药片中维生素D含量的测定方法

维生素d的检测方法维生素D是一种重要的脂溶性维生素，对人体生长发育、钙磷代谢和免疫功能具有重要作用。

维生素D的检测方法一直是人们关注的热点问题。

目前常用的维生素D检测方法主要包括化学方法、免疫学方法以及分子生物学方法等。

化学方法是最传统的维生素D检测方法之一。

它基于维生素D的化学性质进行测定，常见的化学方法有高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）。

这些方法需要对样品进行提取和纯化处理，然后通过色谱技术进行分离和定量分析。

化学方法具有准确度高、可靠性好的优点，但它们需要较为复杂的仪器设备和繁琐的样品处理步骤，且需要专业的技术人员进行操作。

免疫学方法是近年来发展起来的一种维生素D检测方法。

这种方法基于抗体与抗原结合的特异性反应来检测维生素D水平，常用的方法有放射免疫分析法（RIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）和化学发光法。

免疫学方法操作简便，结果快速，准确性和灵敏度较高，适用于大规模样品检测。

但免疫学方法也存在一定的局限性，例如可能受到交叉反应干扰，需要使用抗体等试剂，成本较高。

分子生物学方法在维生素D检测中发挥着越来越重要的作用。

PCR和实时荧光定量PCR是最常用的分子生物学方法。

这些方法通过检测与维生素D受体基因的关联突变位点，或者检测维生素D代谢相关基因的表达水平来间接评估体内维生素D的水平。

分子生物学方法具有快速、灵敏度高、样品体积要求低等优点，但需要复杂的实验操作和专业的技术支持。

除了以上主要的方法外，还有一些其他的维生素D检测方法，如质谱法、电化学法等。

这些方法在特定的实验条件下可以进行维生素D的测定，但一般更多用于科学研究领域。

需要注意的是，不论使用哪种检测方法，都需要注意样本的选择和处理。

维生素D血清水平的变化受到多种因素的影响，如日照时间、饮食摄入、年龄、季节、肥胖程度等。

因此，在进行维生素D的检测时，需要选择适当的样本类型（如血液、尿液或唾液）和采样时间，并尽量控制可能的干扰因素。

测定药片中的维生素D含量的方法摘要：本方法采用高效液相色谱法测定维生素D(包括维生素D2和D3,下同)及其制剂、维生素AD制剂或鱼肝油中所含维生素D及前维生素D经折算成维生素D 的总量，以单位表示，每单位相当于维生素D是0.025μg。

关键词：高效液相色谱法、维生素D、半暗室、避免氧化、第一种方法、第二种方法、第三种方法引言：本方法采用高效液相色谱法测定维生素D(包括维生素D2和D3,下同)及其制剂、维生素AD制剂或鱼肝油中所含维生素D及前维生素D经折算成维生素D 的总量，以单位表示，每单位相当于维生素D是0.025μg。

测定应在半暗室中及避免氧化的情况下进行。

无维生素A醇及其他杂质干扰的供试品可用第一种方法测定，否则应按第二种方法处理后测定；如果按第二种方法处理后，前维生素D峰仍受杂质干扰，仅有维生素D峰可以分离时，则应按第三种方法测定。

第一种方法(1)对照品贮备溶液的制备根据各制剂中所含维生素D的成分,精密称取相应的维生素D2或D3对照品25mg,置100ml棕色量瓶中，加异辛烷80ml，避免加热，用超声处理助溶1分钟使完全溶解，加异辛烷至刻度，摇匀，充氮密塞，避光，0℃以下保存。

测定维生素D2时，应另取维生素D3对照品25mg，同法制成维生素D3对照品贮备溶液，供系统适用性试验用。

(2)内标溶液的制备称取邻苯二甲酸二甲酯25mg，置25ml量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀。

(3)色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂，正己烷－正戊醇（997∶3)为流动相，检测波长为254nm。

量取维生素D3对照品贮备溶液5ml，置具塞玻璃容器中，通氮后密塞，置90℃水浴中加热1小时，取出迅速冷却，加正己烷5ml，摇匀，置1cm具塞石英吸收池中，在2支8W主波长分别为254和365nm的紫外光灯下，将石英吸收池斜放成45°,并距灯管5～6cm,照射5分钟,使溶液中含有前维生素D3、反式维生素D3、维生素D3和速甾醇D3；取此溶液注入液相色谱仪，测定维生素D3的峰值，先后进样5次,相对标准偏差应不大于2.0％；前维生素D3(与维生素D3的比保留时间约为0.5)与反式维生素D<[3] >(与维生素D3的比保留时间约为0.6)以及维生素D3与速甾醇D3(与维生素D3的比保留时间约为1.1)的峰分离度均应大于1.0。

食品中維生素D之檢驗方法1. 適用範圍：本檢驗方法適用於含鈣錠狀、粉狀及膠囊膳食補充品中維生素D2及D3之檢驗。

2. 檢驗方法：高效液相層析法（high performance liquid chromatography, HPLC）2.1. 裝置：2.1.1. 高效液相層析儀：2.1.1.1. 檢出器：具有265 nm波長之紫外光檢出器。

2.1.1.2. 層析管：Vydac C18，5 μm，內徑4.6 × 250 mm或同級品。

2.1.2. 振盪器（Shaker）。

2.1.3. 減壓濃縮裝置（Rotary evaporator）。

2.1.4. 離心機（Centrifuge）。

2.1.5. 超音波震盪器（Ultrasonic vibrator）。

2.2. 試藥：二甲基亞碸（dimethyl sulfoxide）、正己烷、乙腈及甲醇採用試藥特級；維生素D2（ergocalciferol）及維生素D3（cholecalciferol）對照用標準品。

2.3. 器具及材料：2.3.1. 離心管：50 mL，PP材質。

2.3.2. 濾膜：孔徑0.45 μm，Nylon材質。

2.3.3. 容量瓶：5 mL、100 mL，褐色。

2.3.4. 濃縮瓶：250 mL，褐色。

2.4. 移動相溶液之調製：甲醇：乙腈以10:90（v/v）之比例混合後，以濾膜過濾，取濾液作為移動相溶液。

2.5. 標準溶液之配製：取維生素D2及D3對照用標準品各約10 mg，精確稱定，共置於容量瓶中，以正己烷溶解並定容至100 mL，供作混合標準原液，冷藏儲存。

臨用時再以正己烷稀釋至0.1～10.0 μg/mL，供作混合標準溶液。

2.6. 檢液之調製：取磨細粉末檢體約5 g，精確稱定，置於離心管中，加二甲基亞碸10 mL，於40～50℃水浴中超音波振盪30分鐘，加甲醇：水（1:1，v/v）溶液10 mL混勻後，加入正己烷20 mL振盪萃取30分鐘，以3500 rpm離心10分鐘。

维生素D测‎定方法维生素D的‎测定方法，目前只有“婴幼儿配方‎食品和乳粉‎通用检验方‎法”介绍的GB‎/T 5413.9-1997所‎列的先正相‎收集，后反相分离‎的H PLC‎测定方法。

该法可同时‎测定 A.D.E，但操作比较‎烦琐，对于维生素‎的营养素补‎充剂，样品中杂质‎干扰小，在测定A.E的同时可‎控制采样量‎和色谱的分‎离条件，并参照GB‎/T 5413.9-1997与‎G B/T 5009.82-2003（食品中维生‎素A和维生‎素E的测定‎）的方法检测‎营养补充剂‎维生素D也‎可同时测定‎A.E。

一、原理样品中维生‎素D经热皂‎化处理后。

用HPLC‎紫外检测，内标法定量‎。

二、仪器1、HPLC：water‎公司，510泵，486紫外‎检测器，三锐色谱工‎作站。

2、超声波振荡‎器3、水浴箱4、0.45μ滤膜‎三、试剂1、维生素D3‎标准对照品‎：精确称取维‎生素D3标‎准对照品（sigma‎公司）5.0mg 左右‎加已脱醛处‎理的无水乙‎醇至50m‎l刻度，配成100‎μg/ml的标准‎D3贮备液‎。

2、维生素D贮‎存一般较稳‎定，贮备液也可‎在264μ‎n下按常规‎的标定方法‎用比吸光系‎数计算出维‎生素D3的‎标准浓度。

维生素D3‎比吸光系数‎E1%cm=493。

3、其他试剂：无水乙醚，无水乙醇，无水硫酸钠‎，甲醇，抗坏血酸，氢氧化钾，内标苯并e‎芘……等同GB/T 5009.82-2003或‎G B/T 5413.9-1997四、方法1、准确称取经‎研碎成粉状‎的均匀样品‎2.0g于皂化‎瓶中，加内标苯并‎e芘溶液2‎.0ml，加10%抗坏血酸5‎m l，样品先混成‎均匀的糊状‎，再加无水乙‎醇30ml‎同1：1氢氧化钾‎溶液10m‎l在沸水上‎皂化10分‎钟，使皂化完全‎，皂化后立即‎放入冰中冷‎却。

2、提取、洗涤、浓缩等步骤‎同GB/T 5009.82-2003，最后用无水‎乙醇定容至‎2ml。

检测维生素d的金标准维生素D是人体所必需的营养素之一，它对于骨骼健康和免疫系统的正常运作至关重要。

然而，由于维生素D的合成主要依赖于阳光照射，加上现代人常常室内工作、生活，很多人缺乏足够的维生素D。

因此，准确地检测维生素D的水平非常重要，以便进行适当的补充。

那么，如何检测维生素D的水平呢？这就需要用到“金标准”——液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测方法。

液相色谱-串联质谱是一种高灵敏度、高特异性的检测方法，它可以在非常低的浓度下检测到目标物质。

在维生素D的检测中，这种方法可以检测到血液中维生素D的两种形式：25-羟基维生素D（25(OH)D）和1,25-二羟基维生素D（1,25(OH)2D）。

25(OH)D是血液中维生素D的主要形式，它是维生素D的代谢产物，也是维生素D的主要储存形式。

1,25(OH)2D则是一种活性形式，它可以调节钙和磷的吸收和利用，以及促进骨骼生长和修复。

因此，检测25(OH)D和1,25(OH)2D的水平可以准确评估维生素D的营养状态和生理功能。

LC-MS/MS检测方法的优势在于它可以检测到不同种类的维生素D代谢产物，并且可以在一个样本中同时检测多种代谢产物。

此外，它还可以准确、快速地测量样本中维生素D的浓度，从而提高了检测的精度和可靠性。

然而，LC-MS/MS检测方法也有一些限制。

首先，它需要昂贵的设备和专业的技术人员来操作。

其次，它需要较长的检测时间和复杂的样品预处理过程，这增加了检测的成本和难度。

因此，对于一般的临床检测和大规模流行病学调查，通常采用其他方法，如放射免疫测定法或酶联免疫吸附测定法。

总的来说，液相色谱-串联质谱是检测维生素D水平的“金标准”，它可以提供准确、快速、高灵敏度和高特异性的检测结果。

但是，它也有一些限制，需要在实际应用中权衡利弊，选择最适合的检测方法。

无论采用何种方法，准确地检测维生素D的水平是维护人体健康的重要一步。

测维生素D的方法维生素D是一种脂溶性维生素，对人体健康至关重要。

它在人体内能够促进钙的吸收与利用，维持骨骼的健康，并参与多种生理反应，包括免疫系统、神经系统和肌肉功能等。

因此，准确测定维生素D水平对于评估个体的健康状态非常重要。

下面将介绍几种常用的测量维生素D水平的方法。

1. 免疫层析法（Immunoassay）免疫层析法是目前最常用的测定维生素D水平的方法之一。

该方法基于抗体与维生素D结合的特异性，并通过抗原抗体反应来检测维生素D的含量。

免疫层析法具有快速、高灵敏度和高特异性等特点，但其结果可能受到其它物质的干扰，需要注意结果的正确解读。

2. 液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）液相色谱-串联质谱法是目前最准确和可靠的测定维生素D水平的方法。

该方法通过对样品经过色谱柱分离和串联质谱仪检测来确定维生素D2（麦角固醇）和维生素D3（胆骨化醇）的含量。

由于其高灵敏度和高分辨率，该方法能够准确地测定维生素D的浓度而且不受干扰。

3. 放射免疫分析法（RIA）放射免疫分析法是一种通过放射性同位素标记的抗体来测定维生素D水平的方法。

该方法通过测定放射性同位素与维生素D结合的程度来测定其浓度。

该方法具有高灵敏度和高特异性，但由于使用了放射性同位素，需要严格控制实验操作，确保安全性，并注意实验室安全操作。

除了上述常用的方法外，还有一些辅助的方法用于评估维生素D水平，如骨骼X 线检查、尿液中钙和磷含量的测定等。

但这些方法不是直接测定维生素D水平的，而是通过评估与维生素D代谢相关的指标来间接推断维生素D的水平。

需要指出的是，无论使用哪种方法测定维生素D水平，都需要注意标本的采集和处理，以及实验过程的严密控制，以确保结果的准确性和可靠性。

此外，由于维生素D的生理功能广泛，其水平的评估应结合临床症状和其它检查结果，综合判断个体的维生素D营养状况。

总结起来，测定维生素D水平的方法有免疫层析法、液相色谱-串联质谱法、放射免疫分析法等。

标题：维生素D含量测定法分发部门：总经理室、质量技术部，行政部（存档）维生素D含量测定法1 目的本标准规定了维生素D的检测方法和操作要求。

2 范围本公司生产的成品中维生素D的测定。

3 责任QC检验员对本规程实施负责，QA负责监督。

4 引用标准GB/T 5413.95 规程5.1 方法提要样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，经（用）石油醚萃取后，用高压液相色谱，紫外检测器定量测定。

5.2 试剂所有试剂均用不含氮的蒸馏水配制。

5.2.1 高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）；5.2.2 异丙醇：色谱纯；5.2.3 2%硼酸溶液；5.2.4 焦性没食子酸的乙醇溶液：15g/L；5.2.5 氢氧化钾溶液：质量比为100：50；5.2.6 石油醚：沸程30～60℃2/4 维生素D含量测定法QC-O-079 5.2.7 甲醇：色谱纯；5.2.8 正己烷：色谱纯；5.2.9 环己烷：色谱纯；5.2.10 维生素D标准溶液5.2.10.1 维生素D2标准贮备液，含维生素D2100μg/mL的甲醇溶液；称取10mg的维生素D2，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

5.2.10.2 维生素D3标准贮备液，含维生素D3100µg/mL的甲醇溶液；称取10mg的维生素D3，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

5.2.10.3 维生素D标准工作液，其中维生素D2、维生素D3的质量浓度均为1μg/Ml；取维生素D2标准贮备液1mL，维生素D3标准贮备液1mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容。

5.3 仪器5.3.1 平底烧瓶：250mL5.3.2 分液漏斗：500mL5.3.3 旋转蒸发器5.3.4 高压液相色谱仪：具有可变波长的紫外检测器、数据处理系统或记录仪5.4 操作方法：54.1 样品处理5.4.1.1 含淀粉的样品准确称取10g样品，放入250mL平底烧瓶中，加入lgTaka淀粉酶，再加入30mL45～50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min。