常见食用豆类中黄酮类化合物含量的测定

总黄酮（Flavonoid）含量(铝盐显色法酶标仪96样)（一）检测原理：总黄酮，即黄酮类化合物，包括黄酮，黄酮醇，黄烷酮，橙酮，异黄酮，黄烷醇，花青素等，是植物重要的一类次生代谢产物，具有有较强的抗氧化活性，可捕捉活性氧自由基，降低氧化伤害，在果实中影响其色泽和风味；对植物的抗逆性（比如抗紫外）和抗病虫害方面有重要作用。

实验采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法测定黄酮总含量，即在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值，即可计算样品中总黄酮含量。

（二）试剂组分与配制：试剂名称规格保存要求备注试剂一液体1.6m L×1支4℃保存试剂二液体3m L×1瓶4℃保存试剂三液体12m L×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存做标曲，则用到该试剂（三）所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、粉碎仪、筛子、60%乙醇、离心机、蒸馏水。

（四）总黄酮测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g新鲜样本(若水分充足，可增加样本取样质量)；或者称取约0.03g烘干样本（将样本在105℃下杀青3min，然后60℃烘干至恒重，粉碎，过40-60目筛，得到烘干样本），加入1.5mL的60%乙醇（若鲜样需研磨均质），60℃振荡提取2h（若蒸发用60%乙醇定容至1.5mL），25℃×12000rpm，离心10min，取上清待测。

【注】：若样本量较少，可同比例缩减样本量，如取0.02g干样，加入1mL60%乙醇，60℃振荡提取2h。

25℃×12000rpm，离心10min，取上清，用60%乙醇定容至1mL待测。

②液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测：①酶标仪预热30min，调节波长至510nm。

黄酮含量测定实验报告1. 实验目的本实验旨在探究不同食材中黄酮含量的差异，并利用比色法测定黄酮的含量。

2. 实验原理比色法是利用物质对可见光的吸收特性进行定量分析的方法。

黄酮是一类具有广泛生物活性的天然化合物，常常用作药物和食品添加剂。

黄酮的浓度可以通过其在特定波长下的吸光度来确定。

3. 实验步骤3.1 准备工作- 准备所需食材样品，如黄芩、枸杞、山楂等。

- 准备试剂：甲醇、石油醚、2N盐酸、硼酸溶液、盐酸。

3.2 提取黄酮1. 将所选食材样品粉碎，并称取3克样品。

2. 将样品加入25mL石油醚，室温条件下搅拌30分钟，以去除油脂。

3. 过滤样品，将滤液收集入锥形瓶中。

4. 再加入25mL甲醇，室温条件下搅拌30分钟，以提取黄酮。

5. 过滤后，用甲醇定容至100mL。

3.3 构建标准曲线1. 取黄酮标准品，分别称取0.1g、0.2g、0.3g、0.4g和0.5g，置于50mL锥形瓶中。

2. 分别加入25mL石油醚和25mL甲醇，按上述方法提取黄酮。

3. 过滤后，用甲醇定容至50mL，得到浓度分别为2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL和10mg/mL的黄酮溶液。

3.4 测定样品黄酮含量1. 将提取得到的样品溶液取5mL，并用甲醇定容至25mL。

2. 取适量样品溶液置于比色皿中，以甲醇为对照组。

3. 在波长为380nm的紫外可见光谱仪中测定吸光度。

4. 实验结果与分析4.1 标准曲线根据所得的吸光度数据，绘制出黄酮浓度与吸光度之间的标准曲线。

4.2 样品含量计算根据所测得的样品吸光度值，利用标准曲线可得到样品中黄酮的浓度。

5. 实验讨论与结论本实验利用比色法测定了不同食材中黄酮的含量。

通过对标准曲线的测定和样品吸光度的测量，可以准确计算出样品中黄酮的含量。

本实验的结果对于食品科学和药物研发具有重要意义。

黄酮作为一种天然化合物，具有多种生物活性，可以抗氧化、抗炎和抗肿瘤等。

因此，了解黄酮含量对于评估食材的营养价值和药物疗效具有指导意义。

紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法紫外分光光度法是检测植物黄酮含量的最有效的方法，紫外分光光度的检测方法有很多，本文主要介绍了直接测定法、显色测定法、差示测定法、多波长法测定的方法，这些方法的应用条件不同，需要结合实际，综合考虑后选择适用的测定方法，这样才能提高测定的工作效率，保证测定结果的正确性。

通过对植物黄酮含量的测量，可以掌握黄酮类化合物含量的原理，还能对植物的特性进行科学的分析，具有一定的医药价值。

标签：紫外分光光度法植物黄酮方法【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）11-0709-02黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一類重要的天然有机化合物，很多植物中都含有一定量的黄酮。

黄酮种类很多，其主要类型有黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇等等，具有一定的保健和药用价值。

黄酮类化合物的存在形式既有与糖结合成糖苷的，也有游离态，多呈黄色，在紫外光下一般具有荧光，具有很强的抗氧化性。

紫外分光光度法是测定植物黄酮含量的主要方法，下面对具体的测定方法进行一些介绍，以供参考。

一直接测定法黄酮是指具有α或β苯基苯稠吡喃酮的一类化合物，这种化合物的分子中含有肉桂酰基，也还有苯甲酰基，是一种综合的共轭体系，在甲醇溶液中，大多数黄酮类化合物在甲醇中的紫外吸收光谱由两个主要吸收带组成。

出现在300～400nm之间的吸收带称为带Ⅰ，出现在240～280nm之间的吸收带称为带Ⅱ。

带Ⅰ是由B环桂皮酰基系统的电子跃迁引起的吸收，而带Ⅱ是由A环苯甲酰基系统的电子跃迁引起的吸收，如图1所示。

峰带Ⅱ吸收紫外线的能力较强，也更适合直接测定法的检测。

在利用直接测定法对植物含黄酮量进行测定时，需要运用lambert- Beer 定律进行计算。

直接测定法主要利用了黄酮结构的特点，在测定的过程中不需要使用显色剂，在黄酮特征吸收峰处直接测定即可。

这种方法比较直接快速，而且操作简单，但是也具有一定的缺点，只适合单一成分的测定，在检测的过程中，若样品含有一定杂质，可能会影响检测结果的准确性。

豆制品中异黄酮成分的提取与含量测定在全球范围内，豆制品是一种非常重要的食品之一。

不仅因为它们是一种丰富的蛋白质来源，还因为它们富含一种被称为异黄酮的天然化合物。

异黄酮是一类具有植物雌激素活性的化合物，许多研究表明它们具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生理活性。

提取和测定豆制品中的异黄酮成分对于研究其健康功效以及产品质量控制具有重要意义。

提取豆制品中的异黄酮成分是一个关键步骤。

首先，我们需要选择一种合适的溶剂来提取。

乙醇、乙醚和丙酮等有机溶剂都适用于异黄酮的提取。

在选择溶剂的同时，还需要考虑提取时间和温度等因素。

一般来说，较长的提取时间和较高的提取温度可以增加异黄酮的提取率，但也可能会导致一些热敏感的化合物的降解。

因此，需要在选择提取条件时进行优化。

提取后，我们需要对提取液进行浓缩和净化。

常见的浓缩方法包括旋转蒸发和真空浓缩等。

净化的方法主要包括液液萃取、固相萃取和高效液相色谱等。

液液萃取是一种简单有效的方法，它基于不同化合物在不同相中的分配差异。

固相萃取则利用固相萃取柱具有特异性吸附特性的原理，可以方便地分离目标化合物。

高效液相色谱是一种非常常用的分析方法，可以将样品中的异黄酮分离并测定其含量。

在测定豆制品中的异黄酮含量时，可以使用不同的分析技术。

常用的分析方法包括紫外-可见吸收光谱、荧光光谱和质谱等。

紫外-可见吸收光谱是一种简单方便的分析方法，适用于异黄酮的定性和定量分析。

荧光光谱则具有更高的灵敏度和选择性，可以用于低浓度异黄酮的检测。

质谱是一种非常灵敏和准确的分析方法，可以通过测定分子的质量和碎片的质量谱图来确定异黄酮的结构和含量。

除了选择合适的分析方法，还需要建立准确可靠的分析方法。

分析方法的准确性和可靠性依赖于样品的预处理、标准曲线的建立和质控样品的应用等。

因此，在进行异黄酮含量测定前，需要对分析流程进行验证，并建立相应的质量控制措施。

总之，提取和测定豆制品中的异黄酮成分是一项重要的研究工作。

通过选择合适的提取方法和分析技术，可以准确地测定豆制品中异黄酮的含量，并深入研究其健康功效。

紫外分光光度法中是如何测定大豆异黄酮含量的介绍大豆异黄酮是一种植物雌激素，在很多植物中都有存在，特别是在大豆中含量较高。

大豆异黄酮被认为具有多种保健作用，能够预防癌症、心血管疾病等多种疾病，受到了越来越多人的关注。

测定大豆异黄酮含量的方法有多种，其中一种常用的方法是紫外分光光度法。

紫外分光光度法紫外分光光度法是一种常用的光谱分析方法，利用样品吸收光的强度与样品的组成、浓度等相关，通过测量样品在不同波长下的吸光度来分析样品中目标物质的含量。

在测定大豆异黄酮含量时，紫外分光光度法可利用大豆异黄酮的UV吸收特性进行测定。

实验步骤以下是用紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量的具体步骤：1. 样品制备•取约5克大豆粉末，加入40 mL纯水中。

•安钠溶液：取0.1 g NaOH 溶于100 mL无水乙醇中，摇匀。

•取100 μL大豆提取物于2 mL离心管中，加入0.2 mL安钠溶液，混匀。

•在37度水浴箱中恒温振荡1.5h，离心3000 r/min，去除上清液备用。

2. 质量调制将1 mg/mL的大豆异黄酮标准溶液以0、1、2、4、6、8、10μg/mL的浓度分别稀释成系列标准曲线溶液。

3. 测定吸收光谱•将样品和标准曲线溶液分别在波长范围为200-400 nm之间扫描吸收光谱。

•记录吸光度值并绘制吸收光谱图。

4. 计算异黄酮含量•峰高法计算：对样品吸收光谱中的异黄酮峰高进行读值，计算大豆提取物或样品中的异黄酮质量浓度。

结论紫外分光光度法是一种简单、快速、准确的测定大豆异黄酮含量的方法。

该方法使用安钠溶液去除干扰物质，提高了测定的准确性。

通过建立标准曲线和测定样品的吸光度，可以方便快捷地计算出大豆异黄酮的含量。

该方法不仅适用于大豆异黄酮的测定，也可以用于测定其他物质的含量，具有广泛的应用前景。

复方苦豆子颗粒中总黄酮成分的含量测定作者：曹亚军，陈虹，马建慧，李丽燕【摘要】目的建立测定复方苦豆子颗粒中总生黄酮含量的方法。

方法用60%乙醇提取并制成供试品，采用分光光度法于500 nm处测定样品中总黄酮的含量。

结果线性范围为10.0～50.0 mg·L-1，回归方程为A＝12.31C－0.012 9，r= 0.999 9，芦丁的平均回收率为98.67%，RSD＝3.09%(n=5)。

结论所建立的方法简便、准确，可用于复方苦豆子颗粒的质量控制。

【关键词】复方苦豆子颗粒；总黄酮Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of the total flavonoids contents in Complex Prescription Kudouzi Granules. MethodsThe total flavonoids in Complex Prescription Kudouzi Granules were extracted with 70% alcohol, and then were processed into the samples, finally the samples were determined at the wavelength of 500 nm. ResultsRutin showed a good linear relationship with absorbance when its concentration was in the range of 10.0～50.0 mg·L-1，and the regression equation established was A =12.31C－0.012 9 (r = 0.999 9). The average recovery of rutin was 96.87% (RSD=3.09%, n=5). ConclusionThis procedure is simple and accurate, and can be used for quality control of Complex Prescription Kudouzi Granules.Key words：Complex Prescription Kudouzi Granules; Total flavonoids复方苦豆子颗粒是老中医按中医理论组方，由苦豆子、山楂、莱菔子、黄芪等8味中药经水提醇沉等工艺精制而成，主要含黄酮、生物碱、蒽醌、有机酸、多糖等有效成分，具有消食除胀、健脾益气、祛痰降浊、活血化淤之功效。

黄酮含量的测定方法黄酮含量的测定方法1、对照法1）①对照品制备：精密称取芦丁对照品20.8mg，置于100ml容量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。

②样品溶液制备精密称取样品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70%乙醇补足减失重量，即得。

③标准曲线的制备精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L 氢氧化钠溶液10ml，加70%乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。

各取10ml 置于50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度。

在510nm的波长下测定吸光度。

2）①样品溶液的制备：分别精确称取80℃恒温干燥的样品用50%甲醇回流提取，料液比1：15,提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30%甲醇定容至50ml 容量瓶中。

从其中取出12ml溶液放入100ml 容量瓶中，稀释至刻度，再从100ml 容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ⅰa和Ⅱa。

②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ⅰa、Ⅱa及芦丁标准品的吸收曲线，均在350 nm 处有一强吸收，因此选择350 nm为测定波长。

③标准曲线的制定：精密称取芦丁对照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。

分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100ml 容量瓶中，于350 nm 波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示在4.12～12.36mg／103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。

④含量测定结果：分别吸取2．2．1中Ⅰa和Ⅱa待测样品液各适量于石英比色池中，按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm 波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。

标准曲线法测黄酮含量计算黄酮化合物是一类具有重要生物活性的化合物，广泛存在于植物中。

它们在植物生长和生理过程中起着重要的作用，对人体健康也有着积极的影响。

因此，测定植物中黄酮含量具有一定的研究意义。

标准曲线法是一种常用的测定黄酮含量的方法，本文将介绍如何使用标准曲线法计算黄酮含量。

首先，准备工作。

需要准备的试剂和设备包括，乙醇、乙酸乙酯、乙酸、乙酸钠、二氧化硅、标准品、紫外分光光度计等。

在实验操作前，要确保所有试剂和设备都已经准备就绪，并且清洁干净。

其次，制备标准曲线。

选取几种不同浓度的标准品，分别用乙醇稀释成一系列不同浓度的溶液。

然后，分别取一定体积的每种标准品溶液，加入相应的试剂和溶剂，进行提取和转化。

最后，用紫外分光光度计测定各标准品溶液的吸光度，并绘制标准曲线。

接下来，测定样品。

将待测样品制成适当的溶液，然后用相同的方法进行提取和转化。

测定样品溶液的吸光度，并根据标准曲线计算出样品中黄酮的含量。

最后，结果分析。

根据实验得到的数据，计算出样品中黄酮的含量，并进行统计分析。

同时，还可以对不同样品进行比较，找出含量差异较大的样品，为后续研究提供参考。

通过标准曲线法测定黄酮含量，可以得到准确的结果，并且具有较高的重现性和灵敏度。

这种方法简单易行，适用于大批量样品的测定。

在实际应用中，可以根据需要对标准曲线法进行改进和优化，以满足不同样品的测定要求。

总之，标准曲线法是一种常用的测定黄酮含量的方法，通过合理的实验设计和严格的操作规范，可以得到准确可靠的结果。

希望本文的介绍能够对相关研究工作提供一定的帮助，也希望读者能够在实际操作中加以实践和改进，以获取更好的实验效果。

实验九食品中总黄酮的测定（－）目的意义黄酮类化合物（flavonoids）是广泛存在于植物界的一大类多酚化合物，多以苷类形式存在。

其分析方法有多种，对于黄酮类化合物的相互分离以及单一成分的定量分析，常采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）；而对于总黄酮含量的测定，则主要采用分光光度法。

通过本方法的学习，可以掌握食物中总黄酮的测定方法。

（二）高效液相色谱法1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。

2．仪器和试剂（1）高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）层析柱（4）超声波清洗仪（5）索氏提取器（6）微孔过滤器（滤膜0.45um）（7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品（9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。

（10）去离子水（11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液。

3. 操作步骤（1）样品处理1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。

2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后，以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。

（2）色谱分离条件色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um;流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气；流速：lml／min；柱温：40℃；检测波长：360nm；灵敏度：0.02AUFS；进样量：20ul。

大豆食品中异黄酮含量1 范围本标准规定了大豆食品中异黄酮（大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素、黄豆黄素、黄豆黄苷）含量测定的高效液相色谱法。

本标准适用于原料大豆及豆浆、豆腐、腐乳等大豆食品中异黄酮含量的测定。

本标准测试方法的线性范围：0.5μg/mL～100μg/mL。

本标准测试方法的检出限：2.5μg/kg。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义3.1 大豆异黄酮（soybean isoflavones）大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的一类次生代谢产物，属于天然黄酮类物质，具有异黄酮类化合物的典型结构。

大豆中以异黄酮葡萄糖苷和相应苷元形式存在的物质，包括大豆苷（Daidzin）、染料木苷（Genistin）、大豆苷元（Daidzein）、染料木素（Genistein）、黄豆黄素（Glycitein）、黄豆黄苷（Glycitin）。

其分子式如下：大豆苷（C21H20O9）、染料木苷（C21H20O10）、大豆苷元（C15H10O4）、染料木素（C15H10O5）、黄豆黄素（C16H12O5）、黄豆黄苷（C22H22O10）。

4 原理样品经过乙腈-水溶液震荡提取，提取液经离心、浓缩后用80％甲醇定容、过滤，经高效液相色谱分析（C18柱分离），在260nm条件下测定，依据保留时间定性，用外标法定量。

5 试剂和材料本标准使用符合 GB/T 6682-2008 规定的一级水。

除另有规定仅使用分析纯试剂。

5.1 试剂5.1.1 甲醇（Methanol，CH3OH）：色谱纯。

5.1.2 乙腈（Acetonitrile，C2H3N）：色谱纯。

5.1.3 二甲基亚砜（DMSO，C2H6OS）。

5.1.4 冰醋酸（AceticAcid，CH3COOH）。

大豆提取黄酮实验报告1. 引言黄酮是一类天然的营养物质，广泛存在于植物中，尤其丰富于大豆中。

黄酮具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗肿瘤等多种生理功能，对人体健康有重要意义。

本实验旨在从大豆中提取黄酮，并验证提取方法的有效性。

2. 实验目的1. 掌握大豆黄酮提取的方法；2. 验证所采用黄酮提取方法的有效性。

3. 实验步骤3.1 材料准备- 大豆100g- 乙醇绝对乙醇200mL- 水200mL- 无水氯化钠10g3.2 大豆磨碎将大豆放入研钵中，用研钵和杵将其磨碎，直到得到细小的大豆颗粒。

3.3 提取黄酮1. 将磨碎后的大豆颗粒放入一个容器中，加入绝对乙醇，并充分搅拌混合。

2. 将容器密封，室温下静置24小时，使大豆中的黄酮溶解于乙醇中。

3.4 分离黄酮1. 将混合液过滤，将固体残渣分离出来。

2. 将过滤后的液体加入适量的水，并加入无水氯化钠搅拌混合。

3. 再次过滤液体，将沉淀留取。

3.5 干燥和称重将取得的黄酮沉淀放入干燥器中，风扇吹干，直至得到固体状的黄酮。

4. 结果经过提取和分离，得到了黄酮的沉淀物。

将沉淀物取出后放入干燥器中，干燥后得到了黄酮样品。

5. 讨论与分析我们成功地从大豆中提取到了黄酮，证明了所采用的提取方法有效。

然而，实验中可能存在一些问题，例如可能会有部分黄酮未被提取到，导致损失。

此外，所提取得到的黄酮应经过进一步的分离和纯化，以确保其纯度和质量。

为了提高黄酮的纯度，可以使用比本实验中使用的方法更多样化的提取反应，如超声波法、溶剂萃取法等，以增加黄酮的提取效率。

同时，在提取过程中，还可以对提取温度、时间、酶解条件等因素进行优化，以提高提取效果。

6. 结论通过本次实验，我们成功地从大豆中提取到了黄酮，并初步验证了所采用的提取方法的有效性。

实验结果表明，大豆含有丰富的黄酮，为进一步研究和利用大豆黄酮提供了可能性。

未来可以进一步研究黄酮的生理功能和应用价值，为人类健康提供更多的贡献。

参考文献1. 李光正. 大豆黄酮的提取及其抗氧化活性研究[J]. 农产品加工(学术版), 2014(3): 32-34.2. 张小龙. 大豆黄酮对人体健康的保健作用[J]. 中国农民, 2017(18): 89-90.3. 王小娜, 王勇. 大豆黄酮的提取及其应用研究进展[J]. 粮食与饲料工业, 2015, 42(6): 64-66.。

菜豆中总黄酮提取工艺及含量测定涂建飞;卢立;张晶【摘要】目的测定菜豆豆荚总黄酮含量,优化菜豆中黄酮提取工艺.方法以芦丁为对照品通过紫外分光光度法测定总黄酮含量,将回流法、超声法、煎煮法提取黄酮类化合物的提取效率进行对比,采用正交法优化了超声提取工艺,用最佳提取工艺验证实验结果.结果提取次数对黄酮提取率影响显著,超声时间和乙醇浓度对提取率影响不显著.结论最佳提取工艺为85％乙醇、超声60min、提取3次,菜豆中总黄酮含量为158.86mg/100g.【期刊名称】《人参研究》【年(卷),期】2013(025)002【总页数】3页(P43-45)【关键词】菜豆;芦丁;最佳提取工艺【作者】涂建飞;卢立;张晶【作者单位】吉林农业大学中药材学院吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院吉林长春·130118;吉林农业大学中药材学院吉林长春·130118【正文语种】中文菜豆(Phaseolus vulgaris L.)又名豆角，芸豆，四季豆等，属豆科(Fabaceae)，蝶形花亚科(Faboideae)，为一年生草本矮生或蔓生植物，色泽嫩绿，味道鲜美，是人们日常生活中经常食用的一种蔬菜[1]。

菜豆营养价值高，含有丰富的碳水化合物、蛋白质、维生素和矿物质，且有增进食欲，防治癌症，改善心脑血管系统，防止便秘，增加胃肠揉动等功效，适合肥胖，糖尿病，冠心病，癌症患者食用，是人们生活生产中重要的作物之一[2～3]。

黄酮类化合物具有抗癌、防癌作用、抗自由基活性、抗脂质过氧化、抗病毒、抗急性胰腺炎等药理作用,可用于多种疾病的治疗[4～5]。

对菜豆中黄酮类化学成分研究十分缺乏，具有很好的发展前景，菜豆中的黄酮的含量未有文献报道，本文测定菜豆中黄酮含量，为以后的研究提供理论依据。

1.1 材料菜豆(Phaseolus vulgaris L.)由吉林农业大学园艺学院韩玉珠教授提供及鉴定。

1.2 仪器752紫外可见分光光度计(上海成光仪器有限公司)；KQ-250DB数控型超声清洗器；101型电热温度干燥箱(北京科伟永新仪器有限公司)。

总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定呀，有几种常见方法呢。

紫外- 可见分光光度法。

先得把样品处理好，就像给食材做前期准备一样。

把含有总黄酮的样品进行提取，提取液要纯净呀，不能有太多杂质干扰，杂质多了就像炒菜的时候锅没洗干净，那肯定做不出好菜。

然后在特定波长下测定吸光度，这个波长就像一把专门开总黄酮这把锁的钥匙，得找对喽。

这方法安全性挺高的，只要按照正常操作流程，不会有啥危险情况，稳定性也不错呢，只要仪器正常工作，数据偏差不会太大。

在食品、药品检测领域应用可广泛了，能快速知道产品里总黄酮的大概含量。

我知道一家小型制药厂，想检测新研发的药品里总黄酮含量，就用这个方法，快速得到结果，他们高兴得不得了，就像挖到宝藏一样。

还有高效液相色谱法。

这得把样品制成合适的溶液，溶液就像一支整齐有序的队伍，不能乱哄哄的。

然后注入色谱仪，色谱仪就像一个超级严格的裁判，把不同成分分得清清楚楚。

测定过程中要保证仪器的清洁和稳定，这可不能马虎呀，不然数据就乱套了。

这个方法安全性也还好，就是操作要细心些。

在科研中用得很多，能精确测定总黄酮含量，优势就是精准度高呀。

有个科研团队研究植物中的总黄酮含量，用这个方法得到准确数据，他们兴奋地说这简直是找到了解开谜团的密码。

我觉得这些总黄酮含量测定方法各有各的好，在合适的场景下都能发挥大作用，就像不同的工具在不同的工作里都能大显身手。

高效液相色谱法测定大豆异黄酮含量的研究随着人们对健康意识的增强和对营养保健品需求的增加，越来越多的人开始关注食品中的天然功能组分。

大豆异黄酮作为大豆中重要的天然功能型成分之一，受到了越来越广泛的关注。

为了探究大豆中异黄酮的含量，并且保证效率和准确性，研究人员采用了高效液相色谱法进行分析研究。

一、大豆异黄酮的作用及其检测方法大豆异黄酮是大豆中最主要的天然植物雌激素类物质，具有许多良好的生物功能特性。

诸如降血压、抗氧化、降低胆固醇等，可以消化清道夫、改善皮肤、防癌、防心脑血管疾病等，被广泛应用于医疗卫生和功能性食品等领域。

而要检测大豆异黄酮的含量，通常采用的方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、液-物质组合色谱法等。

其中，高效液相色谱法因其精准、快速、稳定等优点，成为检测大豆异黄酮含量的主流分析方法。

二、高效液相色谱法的原理及操作步骤高效液相色谱法是使用液相作为固定相，以分离样品中单独的化学成分为目的的一种色谱技术。

其基本原理是从样品中分离出需要测定的化合物，并用高效液相色谱仪对其进行测定。

高效液相色谱仪操作步骤具体如下：1. 样品的粉碎。

先将干燥的样品粉碎成均一颗粒大小，并筛出合适的样品。

2. 提取样品。

选择较好的提取剂，加入到粉碎的样品中，经过摇晃、超声波或加热提取等方式获得提取液。

3. 进样管的插入。

将提取液及其稀释液分别移动到进样管中，以准确测量样品的含量。

4. 色谱柱的操作。

准备好色谱柱后，运用移液器将提取物注入色谱柱的样品口中。

5. 色谱谱图的测量及结果的分析。

测量完成后，需要对仪器测量数据进行分析处理，最后得到样品中大豆异黄酮的含量。

三、高效液相色谱法测定大豆异黄酮含量的优势相比于其他的化学检测方法，高效液相色谱法有以下几个明显的优势：1. 测量结果准确性高。

高效液相色谱法的检测结果精准度高，极低的误差率使分析结果更加可信。

2. 速度快效率高。

在保障精确仪器性能的前提下，高效液相色谱法的测量速度快，使得在短时间内快速地获取样品数据更加便捷。

总黄酮成分提取取苦菜和蒲公英地上部分，洗净烘干，粉碎成粉，过0.6 mm筛，置于棕色瓶内储藏备用。

分别称取苦菜和蒲公英粉1.000 g于三角瓶中溶解，共9份，放入超声波清洗器中（超声功率120 W，温度为50℃）提取，过滤定容至100 mL。

为快速提取苦菜和蒲公英中的总黄酮成分，采用正交试验确定提取的最佳条件。

选择乙醇浓度、料液比和提取时间3个水平进行试验(见表1) 。

表1 正交试验因素及水平Table 1 Factors and level of orthogonal test处理Treatment因素FactorsA 乙醇浓度/%EthanolconcentrationB 料液比/g·mL-1Solid-liquid ratioC 提取时间/hExtraction time1 50 1:10 0.52 60 1:20 1总黄酮含量测定（1）芦丁标准溶液的制备：将芦丁标准品于120℃下干燥30min，称取干燥后样品20 mg，用30%乙醇溶解，定容到100 mL，配制成浓度为0.2 mg·mL-1的芦丁标准溶液。

（2）标准曲线的制作：分别吸取0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL芦丁标准溶液，置于50 mL比色管中，加入2.0 mL 5%的NaNO2溶液，混匀后放置5 min，再加入2.0 mL 10%的Al(NO3)3溶液，摇匀后放置5 min，加入10 mL 4%的NaOH溶液，最后用30%乙醇定容至50 mL，摇匀后放置10 min，在510 nm下用紫外分光光度计测定各样品吸光值。

以吸光度A值为纵坐标( Y)，以标准样品浓度为横坐标( X) ，绘制标准曲线，计算线性回归方程。

得到的线性回归方程为: Y =0. 017X-0.0124，相关系数R2 = 0.994。

即在0~0.02 mg ·mL-1范围内，芦丁标准样品浓度与吸光度的线性关系良好。

食品中总黄酮的测定方法黄酮类化合物(flavonoids)是广泛存在于植物界的一大类多酚化合物，多以苷类形式存在。

其分析方法有多种，对于黄酮类化合物的相互分离以及单一成分的定量分析，常采用高效液相色谱法 (high performanee liquid chromatography, HPLC)；而对于总黄酮含量的测定，则主要采用分光光度法。

通过本方法的学习，可以掌握食物中总黄酮的测定方法。

(一)高效液相色谱法1.原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。

2 •仪器和试剂(1)高效液相色谱仪(2)紫外检测器(3)层析柱(4)超声波清洗仪(5)索氏提取器(6)微孔过滤器(滤膜0.45um)(7)甲醇(色谱纯)(8)芦丁标准品(9)石油醚，盐酸，磷酸(分析纯)。

(10)去离子水(11)芦丁标准溶液：精确称取经105C干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug/ml的芦丁标准溶液。

3. 操作步骤(1)样品处理1)固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚(60〜90C)提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25% HC1 5ml，80C水浴回流水解1h,取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。

2)液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后,以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um ）滤过后供测定用（2）色谱分离条件 色谱柱： CLC — ODS ， 6mm x 150mm ，5um;流动相：0.3%磷酸水溶液：甲醇（V:V ）= 40:80，临用前用超声波脱气； 流速: lml / min ；柱温: 40C ；检测波长：360nm ；灵敏度：0.02AUFS ;进样量：20ul 。