实验三 注射液中葡萄糖含量的测定

实验十二葡萄糖注射液中葡萄糖含量测定一、实验目的⑴了解用旋光法测定10%葡萄糖注射液含量的原理和方法。

⑵掌握旋光仪的使用操作。

二、实验原理见本章2.6.4三、实验仪器与试剂⑴仪器WXG-4小型旋光仪分析天平容量瓶（100ml）⑵药品葡萄糖约10％葡萄糖注射液蒸馏水四、实验步骤⑴标准曲线的制备：①标准葡萄糖溶液的配制：配制每1ml中各含0.015g，0.035g，0.055g，0.075g，0.095g 葡萄糖（C6H12 O6 . H2O）的标准溶液五份。

称取葡萄糖（C6H12 O6 . H2O）（A.R）0.75 g，1.75 g，2.75 g，3.75 g，4.75 g五份，在烧杯中加水溶解，转入50ml量瓶，于每份中加入氨溶液0.1ml，用蒸馏水稀释定容至刻度，摇匀，放置10min，即得。

②标准溶液的测定：先用蒸馏水校正旋光仪的零点，再将五种不同浓度的标准溶液分别装入2dm的测定管中，依法测定其旋光度。

③标准曲线的绘制：根据五份标准溶液所测得的旋光度，以旋光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制α—c曲线。

⑵供试液的测定①供试液的配制：精密量取100%的注射液25ml置于50ml容量瓶中加氨试液0.1ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置10min, 即得。

②供试液的测定：将供试液装入2dm测定管中，在已校好零点的旋光仪上测定其旋光度。

根据旋光度，从标准曲线上查出供试液葡萄糖的含量，并计算出葡萄糖注射液的百分比浓度和标示量的百分比。

五、注意事项⑴新配制的葡萄糖溶液要发生变旋现象，溶液在PH＜3 或 PH＞7时，变旋速度都可以加快，故常加入一定量氨试液，以促进其变旋现象稳定。

经高压灭菌的并放置长时间的葡萄糖注射液，其变旋现象已达平衡，可不加氨试液，即可测定。

但本次实验中测定应有稀释，故仍应按比例加入氨试液，并放置10min，以使旋光稳定后，再行测定。

⑵溶液测定前，应先用蒸馏水作空白校正零点，测定后再校正一次，以确定在测定时零点有无变化，若第二次校正零点有变化，则应重新测定溶液旋光度。

葡萄糖测定的标准操作规程【目的】体外检测血清中葡萄糖（GLU ）的含量。

【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP ，室负责人监督落实。

2.本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。

【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h ，不饮酒24h 后采集血样。

体检对象抽血前应有两周的的正常状况。

孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。

此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。

2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂所采用的反应式如下：+--+++-−−−→−+--+--−→−+H NADH PG NAD ADPATP PDH G HK 6666磷酸葡萄糖磷酸葡糖糖葡萄糖式中：ATP 为三磷酸腺苷；ADP 为二磷酸腺苷；HK 为己糖激酶；G-6-PDH 为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；6-PG 为6-磷酸葡萄糖酸上述反应中，NADH 的生成量与样本中葡萄糖的浓度成正比，通过在340nm 处测定吸光度的变化值，即可测得样本中葡萄糖的浓度。

二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司HDL-C 试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：试剂1（R1）三磷酸腺苷 0.75mmol/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 375U/LNAD 15mmol/L哌嗪-N,N ’-双（2-乙磺酸）缓冲液 50 mmol/L试剂2（R2）己糖激酶 60KU/L哌嗪-N,N ’-双（2-乙磺酸）缓冲液 50 mmol/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号：4490050/4590050）对测定进行校准。

葡萄糖、果糖的旋光度测定■、实验目的和要求1、了解旋光仪测定旋光度的基本原理；2、掌握用旋光仪测定溶液或液体物质的旋光度的方法;3、了解葡萄糖和果糖的旋光性质；4、学习通过测定旋光度计算溶液含糖量的方法。

二、实验内容和原理只在一个平面上振动的光叫做平面偏振光，简称偏振光。

物质能使偏振光的振动平面旋转的性质，称为旋光性或光学活性。

具有旋光性的物质，叫做旋光性物质或光学活性物质。

旋光性物质使偏振光的振动平面旋转的角度叫做旋光度。

许多有机化合物，尤其是来自生物体内的大部分天然产物，如氨基酸、生物碱和碳水化合物等，都具有旋光性。

这是由于它们的分子结构具有手征性所造成的。

因此，旋光度的测定对于研究这些有机化合物的分子结构具有重要的作用，此外，旋光度的测定对于确定某些有机反应的反应机理也是很有意义的。

测定溶液或液体的旋光度的仪器称为旋光仪，其工作原理见下图。

常用的旋光仪主要由光源、起偏镜、样品管(也叫旋光管)和检偏镜几部分组成。

物质的旋光度与测定时所用溶液的浓度、样品管长度、温度、所用光源的波长及溶剂的性质等因素有关。

因此，常用比旋光度［a］来表示物质的旋光性。

溶液的比旋光度与旋光度的关系为：［a>=—(溶剂)D c x L式中［a ］"为比旋光度；t为测定时的温度(℃)；D表示钠光(波长为=589.3nm)；a为观测的旋光度；c 为溶液的浓度，以g-mL-i为单位；L为样品管的长度，以dm为单位。

如果被测定的旋光性物质为纯液体，可直接装入样品管中进行测定，这时，比旋光度可由下式求出:a式中d为纯液体的密度(g-mL-i)。

测定旋光度具有以下意义：1.测定已知物溶液的旋光度，再查其比旋光度，即可计算出已知物溶液的浓度。

2.将未知物配制成已知浓度的溶液，测其旋光度，计算出比旋光度，再与文献值对照，作为鉴定未知物的依据。

3.由比旋光度可按下式求出样品的光学纯度(OP)。

光学纯度的定义是：旋光性产物的比旋光度除以光学纯试样在相同条件下的比旋光度。

血液中葡萄糖的测定（邻甲苯胺法）一目的掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。

二原理血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺（Schiff碱）。

血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。

将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在630nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。

邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9～6.11mmol / L (即100ml血清中葡萄糖的正常值为70～100mg)。

邻甲苯胺法对葡萄糖特异性高，测定结果为真糖值，为临床上常用的血糖测定方法。

此方法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质。

由于血液葡萄糖在进食后明显升高，所以必须采取空腹血做血液葡萄糖测定，血细胞糖酵解作用会降低血液葡萄糖浓度，所以血液抽出后应及时测定，或用含氟化钠的抗凝剂抑制糖酵解，可稳定24小时。

三操作1.采得待测血样（抗凝）后立即离心以分离血浆（3,000转离心15分钟）。

2.取干燥试管4支，分别标出号码，按下表添加试剂。

4.以空白管调零，读取各管630nm处吸光度值。

5.计算血糖mmol/L = 测定管吸光值× 5标准管吸光值四实验器材与试剂分光光度计、沸水浴、试管、移液管、电炉、烧杯、洗耳球、试管夹。

邻甲苯胺试剂：称取硫脲(AR)级1.5g，溶于940ml冰醋酸(AR级)中，加邻甲苯胺60ml。

置棕色瓶中至少可用两个月。

此试剂腐蚀性极强，应避免接触皮肤。

12 mmol/L苯甲酸溶液：900ml蒸馏水中加入1.4g苯甲酸，加热助溶，冷却后定容到1L。

葡萄糖标准储存液（100 mmol / L）：称取无水葡萄糖（烘箱80烘干至恒重，干燥器中保存）1.802g，溶于80ml苯甲酸溶液中，再定容到100ml。

葡萄糖标准应用液（5 mmol / L）：取标准储存液5ml，加苯甲酸溶液至100ml。

实验七葡萄糖含量的测定（碘量法）实验七葡萄糖含量的测定（碘量法）一、实验目的本实验旨在通过碘量法测定样品中葡萄糖的含量，以了解该样品是否符合质量标准。

碘量法是一种常用的化学分析方法，具有操作简便、准确度高、适用范围广等优点。

二、实验原理碘量法的基本原理是利用碘与葡萄糖的氧化还原反应。

在酸性条件下，碘可以将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同时释放出等量的碘离子。

通过测量释放出的碘离子浓度，可以推算出葡萄糖的含量。

三、实验步骤1.样品处理：称取适量样品，用蒸馏水溶解，转移至250 mL容量瓶中，定容至刻度。

2.制备标准溶液：准确称取已知质量的葡萄糖标准品，用蒸馏水溶解并定容至100 mL容量瓶中，得到1 mg/mL的葡萄糖标准溶液。

3.绘制标准曲线：分别取0、1、2、3、4 mL的葡萄糖标准溶液于5个25 mL容量瓶中，各加入0.5 mL 6 mol/L的盐酸溶液，摇匀后分别加入0.5 mL0.1%的淀粉溶液和1 mL 0.05%的硫酸铜溶液，摇匀后再加入10 mL 0.01%的碘溶液，用蒸馏水定容至刻度。

在暗处静置5 min后，用光电比色计测量各溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。

4.样品测定：取5 mL样品溶液于25 mL容量瓶中，按照标准曲线的制备方法进行操作，最后用光电比色计测量吸光度。

5.数据处理：根据标准曲线计算样品中葡萄糖的含量。

四、实验结果与数据分析1.标准曲线绘制结果：根据吸光度与葡萄糖浓度的关系绘制标准曲线，得到回归方程为y = 0.047x + 0.032（R² = 0.998）。

结果表明，在一定浓度范围内，吸光度与葡萄糖浓度呈线性关系。

2.样品测定结果：通过光电比色计测量样品溶液的吸光度，根据回归方程计算得到样品中葡萄糖的含量为98.5%。

3.数据处理与分析：根据实验结果可知，该样品中葡萄糖含量较高，符合质量标准。

此外，本实验还验证了碘量法测定葡萄糖含量的准确性和可靠性。

一、实验目的1. 了解血糖测定的原理和方法。

2. 掌握血糖测定仪器的使用方法。

3. 通过实验，了解血糖水平的变化规律。

二、实验原理血糖测定是通过对血液中葡萄糖含量的测定来评估人体血糖水平的一种方法。

本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖，其原理是：葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下，氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，催化分解生成水和氧气，同时产生色原，色原的吸光度与血糖浓度成正比。

三、实验材料1. 仪器：血糖测定仪、采血针、采血管、酒精棉球、棉签。

2. 试剂：葡萄糖标准溶液、葡萄糖氧化酶试剂、显色剂、缓冲液。

3. 样品：受试者空腹血液。

四、实验步骤1. 准备工作：将血糖测定仪开机预热，调整好工作参数；准备好试剂和仪器，确保其处于正常工作状态。

2. 样品采集：用采血针对受试者进行指尖采血，用酒精棉球消毒采血部位，待血液自然流出后，用棉签轻轻按压，收集血液至采血管中。

3. 血糖测定：将采集到的血液滴入血糖测定仪的测试槽中，按照仪器提示进行操作。

4. 结果读取：待仪器显示结果后，记录受试者的血糖浓度。

五、实验结果1. 受试者空腹血糖浓度：X mmol/L。

2. 标准溶液血糖浓度：A mmol/L。

3. 标准曲线方程：y = kx + b，其中y为吸光度，x为血糖浓度，k和b为回归系数。

4. 实验重复性：重复测定3次，结果分别为X1、X2、X3，计算其平均值和标准差。

六、实验分析1. 根据实验结果，受试者的空腹血糖浓度为X mmol/L，与正常血糖范围（3.9-6.1 mmol/L）相比较，受试者的血糖水平处于正常范围内。

2. 通过实验得到的血糖标准曲线方程，可以用于血糖浓度的测定。

3. 实验重复性较好，说明实验结果可靠。

七、实验总结本次血糖测定实验，成功掌握了血糖测定的原理和方法，了解了血糖水平的变化规律。

实验过程中，严格按照操作规程进行，确保了实验结果的准确性。

在今后的工作中，我们将继续学习和应用血糖测定的相关知识，为患者提供更优质的医疗服务。

实验一：葡萄糖一般杂质检查一、目的要求：1、葡萄糖的鉴别试验。

2、掌握一般杂质检查的目的和原理。

3、熟悉杂质检查的操作方法。

二、实验原理1、鉴别试验：醛基或酮基有还原性，在碱性酒石酸铜(Fehling试液)中还原铜成氧化亚铜。

无水葡萄糖、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化钠注射液均用此法鉴别。

2、酸碱度检查：是用药典规定的方法对药物中的酸度、碱度及酸碱度等酸碱性杂质进行检查。

检查时应以新沸并放冷至室温的水为溶剂。

不溶于水的药物，可用中性乙醇等有机溶剂溶解。

常用的方法有酸碱滴定法，指示剂法以及pH值测定法。

3、氯化物检查法：氯化物在硝酸溶液中与硝酸银作用，生成氯化银沉淀而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液和硝酸银在同样条件下用同法处理生成的氯化银浑浊程度相比较，测定供试品中氯化物的限量。

反应离子方程式：Cl- + Ag+→ AgCl↓（白色）4、铁盐检查法：三价铁盐在硝酸酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性的硫氰酸铁络离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。

反应离子方程式：Fe3+ + 3SCN-→ Fe（SCN）3（红棕色）三、试剂与仪器1、酚酞指示液取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，即得。

2、氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）3、稀硝酸取硝酸10.5 ml，加水稀释至100 ml，即得。

本液含HNO3应为9.5％～10.5％4、稀盐酸取盐酸23.4 ml,加水稀释至100 ml，即得。

本液含盐酸分数应为9.5%~10.5%5、硝酸银溶液（0.1mol/L）称取1.75 g硝酸银，溶于100 mL水中。

6、标准氯化钠溶液（10μgCl－/ml）称取氯化钠0.165 g，置1000 ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。

临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10 μg的Cl-)7、碘试液1滴取碘13.0g，加碘化钾36g与水50ml溶解后，加盐酸3滴与水适量使成1000ml，摇匀，用垂熔玻璃器滤过。