当前位置：文档之家 › 胶体金试纸条的制备

胶体金试纸条的制备

  • 格式：ppt
  • 大小：2.35 MB
  • 文档页数：37

下载文档原格式

  / 37

合集下载

胶体金试纸条的制备

胶体金试纸条的制备

引言概述：胶体金试纸条是一种常用的分析试剂，广泛应用于生化分析、环境监测等领域。

它以胶体金作为指示剂的主要成分，结合纸条的吸附性能，通过改变颜色来检测目标物质的存在。

本文将详细介绍胶体金试纸条的制备方法和其在分析应用中的优势。

正文内容：一、胶体金试纸条的制备方法1.胶体金的制备1.1还原法制备胶体金1.2化学合成法制备胶体金1.3生物法制备胶体金2.纸条的处理2.1选用合适的纸质材料2.2纸条的预处理2.3纸条的涂覆二、胶体金试纸条的特点和优势1.高灵敏度1.1胶体金的特殊光学性质1.2微米级纳米颗粒的高表面积1.3足够的反应时间2.简单易用2.1操作步骤简单2.2结果直观可见2.3不需要专业设备3.高选择性3.1可调控的颗粒大小和形状3.2可调控的胶体金表面性质3.3可选择性修饰纸条反应区域4.低成本4.1胶体金制备成本低4.2纸条材料成本低4.3适用于大规模生产5.广泛应用5.1生化分析5.2环境监测5.3食品安全检测5.4临床诊断三、胶体金试纸条在生化分析中的应用案例1.蛋白质分析1.1检测蛋白质的存在及浓度1.2快速筛选蛋白质结构1.3监测酶活性变化2.DNA分析2.1单核苷酸多态性检测2.2基因突变检测2.3DNA序列鉴定3.药物检测3.1药物快速筛选3.2药物代谢产物检测3.3药物治疗监测四、胶体金试纸条在环境监测中的应用案例1.水质监测1.1水中重金属离子检测1.2水中有机物污染物检测1.3水中微生物检测2.大气监测2.1空气中有害气体检测2.2空气中颗粒物检测2.3气候变化指示剂监测3.土壤监测3.1土壤中有害物质检测3.2土壤中养分成分检测3.3土壤微生物检测五、结合与总结胶体金试纸条作为一种快速、简便、低成本的分析工具，在生化分析和环境监测等领域具有广泛的应用前景。

它不仅可以满足快速检测的需要，还能提供定量和定性的分析结果。

未来随着技术的不断创新和进步，胶体金试纸条将在更多领域展现其优势和应用价值。

PCT胶体金试纸制备及其原理

PCT胶体金试纸制备及其原理
先将水加热至60 ℃左右，加入Na2HPO4和PVA，冷却至室温，最后加入BSA和Triton-x100，搅拌溶 解。
大家好
21
5、PCT胶体金试纸样品垫和金标垫处理
样品垫和金标垫的处理方式一样，都是将切割好的样品垫（玻纤膜-有些脆， 需小心）和金标垫（聚酯膜）浸泡在处理液中1小时，使其彻底湿润。（半小时 需用镊子翻一次面）
大家好
8
3、常用的免疫胶体金检测技术
（1）免疫胶体金光镜染色法 （2）斑点免疫金渗滤法 （3）胶体金免疫层析法
将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗 体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前 移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区 域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上， 可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。
PCT胶体金试纸制备及其原理
2016年6月3号
大家好
1
大家好
2
胶体金（colloidal gold）也称金溶胶（gold solution）： 是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。胶体金颗 粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层 构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－）， 外层双层正离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶 体金游离于溶胶间的悬液状态。
胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用 下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体 金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由

胶体金检测试纸生产工艺

胶体金检测试纸生产工艺

胶体金检测试纸生产工艺本项目主要从事犬、猫传染病抗体胶体金检测试纸的生产，以微孔滤膜为固相载体，膜上包被已知抗体，待加入检测样本后，经毛细管虹吸作用或微孔滤膜的渗滤作用，使标本中的抗体与膜上包被的抗体或抗原结合，再通过胶体金标记物与复合物反应，可形成肉眼可见的红色产物。

目前应用最为广泛的胶体金免疫技术有侧向横流模式，又称金标免疫层析法（ImmUnOgoIdChrOmatograPhyASsay,GICA ）O金标免疫层析法试纸条主要是通过毛细管虹吸作用反应,它由以下几部分组成:样品垫、胶体金垫、NC 膜（硝酸纤维素膜）、吸水滤纸、以及PVC 底板，NC 膜（硝酸纤维素膜）上包括一条检测线（T 线）和一条质控线（C 线）一次层叠起来，如下图所示：图3 金标免疫层析法示意图在吸水材料的牵引下，待测抗原在试条上向上走，首先与金标抗体结合成抗原抗体复合物，抗原抗体复合物上行到检测线时，被测抗原的另一结合位点与包被在此处的单抗结合，形成两个抗体结合一个抗原（双抗体夹心）的金标复合物，因有金颗粒在此沉积，故T 线显红色。

未结合抗原的金标抗体上行到C 线时，与“抗金标抗体”结合，所以C 线也显红色。

检测结果判定：T 线与C 线均显线，表明检测结果为阳性；C 线显线，T 线不显，表明结果为阴性。

若C 线不显线，则检测结果无效。

工艺流程如下所示：NC«（跚咬纤假素膜）PVC 底板 测试线（TtK 1）M 析方向样品稀释液噪声：N ；一般固体废物：不合格品(S1)；废防粘纸(S2)；边角料(S3)；废包装物(S4)；危险废物：废一次性滴管(S5)玻璃器具清洗废水(S6)；玻璃器具淋洗废水(S7)；超声波清洗废水(S8)、超声波冲洗废水(S9)o图4胶体金检测试纸生产过程示意图工艺流程简述： (1)检测：外购硝酸纤维素膜、金结合垫、吸水垫、样品垫均人工目视进行检验。

①硝酸纤维素膜：人工目视干燥后的包被膜表面应洁净、无污染、破损等，如有，需用笔标出。

链霉素胶体金免疫层析试纸条的技术报告

链霉素胶体金免疫层析试纸条的技术报告

链霉素胶体金免疫层析试纸条的技术报告1 胶体金的制备1.1玻璃器皿的准备玻璃器皿表面的少量污染会干扰金颗粒的生成，一切玻璃容器应绝对清洁，用前经过酸洗，硅化。

硅化过程一般是将玻璃容器浸泡于含5％二氯二甲硅烷的氯仿溶液中1min，室温干燥后蒸馏水冲洗，再干燥备用。

专用的玻璃器皿以第一次生成的胶体金稳定其表面，弃去后以双蒸馏水淋洗，可代替硅化处理。

将玻璃器皿用酸液浸泡72小时后，取出，用洗洁精洗涤和大量自来水冲洗，蒸馏水浸泡24h后用去离子水冲洗三次，37℃温箱烘干后备用。

1.2 柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液在胶体金免疫层析试验中，检测信号是由于金颗粒在检测线或质控线上聚集而成，所以如果金颗粒太小就不能产生足够的颜色信号，如果太大又会遇到空间位阻问题。

空间位阻可以阻止小分子蛋白质接近金颗粒的zeta电位，例如IgG 分子(160 000 DaLtons)大约8nm，约有4nm可以与金颗粒的表面结合，其最适的标记金颗粒为40nm，而对小分子抗原来说，可以使用20nm的胶体金颗粒进行标记。

取0.01％氯金酸水溶液100mL用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，持续搅拌的情况下加入1％柠檬酸三钠水溶液3.5mL，继续搅拌加热10min，溶液呈透亮的红色。

室温冷却，用去离子水恢复到原体积，4℃保存。

1.3 胶体金的质量鉴定1.3.1 肉眼观察用肉眼观察制备的胶体金，其颜色为酒红色、均匀度较好无杂质、透明度较高。

1.3.2 紫外扫描鉴定取冷却后的胶体金溶液进行400～600nm紫外扫描，确定最大吸收峰波长，观察最大吸收峰的峰形、峰宽。

紫外扫描的最大吸收峰波长为520nm，根据回归方程Y= 0. 4271X + 514. 56计算得到胶体金颗粒粒径为12.74nm。

由图谱可以看出最大吸收峰的峰宽较小,说明胶体金颗粒分布比较均匀1.3.3 透射电镜鉴定透射电镜下观察胶体金颗粒的大小是否均匀一致，有无椭圆形及多角形。

拍片放大后测量胶体金颗粒直径大小，取多个点计算胶体金颗粒的平均直径。

胶体金试纸条的制备

胶体金试纸条的制备

抗体与胶体金的偶联机制
抗体活性的保持
在抗体与胶体金结合过程中，应确保 抗体的活性不受影响，以保证检测的 灵敏度和特异性。
抗体与胶体金的结合是通过共价键或非共价 键实现的。共价键结合力较强，但不易解离 ；非共价键结合力较弱，但易于解离。
试纸条的制备工艺
基材选择与处理
选择合适的支持膜作为试纸条的基材，如硝酸纤维素膜、 聚酯膜等，并进行预处理，以提高其亲水性和结合力。
流感检测
在流感高发季节，胶体金试纸条可以快速检测流 感病毒抗原，为防控流感提供有力支持。
食品安全检测
农药残留检测
胶体金试纸条可用于检测果蔬等农产品中的农药残留，保障食品 安全。
兽药残留检测
通过胶体金试纸条检测肉类、禽蛋等食品中的兽药残留，有助于 监控食品安全，防止药物滥用。
重金属离子检测
用于检测食品中重金属离子的胶体金试纸条，能够快速、准确地 检测出食品中的重金属含量。
新材料的应用
高分子材料
研究新型高分子材料，提高试纸条的灵敏度、稳定性和耐用性。
纳米材料
利用纳米材料的特点，增强试纸条的信号放大效果和特异性。
生物材料
探索生物相容性更好的生物材料，降低试纸条对人体的潜在风险。
新技术的开发
免疫分析技术
研究更高效、特异的免疫分析技术，提高试纸条的检测准 确性。
微流控技术
环境监测
1 2
水质监测
胶体金试纸条可用于快速检测水体中的有害物质， 如铅、汞、砷等，确保水质安全。
大气污染监测
通过胶体金试纸条检测大气中的有害气体和颗粒 物，有助于及时发现和防控空气污染。
3
土壤污染监测
胶体金试纸条可用于检测土壤中的重金属和有机 污染物，为土壤污染治理提供依据。

胶体金试纸条的制备_图文

胶体金试纸条的制备_图文
4、5 号管颜色无变化与对照颜色一致，最低蛋白量即为4 号管的蛋白量。
最终结合（McAb）
• 取100ml金溶液，调整pH值至8.2 • 调整滤过和离心的抗体溶液（0.1μg/μl）至
pH8.2 • 当金溶液在快速搅拌时要逐滴加入定量的
抗体（蛋白最小浓度量加10%即蛋白稳定 量），大约5分钟加完 • 在金标溶液中加入10ml滤过的10％BSA至 终浓度为1%，并轻轻搅拌10分钟。
• 在兽医疫病检测中的应用
Bhakar等应用相应的单抗标金，建立了阿米巴虫抗原检测方法。Kameyama 等以牛病腹泻病毒的 NS3 蛋白制备单克隆抗体，并用胶体金标记单抗制备胶 体金试纸，用于牛病毒性腹泻抗原的检测。Kang等以同样方式建立了猪轮状 病毒胶体金抗原检测方法，并用于腹泻仔猪轮状病毒的鉴别诊断。Li等应用 实验室制备的两种 PRRSV 单抗，以双单抗夹心的模式，组装成 PRRSV 抗 原检测试纸，作为 PRRSV 感染的诊断工具。
135s一般用在双抗体夹心法，180s一般用在竞争法.
吸收垫(Absorbent Pad)：
提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸 收纸；
吸收纸的作用： 主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及 使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。
片材：
不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了 产品的货架期。
• ⑤乙醇—超声波还原法(1980年)可合成6～10nm大小的金 颗粒；
• ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒 ；
• ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大 小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。

PEDV胶体金试纸条制备

PEDV胶体金试纸条制备胶体金(colloidal gold)是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂等作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，利用它在碱性环境下带负电荷的性质，与蛋白质分子的正电荷基团相互吸引而形成牢固结合，可以将胶体金与抗体蛋白以及其他一些蛋白相结合，进行示踪研究。

目前已成为继荧光素、放射性同位素和酶之后，在免疫标记技术中较为常用的一种非放射性示踪剂。

1971年，Faulk和Taylor首先报道了将胶体金与抗体结合，应用于电镜水平的免疫细胞化学研究。

1974年，Romano等用胶体金标记抗球蛋白抗体，建立间接免疫金染色法。

之后，胶体金作为以后总新型免疫标记技术发展很快。

1978年，Geohegan等将胶体金标记抗体用于普通光镜下检测B淋巴细胞表面膜免疫球蛋白，建立了光镜水平的免疫金染色(immunogold staining，IGS)，但是所需的胶体金颗粒必须大于20nm，并且标记物浓度要高，才能获得阳性结果。

1981年Danscher等用银显影方法增强了金颗粒的可见度，并提高了灵敏度。

1983年Holgate等将免疫金染色与银显影技术相结合，称之为免疫金银染色法(immunogold silver staining，IGSS)。

由于IGS和IGSS两种方法具有试剂制备简便，特异性强、灵敏度高、应用范围广，并可以用于双重和多重标记等特点，被广泛应用于医学和细胞生物学研究领域，是目前免疫组织化学技术中常用的敏感方法之一。

近年来胶体金标记技术进一步发展应用于免疫转印、流式细胞术、液相免疫测定、固相斑点金／银染色(dot IGS／IGSS)以及斑点金免疫渗滤测定法(dot immunogold filtration assay，DIGFA)等多种标记免疫检测方法。

本实验中应用柠檬酸钠还原法制备颗粒大小为20nm．30nm大小的胶体金，用于与制备纯化的抗体相结合，为制备检测·猪流行性下痢(PEDv)病毒试纸条做准备。

同时检测两种真菌毒素的胶体金试纸条的研制

速检测卡。结果 ：该检测卡能同时检测 Ａ Ｂ 和 Ｏ Ｆ 。 Ａ两种真茵毒素 ，且两者之 间互不干扰 ，灵敏度均可达到 ２ ｇ ， ，重复性、稳定性均 良好。结论 ：成功制作 出了能 同时检 测两种真菌毒素的快速检测卡 ，一次操 ． ｇＬ ５ 作能检测两种毒素，节省 了 检测时间和检测成本。 关键词 黄曲霉毒素 Ｂ ；赭 曲霉毒素 Ａ；单克隆抗体 ；胶体金
ｏ ｐ ｒ ｔ ｎ ｃ ｕ ｄ ｅｅ ｔ ｂｏｈ ｔ ｘｎ ｏ ａ ｅ ｅ ｔ ｔｍｅ ｎｄ ｏ ｔ ｎｅ ｏ ｅ ａｉ ｏ ｌ ｄ ｔ ｃ ｔ ｏ ｓ ｔ ｓ ｖ ｔｓ ｉ ａ ｃ ｓ． ｏ ｉ
Ｋｅ ｗｏ ｄ ａｌ ｔｘｎ ｌ ｏ ｈ ａ ｏ ｉ Ａ； ｍｏ ｏ ｌｎ ｎ ｉ ｏ ｙ ｃ ｌ ｉａ ｏｄ ； ｔｓ ｓｒ ｙ ｒ ｓ ｆ ｏ Ｂ ； ｃ ｒ ｔｘｎ ａ ｉ ｎ ｃ ｏ ａ ａ ｔ ｄ ； ｏ ｏｄ ｌ ｌ ｌ ｂ ｇ ｅｔｔｐ ｉ
ｗ ｉ ｈ Ｃ ｉ ｌ ｅ ｕ ｌ ｅｅ ｔ ｔ ｏ ｋ ｎ ｓ ｏ ｕ ｇ ｏ ｉ ｓ Ｗ ８ ｓ ｃ ｅ ｓ ｌ ｒ ｄ ｃ ｄ ｈ ｃ ａ ｓｍｕ ｔ ｏ ｓｙ ｄ ｔ ｃ ｗ ｉ ｄ ｆ ｆ ｎ ｉ ｔｘｎ ８ ｕ ｃ ｓ ｆ ｌ ｐ ｏ ｕ ｅ ，ｗｈ ｃ ａ ｅ ｔ ｒ ｄ ｎ ｎ ａ ｕ ｙ ｉｈ Ｗ ｓ ｆａ ｕ ｅ ｔ Ｉ ｌ
０ １ ｏ ， ｐ ７４的 Ｃ Ｓ稀 释） ． ｌＬ Ｈ ． ０ ｔ ｏ Ｂ ，此 为检 测 Ｏ Ａ的
１ 材料与方法
１１ 材料 与试 剂 ．
检 测 线 Ｔ ；（ ） Ｖ — Ｆ ｌ 全 抗 原 （ １ ３Ｏ Ａ Ａ Ｂ 完 １ｍｇ／ｍ ， Ｌ
０ １ ｏ／ Ｈ ． Ｃ Ｓ ． ｌＬｐ ７ Ｏｍ ４的 Ｂ 稀释） ，此为检测 Ａ Ｂ 的 Ｆｌ

胶体金试纸条制备

胶体金试纸条制备你知道那种小小的试纸条吗？就是那种你去医院做检查，拿到手上可能看不太懂的东西。

别小看它，它背后有一门学问——胶体金试纸条的制备！现在跟我一起，咱们轻松聊聊这个话题，带你走进这门既神奇又有点“高大上”的技术，保证让你听了之后既有收获，又不觉得晦涩难懂。

得说说“胶体金”是个啥玩意儿。

大家都知道，金子是贵重的，对吧？不过，胶体金可不是真的拿块金子给你切成细小颗粒。

它其实是金属金通过特殊工艺做成了超小的颗粒，这些颗粒非常微小，可以在水里悬浮，就像是放进水里的金色小鱼，闪闪发光又不沉底。

这样的小颗粒就能发挥出神奇的作用了。

想象一下，金子本身不容易被氧化、耐腐蚀，再加上它那闪闪发光的特性，真是把试纸条变成了一道亮丽的风景线。

大家可能会想：“那这小小的胶体金颗粒怎么用呢？”别急，咱们慢慢来。

胶体金之所以有这么神奇的效果，得归功于它能够跟一些特殊的物质发生反应。

比如，人体内的一些特定物质，它们在一些疾病的初期，浓度会发生变化。

用胶体金试纸条一检测，结果就能马上显现出来。

说得再直白一点，就是让试纸条上的胶体金颗粒和你体内的一些“目标”物质“亲密接触”之后，通过一些变化，快速给出判断，让医生一眼就能看出结果。

这个过程，简直就像是纸上轻轻一划，答案就显现出来，不需要太多复杂的操作。

好啦，接下来说说如何制作这些神奇的试纸条。

得先有个“基础材料”，就是那种普通的试纸。

别看它看起来普通，它可是经过特别设计的，能够吸水又不容易破损。

就像是你在湿气十足的环境里放个湿巾，湿巾能吸水但不破，试纸也是同样的道理。

接下来呢，把胶体金颗粒和一些化学试剂溶解到液体里，然后利用吸附作用，把这些液体涂布到试纸上。

把胶体金颗粒涂在试纸的特定区域，其他部分就涂上专门的化学物质，让它们一旦接触到目标物质，就能迅速发生变化，产生可视化的反应。

这时候，神奇的胶体金颗粒开始“登场”了。

你可以把它们想象成超级小的“侦探”，一旦检测到你体内的目标物质，它们就会迅速反应，把结果通过颜色变化显现出来。

猪瘟胶体金快速诊断试纸条的研制

ｔ ｇ ａ ｈ ｓ ａ （ Ｃ ） ｓｄ ｖ ｌｐ ｄ ｂ ｓｎ ｈ ｅ ｕ ｉｇ ｍ ｅｈ ｄ ｏ ｉｒｃａ ｉ ｏ ｉ ｍ ｒ ｐ ｒ ｏ ｌｉａ ｏ ｒ ｐ ｙａ ｓ ｙ ＧＩ Ａ ｗａ ｅ ｅｏ ｅ ｙｕ ｉ ｇ ｔ ｅｒ ｄ ｃｎ ｔ ｏ ｆｃｔｉ ｃｄ ｓ ｄｕ ｐ ｅ ａ ｅｃ ｌ ｄ ｌ ｏ ｐ ｒｉｌｓ ｎ ｕ ｉ ｃ ｔｎ ｈ ｏｌ ｉａ ｏ ｄ ｐ ｒｉｌｓｗｉｈ ｔ ｅ ＣＳ ａ ｔｂ ｄ ． Ｔｈ ｏｄ ａ ｔ ＣＳ Ｖ ｒ ａ ｔ ｅ ，ａ ｄ ｐ ｔｆ ａｉｇ ｔ ｅ ｃ ｌ ｄ ｌｇ ｌ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ Ｆ ｎ ｉｏ ｙ ｃ ｉ ｏ ｃ ｅｇ ｌ－ ｎ ｉ Ｆ ｗｅ ｅ — ｗｒ ｐ ｅ ｎ ｏ ｇ ａ ｓ ｉ ｅ ｅ ｂ ａ ｃ ， ａ ｄ ｔ ｅ ｐ ｒｆｅ Ｆ ａ ｔｂ ｄ ｎ ｏ ｔａ ｔ～ａ ａ ｔｂ ｄ ｒ ａ ｐ ｄ ｏ ｔ ｌｓ ｆ ｒ ｍ ｍ ｒｎ ｅ ｂ ｎ ｈ ｕ ｉ ｄ ＣＳ ｎ ｉｏ ｙ ａ ｄ ｇ ａ— ｎ ｉｒｔ ｎ ｉｏ ｙ ｗｅ ｅ ｉ ｗｒ ｐ ｅ ｎ ｎｔｏ ｅｌ ｌｓ ｍｂ ａ ｅ ｔ ｒｐ ｒ ｉ ｆｒ Ｃ Ｆ ｄ ａ ｎ ｓｓ ７ ａ ｐ ｅ ｒ ｅｅ ｔｄ ｆｒ ａ ｐ ｄ ｏ ｉｒ ｃ ｌ ｏ ｅ ｍｅ ｒｎ ｏ ｐ ｅ ａ ｅ ａ ｋｔ ｏ Ｓ ｉｇ ｏ ｉ． ０ ｓｍ ｌｓ ｗｅ ｅ ｄ ｔ ｃｅ ｏ ｕ ＣＳ ＦＶ ｙ ｔ ｅｒ ｐｄ ｄａ ｎ ｓｓｓｒｐ，ｏ ｉｈ ２ ｏ ｉ ｖ ａ ｅ ｒ ｅｅ ｔ ｄａ ｄｖｒ ｓｉ ｌｔ ｎ ａ ｄｉｅ ｔ ｉ ｂ ｈ ａ ｉ ｉｇ ｏ ｉ ｔｉ ｆ ｗｈ ｃ ６ｐ ｓｔ ｅｃ ｓ ｓｗｅ ｅｄ ｔｃｅ ｎ ｉｕ ｏ ａ ｉ ｎ ｎ ｉ — ｉ ｓ ｏ ｄ ｆ
症病毒进行检测 ， 无交叉反应． 关键词 ： 猪瘟 ； 抗体 ； 体金 ； 胶 试纸条 ； 硝酸纤维素膜
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一般使用Millipore，MDI，S&S，whatman 等国外公司 的硝酸纤维素膜。 NC膜的作用： - 在检测线和对照线条带区域固定抗体； - 样品在NC膜上流动并与试剂混合发生免疫反应； - 反应在NC膜上显色，读检测结果 NC膜的重要参数： 孔径、对称性、层析速度、表面活性剂、蛋白结合力、 强度、表面质量、厚度、批间均一性等。
常 见 蛋 白 标 记 条 件
最小蛋白用量的确定
（ 1 ）光电比色法：制备一系列不
同浓度的等体积蛋白质溶液（1ml）， 分别加入5ml胶体金中，迅速混匀， 然后，各加入1ml 10% NaCl溶液， 摇匀，静置 5min 后测各管。根据胶 体 金 颗 粒 的 大 小 ， OD 在 520 ～ 580nm之间测定，以OD值为纵坐标， 蛋白质用量为横坐标作一曲线，取 曲线最先与横轴相接近的那一点处 的蛋白质用量为最适稳定量。图中 10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适 稳定量为45μg/ml。
胶体金免疫层析试纸模式
• 双抗体夹心模式 疫病抗原检测 • 竞争模式 小分子物质检测
• SPA/蛋白G模式 疫病抗体检测
双抗体夹心模式
判定 阳性 阴性
检测线 质控线 显色 显色 不显色 显色
竞争模式
判定 阳性 阴性 检测线 质控线 不显色 显色 显色 显色
SPA/G蛋白模式
判定 阳性 阴性 检测线 质控线 显色 显色 不显色 显色
135s一般用在双抗体夹心法，180s一般用在竞争法.
吸收垫(Absorbent Pad)：
提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸 收纸； 吸收纸的作用： 主要表现在控制样品的流速，促进虹吸作用以及 使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。
片材：
不干胶塑料衬底，片材的质量很大程度上影响了 产品的货架期。
最终结合（McAb）
• 取100ml金溶液，调整pH值至8.2 • 调整滤过和离心的抗体溶液（0.1μg/μl）至 pH8.2 • 当金溶液在快速搅拌时要逐滴加入定量的 抗体（蛋白最小浓度量加10%即蛋白稳定 量），大约5分钟加完 • 在金标溶液中加入10ml滤过的10％BSA至 终浓度为1%，并轻轻搅拌10分钟。
胶体金的合成
胶体金 1％柠檬酸 粒径 三钠加入量 （nm） （ml）*
呈色
λmax
16
24.5 41 71.5
2.00
1.50 1.00 0.70
橙色
橙红 红色 紫色
518nm
522nm 525nm 535nm
注意事项
（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制 氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。 （3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三 蒸馏水，或者是高质量的去离子水。 （4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁 的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经 硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿 溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。
结合垫(Conjugate pad)：
玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材 质，多种规格，批间稳定。
结合垫的作用主要为：
吸附一定量的金标结合物颗粒； 吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上； 保持金标结合物颗粒的稳定性； 保证金标结合物颗粒定量完全释放等。
玻璃纤维膜/聚酯纤维膜
硝酸纤维素膜( Nitrocellulose)：
胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一 般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢 固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标记蛋白质的等电点略偏碱。
需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要 降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH可 能损害pH测定计的探头，因此，一般用精密的pH试纸测 定其pH即可.
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
免疫层析法( immunochromatogra-phy， ICA)
是继IGFA 之后发展起来的另一种固相膜免疫测定， 与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同，免疫层析法 中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层 析作用的横流 （lateral flow） )向另一端移动。移动过 程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者 抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分 离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体金 为标记物的实验称为胶体金免疫层粒大小及均匀度
理想的金颗粒大小基本相等， 均匀一致，无椭圆形及多角 形的金颗粒存在。
优质金颗粒和劣质金颗粒
劣质金外形不均一 ，且 非球形，有凝集现象 ， 颗粒间变异系数较大 。
胶体金的蛋白标记
双电层结构保证了胶体金的稳定 性，使金颗粒始终以悬浮状态存 在。 胶体金溶液通常由呈单一分散状 态的金颗粒组成，金颗粒直径在 1-100nm 之间，而稳定的金溶液 则要求金颗粒维持在某一固定直 径不变。
胶 体 金 免 疫 层 析 试 纸 质 量 检 测
胶体金免疫层析试纸的应用
• 在兽药残留检测中的应用
Zhang等用克伦特罗制备的单克隆抗体标记胶体金作为检测探针，然后将偶 联 BSA的克伦特罗作为 T 线，以竞争模式组装成试纸，用于样品的克伦特罗 残留检测，为我国食品安全检测提供了有效的工具。之后 Zhang 的团队采用 同样的模式制备并组装成功两类兽药残留检测试纸，分别为磺胺间甲氧嘧啶、 恩诺沙星残留检测胶体金免疫层析试纸，为我国兽药残留快速检测技术的发 展奠定了基础。
胶体金技术的种类及优点
快速免疫金渗滤法(immuogold filtration assay ,IGFA) 即穿流式(flow through)的固相膜免疫测定。 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前 者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一 片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜， 标记结合物为免疫金。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。 » 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三 钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白 质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由 5μg～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入 一系列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述 各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠，依表顺序进行。
发现 1、2 号管出现黑色沉淀且红色全部褪去，3 号管虽 然能保持红色，但是管底也出现了一定量的黑色沉淀，而 4、5 号管颜色无变化与对照颜色一致，最低蛋白量即为4 号管的蛋白量。
• 在兽医疫病检测中的应用
Bhakar等应用相应的单抗标金，建立了阿米巴虫抗原检测方法。Kameyama 等以牛病腹泻病毒的 NS3 蛋白制备单克隆抗体，并用胶体金标记单抗制备胶 体金试纸，用于牛病毒性腹泻抗原的检测。Kang等以同样方式建立了猪轮状 病毒胶体金抗原检测方法，并用于腹泻仔猪轮状病毒的鉴别诊断。Li等应用 实验室制备的两种 PRRSV 单抗，以双单抗夹心的模式，组装成 PRRSV 抗 原检测试纸，作为 PRRSV 感染的诊断工具。
免疫胶体金技术的特点
优点：
• • • • • 检测方法简单而快速，数分钟即可得出结果； 不需仪器设备，操作人员不需特殊训练； 试剂稳定，适用于单份测定； 无污染； GICA的特点是单一试剂，一步操作。小型实验室 即有条件开发生产。 • 干燥包装的试剂可在室温保存一年以上。
成为目前“病人身边检验”（point-of-care testing，POCT） 中广为应用的方法。
免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型 的免疫标记技术。
胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包 被过程。
胶体金技术的发展
1939-----雏形 Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电 子显微镜下观察金离子呈高电子密度。 1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究 Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结 合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。 1974------实现间接免疫金染色法 Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，实现了 间接免疫金染色法
不足：
金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控 制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂 的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。 其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料 的开发与应用。 最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能 制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生 产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的 GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其 精密度和准确性均符合定量测定要求。
胶体金免疫层析法试剂的组成
样品垫(Sample pad)：
玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材 质，多种规格，批间稳定。
样品垫的作用：
减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布； 去除样品中杂质颗粒； 调节样品液pH值或粘度等。
样品垫可使用化学物质进行浸渍处理，从而减少样本差 异，提高试验的灵敏度。通常可以将洗涤剂、粘性增强剂、 阻滞剂及盐渗入样本垫然后加以干燥，该工艺可避免使用 复杂辨识剂/追迹缓冲液的麻烦，使检测一步完成。
免疫胶体金技术简介
Immune colloidal gold technique 2015-1-27
目录
1 2 3 4
胶体金技术的发展 胶体金技术的种类 胶体金的合成 胶体金的标记与纯化
5