免疫血清鉴定指标
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乙肝疫苗免疫效果判定的实验室检测指标主要包括乙肝两对半定性检查结果和乙肝病毒定量检测结果。
乙肝两对半定性检查结果:这是检测乙肝病毒标志物的实验方法,主要包括HBsAg(乙肝表面抗原)、HBsAb(乙肝表面抗体)、HBeAg(乙肝e抗原)、HBeAb(乙肝e抗体)和HBcAb(乙肝核心抗体)等指标。
如果乙肝两对半定性检查结果显示第二项乙肝表面抗体阳性,表明机体已经产生了免疫力,对乙肝病毒有了抵抗力。
乙肝病毒定量检测结果:通过检测血清中HBsAb的含量,可以判定疫苗接种后机体是否产生了足量的抗体,并且可以了解抗体的持久性。
一般来说,如果HBsAb含量大于10mIU/mL,就表明机体对乙肝病毒有了较强的抵抗力。
除了以上两个指标外,还可以采用酶联免疫吸附实验等方法检测血清中HBsAb的滴度,了解疫苗接种后的免疫效果。
同时,定期进行乙肝病毒标志物的检测,也可以及时发现感染,采取有效的预防和治疗措施。
免疫检测各种指标代表意义名称嘉禾对比标准值血浆纤维蛋白原测定56202-4g/L抗磷脂酰乙醇胺抗体(金域)300抗磷脂酰丝氨酸/凝血酶源抗体400抗心磷脂抗体三项(金域)120抗波形蛋白/心磷脂复合物抗体300抗凝血酶III300290±30.2g/L (90.3%±13.2%)纤溶酶原300调节T细胞Treg-CD127检测(金域)560增加:月经期和妊娠期、糖尿病、动脉硬化症、大叶肺炎、支气管肿瘤、肾病综合征、淀粉样变性、尿毒症、亚急性细菌性心内膜炎、心包炎、心肌梗塞、血栓性静脉炎等。
剧烈运动后也会增加。
减少:先天性纤维蛋白原缺乏症、异常纤维蛋白原血症、新生儿、早产儿、肝损伤(如氯仿、磷、急性黄色肝萎缩,微生物毒素中毒、肝硬化),恶性肿瘤、严重结核病、烧伤,纤维蛋白原溶解活性增高,见于DIC(注:弥散性血管内凝血)说明抗凝血酶III主要反映机体抗凝系统的功能。
升高:一般不会引起病理性后果。
减少见于:遗传性抗凝血酶Ⅲ缺乏;获得性抗凝血酶Ⅲ缺乏:见于各种肝病,如肝硬化、重症呷、肝癌晚期等;抗凝血酶Ⅲ丢失增多:如肾脏疾病;抗凝血酶Ⅲ消耗增多:如各种原因所造成的血液凝固性增高,抗凝血酶Ⅲ中和活化的凝血因子,以致消耗增加。
纤溶酶原缺乏会削弱凝血亢进时机体的反应能力,比如临床上广泛血栓形成。
这种情况在外科手术或溶栓治疗后再栓塞危险会增加。
换句话说,纤溶酶原浓度增加一旦激活,可引起出血危险性增加。
调节性T细胞(Regulatory T cells)是维持机体免疫耐受的重要因素之一,它由胸腺产生后输出至外周,并通过主动调节的方式抑制存在于正常机体内潜在的自身反应性T细胞的活化与增殖,从而调节机体的免疫力,如防止自身免疫性疾病的发生。
CD4* CD25’/FOXP3*细胞的数量减少或功能异常均有可能导致自身免疫病的发生,一些自身免疫性疾病如多发性硬化症、活动性类风湿关节炎、I型糖尿病等调节性T细胞的数量和功能均会发生变化。
血清检查知识点总结1. 血常规血常规是检测血液中的相关指标,包括血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数、血小板计数、红细胞压积、平均红细胞体积等,可以帮助医生了解患者的贫血、感染和出血等情况。
血常规检查是评估机体全面健康状况的常规检查项目之一。
2. 生化检查生化检查是通过检测血清中的生化指标来评估机体的器官功能和代谢情况。
常见的生化指标包括血糖、肝功能指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、直接胆红素等)、肾功能指标(血清肌酐、尿素氮、尿酸等)、血脂(总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等)和电解质(钠、钾、氯等)等。
生化检查可以帮助医生判断糖尿病、脂质代谢紊乱、肝肾功能异常等疾病。
3. 免疫学指标免疫学指标是指血清中的免疫球蛋白、淋巴细胞亚群、细胞因子等指标,可以评估机体的免疫功能状态。
免疫学指标常用于自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤和过敏性疾病的辅助诊断和疾病监测。
4. 感染性疾病标志物感染性疾病标志物是指血清中的病原微生物抗体、抗原和核酸等指标,可以帮助医生判断患者是否感染了细菌、病毒、真菌或寄生虫等病原体。
常见的感染性疾病标志物包括乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)、艾滋病病毒抗体(HIV-Ab)等。
5. 肿瘤标志物肿瘤标志物是指部分肿瘤细胞产生的特异性抗原或代谢产物,在血清中的含量增加可以提示特定肿瘤的存在。
常见的肿瘤标志物包括甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原(PSA)等。
肿瘤标志物的检测可以用于肿瘤的早期筛查、诊断和疾病监测。
6. 血清检查的临床应用血清检查在临床应用中具有重要意义,可以帮助医生进行疾病的诊断、鉴别诊断、治疗监测和预后评估。
通过血清检查,医生可以及时发现患者的病变情况,指导治疗方案的调整,提高治疗效果和提高患者的生存率。
血清检查还可以帮助医生进行个体化治疗,减少不必要的药物使用和手术风险。
7. 血清检查的注意事项在进行血清检查时,患者需要遵循医嘱,按照规定的时间和条件进行检查。
免疫学检查项目免疫学检查项目是用于评估人体免疫系统功能和疾病状态的重要手段。
通过检测免疫系统相关的指标,可以帮助医生判断患者的免疫功能是否正常,并辅助诊断各类免疫相关疾病。
一、免疫细胞计数免疫细胞计数是评估免疫系统功能的基础项目之一。
通过血液检测,可以得到不同类型免疫细胞的数量,如淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞等。
这些细胞的数量和比例可以反映出免疫系统的整体状态,从而帮助医生判断免疫功能是否正常。
二、免疫球蛋白测定免疫球蛋白是免疫系统中的重要组成部分,包括免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M等。
通过检测血液中的免疫球蛋白水平,可以了解人体免疫系统对抗病原微生物的能力。
低于正常范围的免疫球蛋白水平可能提示患者存在免疫缺陷疾病。
三、细胞因子检测细胞因子是一类重要的信号分子,可以调节免疫细胞的活动和相互作用。
通过检测血液中细胞因子的水平,可以评估免疫系统的炎症反应和免疫调节功能。
常见的细胞因子包括白细胞介素、肿瘤坏死因子等,它们的异常水平可能与免疫炎症性疾病的发生和发展有关。
四、自身抗体检测自身抗体是人体免疫系统产生的一类针对自身组织和细胞的抗体。
通过检测血液中的自身抗体水平,可以帮助医生判断患者是否存在自身免疫性疾病。
常见的自身抗体检测项目包括抗核抗体、抗磷脂抗体、甲状腺抗体等。
五、炎症标志物检测炎症标志物是反映炎症反应程度和疾病活动性的指标。
通过检测血液中的炎症标志物水平,可以帮助医生判断患者是否存在炎症性疾病,并评估疾病的严重程度和治疗效果。
常见的炎症标志物包括C 反应蛋白、血沉等。
免疫学检查项目的结果对于医生诊断和治疗疾病起到重要的辅助作用。
同时,患者在接受检查时也需要配合医生的指导,如遵守空腹和特殊饮食要求,以保证检测结果的准确性。
希望通过免疫学检查,能够更好地了解人体免疫系统的状态,及时发现和治疗各类免疫相关疾病,提高生活质量。
自身免疫性疾病的相关检验指标分析与应用自身免疫性疾病(Autoimmune diseases)是指机体免疫系统错误地攻击自身组织、器官或功能,导致慢性炎症和损伤的一类疾病。
由于自身免疫性疾病的多样性和复杂性,目前临床常用的自身免疫性疾病相关检验指标主要包括免疫学指标、自身抗体检测和炎症指标等,这些指标可以作为自身免疫性疾病的辅助诊断工具,为疾病的早期筛查和预后评估提供重要依据。
一、免疫学指标1. 血小板计数(Platelet Count)血小板计数是指血液中血小板的数量,血小板是一种参与止血和血管修复的细胞。
在某些自身免疫性疾病中,血小板计数常常显著下降,如系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus,简称SLE)和自身免疫性血小板减少性紫癜(Autoimmune Thrombocytopenic Purpura,简称ITP)。
因此,检测血小板计数可以为这些疾病的诊断提供参考。
2. 淋巴细胞计数(Lymphocyte Count)淋巴细胞计数是指血液中淋巴细胞的数量,淋巴细胞是机体免疫的重要细胞成分。
在某些自身免疫性疾病中,淋巴细胞计数常常异常增加或减少,如甲状腺自身免疫疾病(Thyroid Autoimmune Disease,简称TAD)和类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,简称RA)。
因此,检测淋巴细胞计数可以作为这些疾病的辅助诊断指标。
3. 白细胞计数(White Blood Cell Count)白细胞计数是指血液中总白细胞的数量,白细胞是机体免疫的主要成分之一。
在自身免疫性疾病中,白细胞计数常常出现异常变化,如SLE和风湿性多肌痛症(Rheumatoid Myalgia,简称RM)。
因此,检测白细胞计数可以为这些疾病的诊断提供参考。
二、自身抗体检测1. 抗核抗体(Antinuclear Antibody,简称ANA)ANA是一类抗体,主要针对细胞核蛋白和染色体蛋白。
检验科常见免疫功能检测方法与解读免疫功能检测是一项重要的检验科技术,在临床诊断和治疗中起到了至关重要的作用。
本文将介绍检验科中常见的免疫功能检测方法,并对其结果进行解读。
一、淋巴细胞亚群检测法淋巴细胞亚群检测法是通过检测外周血中的淋巴细胞亚群比例来评估免疫功能的方法。
在检验中,可以采用流式细胞术或单克隆抗体技术来测定淋巴细胞亚群的比例,包括CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD16+/CD56+等。
淋巴细胞亚群检测结果的解读主要参考各项指标的正常参考范围,当某项指标超出正常范围时,提示免疫功能异常。
例如,CD4+细胞比例低于正常范围可提示免疫功能低下,CD4+/CD8+比值异常可提示免疫系统失衡等。
二、血清免疫球蛋白测定法血清免疫球蛋白测定法是评估机体免疫功能的重要指标之一。
该方法通过检测血清中的免疫球蛋白含量,包括IgG、IgM、IgA等,来判断机体的免疫功能状态。
血清免疫球蛋白测定结果的解读需要结合正常参考范围和临床病情来进行判断。
例如,IgG水平降低可提示慢性感染、免疫缺陷病等,IgM水平升高可提示急性感染等。
三、溶血试验溶血试验是评估机体免疫功能的一种方法,主要用于检测血清中溶菌酶、溶血素等溶血成分的活性。
常见的溶血试验包括红细胞溶血试验和细菌溶菌试验。
溶血试验结果的解读需要结合对应的正常参考范围和临床病情来进行判断。
例如,红细胞溶血试验异常可提示免疫性溶血性贫血、自身免疫性疾病等,细菌溶菌试验异常可提示细菌感染等。
四、细胞因子测定法细胞因子是免疫系统中的信号分子,参与调节免疫功能。
通过检测血清或体液中的细胞因子水平,可以了解机体免疫状态。
细胞因子测定法的结果解读需参考正常范围和临床病情。
例如,肿瘤坏死因子(TNF)升高可提示炎症反应、自身免疫性疾病等,白细胞介素-6(IL-6)升高可提示感染、炎症等。
五、自身抗体检测法自身抗体检测法是评估自身免疫功能的方法,主要通过检测体液中自身抗体的水平来判断机体的免疫功能状态。
临床常用免疫学检查概述免疫学检查是临床上常用的一种检查方法,通过检测人体免疫系统的功能状态,可以帮助医生进行疾病诊断、疾病治疗方案制定等。
本文将介绍一些临床常用的免疫学检查方法。
血清免疫学检测血清免疫学检测是指通过检测血清中的各种免疫分子水平,来评估免疫系统的功能状态。
常见的血清免疫学检测项目包括:免疫球蛋白检测免疫球蛋白是免疫系统分泌的一种重要免疫分子。
在免疫系统受到某些刺激后,会产生特定种类的免疫球蛋白,这些免疫球蛋白会与入侵人体的病原体结合,形成免疫复合物,从而防止病原体进一步侵入人体组织。
常见的免疫球蛋白检测项目包括IgG、IgM、IgA等,通过检测不同类型的免疫球蛋白水平,可以帮助医生了解患者的免疫系统状态。
补体检测补体是一种由多种免疫蛋白组成的血清蛋白复合体,是免疫系统中的重要组成部分。
补体可以帮助身体清除细胞废物和病原体,调节免疫系统的表现形式,保持免疫平衡。
补体缺乏或功能异常会导致多种免疫疾病的发生。
通过检测补体水平可以帮助医生了解患者的免疫状态。
自身抗体检测自身抗体是一种由免疫系统产生的抗体,它们能够与人体组织中的自身抗原结合,从而引发自身免疫反应。
一些自身抗体和特定的自身免疫疾病有关,如胶原病、系统性硬化症等。
通过检测自身抗体水平可以帮助医生了解患者是否存在自身免疫疾病。
免疫细胞学检测免疫细胞学检测是指通过检测一些免疫细胞的数量或功能状态,来评估免疫系统的功能状态。
常见的免疫细胞学检测项目包括:淋巴细胞亚群检测淋巴细胞是免疫系统中最主要的免疫细胞,它们可以识别和消灭入侵的病原体。
淋巴细胞可分为多个亚群,如T细胞、B细胞等,它们在免疫过程中发挥着不同的作用。
通过检测淋巴细胞亚群数量可以帮助医生判断患者是否存在免疫系统方面的问题。
白细胞介素检测白细胞介素是一类由免疫细胞产生的细胞因子。
它们可以通过调节免疫系统的功能状态来保持身体的免疫平衡。
白细胞介素的水平异常与多种免疫疾病的发生相关。
精品 感谢下载载 评估机体免疫水平主要有哪些免疫学指标?
这里要分两大类:一是"临床应用学的免疫指标",二是"理论研究型的免疫学指标",而"临床学应用指标"的范围较小,其指标也包括在理论研究型的指标中,即理论研究型不但包括日常医疗应用的指标(临床应用),也包括了理论研究与教学的指标 一,临床应用学的免疫指标: 1-免疫细胞学指标:白细胞,中性粒细胞,淋巴细胞,T淋巴细胞,NK细胞, 2-血液学指标:Ig-G,Ig-M,Ig-E,或"免疫球蛋白"等 3-抗原学指标: (1)血液免疫学指标:常见有:乙肝两对半中的第一,第三项, (2)人体各种分泌物中的病原体检查(如淋病双球菌,大便中的寄生虫,大便中的伤寒弧菌的检查,痰中的结核杆菌检查,等等) 二,理论研究学的免疫学指标(以上各类其实也是,但理论研究学中,还有更深入的指标,以下只列以上所说之外的): 1-抗原;即各种微生物的分离,检查,定型; 2-免疫球蛋白:Ig-A,Ig-D,再加上以上临床学免疫指标的各项; 3-补体系统; 4-细胞免疫学指标: (1)T细胞; (2)B细胞; (3)NK细胞; (4)CD白细胞(以上各种,还有:CD30以上的系列, 5-体液免疫学指标: (1)以上免疫球蛋白各种; (2)特异性抗体的滴度; (3)补体系统的滴度 临床常用免疫学检测: ➢ 免疫球蛋白检测 ➢ 血清补体检测 ➢ 感染性疾病的免疫学指标 ➢ 肿瘤标志物检测 ➢ 自身免疫性疾病的免疫学指标 ➢ 其他体液免疫指标 ➢ 细胞免疫相关检测
➢ 免疫球蛋白检测 P440-442
缺乏特异性诊断价值,主要用于机体体液免疫功能状态的评估。 临床检验现状:
检验目的 内容 检验方法
免疫球蛋白 IgA、IgG、IgM 免疫比浊法 IgE IgE 免疫发光 ➢ 血清补体检测 P442-443
缺乏特异性诊断意义,主要用于机体体液免疫功能状态的评估。 ➢ 肿瘤标志物检测 精品 感谢下载载 P458-462
免疫血液检查项目
血液免疫检查的项目通常有抗双链DNA抗体、抗核抗体、抗ENA 抗体谱等。
1、抗双链DNA抗体:
抗双链DNA抗体是属于存在于人体内的一种抗体,如果做完检查以后,结果超出了正常值,可能是风湿病以及系统性红斑狼疮引起的。
2、抗核抗体:
抗核抗体是指抗细胞内所含的抗原成分,如果检查结果显示高滴度阳性,提示患者身体患有免疫系统疾病,比如系统性红斑狼疮、类风湿性疾病等。
3、抗ENA抗体谱:
ENA抗体是抗核抗体系列中的一种,对诊断系统性风湿疾病以及系统性红斑狼疮有很重要的作用。
如果做完检查以后确定患有系统性红斑狼疮,可以遵从医嘱服用免疫抑制剂,比如硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、吗替麦考酚酯等;如果确诊患有类风湿性关节炎,可以在医生的指导下服用甲泼尼龙、双氯芬酸、甲氨蝶呤等药物进行治疗。
在服用药物期间不要吃辛辣刺激性的食物,比如辣椒、生姜,以免影响药效吸收。
常用免疫学检查参考值血清免疫球蛋白分类Ig通常是指具有抗体活性和(或)抗体样结构的球蛋白。
应用免疫电泳与超速离心分析可将Ig分5类:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。
IgG:含量最多或最主要的Ig(75%),唯一能够通过胎盘的Ig。
主要由脾脏和淋巴结中的浆细胞合成与分泌。
IgA:约占10%,SIgA在局部免疫中起重要作用。
主要由肠系淋巴组织中的浆细胞产生。
血清免疫球蛋白IgM:分子量最大,由5个IgM单体通过J链连接。
是最早出现的Ig,是抗原刺激后最早出现的抗体,其杀菌、溶菌、溶血、促吞噬以及凝集作用比IgG高500-1000倍。
测定方法:单向免疫扩散法(RID)或免疫比浊法。
血清免疫球蛋白测定参考值参考值:IgG:7.6-16.6g/L (RID法)IgA:710-3350mg/L IgM :0.48-2.12 g/L临床意义免疫球蛋白增高多克隆增高:常见于各种慢性感染、慢性肝病、肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病,如SLE、类风湿关节炎等。
单克隆增高:主要见于免疫增殖性疾病,如多发性骨隋瘤、原发性巨球蛋白血症等。
免疫球蛋白降低:常见于各类先天性免疫缺陷病、获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的病人。
血清IgD测定免疫扩散法:0-62mg/L已发现有些抗核抗体、抗基底膜抗体、抗甲状腺抗体和抗“O”抗体等均属IgD,但活性甚低。
血清IgE:主要由鼻咽部、支气管、胃肠道等粘膜固有层的浆细胞分泌,为亲细胞抗体,能与肥大细胞、嗜碱性粒细胞膜上的FceR结合,产生I型变态反应。
ELASA:0.1-0.9mg/L临床意义:1. I型变态反应2. IgE型骨髓瘤、寄生虫感染等3. 慢性肝炎、SLE、类风湿性关节炎等。
血清M蛋白测定(M protein,monoclonal immunoglobulins)是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的IgG分子或片段,一般不具有抗体活性。
参考值:蛋白电泳法,免疫电泳法:阴性意义:1.多发性骨髓瘤(MM),占35%-65%,其中IgG型占60%左右;IgA型占20%左右;轻链型占15%左右;IgD、IgE型罕见。
竭诚为您提供优质文档/双击可除免疫血清鉴定指标篇一:免疫血清的制备免疫血清的制备免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。
高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免疫标记抗体等),也可供特异性免疫治疗用。
免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。
如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体,常可获得高效价的免疫血清。
…免疫血清的制备是常用的免疫学实验技术。
高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免疫标记抗体等),也可供特异性免疫治疗用。
免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。
如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体,常可获得高效价的免疫血清。
而使用免疫原性弱的抗原免疫时,则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。
免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。
因此,如欲获得高特异性的免疫血清,必须予先纯化抗原。
此外,抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等,也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。
一、原理具有免疫原性的抗原可刺激机体相应b细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。
由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的b细胞克隆所识别,因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体,实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗体混合物(即多克隆抗体)。
另外,抗体的产生具有回忆应答的规律性,牨m现为初次免疫注射与再次免疫注射后的抗体应答特点截然不同。
是由于记忆性b细胞参与再次应答所致。
二、免疫方法根据抗原的性质不同而异。
下面以制备家兔抗人Igg免疫血清为例作具体说明。
1.用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛,以酒精及碘酒消毒皮肤;2.第一次免疫:用2ml注射器吸取弗氏完全佐剂(FcA)乳化的抗原(人Igg)下称FcA-Igg)液1ml,每侧脚掌皮下各注入0.5ml。
3.第二次免疫:间隔10-14天后,于两侧窝及鼠蹊部肿大的淋巴结内注入FcA-Igg,每淋巴结注0.1ml,其余注入淋巴结附近皮下共1ml。
如淋巴结未肿大或肿大不明显时,直接注入两侧窝及鼠蹊部皮下。
4.间隔7-10天后,从耳静脉采血0.5~1.0ml,分离血清,以双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价(即试血)。
效价至少应达到1∶16以上时才能放血。
5.若效价未达到要求,可用不加佐剂的抗原液(人Igg)耳静脉内注射免疫。
即于1周内注射3次,分别为0.1、0.3、0.5ml。
间隔1周再试血。
如效价达到要求应立即放血。
另外,也可在第2次免疫后,以弗氏不完全佐剂(FIA)乳化的抗原(人Igg)(简称FIA-Igg)再免疫1-2次。
注射部位、剂量和间隔均同第2次,再试血测抗体效价,如效价达到要求立即放血。
三、放血(一)心脏采用血法1.家兔仰面,四肢缚于动物固定架上(或由助手抓住四肢固定);2.剪去左胸部兔毛,消毒皮肤;3.用左姆指摸到胸骨剑突处,食指及中指放在右胸处轻轻向左推心脏,并使心脏固定于左胸侧位置。
然后,以左拇指触摸心脏搏动最强的部位;4.用50ml注射器(连接16号针头),倾针45°角度,对准心搏最强处刺入心脏抽血致死;5.将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中,待凝固后分离血清。
(二)颈动脉放血法1.家兔仰卧同上固定。
头部略放低以暴露颈部。
剃毛及消毒皮肤;2.沿颈部中线切开皮肤约10cm,分离皮下组织,直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌;3.分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织,暴露出颈总动脉后使之游离;4.于动脉下套入两根黑丝线,分别置于远心及近心端。
结扎远心端的丝线。
近心端的动脉用血管夹夹住;5.用尖头小剪刀在两根丝线间的动脉璧上剪一小口,插入塑料放血管。
再将近心端的丝线结扎固定于放血管上,以防放血管滑脱;6.松开血管夹,使血液流入灭菌三角烧瓶中。
一般一只家兔可放血80~100ml。
四、分离血清1、将三角烧瓶的血置37℃温箱1小时2、再置4℃冰箱内3~4小时。
3、待血液凝固血块收缩后,用毛细滴管吸取血清。
4、于3000rpm离心15分钟,取上清加入防腐剂(0.01%硫柳汞或0.02%叠氮钠,最终浓度)5、分装后置4℃冰箱中保存备用。
五、结果鉴定以双相琼脂扩散试验测定所获免疫血清的抗体效价,并用琼指免疫电泳鉴定免疫血清中抗体的质量,应产生单一的沉淀弧线。
鉴定方法的具体步骤参见有关部分。
六、材料(一)动物:健康成年家兔,雄性,体重2~3公斤。
(二)器材:剪刀、镊子、注射器(2ml、50ml)附针头(9号、6号)、称量瓶(10ml)、量筒、动物固定架、灭菌三角烧瓶(200ml)、手术器械一套、血管夹、黑丝线、塑料放血管等。
(三)试剂1.灭菌生理盐水;2.纯化人Igg(10mg/ml);3.消毒酒精及碘酒;4.羊毛脂;5.石蜡油;6.活卡价苗(bcg)(75mg/ml);7.弗氏不完全佐剂(FIA)制备:称羊毛脂10克,逐滴加入优质石蜡油40ml,边滴边研磨,分装于疫苗瓶中(每瓶10ml),高压灭菌(8磅20分钟)后保存备用。
8.弗氏完全佐剂乳化抗原(FcA-Igg)的制备:将FIA予温(60℃30分钟),吸取3ml于研钵中,逐滴加入活bcg(75mg /ml)0.5ml及纯化人Igg2.5ml(2.4mg/ml)牨_滴入边研磨直至形成均一性的乳状液,取1滴滴于冷水面上不散开为合格。
七、注意事项1.免疫用实验动物的抗体反应性个体差异性较大,因篇二:临床免疫和免疫检验实验指导临床免疫和免疫检验实验指导(一)免疫血清的制备与鉴定实验一、免疫血清的制备机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产生体液免疫(抗体)和细胞免疫(致敏的T淋巴细胞及其产物多种淋巴因子)的过程。
一种抗原能否引起免疫反应,一方面取决于抗原分子表面有无特异性的抗原决定簇。
另一方面取决于机体有无相应的免疫活性细胞。
上述条件具备时,抗原经合适途径,选择合适剂量及次数,进入机体内,经过一段潜伏期,抗体水平就逐渐升高,维持高峰,既高效价抗体。
利用此原理可制备血清学试验所需的抗血清、各种免疫球蛋白及溶血素等。
制备优质的免疫血清除需要纯化抗原外,还需注意选择合适的动物及注射的途径,抗原剂量、注射次数等有密切关系。
(一)抗原制备和动物的选择1.抗原的制备:为了制备特异性强、亲和力高和效价满意的抗血清,首先要选择合适的抗原。
抗原的特异性除与其分子量大小有关外,还与其分子表面上决定簇性质、位置、立体构型有密切的关系。
抗原种类可分为天然抗原、人工抗原及合成抗原。
在天然抗原中又可分为可溶性抗原(如血清、毒素、组织浸出液等)、颗粒性抗原(如细菌、红细胞等)及半抗原(本身无免疫原性,必须与载体结合才有免疫原性)。
2.动物的选择:实验室多选用家兔、豚鼠(或鸡),商品性生产多用马、羊,特殊情况选用猴。
在免疫前应预先测定体内有无存在低滴度交叉反应的天然抗体。
(二)抗原的注射途径和剂量1.注射抗原的途径:通常可采用静脉、腹腔或皮下途径,皮内或肌肉途径较少采用。
近期发展在局部淋巴结或足等部位注射抗原。
不同途径,抗原在体内代谢速度不同,因而产生抗体的水平不同。
在皮下组织中能长期贮留的抗原,特别是与佐剂相混合的抗原,可以从皮下组织内缓慢释放出来,有利于抗体的产生。
2.抗原剂量及注射次数:应随抗原的性质而异。
3.每次注射间隔时间:不同抗原和不同免疫方法,可从数日到数周,一般无佐剂抗原为2~4天。
加佐剂抗原为10~15天。
(三)佐剂的作用原理及种类:1.原理:佐剂又称免疫增强剂。
它可以增强抗原的免疫原性及改变机体的免疫反应性,达到增强免疫力或提高抗体产生水平及在体内维持时间明显延长。
2.种类:通常多用福氏佐剂(Freundadjuvant),它分为福氏不完全佐剂(IncompleteFreundadjuvant)和福氏完全佐剂(completeFreundadjuvant)。
福氏不完全佐剂既抗原水溶液(1~5mg/ml)1ml、油剂(液体石蜡)4ml、乳化剂(羊毛脂)1g混合而成油和水的乳悬液。
福氏完全佐剂在上述成份中按10mg/ml加入卡介苗。
3.配制方法:先将羊毛脂与液体石蜡混合分装小瓶,高压蒸汽灭菌,8磅20分钟,保存4℃冰箱,使用前再溶化,制备可分研磨法和注射法。
前者将乳悬液在微火上溶化后,按比例加入卡介苗,边滴边研磨,使菌体完全分散,按同法加抗原,每加1滴应研磨数转直至小滴消失,加抗原要慢,待抗原全部滴入后则成乳白色粘稠的油包水乳剂。
后者将等量的乳悬液和抗原卡介苗混合液分别吸入两个附有针头的5毫升注射器内。
将其之一与约长6厘米的塑料管连接,针头穿入约1厘米,然后稍稍推动针管,使液体进入塑料管直至距塑料管开口端还有1厘米距离为止,同时由另一人将另一个5毫升注射器与塑料管开口端相连,此时二人相对而坐,左手固定针头与注射器的连接处,右手交替推动针管,反复操作,直至形成粘稠的乳剂为止。
制成的乳剂是否油包水乳剂,直接影响到免疫的效果,因此每次制成后要进行检查。
方法是将佐剂抗原滴入冷水表面,滴入后应保持完整而不分散,若滴入后分散,说明不合格,要另行配制。
(四)免疫的方法:1.无佐剂免疫法:应根据抗原的性质采用合理方法。
颗粒性抗原(红细胞、细菌)通常不需采用加佐剂方法。
将某种抗原(浓度约1%)根据下列的顺序、每次间隔3~5天免疫动物(兔)皮下注入抗原0.3ml肌肉0.4ml足0.4ml静脉(耳)0.4ml皮内0.5ml于最后一次注射后7天,采耳血,分离血清,用特异抗原测定其效价。
2.福氏佐剂免疫法:1)一般免疫方法:第一针剂量为每只家兔注射1毫升加佐剂的抗原。
注射途径为两只后足掌,每只0.2毫升,其他各淋巴结附近部位,多点皮内注射。
总量为0.6毫升。
第二针间隔在第一针免疫后3~4周。
剂量为不加佐剂的抗原1毫升。
注射途径为背部多点皮下注射。
第三针间隔时间为第二针免疫后1~2周,剂量和途径同第二针。
2)淋巴结免疫法,卡介苗致敏:每只兔后足各注射活卡介苗(75mg/ml)0.3ml,10~14天后两侧窝淋巴结可肿大,如蚕豆大小,既可作淋巴结注射。
第一针于两侧窝淋巴结内注射佐剂抗原(1mg/ml),每个淋巴结内注射0.25ml。
注射加强针,两次间隔时间、注射次数、剂量、途径与一般免疫方法相同。
(五)采血1.试血:一般在最后一次注射后的7~10天,既可由耳缘静脉取少量血,分离血清进行试血。
多采用环状试验,在10分钟内能出现“++”沉淀环为合格。
目前更多采用双向扩散法,经37℃24小时后观察结果,效价在1:16以上既可用。
2.放血:当免疫血清效价达到所需要滴度时,由心脏或颈动脉用无菌手续采血。
(六)分离血清:将收集血置无菌试管或三角瓶内,凝固后,用无菌滴管。