外周血异型淋巴细胞及鉴别

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析一、实验背景1、Carnoy固定液：固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。

单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混合的固定液。

由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称其为卡诺氏固定液。

Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15min至24h，冰箱、室温均可。

必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。

2、低渗液（hypotonic solution）低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的溶液，渗透压低于组织液，与外周血混在一起时，水分迅速进入细胞，使其膨胀，甚至破裂，获得分散良好的染色体分裂象。

常见的低渗液：水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾（0.65mol/L）、氯化钾（0.075mol/L）等。

低渗效果取决于低渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。

低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使黏附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形态。

实验室中一般选用0.075mol/L KCl为低渗液，其优点有：①染色体轮廓清楚，可染色性强，染色时间短。

②用于显带染色时能充分显示带型特点。

低渗处理为37℃，25～30min，以预实验条件为准。

2、肝素N-硫酸和艾杜糖醛酸含量较多的一种糖胺聚糖，由D-β-葡糖醛酸(或L-α-艾杜糖醛酸)和N-乙酰氨基葡糖形成重复二糖单位组成的多糖。

肝素是一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。

2、PHA植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞—淋巴细胞。

是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还可以刺激机体产生非特异性抗体。

外周血涂片细胞学检查是什么？有什么作用？血液，是人体的一面镜子，动态反映了机体造血、营养、免疫等多方面的状态。

要了解患者的血细胞，外周血涂片镜检无疑是最经济、最快速的手段。

但在今天，即使是血液科，亲自动手镜检的临床医生也已少之又少。

鉴于血细胞形态学的专业性，方便临床医生判读检验结果，促进沟通，在此简要介绍外周血涂片镜检的基本知识。

1.什么是外周血涂片检查外周血涂片检查，就是外周血细胞形态与性质分析。

近年来，随着临床检验血球分析仪的广泛应用，外周血涂片医学检查越来越重要，该检查在感染分类、血液寄生虫、白血病、血小板疾病以及贫血等试验诊断中具有重要作用，而且外周血细胞学观察，可以将某些病症的发生与发展精准反映出来，在临床诊疗中的用途非常重要。

2.外周血涂片细胞学检查的适用范围对于有发热待查、贫血、出血、肝脾及外周淋巴结肿大等患者，及其他需要在血常规机检项目外检查血细胞数量与形态的患者均适用。

3.外周血涂片的标本通常临床制备外周血涂片的血液是静脉采集毛细血管，而毛细血管采集的血标本一般用于直接涂片；静脉血一般经EDTA抗凝，物理抗凝后制备血涂片，对血细胞形态有影响，且无法观察到成堆血小板，无法判断血小板无力症等。

因此对血细胞形态的最佳观察标本就是毛细血管采集标本。

·毛细血管采集血液临床血液标本采集多选择无名指采血，将皮肤刺破，拭去第一滴血液，及时采一滴血液，制作血涂片，该方法所制备血液涂片几乎不会受到人为因素干扰。

·EDTA抗凝血EDTA抗凝剂内放入所采集静脉血，并充分混匀，采集标本后4h内完成推片；如果需用陈旧血的血常规抗凝血进行涂片，也尽量不要超过24小时。

因为采血数小时后细胞形态就开始发生变化，改变程度随着标本放置时间的延长而加大，例如出现红细胞皱缩，细胞出现溶解和空泡，胞质中颗粒浓缩呈中毒颗粒样，核扭曲，核固缩，核破碎等；高脂血症更易改变粒细胞形态。

·物理抗凝血通常是在浓缩血中探寻红斑狼疮等异常细胞，有助于异常细胞检出率的提升。

3个经典案例，剖析异常血常规散点图背后的真相作者：田洪兵单位：成都市锦江区妇幼保健院异型淋巴细胞是由药物或病毒等刺激导致应激反应而产生幼稚细胞化或原始细胞化等形态变异的一类非典型淋巴细胞[1]。

外周血中的异型淋巴细胞形态主要有三型：I型（泡沫型或浆细胞型）；II型（不规则型或单核细胞样型）；III型（幼稚型或幼淋巴细胞样）。

异型淋巴细胞在WBC分类计数中的占比对临床诊断某些疾病有重要参考意义！我室采用的这台SYSMEX全自动血液细胞分析仪XN-1000对异型淋巴细胞的检出有重要的参考意义。

下面介绍一下这台仪器的检测原理以及WDF散点图。

一、使用流式细胞术原理的细胞解析使用半导体激光的流式细胞术中，分析以波长633nm激光照射细胞所得到的前向散射光（FSC）、侧向散射光（SSC）、侧向荧光（SFL），将细胞进行计数和分类。

两种散射光（FSC、SSC）反映细胞大小、表面构造、颗粒形状、核形、折射率和反射率等。

一般情况下，细胞越大，FSC的信号就越强，细胞内部构造越复杂，SSC的信号也越强。

另外，侧向荧光主要反映细胞内核酸和细胞器的种类和多少。

针对这3种信号，运用独创性的数字技术和演算法，将白细胞、有核红细胞、网织红细胞、血小板进行分类和计数，同时检出异常细胞和幼稚细胞[2]。

二、WDF通道WDF通道中，对白细胞进行计数并分类为中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞以及嗜酸性粒细胞；同时检出幼稚白细胞以及异型淋巴细胞等的异常细胞。

LysercellWDF中的表面活性剂使红细胞和血小板溶血、溶解，同时使白细胞的细胞膜轻微受损。

白细胞的细胞形态因各自的特征而异，用侧向散射光可区别该差异。

此后，FluorocellWDF中的荧光染料进入细胞内，对核酸及细胞器染色。

由于核酸及细胞器的种类和多少不同，各种白细胞的荧光强度产生差异。

通过使用独创的演算法来对各种白细胞具有的散射光和荧光强度的差异进行分析，对各类细胞进行计数、分类及检出异常细胞并报警[2]。

人体外周血淋巴细胞培养及染色体组型分析实验方案2012级师范2班第3组组员：吴婵胡颖月央珍杨基伟杨青松宋海燕田金梅（组长）一、实验目的掌握人体外周血淋巴细胞培养与染色体组型分析的方法。

二、实验原理人的1ml外周血约含有1×10*6~3×10*6个小淋巴细胞，它们几乎都处于G0或G1期，一般情况下不分裂，但但采用人工离体培养的方法，经PHA（植物血球凝集素）刺激后，能转变成可分裂的淋巴母细胞进行有丝分裂。

所谓外周血培养即是将外周血接种在适当的培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。

用低渗盐溶液（一般是0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去然后用Carnoy固定液固定，最后以气干法制片，可获得较好的染色体标本。

核型（karyotype）指一个细胞中的整套染色体，按其大小、形态特征顺序排列所构成的图像。

通常是将显微摄影得到的染色体照片剪贴而成。

在完全正常的情况下，一个体细胞的核型一般可代表该个体的核型。

组型（idiogram)是以模式图的方式表示，它是通过许多细胞染色体的测量取其平均值绘制成的，是理想的，模式化的染色体组成，代表一物种染色体组型的特征。

将待测细胞的核型进行染色体数目、形态特性的分析，确定其是否与正常核型完全一致，称为核型分析（karyotype analysis）。

这对于探索人类遗传病的发病机理，探讨动物和植物的起源，以及物种间的亲缘关系等都具有重要意义。

染色体的特征以有丝分裂中期最为显著，所以一般都分析中期分裂相。

根据染色体着丝粒位置可将染色体分为中部着丝粒染色体（m）,亚中部着丝粒染色体（sm），亚端部着丝力粒染色体（st)，端部着丝力粒染色体（t）。

对于任何一个的基本形态特征来说，重要的参数有以下3个：（1）相对长度=单条染色体的长度/(单倍体常染色体+X或Y染色体)的总长度×100%（2）臂指数=长臂/短臂（反映着丝粒位置的指数）（3）着丝粒指数=短臂/整个染色体长度×100%（反映着丝粒位置的指数）人类体细胞的正常核型是含有23对染色体，共46条。

急性淋巴细胞性白血病的鉴别诊断急性淋巴细胞性白血病（Acute Lymphoblastic Leukemia, ALL）是一种由淋巴细胞原始增生引起的恶性疾病。

对于临床医生来说，准确诊断急性淋巴细胞性白血病至关重要，因为治疗方案可能因诊断结果不同而有所不同。

本文将介绍急性淋巴细胞性白血病的鉴别诊断，并讨论其常见的临床表现、实验室检查和影像学表现等。

一、临床表现急性淋巴细胞性白血病的临床表现因患者年龄和病情不同而有所差异。

常见的症状包括发热、贫血、出血倾向、淋巴结肿大、肝脾肿大等。

患者可能会出现全身不适、乏力、食欲减退、体重下降等非特异性症状。

年龄较小的患者（儿童）可能还会出现生长迟缓、发育障碍等表现。

二、实验室检查急性淋巴细胞性白血病的实验室检查是确诊的主要手段之一。

常规检查可发现白细胞计数升高、红细胞计数和血红蛋白含量降低、血小板计数降低等。

外周血涂片检查可见原始淋巴细胞数量增多，伴有异型淋巴细胞存在。

骨髓穿刺和骨髓涂片检查是确诊急性淋巴细胞性白血病的金标准，骨髓中原始淋巴细胞比例增高，伴有异型淋巴细胞和形态不规则的淋巴细胞等。

免疫细胞化学染色和流式细胞术检查可进一步确定细胞类型和免疫表型。

三、影像学表现影像学检查不是急性淋巴细胞性白血病诊断的首选方法，但在一些情况下可以提供辅助诊断的信息。

骨骼X线检查可发现干骺端呈膨胀状，伴有骨质破坏、硬化、骨膜反应等改变。

骨髓磁共振成像（MRI）可以显示骨髓的异常信号，有助于诊断。

另外，腹部超声检查可检测肝脾肿大，胸部X线检查可发现纵隔肿大等。

四、鉴别诊断急性淋巴细胞性白血病的鉴别诊断主要是与其他类型的白血病和类白血病反应相区分。

以下是一些常见的鉴别诊断要点：1. 与急性髓细胞性白血病（Acute Myeloid Leukemia, AML）区分：AML的外周血涂片检查和骨髓涂片检查中可见原始髓系细胞增多，而在急性淋巴细胞性白血病中主要是淋巴系细胞增多。

免疫细胞化学染色和流式细胞术检查对于确定细胞类型具有重要意义。

外周血淋巴细胞免疫亚裙计数概念及应用一、概述外周血淋巴细胞免疫亚裙计数是一种用于评估机体免疫功能的检测技术，通过对外周血中不同类型淋巴细胞数量的测定，可以帮助医生判断机体的免疫状态，诊断免疫系统相关疾病以及监测免疫治疗的疗效。

本文将就外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的概念、检测方法以及临床应用进行介绍。

二、外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的概念外周血淋巴细胞免疫亚裙计数是通过流式细胞术或细胞分析仪等技术，对外周血中的淋巴细胞进行亚裙分型和计数。

淋巴细胞主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞，其中T淋巴细胞可以进一步分为CD4+T细胞和CD8+T细胞，而B淋巴细胞可以进一步分为成熟B细胞和记忆B细胞。

三、外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的检测方法1. 样本采集：外周血样本采集是进行外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的第一步，通常采用静脉血抽取的方式获取样本。

2. 样本处理：采集到的外周血样本需要经过一定的处理才能进行免疫亚裙计数的检测，比如进行红细胞裂解等操作。

3. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过激光仪器检测样本中细胞类型和数量的技术，可以用于进行外周血淋巴细胞免疫亚裙计数。

4. 细胞分析仪：细胞分析仪是一种用于细胞计数和分类的仪器，在外周血淋巴细胞免疫亚裙计数中也有着重要的应用。

四、外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的临床应用外周血淋巴细胞免疫亚裙计数在临床上具有重要的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 免疫功能评估：通过对外周血淋巴细胞免疫亚裙计数的检测，可以评估机体的免疫功能状态，了解机体的免疫活性和免疫抑制情况，为临床治疗提供重要参考依据。

2. 免疫系统疾病诊断：外周血淋巴细胞免疫亚裙计数可以用于诊断免疫系统相关疾病，比如自身免疫性疾病、免疫缺陷病等，有助于医生进行早期诊断和治疗。

3. 免疫治疗监测：在进行免疫治疗的过程中，通过定期监测外周血淋巴细胞免疫亚裙的变化，可以了解治疗的效果和机体的免疫反应，为治疗方案的调整提供依据。

液基薄层制片技术制作外周血淋巴细胞涂片方法学的建立及免疫组化染色应用孔庆暖;王丽娜;韩增磊;黄维清【摘要】Objective To develop a new morphological examination method which make smears of lymphocytes in pe-ripheral blood as well as applied with immunohistochemistry using thinprep liquid-based technology. Methods After separated by Ficoll-hypaque density centrifugation, lymphocytes in peripheral blood were preserved in special Preserv-Cyt Solution overnight. And liquid-based smears were prepared with cytospin on the principle of thinprep cytologic test. The immune phenotype of lymphocytes were observed with CD3 and CD20 immunohistochemistry staning. Accu-rate expression location indicated the condition of antigen preservation in lymphocytes. Results The lymphocytes yields of five healthy volunteers reached up to 95% with complete and clear cell morphology. CD3 and CD20 were accord-ingly expressed on cell membranes of two lymphocyte subsets. The proportion of the two lymphocyte subsets calculated by immunohistochemstry staining was in accordance with previous literature. Conclusion The application of preparing lymphocytes smears with thinprep liquid-based technology in blood method in lymphocytes morphology observation and immunohistochemistry staining is rapid and effective compared with conditional manual blood smears. The method also has important values on lymphocyte subsets classification, lymphoma classification and prognosis.%目的：应用液基薄层制片技术制作外周血淋巴细胞涂片,以期建立更加简单直观且能够与分子生物学相结合的外周血淋巴细胞形态学检查方法。