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免疫胶体金法快速检测水产品中喹诺酮类药引言近年来，随着水产品加工业的迅猛发展，水产品中喹诺酮类药物残留的问题日益凸显，给人民群众的健康带来了严重的危害。
开发一种高灵敏度、高特异性、快速检测水产品中喹诺酮类药物的方法迫在眉睫。
免疫胶体金法是一种新型的生物技术手段，具有快速、简便、低成本等优点，被广泛用于食品、水产品等领域的药物残留检测。
本文介绍了免疫胶体金法在水产品中喹诺酮类药物残留检测方面的应用和发展。
一、喹诺酮类药物的概述喹诺酮类药物是一类广谱抗生素，主要用于预防和治疗动物细胞内寄生虫、细菌等疾病。
目前已有多种喹诺酮类药物被广泛应用于水产品养殖过程中，以控制和预防水产品中的细菌和寄生虫感染。
而由于水产品中残留的药物对人体健康造成一定程度的危害，开发一种快速、灵敏的方法用于检测水产品中喹诺酮类药物是非常必要的。
二、免疫胶体金法的概述免疫胶体金法是一种利用金纳米颗粒和抗体等生物标记物相结合的技术，通过颜色变化的方式来检测A检测物在样品中的存在和浓度的一种方法。
它具有快速、简便、低成本等优点，被广泛用于食品、水产品等领域的药物残留检测。
三、免疫胶体金法在水产品中喹诺酮类药物残留检测中的应用免疫胶体金法在水产品中喹诺酮类药物残留检测方面具有一定的优势和应用前景。
该方法具有高灵敏度，可以检测到极低浓度的喹诺酮类药物残留；该方法具有高特异性，可以准确鉴别水产品中的喹诺酮类药物；该方法操作简便，不需要复杂的仪器和技术支持，可以在实验室和现场快速进行检测；该方法成本低廉，适合大规模生产和应用。
结论免疫胶体金法是一种快速、简便、低成本的药物残留检测方法，在水产品中喹诺酮类药物残留检测中具有广阔的应用前景。
相信随着技术的不断创新和发展，免疫胶体金法将为保障水产品质量和人民群众的健康提供更可靠的技术支持。
KJ201706动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201706）1范围本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速测定。
2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行定性判定。
3试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1甲醇：色谱纯。
3.1.2氢氧化钠。
3.1.3磷酸二氢钾。
3.1.4磷酸氢二钠。
3.1.5盐酸。
3.1.6氯化钠。
3.1.7氯化钾。
3.1.8三氮化钠。
3.1.9乙二胺四乙酸二钠。
3.1.10三羟甲基氨基甲烷，即Tris。
3.1.11乙酸乙酯。
3.1.12磷酸二氢钠。
3.1.13氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2）4g，用水溶解并稀释至100mL。
3.1.14缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.5g，溶于约800mL水中，充分混匀后用盐酸（3.1.5）或氢氧化钠溶液（3.1.13）调节pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀。
4℃保存，有效期三个月。
3.1.15展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.44g，氯化钠（3.1.6）8g，氯化钾（3.1.7）0.2g，三氮化钠（3.1.8）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9）1.0g溶于约500mL水中，充分混匀后用水稀释至1000mL。
水产苗种中硝基呋喃类代谢物的快速测定
张倩玉;李达;牟丹丹;魏海英;王磊
【期刊名称】《水产养殖》
【年(卷),期】2022(43)12
【摘要】硝基呋喃类药物是一种广谱抗生素,其抗菌效果显著,价格低廉,曾被广泛用于畜禽及水产养殖行业[1]。
但由于硝基呋喃类药物及其代谢物有严重的致癌、致畸等毒副作用[2],已被我国禁止在畜禽及水产动物食品中使用。
农业农村部《2020年食用农产品市场监管部门抽检不合格情况分析汇总》显示,水产品类食用农产品中呋喃西林代谢物检出113批次,呋喃唑酮代谢物检出40批次。
说明市场上仍存在违规使用硝基呋喃类药物的问题。
【总页数】4页(P51-53)
【作者】张倩玉;李达;牟丹丹;魏海英;王磊
【作者单位】日照市海洋与渔业研究院
【正文语种】中文
【中图分类】F32
【相关文献】
1.高效液相色谱串联质谱法快速测定水产品中硝基呋喃类代谢物研究
2.分散固相萃取净化-液相色谱-质谱联用测定水产苗种中硝基呋喃类代谢物残留量
3.水产品及其苗种中硝基呋喃代谢物的高效液相色谱-串联质谱法测定
4.超高效液相色谱-串联质谱法快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物残留研究
5.酶联免疫法快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物、氯霉素及氟苯尼考
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DOI :10.15906/11-2975/s.20210914[摘要]为建立快速筛选孔雀石绿的前处理方法,对标行标水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201701),用于水产品中药物残留的现场快速检测使用。
试验采用提取、氧化、浓缩和复溶四个步骤,对氮吹、SPE柱、反萃取三种不同提取方式进行前处理优化和比较,通过胶体金免疫层析试纸条进行检测。
结果表明:三种方法均能达到同时检测水产品中孔雀石绿的目的,检测时间为反向萃取法<SPE 柱法<氮吹法。
说明反向萃取法具有用时短、不需要复杂仪器、检测结果准确率高的特点,更适合用于基层快速检测。
[关键词]孔雀石绿;水产品;前处理[中图分类号]S816.17[文献标识码]A[文章编号]1004-3314(2021)09-0075-04孔雀石绿胶体金检测样品前处理工艺的优化高海岗1,刘秀梵1*,王晓泉1,蒋春茂2,郑砚超3(1.扬州大学,江苏扬州225009;2.江苏农业职业技术学院,江苏泰州225300;3.无锡中德伯尔生物技术有限公司,江苏无锡214174)孔雀石绿又叫孔雀绿、碱性绿,是一种人工合成的三苯甲烷类燃料(陈义元,2018),因其在细菌合成过程中能阻止蛋白肽的形成而具有杀菌效果,被广泛用于水产养殖和运输领域。
但孔雀石绿及其代谢物隐性孔雀石绿(LMG )具有致癌、致畸和致突变毒性,已被多国禁用,2002年农业部颁布的《动物性食品中兽药最高残留限量》中明确禁止使用孔雀石绿等多种违禁药物。
但多年来的检测结果显示,我国部分省市在养殖领域和流通领域还在长期使用(师真等,2020;林锏锐等,2019;范芳芳等,2019),严重危害农产品食用安全。
根据文献报道和相关检测数据显示,国内市面上出售的水产品中孔雀石绿、硝基呋喃类药物、氯霉素的检出率为6.5%~23.2%(李菊等,2020)。
为快速监测养殖领域和流通领域违法使用兽药,我国出现了大量的快速检测试剂盒和检测试纸条。
作业指导书O P E R A T I N G I N S T R U C T I O N S水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法编号：XZJY082-00-2019版本：第一版第0次修改编制：审核：批准：实施日期:一、编制目的为规范水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的检验方法，编制本指导书。
二、适用范围本指导书适用于水产品中硝基呋喃类物代谢物残留量的测定。
三、编制依据农业部783号公告-1-2006《水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》四、实验原理样品肌肉组织中残留的硝基呋喃类蛋白结合代谢物在酸性条件下水解，用2-硝基苯甲醛衍生化，经乙酸乙酯液-液萃取净化后，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。
五、试剂和材料除非另有说明,所有试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682一级水指标。
5.1 试剂5.1.1 甲醇：色谱纯。
5.1.2 醋酸铵：色谱纯。
5.1.3 乙酸乙酯。
5.1.4 二甲亚砜。
5.1.5 2-硝基苯甲醛：色谱纯。
5.1.6 磷酸氢二钾。
5.2 试剂配制5.2.1 0.002 mol/L醋酸铵溶液：称取0.15g醋酸铵，用水溶解并定容至1L。
5.2.2 甲醇溶液：甲醇：水=5:95（v/v）。
5.2.3 0.2 mol/L盐酸溶液：量取浓盐酸（p=1.19g/ml）0.6ml,用水稀释至100ml。
5.2.4 0.05 mol/L 2-硝基苯甲醛溶液：称取0.0378g 2-硝基苯甲醛，溶于5ml二甲基亚砜中，现用现配。
5.2.5 碳酸氢二钾溶液：1.0mol/L。
称取0.0378g 2-硝基苯甲醛，溶于500ml 水中。
5.2.6 标准物质AOZ、AMOZ、SEM·HCl和AHD·HCl:纯度≥98%。
5.2.7 同位素内标溶液：AOZ-D4、AMOZ-D5、AHD-13C3和SEM·HCl-13C-15N2。
5.2.8 AOZ标准储备液：1.0mg/ml。
水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定—高效液相色谱法1 范围本标准规定了水产品中呋喃唑酮的代谢物3-氨基-2-唑烷基酮（AOZ）、呋喃它酮的代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）、呋喃西林德代谢物氨基脲（SEM）和呋喃妥因德代谢物1-氨基-2-内酰脲（AHD）残留量的的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于水产品中呋喃唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋喃西林代谢物和呋喃妥因代谢物残留量的测定。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理试样中残留的硝基呋喃类代谢物用硝基呋喃类代谢物快速检测前处理试剂盒提供的试剂提取，经衍生化试剂衍生、经乙酸乙酯反萃、净化后用紫外检测器进行检测，外标法定量。
4 试剂和材料本标准所用试剂应无干扰峰。
除另有特别说明外，所用试剂均为分析纯；试验用水应符合GB/T 6682一级水的要求。
4.1 乙腈:色谱纯。
4.2 乙腈水溶液：乙腈+水=30+70（v/v）4.3 甲醇:色谱纯。
4.4 乙酸乙酯：色谱纯4.5 异丙醇：色谱纯。
4.6 庚烷磺酸钠：HPLC级。
4.7 异辛烷：色谱纯。
4.8 乙酸：色谱纯。
4.9 标准品: 氨基脲（SEM）、3-氨基-2-唑烷基酮（AOZ）、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-乙内酰脲（AHD）：≧99%。
4.10 标准贮备溶液:准确称量各AMOZ、AHD 、AOZ、SEM各10 mg，用甲醇分别定容于100 mL容量瓶中，配制成100 µg/mL的标准贮备液。
4.11 混合标准工作溶液：使用前，取4.10标准贮备溶液用甲醇稀释成所需浓度。
免疫胶体金法快速检测水产品中喹诺酮类药摘要：喹诺酮类药是一类广泛应用于动物养殖和水产养殖中的抗生素，但长期使用容易导致毒性残留物在水产品中积累，对人体健康构成潜在危害。
因此，开发一种快速、准确、简便的检测方法对喹诺酮类药物的监测具有重要意义。
本文基于免疫反应的原理，利用胶体金颗粒的特性，建立一种新型的免疫胶体金法，用于水产品中喹诺酮类药物的快速检测。
研究结果表明，该方法具有高灵敏度、高特异性、快速简便、无需专业技能和设备等优点，能够满足水产品中喹诺酮类药物的快速检测需求。
因此，本研究提供了一种新型的免疫检测试剂盒，可用于水产品中喹诺酮类药物的快速检测，为水产品的质量安全检测提供了重要的技术支持。
引言：喹诺酮类药物是一种广泛应用于动物养殖和水产养殖中的抗生素，具有广谱抗菌作用，可用于防治多种疾病，改善养殖环境，提高养殖效益。
但是，由于喹诺酮类药物存在毒性残留物，在长期使用过程中容易在水产品中积累，对人体健康构成潜在危害。
因此，对水产品中的喹诺酮类药物进行监测和检测具有非常重要的意义。
当前常用的检测方法主要包括高效液相色谱（HPLC）、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）等方法，这些方法具有高灵敏度和高精度，但操作复杂、需要高技术要求，靶物质含量低、分析时间长，不适用于快速大量样品检测和移动检测等场合。
免疫检测技术具有灵敏度高、灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，被广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。
随着胶体金颗粒的研究和应用，免疫胶体金法已成为一种可靠的快速检测方法。
胶体金颗粒具有表面等离子共振吸收现象，颗粒表面离子空穴的共振吸收波长与颗粒大小和形状有关。
在特定条件下，胶体金颗粒会发生明显的表面等离子共振峰位移和形态变化。
利用这种特性，可以通过监测胶体金颗粒的表面等离子共振峰位移和形态变化，实现对目标分子的定性和定量分析。
本研究基于免疫反应的原理，利用胶体金颗粒的特性，建立一种新型的免疫胶体金法，用于水产品中喹诺酮类药物的快速检测。
免疫胶体金法快速检测水产品中喹诺酮类药
喹诺酮类药是一类抗氧化剂、抗生素、抗病毒药物，通常由化学合成的抗菌素，如青
霉素、泼尼松和头孢等组成。
由于喹诺酮类药具有广泛的理化性质，长期大量使用和不当
使用可能会造成毒物残留，严重危害水产生产安全和人体健康。
因此，研究和发展简单、
准确、快速、省时省力的水产品中喹诺酮类药检测技术，对有效监测水产品残留抗生素、
保障水产安全产品的质量和用户健康具有重要意义。
免疫胶体金法是一种特殊的衍生原特异性免疫球蛋白电泳技术，它能够检测各种金属
离子与非金属离子，有效地检测出应用免疫特异性抗体的抗原，具有较好的抗原特异性和
高度的灵敏性，能够快速简便地检测分析残留抗生素。
该方法可以在水产品中快速检测出
喹诺酮类药，以确保水产品质量安全，提高水产养殖企业的经济效益和社会效益。
免疫胶体金法可用于检测喹诺酮类药的步骤如下：第一步，将采样的水产品进行浓缩；第二步，对浓缩的试样进行凝胶电泳，离心聚集、洗涤；第三步，在被检测物质的上覆膜，表明特定物质；第四步，将上覆膜物分子和抗体结合，构成免疫复合物；第五步，将该特
效性抗体反应乙酸铂胶体，使其产生类似上覆电泳状态，从而使喹诺酮类药在免疫胶体金
电泳条带上表达出来；第六步，采用免疫胶体金电泳，条带上的喹诺酮类药含量为相关法
定标准，满足食用安全标准。
免疫胶体金法的水产检测具有一定的准确性与灵敏性，一般可检出毫克级或者更低浓
度水产品中的喹诺酮类药。
此外，该方法在实验操作过程中相对简单、省时、速度快，检
测结果准确可靠，并且在检测过程中没有任何污染源，从而，喹诺酮类药的快速检测也成
为可能。
硝基呋喃类检测方法及标准硝基呋喃简介：硝基呋喃类（Nitrofurans）抗菌剂是一种广效性抗生素，因价格较低廉且疗效佳，广泛用于畜禽及水产养殖鱼类，用以治疗由大肠杆菌或沙门式杆菌所引起之肠炎，养殖鱼之疥疮、赤鳍病、溃疡病等，于饲料中添加或养殖药浴使用。
硝基呋喃类抗菌剂常见有以下四种药物———呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因。
危害性：长时间或大剂量应用硝基呋喃类药物均能对动物体产生毒性作用，其中呋喃西林的毒性最大。
兽医临床上经常出现有关畜禽类呋喃西林、呋喃唑酮中毒的事件,呋喃它酮为强致癌性药物，呋喃唑酮可诱导鱼的肝脏发生肿瘤。
硝基呋喃类药物在动物体内的半衰期短，代谢速度非常快，但其代谢产物能够与组织蛋白质紧密结合,以结合态形式在体内残留较长时间，且毒性更强，是硝基呋喃类药物的标记残留物，若水产品体内有大量的呋喃药物残留，会使人产生耐药性，在临床中降低此类药物的治疗效果，并且此类药物残留对人体也有致癌、致畸胎等副作用。
国内外对之重视程度：1995年起欧盟（EuropeanUnion）禁止硝基呋喃类抗菌剂在食用之畜禽及水产动物使用，并严格执行对输入之食用鱼、虾及禽类进行硝基呋喃的残留检测，2002年美国亦起而效尤；1990年7月欧盟颁布2377/90/EEC条例，将硝基呋喃类药物及其代谢产物列为A类禁用药物；我国农业部文件:农牧发[2002]1号规定食品性动物中呋喃唑酮为不得检出。
呋喃唑酮、呋喃妥因也在1995年被禁用。
科标生物检测中心拥有国际先进的检测仪器和雄厚的技术力量，可以依据多种检测标准，提供硝基呋喃类相关检测服务。
现有检测方法及标准：检测方法参考标准动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法GB/T 21311-2007高效液相色谱/串联质谱法水产品中呋喃唑酮残留量的测定SC/T 3022-2004 高效液相色谱法畜禽肉和水产品中呋喃唑酮的测定SB/T 10387-2004 高效液相色谱法水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定农业部1077号公告-2-2008高效液相色谱法水产品中呋喃唑酮、呋喃它酮代谢物的快速测定DB33/T 744-2009 酶联免疫法动物源性食品中呋喃唑酮残留标示物残留检测农业部1025号公告-17-2008酶联免疫法。
KJ201703食品中罗丹明B的快速检测胶体金免疫层析法食品中罗丹明B的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201703）1范围本方法规定了食品中罗丹明B的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于辣椒粉和辣椒酱中罗丹明B的快速测定。
2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中罗丹明B经有机试剂提取，固相萃取小柱净化，浓缩复溶后，罗丹明B与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中罗丹明B进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1正己烷。
3.1.2丙酮。
3.1.3甲醇。
3.1.4磷酸氢二钠。
3.1.5磷酸二氢钠。
3.1.6提取试剂：将正己烷与丙酮按照体积比80:20混匀。
3.1.7复溶液：称取35.61g磷酸氢二钠(3.1.4)置于1000ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成0.2mol/L溶液A；称取31.21g 磷酸二氢钠(3.1.5)置于1000ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成0.2mol/L溶液B。
将溶液A与溶液B按照体积比67:33混匀，制成pH7.1磷酸盐缓冲液。
3.2参考物质罗丹明B参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥98.6%表1 罗丹明B参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量注：或等同可溯源物质。
3.3标准溶液配制3.3.1罗丹明B标准储备液（1mg/mL）：精密称取适量罗丹明B 参考物质（3.2），置于10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.3）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1mg/mL的罗丹明B标准储备液。
冷藏，有效期6个月。
3.3.2罗丹明B标准中间液A（1μg/mL）：精密量取罗丹明B标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）0.1mL，置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.3）稀释至刻度，摇匀，制成1μg/mL的罗丹明B标准中间液A。
附件5 水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测 胶体金免疫层析法（KJ201705）
1 范围 本方法规定了水产品中硝基呋喃类代谢物快速检测方法。 本方法适用鱼肉、虾肉、蟹肉等水产品中呋喃唑酮代谢物（AOZ）、呋喃它酮代谢物（AMOZ）、呋喃西林代谢物（SEM）、呋喃妥因代谢物（AHD）的快速测定。
2 原理 样品中硝基呋喃类代谢物经衍生处理后，其衍生物与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡/试纸条中检测线（T线）上硝基呋喃类代谢物-BSA偶联物的免疫反应，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中硝基呋喃类代谢物进行定性判定。
3 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1 盐酸。 3.1.2 三水合磷酸氢二钾。 3.1.3 氢氧化钠。 3.1.4 甲醇。 3.1.5 乙醇。 3.1.6 乙腈。 3.1.7 邻硝基苯甲醛。 3.1.8 三羟甲基氨基甲烷。 3.1.9 乙酸乙酯。 3.1.10 正己烷。 3.1.11 邻硝基苯甲醛溶液（10mmol/L）:准确称取0.150g邻硝基苯甲醛，用甲醇（3.1.4）溶解并定容至100mL。 3.1.12 磷酸氢二钾溶液（0.1mol/L）：准确称取22.822g三水合磷酸氢二钾（3.1.2），用水溶解并定容至1000mL。 3.1.13 氢氧化钠溶液（1mol/L）：准确称39.996g氢氧化钠（3.1.3），用水溶解并稀释至1000mL。 3.1.14 盐酸溶液（1mol/L）：取10mL盐酸（3.1.1）加入到110mL水中。 3.1.15 三羟甲基氨基甲烷溶液（10mmol/L）：准确称取1.211g三羟甲基氨基甲烷（3.1.8），溶于80mL水中，加入盐酸（约42mL）调pH至8.0后用水定容至1L。
3.2 参考物质 3.2.1 硝基呋喃类代谢物参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥99%。
表1 硝基呋喃类代谢物参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子量 3-氨基-2-恶唑烷酮 3-anmino-2-oxazolidinone,AOZ 80-65-9 C3H6N2O2 102.09
5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮
5-morpholine-meth
yl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ 43056-63-9 C8H15N3O3 201.22
1-氨基-2-乙内酰脲盐酸盐 1-Aminohydantoinh
ydrochloride,AHD 2827-56-7 C3H5N3O2·HCl 151.55
氨基脲盐酸盐 semicarbazidhydrochloride,SEM 563-41-7 NH2CONHNH2·HCl 111.53
注：或等同可溯源物质。 3.3 标准溶液的配制 3.3.1 标准储备液：分别准确称取适量参考物质（精确至0.0001g），用乙腈溶解，配制成100mg/L的标准储备液。-20℃冷冻避光保存，有效期12个月。 3.3.2 混合中间标准溶液：准确移取标准储备液（3.3.1）各1mL于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为1mg/L的混合中间标准溶液。4℃冷藏避光保存，有效期3个月。 3.3.3 混合标准工作溶液：准确移取0.1mL混合中间标准溶液（3.3.2）于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为0.01mg/L的混合标准工作溶液。4℃冷藏避光保存，有效期1个月。
3.4 材料 3.4.1 AOZ试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。 3.4.2 AMOZ试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。 3.4.3 SEM试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。 3.4.4 AHD试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。 3.4.5 固相萃取柱（强阴离子交换型）：规格1mL，填装量为60mg。
4 仪器和设备 4.1 电子天平：感量分别为0.1g和0.0001g。 4.2 均质器。 4.3 水浴箱。 4.4 离心机。 4.5 氮吹仪或空气吹干仪。 4.6 移液枪：10µL，100µL，1000µL，5000µL。 4.7 涡旋振荡仪。 4.8 胶体金读数仪（可选）。 4.9 固相萃取装置（可选）。 4.10 环境条件：温度15-35℃，湿度≤80%。 5 分析步骤 5.1 试样制备 按照方法要求，称取一定量具有代表性样品可食部分（注：甲壳类，试样制备时须去除头部），用于后续实验。
5.2 试样提取和净化 称取适量的匀浆样品（以试剂盒操作说明书要求来定，精确至0.01g）于50mL离心管。 5.2.1 方法一（液液萃取法） 称取2g±0.05g均质组织样品于50mL离心管中，依次加入4mL去离子水、5mL1mol/L盐酸（3.1.14）和0.2mL10mmol/L邻硝基苯甲醛溶液（3.1.11），充分振荡3min；将上述离心管在60℃水浴下孵育60min；依次加入5mL0.1mol/L磷酸氢二钾溶液（3.1.12），0.4mL1mol/L氢氧化钠溶液（3.1.13），乙酸乙酯6mL，充分混合3min，在室温（20—25℃）下4000r/min，离心5min；移取离心后的上层液体3mL于5mL离心管中，60℃下氮气/空气吹干；向吹干的离心管中加入2mL正己烷，振荡1min，然后加入0.5mL 10mmol/L三羟甲基氨基甲烷溶液（3.1.15），充分混匀30s，室温下4000r/min，离心3min（或静置至明显分层）；下层溶液即为待测液。 5.2.2 方法二（固相萃取法） 称取6g±0.05g均质组织样品于50mL离心管中，依次加入4mL去离子水、5mL1mol/L盐酸（3.1.14）和0.2mL10mmol/L邻硝基苯甲醛溶液（3.1.11），充分振荡3min；将上述离心管在60℃水浴下孵育60min；依次加入5mL0.1mol/L磷酸氢二钾溶液（3.1.12），0.4mL1mol/L氢氧化钠溶液（3.1.13），乙酸乙酯6mL，充分混合3min，在室温（20—25℃）下4000r/min，离心5min；移取离心后的上层液体3mL于15mL离心管中，加入10mL10%乙酸乙酯-乙醇溶液，上下颠倒混合4—5次，4000r/min离心1min（底部会有部分沉淀）。连接好固相萃取装置，并在固相萃取柱（3.4.5）上方连接30mL注射器针筒，将上述上清液全部倒入30mL针筒中，用手缓慢推压注射器活塞，控制液体流速约1滴/秒，使注射器中的液体全部流过固相萃取柱，再重复推压注射器活塞2次，以尽可能将固相萃取柱中的溶液去除干净。将固相萃取柱下方的接液管更换为洁净的离心管，再向固相萃取柱中加1mL10mmol/L三羟甲基氨基甲烷溶液（3.1.15）。用手缓慢推压注射器活塞，控制液体流速约1滴/秒，使固相萃取柱中的液体全部流至离心管中后，离心管中的液体即为待测液。
5.3 测定步骤 5.3.1 试纸条与金标微孔测定步骤 吸取适量样品待测液于金标微孔中，抽吸5—10次混合均匀，室温（20—25℃）温育5min，将试纸条吸水海绵端垂直向下插入金标微孔中，温育3—6min，从微孔中取出试纸条，进行结果判定。 5.3.2 检测卡测定步骤 吸取适量样品待测液于检测卡的样品槽中，室温（20—25℃）温育5—10min，直接进行结果判定。
5.4 质控试验 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。 5.4.1 空白试验 称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。 5.4.2 加标质控试验 准确称取空白样品适量（精确至0.01g）置于50mL具塞离心管中，加入适量硝基呋喃类代谢物标准工作液，使其浓度为0.5µg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
6 结果判定要求 结果的判断也可使用胶体金读数仪判读，读数仪的具体操作与判读原则请参照读数仪的使用说明书。采用目视法对结果进行判读，目视判定示意图如图1和图2所示。
6.1 比色法 6.1.1 无效 控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效。 6.1.2 阳性结果 检测线（T线）不显色或检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色浅，表明样品中硝基呋喃类代谢物高于方法检测限，判为阳性。 6.1.3 阴性结果 检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表明样品中硝基呋喃类代谢物低于方法检测限或无残留，判为阴性。 图1 目视判定示意图（比色法） 6.2 消线法 6.2.1 无效 控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效。 6.2.2 阳性结果 检测线（T线）不显色，表明样品中硝基呋喃类代谢物高于方法检测限，判为阳性。 6.2.3 阴性结果 检测线（T线）与控制线（C线）均显色，表明样品中硝基呋喃类代谢物低于方法检测限或无残留，判为阴性。
图2 目视判定示意图（消线法） 6.3 质控试验要求 空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。 7 结论 当检测结果为阳性时，应对结果进行确证。 8 性能指标
