糖醛酸测定方法
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人参多糖中糖醛酸含量测定方法的建立一、本文概述人参多糖作为一种具有广泛药理活性的天然产物,近年来在医药、保健品等领域的应用日益受到关注。
其中,糖醛酸作为人参多糖的重要组成成分,对于其生物活性的发挥起着至关重要的作用。
因此,建立一种准确、可靠的人参多糖中糖醛酸含量测定方法,对于人参多糖的质量控制、药效研究以及开发利用具有重要意义。
本文旨在建立一种适用于人参多糖中糖醛酸含量测定的方法,并对其进行系统的验证和应用研究。
通过对多种测定方法的比较和优化,最终确定了一种基于高效液相色谱法的糖醛酸含量测定方法。
该方法具有操作简便、准确性高、重现性好等优点,可广泛应用于人参多糖的质量控制、生产工艺优化以及药效研究等领域。
本文首先对人参多糖的提取方法进行了优化,以提高糖醛酸的提取效率。
然后,通过比较不同色谱柱、流动相、检测波长等条件,优化了高效液相色谱法的测定条件。
在此基础上,建立了糖醛酸含量测定的标准曲线,并对方法的准确性、精密度、稳定性等进行了系统的验证。
将该方法应用于实际样品的分析,为人参多糖的质量控制提供了可靠的技术支持。
通过本文的研究,不仅建立了一种准确、可靠的人参多糖中糖醛酸含量测定方法,而且为人参多糖的开发利用提供了有力的技术支持。
本文的研究结果也为其他天然产物中糖醛酸含量的测定提供了一定的参考和借鉴价值。
二、材料与方法本实验所需的试剂包括标准糖醛酸、人参多糖样品、硫酸、咔唑等。
所有试剂均为分析纯,购自国内知名试剂供应商。
实验所用仪器包括紫外可见分光光度计、电子天平、恒温水浴锅、离心机等。
所有仪器均经过校准,确保实验结果的准确性。
准确称取适量标准糖醛酸,用去离子水配制成不同浓度的标准溶液。
分别取各浓度标准溶液适量,加入咔唑试剂和浓硫酸,摇匀后在沸水浴中加热一定时间,冷却后测定其在特定波长下的吸光度。
以糖醛酸浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
将人参多糖样品研细,精确称取适量样品,加入去离子水,在恒温水浴锅中加热溶解。
新疆赤芍多糖中糖醛酸含量的测定王 慧,热娜·卡斯木*,樊珍珍(新疆医科大学药学院,新疆乌鲁木齐830011)摘 要:目的:测定新疆赤芍多糖中半乳糖醛酸的含量。
方法:采用间羟基联苯法对新疆赤芍多糖中的半乳糖醛酸进行含量测定,并研究四硼酸钠-浓硫酸溶液用量、加酸后沸水浴时间、间羟基联苯溶液用量、显色时间及中性糖对测定结果的影响。
结果:最佳测定条件为:四硼酸钠-浓硫酸溶液用量5.0mL,沸水浴加热5min,间羟基联苯用量为80μL,显色时间10min,测定波长为525nm。
新疆赤芍多糖中糖醛酸的平均含量为24.49%。
结论:间羟基联苯法适用于新疆赤芍多糖中半乳糖醛酸的含量测定。
关键词:新疆赤芍多糖;糖醛酸;间羟基联苯法中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1673-2197(2013)02-0012-03收稿日期:2012-11-19基金项目:新疆维吾尔自治区科技支疆项目(201191259)作者简介:王慧(1987-),女,新疆医科大学硕士研究生,研究方向为新疆特色中药资源的开发与利用。
通信作者:热娜·卡斯木,女,维吾尔族,博士,新疆医科大学教授,研究方向为新疆特色中药资源的开发与利用。
E-mail:renakasimu@vip.sina.com。
Quantitative determination of uronic acid in Polysaccharides fromRadix Paeoniae hybridaeWang Hui,Rena·Kasimu*,Fan Zhenzhen(College of Pharmacy,Xinjiang Medical University,Urumqi 830011,China)Abstract:Objective:To determine the galacturonic acid content of the Polysaccharides fromRadix Paeoniae hybridae.Methods:The method with Meta-hydroxydiphenyl was used.The amount of Na2B4O7-H2SO4,the heating time,m-hydroxydiphenyl,thecolor development time and the interference by neutral sugar were studied.Results:The optimized parameters were obtained as fol-lows:the dosage of Na2B4O7-H2SO4and m-hydroxydiphenyl was 5.0mL and 80μL,time for heating and color development were5min and 10min respectively.The detection wavelength was 525nm.The average content of galacturonic acid in PolysaccharidesfromRadix Paeoniae hybridae is 24.49%.Conclusion:The method of m-hydroxydiphenyl can be well used for the determinationof galacturonic acid in Polysaccharides fromRadix Paeoniae hybridae.Key Words:Radix Paeonia Hybridae Polysaccharides;Uronic Acid;The Method of Meta-hydroxydiphenyl 新疆赤芍(Radix Paeoniae hybridae)是新疆芍药(Paeonia Sinjiangensis K.Y.Pan.)和块根芍药(P.anoma-la L.)的统称,与川赤芍为同科同属植物,药材名为赤芍。
气相色谱法同时测定多糖中的中性糖、糖醛酸、氨基糖和唾液酸李波;芦菲;田素玉【摘要】Neutral sugar, uronic acid, amino sugar and sialic acid were effectively determined simultaneously by gas chromatography after methanolysis and trimethylsilylation. Three standard monosaccharide mixtures (including Ara, Rha, Fuc, Xyl, Man, Gal, Gle, GlcA, GalA, GalNAc, GlcNAc, Neu5Ac) and two polysaccharide samples (okara polysaccharide DFP, Coprinus comatus polysaccharide F32) were methanolysis by 1 mol/L HC1/methanol at 85 ℃ for 18 -24 h, neutralized with Ag2CO3 and re-N-acetylated by adding acetic anhydride for 24 h in the dark. After removing the silver salts, the dried residue was trimethylsilylated by adding silylation reagent(pyridine/hexamethyldisilazane/chlorotrimethylsilane = 5: 1:1 ) for 30 min at room temperature. Then the final products were analyzed by gas chromatography. This method needs fewer amount of sample, and has higher sensitivity and resolution. It can simultaneous detect kinds of monosaccharides. It will have a great potential for application.%采用甲醇解和硅烷衍生化,用气相色谱法同时测定样品中的中性糖、糖醛酸、N-乙酰氨基糖和唾液酸,取得了很好的效果。
根据您的要求,我将根据您提供的主题“测定葡萄糖醛酸内酯及其所含葡萄糖醛酸的方法”,撰写一篇深度和广度兼具的中文文章。
一、引言葡萄糖醛酸内酯是一种重要的生物活性成分,在医药和食品工业中有着广泛的应用。
而测定葡萄糖醛酸内酯及其所含葡萄糖醛酸的方法则成为了研究和生产中的重要课题,针对这一课题需要综合考虑不同的因素和方法。
二、测定葡萄糖醛酸内酯的方法1.色谱法:色谱法是一种常用的测定葡萄糖醛酸内酯的方法,通过色谱柱分离和检测样品中的成分。
该方法准确度高,但需要专业设备和操作技能。
2.光谱法:光谱法包括紫外-可见光谱和红外光谱,通过分析样品在不同波长下的吸收特性来测定葡萄糖醛酸内酯的含量。
这种方法适用性广,但需要考虑样品制备和仪器校准的影响。
3.生物传感器法:生物传感器是一种新兴的测定方法,通过生物元件与目标物质的特异性反应来实现检测。
这种方法具有快速、灵敏和实时性好的特点,但需要考虑生物元件的稳定性和再生性。
三、测定葡萄糖醛酸的方法1.酶法:酶法是测定葡萄糖醛酸含量的常用方法,通过酶促反应将葡萄糖醛酸转化为可测定的产物。
该方法操作简单,但需要注意酶的活性和稳定性。
2.高效液相色谱法:高效液相色谱法是一种准确测定葡萄糖醛酸的方法,通过利用不同的固定相和流动相来分离和检测样品中的葡萄糖醛酸。
这种方法具有分离效果好、灵敏度高的特点,但需要考虑流动相的制备和设备的维护。
四、个人观点和理解测定葡萄糖醛酸内酯及其所含葡萄糖醛酸的方法涉及到多种科学原理和技术手段,需要根据具体的实验条件和样品特性来选择合适的方法。
在实际研究和生产中,应该综合考虑方法的准确性、快速性和成本效益,选择最适合的测定方法。
总结测定葡萄糖醛酸内酯及其所含葡萄糖醛酸的方法涉及的技术和方法多种多样,每种方法都有其特点和适用范围。
在实际操作中,需要根据具体情况选择合适的方法,并注意方法的操作规范和质量控制。
希望通过本文的介绍,对测定葡萄糖醛酸内酯及其所含葡萄糖醛酸的方法有更深入的了解。
糖醛酸测定方法一.间羟基联苯比色法1.原理:多聚己糖醛酸与含四硼酸钠的硫酸溶液在高温作用下水解, 水解产物进一步与间羟基联苯反应, 生成粉红色衍生物, 产生紫外吸收, 且在一定浓度范围内, 该衍生物吸收值与糖醛酸含量呈线性关系, 可通过比色法对糖醛酸含量进行计算。
2.试剂配制:间羟基联苯溶液:称取0.15g间羟基联苯溶于5 mg/mL氢氧化钠溶液中, 定容至100mL, 其质量浓度为1.5mg/mL.四硼酸钠/硫酸溶液:0.478g四硼酸钠溶于100mL浓硫酸中, 备用。
葡萄糖溶液:称取葡萄糖25.00mg,加水溶解并定容至25mL混匀, 成1mg/mL的标准溶液。
(排除中性糖对测定结果的影响)半乳糖醛酸标准溶液:称取干燥至恒重的半乳糖醛酸25.00 mg, 加水溶解并定容至25mL, 混匀, 成1mg/mL的标准溶液。
3. 波长扫描:取半乳糖醛酸标准溶液0.50mL, 置10 mL容量瓶中, 用水定容至刻度, 摇匀( 质量浓度为0.05 mg/mL)。
量取溶液1.00 mL 置于20 mL具塞试管, 置冰水浴中, 加入四硼酸钠/硫酸溶液6 mL, 待全部加完后, 用旋涡混合器混匀, 于沸水浴中加热5 min, 冰水浴中冷却后用微量加样枪加入1.5 mg/mL间羟基联苯溶液100 μL, 混匀后振摇5 min, 超声除去气泡。
以1 mL蒸馏水同上操作制得空白液调零, 用UV-2450 型紫外可见分光光度计在200 nm~ 800 nm波长范围内扫描, 确定最大吸收波长。
4.标准曲线的制备:取1mg/mL 半乳糖醛酸标准溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL和0.6 mL置于10 mL容量瓶中, 加水定容, 再分别取上述各配制溶液1.0mL至于20mL具塞试管,置冰水浴中, 加入四硼酸钠/硫酸溶液6 mL, 待全部加完后, 用旋涡混合器混匀, 于沸水浴中加热5 min, 冰水浴中冷却后用微量加样枪加入1.5 mg/mL间羟基联苯溶液100 μL, 混匀后振摇5 min, 超声除去气泡。
食品研究与开发F ood Research And Development圆园19年9月第40卷第17期多糖中糖醛酸含量测定方法的研究进展李亚平1,周鸿立1,2,*(1.吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022;2.吉林省农业资源综合开发与利用工程研究中心,吉林吉林132022)摘要:综述多糖中糖醛酸含量测定的方法,以期为更准确的测定糖醛酸含量提供一定的参考。
查阅近年国内外相关文献,对其含量测定的不同方法进行比较,并分析其各自的优缺点。
常见方法有光谱法和色谱法。
光谱法有吡唑-硫酸法、间羟基联苯法及3,5-二甲基苯酚法、色谱法有气相色谱法、分子体积排阻液相色谱法及阴离子液相色谱法。
不同方法的测试条件及准确度各有差别。
光谱法操作简单,但干扰因素多,测定结果偏离理论值较大,且测得的是总糖醛酸的含量;色谱法能够确地测定出不同种类的糖醛酸含量,其中高效阴离子液相色谱法不需要衍生化,是未来测定糖醛酸含量的主要方法。
关键词:多糖;糖醛酸;中性糖;含量测定;光谱法;色谱法Progress on Determination Content of Uronic Acid in PolysaccharidesLI Ya-ping 1,ZHOU Hong-li 1,2,*(1.College of Chemical and Pharmaceutical Engineering ,Jilin Institute of Chemical Technology ,Jilin 132022,Jilin ,China ;2.Engineering Research Center for Agricultural Resources and Comprehensive Utilization of JilinProvince ,Jilin 132022,Jilin ,China )Abstract :Methods for determination the content of uronic acid in polysaccharides were reviewed ,In order to provide some reference for the accurate determination of the content of uronic acid.By reviewing relevant literatures at home and abroad in recent years ,the characteristics of different methods were compared ,and analyzed their respective advantages and disadvantages.The common methods were spectroscopy and chromatography.The spectroscopy included pyrazole-sulfuric acid method ,hydroxybiphenyl method and 3,5-dimethylphenol method ,and the chromatography had gas chromatography ,molecular size exclusion liquid chromatography and anionic liquid chromatography.The test conditions and accuracy of different methods were different.The spectroscopy was simple to operate ,but there were many interference factors and large deviation and the measured result was the total uronic acid content.The chromatography could accurately determinedifferent kinds of uronic acid content ,among which the high-efficiency anion liquid phase chromatography did not require derivatization.It was the primary method for determination the uronic acid content in the future.Key words :polysaccharide ;uronic acid ;neutral sugars determination content ;spectroscopic method ;chro -matography引文格式:李亚平,周鸿立.多糖中糖醛酸含量测定方法的研究进展[J].食品研究与开发,2019,40(17):207-211LI Yaping ,ZHOU Hongli.Progress on Determination Content of Uronic Acid in Polysaccharides[J].Food Research and Devel -opment ,2019,40(17):207-211基金项目:吉林省省级产业创新专项资金项目(2017C044)作者简介:李亚平(1991—),女(汉),硕士研究生,研究方向:天然产物的研究与开发。
糖醛酸的含量测定1. 仪器、试剂与药材Hitachi U-3010 紫外可见分光光度计(日本) 超声清洗机(Sb5200D )宁波生物科技有限公司 恒温数控水浴锅(HH —4)国华电器有限公司半乳糖醛酸为urchem 公司,咔唑为国药集团化学试剂有限公司进口分装。
其他试剂均为分析纯。
0.1%的咔唑标准溶液的制备:取0.1g 咔唑,精密称定,置于100ml 容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。
半乳糖醛酸标准溶液的制备:称取20mg 干燥至恒重的半乳糖醛酸对照品,精密称定,置于100ml 容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得0.1948mg/ml 半乳糖标准溶液。
2.实验部分2.1实验条件的选择:2.1.1最大吸收波长的选择精密吸取半乳糖醛酸标准溶液0.5ml 和五加果实粗多糖溶液0.3ml ,分别置于10ml 的具塞刻度试管中,加水至1.00ml ,加6ml 浓硫酸,摇匀,沸水浴加热20分钟,冷至室温后假如0.1%的咔唑标准溶液0.25ml ,摇匀。
另取1.00ml 水同上操作制得空白溶液。
用日本hitach 紫外-可见分光光度计于400-600nm 波长范围内依次扫描,确定半乳醛酸最大吸收波长为520nm ,样品也为520nm 。
400500600nm糖醛酸纯品0.000.050.100.150.200.250.300.350.400.450.50 Abs糖醛酸纯品Peak # Start (nm) Apex (nm) End (nm) Height (Abs) Valley (nm) Valley (Abs) 600.00 520.00 419.00 0.476 50.349 419.00半乳糖醛酸标准品nmB0.30.40.50.60.70.80.91.0 Abs五加果实粗多糖样品中糖醛酸BPeak # Start (nm) Apex (nm) End (nm) Height (Abs) Valley (nm) Valley (Abs)1 600.00 518.00 415.50 0.953 131.559 415.502.1.2浓硫酸用量考察精密吸取半乳糖醛酸标准溶液0.5ml ,浓硫酸用量为3-10ml ,其它操作同前,分别测定吸收度值。
植物多糖中糖醛酸和中性糖分析检测方法的研究进展陈辉;和娴娴;李浩然【摘要】综述植物多糖组分中糖醛酸和中性糖定性及定量的各种分析检测方法,并进行分类比较.【期刊名称】《食品工程》【年(卷),期】2011(000)002【总页数】4页(P50-53)【关键词】糖醛酸;中性糖;检测方法;研究进展【作者】陈辉;和娴娴;李浩然【作者单位】河北科技大学,石家庄050018;河北科技大学,石家庄050018;河北科技大学,石家庄050018【正文语种】中文【中图分类】TS236.2随着生物技术的发展,多糖组分检测方法的研究日益受到重视。
多糖是由10个以上的单糖,并通过糖苷键聚合而成的一种生物大分子,其相对分子质量为数万甚至数百万。
多糖一般分为均多糖和杂多糖,在天然多糖类中以杂多糖为主。
在多糖组分结构中除单糖外,还含有糖醛酸、去氧糖、氨基糖、糖醇等基团。
按照化学性质,植物多糖可以分为中性多糖和酸性多糖。
其中后者引入了糖醛酸等基团而有酸性和一些相应的药效,通常有葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸。
定量测定时,其中的糖醛酸与中性糖两种组分会相互干扰而影响到实验准确性。
由于植物多糖中组分性质的不同,使组分的分析条件不同,增加了其分析测定的难度。
分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。
按照显色剂的不同,检测糖醛酸的方法可以分为间羟基联苯法和硫酸-咔唑法两种。
两种具体方法的检测步骤类似,均是加入四硼酸钠硫酸溶液后,置于冰水浴中预冷。
然后分别取空白溶液(蒸馏水)和不同浓度的标准品各l mL加入到试管里,之后轻轻的震荡,直至充分混匀,期间不断用冰水浴冷却,并将试管置沸水中加热数分钟,冷却至室温。
最终加入显色试剂,摇匀,并沸水中再加热若干分钟后,冷却至室温,在指定处测定吸光度,以吸光度对浓度作图即可得出标准曲线。
以上两种方法的主要区别在于显色试剂的种类和用量,分别加入的间羟基联苯的氢氧化钠溶液和咔唑的乙醇溶液,具体的显色剂用量和衍生处理时间则是依照实验过程而定。
一种快速测定毛竹半纤维素中糖醛酸含量的方法林妲;彭红;阮榕生;余紫苹;刘玉环【摘要】Arabinoglucuronoxylan is the main component in the hemicellulose of moso bamboo. The content of glucuronic acid which is as the main side chain can reflect the structure of the hemicellulose. In this paper, a method for the determination of glucuronic acid in hemicellulose of moso bamboo with m-hydroxydiphenyl was used. The amounts of tetraborate/H2SO4 , m-hydroxydiphenyl and the boiling time were studied. This method was proved simple, accurate and reproducible.%采用间羟基联苯比色法测定毛竹半纤维素中葡萄糖醛酸含最,并研究了四硼酸钠/硫酸、间羟基联苯溶液添加量及沸水浴时间对测定结果的影响,建立了适合于毛竹半纤维素中糖醛酸含量的测定条件,同时证明了该方法测定毛竹半纤维素中葡萄糖醛酸的稳定性、可重复性和精密度.【期刊名称】《中国造纸》【年(卷),期】2012(031)003【总页数】4页(P16-19)【关键词】毛竹半纤维素;葡萄糖醛酸;间羟基联苯比色法【作者】林妲;彭红;阮榕生;余紫苹;刘玉环【作者单位】南昌大学生物质转化教育部工程技术研究中心,江西南昌,330047;南昌大学生物质转化教育部工程技术研究中心,江西南昌,330047;南昌大学生物质转化教育部工程技术研究中心,江西南昌,330047;南昌大学生物质转化教育部工程技术研究中心,江西南昌,330047;南昌大学生物质转化教育部工程技术研究中心,江西南昌,330047【正文语种】中文【中图分类】TS749+.3毛竹又名“楠竹”、“孟宗竹”,禾本科竹亚科刚竹属,单轴散生型,常绿乔木状竹类植物。
糖醛酸测定方法
一•间羟基联苯比色法
1•原理:多聚己糖醛酸与含四硼酸钠的硫酸溶液在高温作用下水解,水解产物进一步与间羟
基联苯反应,生成粉红色衍生物,产生紫外吸收,且在一定浓度范围内,该衍生物吸收值与糖醛酸含量呈线性关系,可通过比色法对糖醛酸含量进行计算。
2. 试剂配制:
间羟基联苯溶液:称取0.15g间羟基联苯溶于5 mg/mL氢氧化钠溶液中,定容至100mL,其质量浓度为1.5mg/mL.
四硼酸钠/硫酸溶液:0.478g四硼酸钠溶于100mL浓硫酸中,备用葡萄糖溶液:称取葡萄糖25.00mg,加水溶解并定容至25mL混匀,成1mg/mL的标准溶液。
(排除中性糖对测定结果的影响)
半乳糖醛酸标准溶液:称取干燥至恒重的半乳糖醛酸25.00 mg,加水溶解并定容至25mL,混匀,成1mg/mL的标准溶液。
3. 波长扫描:取半乳糖醛酸标准溶液0.50mL,置10 mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀(质量浓度为0.05 mg/mL)。
量取溶液1.00 mL置于20 mL具塞试管,置冰水浴中,加入四硼酸钠/硫酸溶液6 mL,待全部加完后,用旋涡混合器混匀,于沸水浴中加热5 min,冰水浴中冷却后用微量加样枪加入1.5 mg/mL间羟基联苯溶液100此,混匀后振摇5 min,超声除去气泡。
以1 mL蒸馏水同上操作制得空白液调零,用UV-2450型紫外可见分光光度计在200 nm~ 800 nm波长范围内扫描,确定最大吸收波长。
4. 标准曲线的制备:取1mg/mL半乳糖醛酸标准溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL和0.6 mL置于10 mL容量瓶中,加水定容,再分别取上述各配制溶液1.0mL至于20mL具塞试管,置冰水浴中,加入四硼酸钠/硫酸溶液6 mL,待全部加完后,用旋涡混合器混匀,于沸水浴中加热5 min,冰水浴中冷却后用微量加样枪加入1.5 mg/mL间羟基联苯溶液100 L混匀后振摇5 min,超声除去气泡。
以1 mL蒸馏水同上操作制得空白液调零,在最大吸收波长处测定吸光度。
5. 样品测定:取样品5 mg置100 mL容量瓶,加水溶解定容至刻度。
取溶液1.00 mL 按标准曲线项方法操作。
6. 中性糖影响:在一定浓度半乳糖醛酸标准溶液中,添加不同质量的中性糖(以葡萄糖为例),测得加入不同质量浓度的中性糖对半乳糖醛酸溶液吸光度的影响。
高效液相色谱法A
1. 标准溶液的制备:
精密称取半乳糖醛酸对照品205. 4 mg,置50mL容量瓶中,加超纯水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每1 mL中含半乳糖醛酸4. 108 mg)。
精密吸取上述对照品溶液
1.0、
2.0、
3.0、
4.0、
5.0、
6.0、
7.0、
8.0、
9.0mL置于25 mL容量瓶中,加超纯水稀释至刻度,摇匀,制得0.116432、0.132864、0.149296、0.165728 0.18216、0.198592、1.115024 1.131456、1.147888 mg/mL 的系列标准溶液。
2标准曲线的绘制:
取配制好的半乳糖醛酸系列标准溶液,分别进样20让,按下面色谱条件测定半乳糖醛酸峰面积,以半乳糖醛酸峰面积为纵坐标,对照品浓度(mg/mL)为横坐标,绘制标准曲线。
求得回归方程。
3. 色谱条件
色谱柱:Sugar-PakI (300 mm >6. 5 mm),流动相:0. 0001 mol/L EDTA 水溶液, 流速:0. 6 mL /min,示差检测器,柱温:90 C ,示差检测池温度:40 C ,进样量:20此。
理论板数:以半乳糖醛酸峰计算,不得低于3000。
高效液相色谱法B
色谱条件色谱柱:ZORBAX SAX 4.6>250mm 5-Micro n Agile nt ;柱
温:40°C ;流动相:0.7mol/l乙酸;流速:1.0ml/min ;测定波长:示差检测;示差检测器温度:40 C ;进样量:20丄。
标准曲线的绘制:称取古洛糖醛酸标准品,用重蒸水溶解,配制成浓度为1.07、2.14、3.21、5.35、10.7mg/mL的标准溶液。
分别进样10丄进行HPLC测定,以峰面积为纵坐标,相应标准溶液的浓度为横坐标,绘制标准曲线进行线性回归。
样品处理与检测:准确称取300mg (精确至±).0001)海藻酸钠或者海藻,加入72%硫酸溶液3.5mL,于研钵中研磨2h,用100mL蒸馏水将其转移至250mL三角瓶,100C沸水浴加热2.5h,于自来水中冷却至室温,加入过量BaCO3粉末,充分反应至溶液pH为7左右,3000r/min离心,沉淀用150mL蒸馏水洗涤3次,将上清液和洗涤液合并在一起,45°C真空旋转浓缩后,定容至10mL,进样10丄进行
HPLC测定。
依据样品测定的峰面积和出峰时间,在相应的标准曲线查出所测组分的量,结合所取样品的质量和定容体积,计算出各组分的含量。
三•咔唑一硫酸比色法(修改后)
1. 原理:半乳糖醛酸在硫酸中与咔唑试剂发生缩合反应,生成紫红色化合物,其呈色强度与半乳糖醛酸含量成正比,可比色定量。
2. 对照品溶液的配制:精密称取干燥至恒重的半乳糖醛酸19. 8 mg,用适量的蒸馏水溶解,并定容于100 ml容量瓶中,配成198 4 /ml的对照品溶液。
使用时稀释至99冯/ml o
四硼酸钠-硫酸溶液的配制:精密称取0.956 g四硼酸钠溶解于200 ml浓硫酸
中,超声溶解,备用。
咔唑溶液的配制:精密称取咔唑100 mg,溶解于100 ml无水乙醇中,配制成0.1% 的咔唑溶液备用。
4. 半乳糖醛酸标准曲线制备:分别精密吸取对照品0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml溶液置于10 ml具塞试管中,各管加水至0.5 ml,分别在冰水浴中加入四硼酸钠—硫酸溶液3ml,用漩涡混合器混匀,于沸水浴中加热5 min,取出后立即冷却至室温,
加0.1%咔唑溶液0.1 ml,摇匀,煮沸5min,冷却至室温后在530nm处测定其吸光度。
以浓度为横坐标,以吸光度值为纵坐标进行线性回归。
方法学考察:
⑤精密度试验取同一对照品溶液,重复测定5次。
⑥稳定性试验取同一供试品溶液,每隔30min测定1次,共测定2h。
⑦重现性试验取同一批号样品多糖5份,按测定法操作。
⑧加样回收率试验精密称取已知含量多糖5份,分别精密加入葡萄糖醛酸对照
品适量,测定吸收度,计算回收率。
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