多糖含量的测定。

但是在操作中也需要小心处理甲醇和硫酸，以防造成伤害。

紫外-可见分光光度法是一种利用多糖对紫外或可见光的吸收特性进行测定多糖含量的方法。

该方法对多糖的种类和结构具有一定的选择性，可以根据样品的特性选择合适的波长进行测定，因此较为灵活。

该方法的操作简便，且测定结果稳定，因此也被广泛应用于多糖含量的测定。

除了以上介绍的方法外，还有一些其他的多糖含量测定方法，如高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。

这些方法在特定情况下具有一定的优势，可以更准确地测定多糖的含量。

但是这些方法通常需要较为复杂的仪器设备，且操作难度较大，因此在实际应用中较少使用。

多糖含量的测定方法有多种，各有特点。

在选择方法时，需要根据具体的样品特性、实验条件和仪器设备等方面进行考量，选择合适的方法进行测定。

在进行多糖含量测定时，也需要严格操作，遵守安全规范，以确保实验的顺利进行。

改良的苯酚硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究一、本文概述多糖和寡糖作为生命体系中的重要组成部分，广泛存在于各类生物体内，具有多种生物学功能，如能量储存、细胞识别、信号传导等。

因此，准确测定多糖和寡糖的含量对于理解其生物学作用以及评估其在食品、医药等领域的应用价值具有重要意义。

传统的苯酚硫酸法是一种常用的多糖和寡糖含量测定方法，但由于其存在的一些局限性，如灵敏度低、抗干扰能力差等，使得该方法在实际应用中受到一定的限制。

因此，本文旨在研究改良的苯酚硫酸法，以提高其测定多糖和寡糖含量的准确性和稳定性，为多糖和寡糖的研究和应用提供更为可靠的分析方法。

本文首先将对传统的苯酚硫酸法进行详细的介绍和分析，阐述其原理、操作步骤以及存在的问题。

在此基础上，本文将详细介绍改良的苯酚硫酸法的具体实施方案，包括试剂的选择、反应条件的优化、干扰物质的排除等方面。

随后，本文将通过一系列的实验验证改良后的方法的可行性和准确性，包括标准曲线的绘制、精密度和稳定性的考察、实际样品的测定等。

本文将对改良的苯酚硫酸法的应用前景进行展望，探讨其在多糖和寡糖研究以及相关领域的应用价值。

通过本文的研究，期望能够为多糖和寡糖含量的准确测定提供一种更为可靠的分析方法，为相关领域的研究和应用提供有益的参考。

二、材料与方法本实验所使用的主要试剂包括苯酚、硫酸、多糖标准品（如葡萄糖、果糖等）以及待测的多糖和寡糖样品。

所有试剂均为分析纯，购自国内知名试剂供应商。

实验所需设备包括电子天平、水浴锅、分光光度计、离心机等。

苯酚硫酸法是一种基于多糖和寡糖在浓硫酸作用下与苯酚发生显色反应的原理来测定其含量的方法。

在酸性条件下，多糖和寡糖会被硫酸水解成单糖，随后与苯酚发生缩合反应，生成有色化合物，其颜色深浅与多糖和寡糖的含量成正比。

（1）标准曲线的绘制：准确称取适量多糖标准品，用蒸馏水配制成不同浓度的标准溶液。

分别取各浓度标准溶液与苯酚硫酸试剂混合，于沸水浴中加热一定时间后冷却，用分光光度计测定各溶液在特定波长下的吸光度。

中药多糖质量控制研究进展本文就近年来常见中药多糖质量控制方法，在总糖含量测定方法、分子量大小和分布测定方法、单糖组成和摩尔比测定方法、杂质检测方法等方面进行综述，希望能够为中药多糖的研究和开发提供一定的参考。

标签：多糖；质量控制；总糖含量；分子量；单糖多糖由10个或10个以上单糖通过缩合而形成的链状结构的物质。

在自然界中，植物、动物、微生物和海洋生物中都有多糖的存在。

近年来，已发现不少多糖类物质具有很好的生物活性，如抗肿瘤、免疫促进活性、抗病毒、降血糖、抗凝血等[1]。

多糖的多样化生物活性使多糖类药物的开发与研究成为了当前新药研究的热点。

多糖质量控制的问题是多糖类新药研发中的瓶颈问题[2]。

多糖是一类分子量相对较大的物质，其结构与蛋白质类似，也可分为一级结构、二级结构、三级结构、四级结构，而多糖的生物与其初级结构和高级结构都有密切的关系。

多糖的一级结构就包含分子量大小及分布、单糖组成及摩尔比、糖苷键链接方式、重复结构单元和分支度等多方面的问题。

这些问题使多糖的定性和定量检测成为一个很大的难题。

现就多糖质量控制的问题，在总糖含量测定方法、分子量大小和分布测定方法、单糖组成和摩尔比测定方法、杂质检测方法等方面进行综述。

1 多糖中总糖含量测定方法多糖的总糖含量决定了其纯度，是多糖药物质量控制最基本的问题。

多糖总糖含量测定一般利用单糖的缩合反应进行显色后用比色法测定；也有直接采用高效液相色谱法（HPLC）测定多糖含量[3]，但由于缺少标准对照和有效检测手段等因素，该方法并未得到广泛认同。

1.1 苯酚/硫酸法多糖在浓硫酸作用下，迅速水解脱水生成糠醛或糠醛类似物，然后与苯酚缩合生成1种红色化合物，在一定范围内生成物颜色深浅和多糖中总糖含量成线性关系，由此来测定多糖中总糖含量。

该法所采用试剂的价格便宜，蛋白质等物质不干扰测定，灵敏度高，故被广泛采用[4-7]。

该法需要注意的问题有：己糖在显示后最大吸收波长一般在490 nm处，戊糖和糖醛酸显示后最大吸收波长一般在480 nm处；苯酚在空气中易氧化生成醌类物质，导致吸收波长发生偏离或吸收值不稳定，所以苯酚在使用前一般宜进行重蒸馏，且需要现配现用；不同多糖在使用该法时，苯酚、硫酸用量、反应温度和时间等都需要进行优化。

丹参多糖的含量测定、结构表征及药理活性研究进展作者：景永帅马云凤王非凡张钰炜吴兰芳张丹参来源：《中国药房》2020年第16期摘要目的：为丹参多糖的进一步研究和开发提供参考。

方法：以“丹参”“多糖”“含量测定”“结构”“活性”“Salvia miltiorrhiza”“Polysaccharide”“Content determination”“Structure”“Activity”等为中英文关键词，在中国知网、万方数据、维普网、PubMed、ScienceDirect等数据库中组合检索1996年1月-2020年6月发表的相关文献，对丹参多糖的含量测定、结构表征和药理活性进行歸纳总结。

结果与结论：共检索到相关文献889篇，其中有效文献56篇。

丹参多糖的提取方法包括水提醇沉法、热水浸提法等，含量测定方法以苯酚-硫酸法为主，多由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖等组成，糖苷键连接方式以（1→6）-α-D-吡喃葡萄糖为主。

丹参多糖具有保护心肌、保护肝脏、调节免疫、抗氧化、抗肿瘤等多种药理活性。

目前，丹参多糖的含量测定、结构表征与药理活性研究已取得一定进展，但大多仍停留在实验研究阶段，尚需加强其工业化生产和相关制剂的研究。

关键词丹参多糖;含量测定;结构表征;药理活性丹参为唇形科多年生草本植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根和根茎，味苦、性微寒，归心、肝经，具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈之功效[1]，临床常作为活血化瘀药[2]。

丹参是国家卫健委公布的药食同源药材，主产于我国湖北、河南、山东、山西以及四川等地[3]。

丹参的临床应用广泛，用于冠心病、高血压、慢性肝炎、肾病等症的疗效明显。

丹参多糖是丹参的主要有效成分之一[4-6]，具有抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、免疫调节、降血糖及降血脂等多种生物活性[7]，被广泛应用于保健品和药品中，具有较高的研究价值。

丹参多糖作为天然的高分子化合物，其结构和理化性质是影响多糖生物活性和作用机制的关键因素[6-9]，因此有必要对其含量测定、结构表征及药理活性研究进展进行汇总分析。

柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法李卫燕;李萍;曹蔚【摘要】首次建立柱前衍生化高效液相色谱法分析当归酸性多糖中糖醛酸、氨基糖和中性糖的方法.D-甘露糖、D-葡萄糖胺、L-鼠李糖、D-半乳糖胺、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-岩藻糖等10种单糖经柱前衍生化法处理后作为标准品.色谱条件:Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm i.d.×250 mm,5μm),流动相由乙酸铵水溶液(100 nmol/L,pH =5.0)、乙腈和四氢呋喃以81:17:2的体积比组成,流动相流速1.0 mL/min,检测波长250 nm,柱温25℃.实验结果表明,当归酸性总多糖是由D-甘露糖、D-葡萄糖胺、L-鼠李糖、D-半乳糖胺、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸和D-葡萄糖以1.5:14.1:1.7:1.6:2.0:2.3:1.0的摩尔比例组成.【期刊名称】《科学技术与工程》【年(卷),期】2015(015)010【总页数】4页(P151-154)【关键词】当归;多糖;高效液相色谱;柱前衍生化;单糖【作者】李卫燕;李萍;曹蔚【作者单位】第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032;第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032;第四军医大学药学系天然药物学教研室,西安710032【正文语种】中文【中图分类】R284.2中药当归是伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.) Diels的干燥根，主产于甘肃岷县，为常用中药，具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功效。

近十几年来，经过国内外学者的研究，发现多糖是当归的主要成分之一[1]。

药理学研究表明，当归多糖具有抗血栓及改善血液流变、保护心血管系统、抑菌、抗肿瘤、保护肺部组织细胞、利胆保肝、补血等生物活性[2]。

多糖的单糖组成分析是控制多糖质量和分析多糖结构的重要环节。

多糖成分分析摘要：对多糖的提取、分离纯化、含量分析以及组分结构分析的研究进展进行了综述，并对其应用前景进行了展望。

多糖的组分分析是多糖质量控制和提供多糖基本信息的重要环节。

关键词：多糖；提取；分离纯化；表征鉴定多糖(polysaccharides,PS)又称多聚糖，由10个以上的单糖分子通过苷键聚合而成，其分子量较大，一般由几百甚至几万个单糖分子组成，是除了蛋白质和核酸以外的一类重要的生物大分子。

虽然糖类的研究并不比蛋白质和核酸晚，但其研究层次与水平还远远落后于蛋白质和核酸。

多糖在自然界高等植物、动物、藻类及细菌类内均有存在，分布极广。

有些多糖无生物活性，如淀粉、树胶和粘液质等，通常被当做杂质除去。

而具有药效作用的多糖大多是活性多糖。

1969年，日本学者千原率先证实了香菇热水提出物的抗肿瘤活性，羽田、佐木进一步研究证实有效成分是香菇多糖。

自此，全世界掀起了从真菌中提取抗肿瘤活性成分的热潮[1]。

尤其近年来，随着生物学、化学等相关学科的飞速发展，多糖化合物也得到了日益深入的研究。

国际科学界视多糖的研究为生命科学的前沿领域，甚至提出21世纪是多糖的世纪。

鉴于多糖研究所具有的学术价值和广阔的应用前景，使得多糖研究成为人们关注的研究热点之一；又目前研究比较多的是植物多糖和微生物多糖，因此本文将就植物多糖和微生物多糖的成分分析研究进行概括、总结，并就存在的问题加以展望。

1 多糖的提取多糖的提取通常要根据多糖的存在形式及提取部位不同决定其提取方法。

一般从植物中提取多糖，先用石油醚、乙醚、丙酮等有机溶剂进行预处理，除去脂溶性杂质[1]。

然后根据不同的溶解度选择一种溶剂进行萃取，常用的为水、稀盐、稀酸、稀碱等溶剂。

传统的提取方法有水提醇沉法、稀碱浸提法、稀酸浸提法和酶法等，随着对多糖研究的不断深入，又出现超滤法、微波辅助浸提法以及超声波法等等。

1.1 溶剂提取法溶剂提取法是提取多糖的常用方法，利用多糖不溶于乙醇的性质在提取液中加入乙醇使多糖沉淀出来。

实验一硫酸苯酚法测多糖含量The pony was revised in January 2021实验一硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求? 测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2．2．方法原理3．糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。

4．3．主要实验仪器及材料5．浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。

6．４．掌握要点7．硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。

8．５．试剂配制9．1）葡萄糖标准液的配制10．准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。

11．2）90%苯酚液的配制12．?准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。

6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤7.管号 0? 1 2 3 4 5 6 78.葡萄糖9.10.苯酚液11.浓硫酸?12.取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。

以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。

用exceL 软件求得回归方程13.2）待测样品多糖的测定与计算14.将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。