临床常用免疫学检验方法(ppt 21页)

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医学免疫学免疫学检测技术ppt课件

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双抗体夹心法、间接法ELISA
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间接法ELISA
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ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区再将蛋白质转移至固相载体后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法荧光素一抗对每种抗体作标记特异测Ag
（2）间接荧光法：荧光素二抗不必标记每种抗体敏感测Ag/Ab
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免疫荧光法
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2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
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II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳：电泳 + 双向免疫扩散（抗原分析）
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3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3）分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验：测试IV型超敏反应能力
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（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM

临床免疫学检验技术PPT(共64页)

临床免疫学检验技术
• 江西省胸科医院：熊国亮
一、概述
• 免疫学检验是研究免疫学技术及其在医学检验领域应用的一门学科。免疫检验技术则重点阐述各类免疫学技术的基本原理、方法类型和临床应用。19世纪末相继建立了凝集试验、沉淀试验和补体结合试验等三大经典血清学试验，用于检测病原微生物的抗原或抗体对传染病的诊断起到重要作用。
三、酶联免疫吸附试验（enzy发展，放射免疫技术、荧光免疫技术、酶免疫技术、化学发光免疫技术、流式细胞免疫分析技术等免疫标记技术应用于临床免疫学检验，加快了免疫学检验的自动化、标准化进程，极大地提高了免疫学检验的灵敏度，拓展了免疫学检测范围，从检测免疫相关物质（抗原、抗体、补体、免疫活性细胞和细胞因子等）到检测体液中的微量物质（激素、酶、血浆微量蛋白、血药浓度、微量元素等）。
三、酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay,ELISA）
• 此法常用多孔聚苯乙烯反应板作为固相载体，读取结果需用酶标仪。标记抗原或抗体所用的酶常选择辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等，HRP常用的底物有邻苯二胺（OPD）或四甲基联苯胺（TMB），碱性磷酸酶一般采用对硝基苯磷酸酯（P-NPP）作为底物，产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有最高吸收峰。
二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用
• 3.免疫球蛋白、循环免疫复合物和补体的测定包括测定五类免疫球蛋白的含量、血清总补体活性及补体成分的含量和在多种疾病时血清中升高的循环免疫复合物。
二、免疫检验技术在临床免疫学检验的应用
• 4. 细胞免疫相关指标测定检测淋巴细胞亚群和淋巴细胞的功能以及白细胞介素—2等多种细胞因子，用于判断机体细胞免疫功能状况。

实验诊断学--临床常用免疫学检查 ppt课件

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IgM 约占血清总Ig的 5%~10%
分子量最大（900000），由五个IgM 单体连接而成，故又称巨球蛋白。
脾脏是它的主要合成部位，IgM主要分布于血液中，防止发生菌血症方面起重要作用，半衰期5天左右。
天然同族凝集素抗 A抗B、冷凝集素及伤寒沙门菌的抗体
均属此类。
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百分比
参考值
正常人群各年龄段个体中血清 IgG、IgA、IgM 的含量有很大差
异
70%-80% 7.0-16.6g/L
10%-15% 0.7-3. 5g/L
5%-10% 0.5-2.6g/L
0.02%-1% 0.6-2.0mg/L
0.002% 0.1-0.9mg/L
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测定方法
❖ 血清中含量较高的 IgG、IgA、IgM多采用单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法和免疫比浊法，而标本中含量极微的IgD和IgE则采用敏感度较高的放射免疫法和酶免疫法等进行定量测定。
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IgG 占总Ig的70%~80%
是血清中的主要抗体，主要由脾脏和淋巴结合成，在机体的免疫防御中起重要作用，抗细菌、病毒和寄生虫等，还具抗毒素作用，为不完全抗体，分子量小（150000），唯一能自由地通过胎盘。
半衰期约为23天，故临床上使用丙球作治疗时以2～3周
注射一次
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高Ig血症
❖ 慢性细菌感染:肺结核,麻风,慢性支气管炎, 感染早期IgM显著升高，以后IgG升高，IgA 也可升高。
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IgA 约占血清总Ig 10%~15%
分为血清型与分泌型两种，具有抗细菌、抗病毒、抗毒素作用，其中的分泌型（SIgA）在局部与抗呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染、炎症或肿瘤等病变密切相关,是抗过敏的重要免疫屏障。

临床常用免疫学检测PPT课件

四、降钙素原检测
严重全身性细菌感染时升高动态监测可评估治疗效果
五、特异性IgE检测
介绍了临床常用免疫学检测项目的临床意义及应用，检测方法及参考范围，各临床免疫学检测项目的特点。
谢谢您的观看！
CA125存在于卵巢癌组织细胞和浆液性腺癌组织中，不存在于黏液型卵巢癌中。
（五）癌抗原242测定（六）癌抗原153测定
乳腺癌时，30％～50％的病人可见CA153明显升高，但在早期乳腺癌时，它的阳性率仅为20%～30%左右，因此主要用于乳腺癌病人的治疗监测和预后判断。
诊断学（第9版）
三、酶类肿瘤标志物检测
（一）前列腺酸性磷酸酶测定（二）神经元特异性烯醇化酶测定
诊断学（第9版）
降钙素
四、激素类肿瘤标志物检测
甲状腺滤泡细胞C细胞合成和分泌的一种单链多肽激素，甲状腺髓样癌病人血清降钙素明显升高，而且由于降钙素的半减期较短，因此可作为观察临床疗效的标志物。
第四节
自身抗体检测
诊断学（第9版）
一、类风湿因子的检测
一、蛋白质类肿瘤标志物的检测
（一）甲胎蛋白测定
胎儿早期由肝脏和卵黄囊合成的一种血清糖蛋白，出生后，AFP的合成很快受到抑制。
1.原发性肝癌病人血清中AFP的含量明显升高，常>300μg/L 2.病毒性肝炎与肝硬化病人血清中AFP有不同程度的升高，但常300μg/L 3.生殖腺胚胎肿瘤病人血清中AFP可升高 4.妊娠3～4个月，孕妇AFP开始升高，7～8个月达高峰，但多低于400μg/L，分娩后3周恢复正常
第八章
临床常用免疫学检测
第一节体液免疫检测第二节细胞免疫检测第三节肿瘤免疫检测第四节自身免疫检测第五节感染免疫检测第六节抑制免疫检测第七节其他免疫检测

临床常用免疫学检查新ppt课件

临床常编用辑免版疫pp学t 检查
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•
IgG最多、主力军 IgA血清型和分泌型 IgM最早出现 IgD功能尚不完全清楚 IgE与变态反应有关
2020/8/20
临床常编用辑免版疫pp学t 检查
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正常值：单向免疫扩散法— IgG 7.0~16.6 g/L IgA 0.7~3.5g/L IgM 0.5~2.6 g/L ELISA法— IgE 0.1~0.9mg/L
2020/8/20
编辑版ppt
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2020/8/20
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二、维持机体内环境稳定
•促进免疫复合物清除 •清除凋亡细胞
2020/8/20
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3、清除免疫复合物
2020/8/20
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清除凋亡细胞的机制 C1q、MBL、C3b等可与凋亡细胞的分子结合
2020/8/20
2020/8/20
编辑版ppt
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第三节免疫细胞检测
针对细胞的数量(amount)、活性（功能 function）、表面标志物(membrane molecules )表达(express)程度～
T细胞免疫检测 B细胞免疫检测自然杀伤细胞检测细胞因子检测中性粒细胞吞噬杀菌功能检测
2020/8/20
第四节肿瘤标志物（tumor marker）检测
1、是由肿瘤细胞本身合成、释放或机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质
2、可反映细胞恶变各阶段的表型及基因特征性 3、包括蛋白类（甲胎蛋白、癌胚抗原等）、糖类、酶类肿瘤标志物
2020/8/20
临床常编用辑免版疫pp学t 检查
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恶性肿瘤增长的检测

临床常用免疫学检查ppt课件

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二.血清M蛋白(monoclonal immunoglobulins)测定
测定方法：蛋白电泳法、免疫比浊法和免疫电泳法
参考值：阴性
意义：检测到 M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖性疾病。见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、轻链病和半分子病等
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三.血清补体检测
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2
一.体液免疫功能检测
• 检测血清免疫球蛋白及其类别（尤其是IgG、IgA和IgM ）和水平，可为诊断免疫缺陷性疾病和免疫增殖性疾病提供重要参数。
• 检测针对疫苗或感染因子的特异性抗体及其水平，可较直接反映机体特异性体液免疫功能状态。
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1．免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig)
3.补体 C 1q
方法：单向免疫扩散法 (0.197-0.04 g/L )
意义：1、增加见于骨髓炎、类风湿性关节炎、痛风、过敏性紫癜等；2、降低见于SLE和混合性结缔组织病等。
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4.BF
方法：单向免疫扩散法 (0.1-0.4g/L)
意义：增高见于某些自身免疫病、肾病综合征、慢性肾炎、恶性肿瘤； 2、减低见于肝病、急性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血。
• 基本概念
补体(complement)：是一组具有酶原活性的糖蛋白，由传统途径的 9种成分C 1 - C 9 、旁路途径的3种成分及其衍生物组成，参与灭活病原体的免疫反应，也参与破坏自身组织和自身细胞而造成的免疫损伤。
1.补体 CH 50
方法：试管法
参考值：50000-100000u/l
意义：反映补体传统途径活化的活性程度。 1、CH 50

临床常用免疫学诊断试验 ppt课件

• 2.AIDS • 3.性传播疾病（STD） • 4.其他
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• 免疫功能检验 (Immunologic Function Test)
免疫功能检验分为细胞免疫功能检验和体液免疫功能检验，对于了解患者的免疫状态，以及细胞的各种功能，为深入研究和认识机体免疫系统的生理、病理改变，阐明某些疾病的发病机制和临床诊断与治疗将提供有利的信息。下面简单介绍临床常用的一些免疫检验项目
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• 2.CD分子 • 3.细胞因子 • 白细胞介素 • 干扰素
• TNF • CSF G-CSF；GM-CSF；M-CSF；EPO • 生长因子
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• 二、免疫活性物质与体液免疫
• 免疫球蛋白检测
• IgG;IgA;IgM;IgE;S-IgE
• M蛋白检测
• 冷球蛋白检测
• 尿本周蛋白检测
5. 支气管哮喘病人，在过敏原激发后，外周血CD4+ T 细胞迅速降低，支气管肺泡灌洗液中CD3+、CD4+、CD8+ T 细胞则增高。过敏性鼻炎患者CD3+、CD4+、CD8+ T 细胞均比正常人低。
6. 血液系统疾病 T cell 亚群也有相应变化，如再生障碍性贫血、粒细胞减少症时CD4+ 细胞减少，CD8+细胞增多，CD3+/CD8+ 比值下降。
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〖临床意义〗
1. IgE增高：见于IgE型多发性骨髓瘤、特应性哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、寄生虫感染、热带嗜酸细胞增多症、SLE、RA及某些霉菌病等。
2. IgE减低：一般无意义。可见于原发性无丙种球蛋白血症、恶性肿瘤及细胞毒药物治疗后。

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糖脂类P460-461
癌抗原50（cancer antigen 50, CA-50) 癌抗原72-4（cancer antigen 72-4, CA72-4) 糖链抗原19-9（carbohydrate antigen 19-9,
CA19-9) 癌抗原242（carbohydrate antigen 242, CA242)
循环免疫复合物(IC) 冷丙种球蛋白(CG) C反应蛋白(CRP)
➢细胞免疫检测
(P444-447)
T细胞免疫检测 B细胞免疫检测自然杀伤细胞(NK)免疫检测细胞因子检测
T细胞免疫检测(P444)
T细胞花环形成试验 (ERFT)
T细胞分化抗原测定 T细胞转化试验
B细胞免疫检测(P445)
B细胞表面免疫球蛋白测定红细胞-抗体-补体花环试验
➢自身免疫病相关免疫指标
（P462-465）类风湿因子（rheumatoid factor, RF) 抗核抗体
(antinuclear antibody, ANA) 组织和细胞抗体
抗核抗体(P462-464)
抗组蛋白抗体抗脱氧核糖核蛋白(DNP)抗体抗双链DNA抗体抗RNA抗体抗可提取核抗原(ENA)抗体
酶类P461-462
α-L岩藻糖苷酶（ α-L-fucosidase，AFU）
前列腺酸性磷酸酶（prostatic acid phosphates，PAP）
神经原特异性烯醇化酶（neuron specific enolase， NSE）
异常凝血酶原（abnormal prothrombin， APT）
临床常用免疫学检 ➢免疫球验蛋白检测
➢血清补体检测 ➢感染性疾病的免疫学指标 ➢肿瘤标志物检测 ➢自身免疫性疾病的免疫学指标 ➢其他体液免疫指标 ➢细胞免疫相关检测
➢免疫球蛋白检测
P440-442
缺乏特异性诊断价值，主要用于机体体液免疫功能状态的评估。
临床检验现状：
检验目的
内容
检验方法参考范围
抗Sm抗体抗RNP抗体抗SS-A(Ro)抗体抗SS-B(La)抗体抗Scl-70抗体
抗着丝点抗体抗PM-1抗体抗JO-1抗体抗核仁抗体
组织和细胞抗体
P464-465
抗线粒体抗体抗甲状腺球蛋白抗体抗甲状腺微粒体抗体抗乙酰胆碱能受体抗体抗平滑肌抗体
➢其他体液免疫指标
(P465-466)
临床常用免疫学检
验
西南医院检验科
府伟灵
要求❖ 了解常用免疫学检验方法
❖ 熟练掌握常用免疫学指标的临床意义
❖ 能根据诊断需要准确选用免疫学指标
❖ 能准确解读临床免疫学检验报告
免疫学检验技 ➢免疫沉术淀技术
➢免疫电泳技术 ➢酶联免疫测定 ➢放射免疫分析 ➢化学发光免疫测定 ➢其他免疫细胞活性与数量测定技术
在肿瘤发生、发展过程中，由肿瘤细胞合成、释放的物质或由机体对肿瘤发生反应而产生的一类物质；与正常组织相比，这些物质在机体内的含量显著增高；检测这些物质可以反映肿瘤的恶变阶段和肿瘤的基因型。
蛋白类P458-460
甲种胎儿球蛋白（alpha fetoprotein, AFP) 癌胚抗原（carcineombryonic antigen, CEA) 前列腺特异抗原（prostate specific antigen, PSA) 癌抗原125（cancer antigen 125, CA125) 癌抗原15-3（cancer antigen 15-3, CA15-3) 组织多肽抗原（tissue polypeptide antigen, TPA) 鳞状上皮细胞癌抗原（squamouse cell carcinoma antigen, SCC)
免疫球蛋白 IgA、IgG、IgM 免疫比浊法
IgE
IgE
免疫发光
➢血清补体检测
P442-443
缺乏特异性诊断意义，主要用于机体体液免疫功能状态的评估。
临床检验现状：
➢感染性疾病的免疫学诊断
在《临床病原体检查》中讲述。
➢肿瘤标志物检测
P458-462
肿瘤标志物（tumor markeቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ)：P458
Fc——EA-RFC 补体受体——EAC-RFC 小鼠红细胞受体——M-RFC
B细胞分化抗原测定
长风破浪会有时，直挂云帆济沧海。努力，终会有所收获，功夫不负有心人。以铜为镜，可以正衣冠；以古为镜，可以知兴替；以人为镜，可以明得失。前进的路上照自己的不足，学习更多东西，更进一步。穷则独善其身，达则兼济天下。现代社会，有很多人，钻进钱眼，不惜违法乱纪；做人，穷，也要穷的有骨气！古之立大之才，亦必有坚忍不拔之志。想干成大事，除了勤于修炼才华和能力，更重要的是要能坚持下来。士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎?死而后已，理想，脚下的路再远，也不会迷失方向。太上有立德，其次有立功，其次有立言，虽久不废，此谓不朽。任何事业，学业的基础，都要以自身品德的修炼为根基。饭而枕之，乐亦在其中矣。不义而富且贵，于我如浮云。财富如浮云，生不带来，死不带去，真正留下的，是我们对这个世界的贡献。英雄者，胸怀大志，腹有良策，吞吐天地之志者也英雄气概，威压八万里，体恤弱小，善德加身。老当益壮，宁移白首之心；穷且益坚，不坠青云之志老去的只是身体，心灵可以永远保持丰盛。乐其乐；忧民之忧者，民亦忧其忧。做领导，要能体恤下属，一味打压，尽失民心。勿以恶小而为之，勿以善小而不为。越是微小的事情，越见品质。学而不知道，与行，与不知同。知行合一，方可成就事业。以家为家，以乡为乡，以国为国，以天下为天下。若是天下人都能互相体谅，纷扰世事可以停歇。志不强者智不达，言不越高，所需要的能力越强，相应的，逼迫自己所学的，也就越多。臣心一片磁针石，不指南方不肯休。忠心，也是很多现代人缺乏的精神。吾日三省乎吾身。为人谋交而不信乎?传不习乎?若人人皆每日反省自身，世间又会多出多少君子。人人好公，则天下太平；人人营私，则天下大乱。给世界和身边人，多一点宽容，多一份担为生民立命，为往圣继绝学，为万世开太平。立千古大志，乃是圣人也。丹青不知老将至，贫贱于我如浮云。淡看世间事，心情如浮云天行健，君子以自强不息。地载物。君子，生在世间，当靠自己拼搏奋斗。博学之，审问之，慎思之，明辨之，笃行之。进学之道，一步步逼近真相，逼近更高。百学须先立志。天下大事，不立川，有容乃大；壁立千仞，无欲则刚做人，心胸要宽广。其身正，不令而行；其身不正，虽令不从。身心端正，方可知行合一。子曰:“知者不惑，仁者不忧，勇者不惧进者，不会把时间耗费在负性情绪上。好学近乎知，力行近乎仁，知耻近乎勇。力行善事，有羞耻之心，方可成君子。操千曲尔后晓声，观千剑尔后识器做学问和学次的练习。第一个青春是上帝给的；第二个的青春是靠自己努力当眼泪流尽的时候，留下的应该是坚强。人总是珍惜未得到的，而遗忘了所拥有的。谁伤害过你，谁要。重要的是谁让你重现笑容。幸运并非没有恐惧和烦恼；厄运并非没有安慰与希望。你不要一直不满人家，你应该一直检讨自己才对。不满人家，是苦了你自己。久的一个人，而是心里没有了任何期望。要铭记在心；每一天都是一年中最完美的日子。只因幸福只是一个过往，沉溺在幸福中的人；一直不知道幸福却很短暂。一看他贡献什么，而不应当看他取得什么。做个明媚的女子。不倾国，不倾城，只倾其所有过的生活。生活就是生下来，活下去。人生最美的是过程，最难的是相知，幸福的是真爱，最后悔的是错过。两个人在一起能过就好好过！不能过就麻利点分开。当一个人真正觉悟的一刻，他放下追寻外在世界的财富，而开始追寻他内心世若软弱就是自己最大的敌人。日出东海落西山，愁也一天，喜也一天。遇事不转牛角尖，人也舒坦，心也舒坦。乌云总会被驱散的，即使它笼罩了整个地球。心态便明灯，可以照亮整个世界。生活不是单行线，一条路走不通，你可以转弯。给我一场车祸。要么失忆。要么死。有些人说：我爱你、又不是说我只爱你一个。生命太了明天不一定能得到。删掉了关于你的一切，唯独删不掉关于你的回忆。任何事都是有可能的。所以别放弃，相信自己，你可以做到的。、相信自己，坚信自己的目受不了的磨难与挫折，不断去努力、去奋斗，成功最终就会是你的！既然爱，为什么不说出口，有些东西失去了，就在也回不来了！对于人来说，问心无愧是最舒服表明他人的成功，被人嫉妒，表明自己成功。在人之上，要把人当人；在人之下，要把自己当人。人不怕卑微，就怕失去希望，期待明天，期待阳光，人就会从卑微存梦想去拥抱蓝天。成功需要成本，时间也是一种成本，对时间的珍惜就是对成本的节约。人只要不失去方向，就不会失去自己。过去的习惯，决定今天的你，所以定你今天的一败涂地。让我记起容易，但让我忘记我怕我是做不到。不要跟一个人和他议论同一个圈子里的人，不管你认为他有多可靠。想象困难做出的反应，不是而是面对它们，同它们打交道，以一种进取的和明智的方式同它们奋斗。他不爱你，你为他挡一百颗子弹也没用。坐在电脑前，不知道做什么，却又不想关掉它。做让时间帮你决定。如果还是无法决定，做了再说。宁愿犯错，不留遗憾。发现者，尤其是一个初出茅庐的年轻发现者，需要勇气才能无视他人的冷漠和怀疑，才能坚并把研究继续下去。我的本质不是我的意志的结果，相反，我的意志是我的本质的结果，因为我先有存在，后有意志，存在可以没有意志，但是没有存在就没有意志类的福利，可以使可憎的工作变为可贵，只有开明人士才能知道克服困难所需要的热忱。立志用功如种树然，方其根芽，犹未有��

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