梯度洗脱方法在中药指纹图谱中的应用

指纹图谱在中药柴胡质量评价中的应用研究王斌;张腾霄;宋相周;唐志国;杨国亮;曹玉铭【摘要】文章对近10年来薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法、紫外光谱法、原子吸收光谱、DNA指纹图谱在中药柴胡质量评价中的应用进行了综述,为柴胡的进一步研究和临床应用提供理论依据.【期刊名称】《绥化学院学报》【年(卷),期】2015(035)002【总页数】4页(P149-152)【关键词】柴胡;指纹图谱;质量评价【作者】王斌;张腾霄;宋相周;唐志国;杨国亮;曹玉铭【作者单位】绥化学院食品与制药工程学院;绥化学院食品与制药工程学院;绥化市食品药品检验检测中心黑龙江绥化 152061;绥化市食品药品检验检测中心黑龙江绥化 152061;绥化市食品药品检验检测中心黑龙江绥化 152061;绥化市食品药品检验检测中心黑龙江绥化 152061【正文语种】中文【中图分类】R284《中国药典》2010版收载的柴胡为伞形科多年生草本植物柴胡（北柴胡）BupleurumchineseDC.和狭叶柴胡（南柴胡）BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根,近代药理研究表明柴胡具有镇静、镇咳、抗炎、保肝利胆等药理活性[1]。

由于中药成分复杂，单一成分作为质量控制指标已不能适应中药质量控制的要求。

而中药指纹图谱可反映中药的整体化学特征及其多组分、多作用靶点的特点。

对中药“安全、有效和质量可控，保证物种的延续，遗传基因的稳定性，品种的地道性和药用价值”起着至关重要的作用。

本文通过文献检索的方式，对近年来指纹图谱在中药柴胡质量评价中的应用进行综述，为柴胡的进一步研究和临床应用提供理论依据。

一、中药指纹图谱中药指纹图谱技术指某种（或某产地）中药材或经适当的处理后，采用一定的分析手段得到的能够标志该中药材或中成药特征的谱图。

中药指纹图谱能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。

释放,且对周围正常组织无毒副作用的给药系统。

近几年,我国在磁性微粒研究方面开展了一些工作,余艺华等[15]制备了壳聚糖磁性微球,并用于蛋白质吸附的研究。

刘利萍等[16]用超声混匀-乳化-化学交联技术制备了具有肺靶向作用的利福平壳聚糖微球,粒径为12.36±4.68 m,可利用磁场引导微球定位于靶区,有效地提高了肺部的药物浓度。

周永国等[17]先制备了载有阿司匹林的壳聚糖微球,然后在其表面吸附一层Fe3O4制得磁性壳聚糖微球,体外测试表明,该微球明显减缓了阿司匹林的释放,且具有较强的磁性,在外磁场下可实现靶向给药。

壳聚糖属于生物可降解高分子化合物,其优越的医药性能使其成为药学工作者关注的热点。

但是壳聚糖作为高分子物质,质量标准难以建立,其医药应用及相应产品的开发仍处于初始阶段。

靶向制剂的研究也是药剂学的前沿领域,近年来在靶向给药的研究中取得了令人鼓舞的进展,如前体药物靶向、载体靶向给药等,其应用前景十分广阔。

但该研究也存在稳定性差等问题,相信随着检测手段的日益先进与靶向制剂工艺手段的发展,壳聚糖在靶向制剂中的应用势必会越来越广,会有更多更有价值的壳聚糖靶向制剂产生,靶向制剂才会真正地造福人类。

参考文献1　梁桂媛,方华丰,刘志伟.5-氟尿嘧啶壳聚糖微球的制备.广东药学院学报,2000,16(1):72　陈亮,陈学敏.国内靶向制剂的研究现状.儿科药学杂志,2003,9(1):103　Jameela S R,Ku mary T V,Lal A V,et al.Progesteroneloaded ch itos an microspheres:a long actin g biodegradable controlleddelivery system.J C on trol Release,1998,52(1/2):174　徐连敏,陈改清.壳聚糖纳米粒的研究进展.国外医学・药学分册, 2002,29(6):3295　M itr a S,Gaur U,Ghosh P C,et al.T umor tar geted delivery of encaps ulated dex tr an-doxorb icin con jugate using chitosan nanoparticles as carrier.J con tr ol Release,2001,74(1-3):3176　王亚敏,石庭森,蒲永林,等.顺铂壳聚糖微球犬肝动脉栓塞的研究.药学学报,1995,30(12):8917　孙锡维,周芝芳,孙洁胤.结肠靶向给药制剂研究的新进展.中国现代应用药学杂志,2002,19(3):1968　孙伟,吴兵兵.奥沙普嗪缓释片的研制与质量控制.医药导报,2002, 21(9):5829　史新元,谭天伟.壳聚糖复合微胶囊的研制及在维生素D2可控释放中的应用.生物医学工程学杂志,2003,20(1):2610　魏农农,陆彬.结肠定位壳聚糖包衣氟尿嘧啶脂质体的制备、形态与体外释放.药学学报,2003,38(1):5311　Lorenzo-Lamosa M L,Rem unan-Lopez C,Vila-Jato J L,et al.Des ign of m icroen capsulated chitosan microph eres for colonic drug delivery.J controlled Release,1998,52:10912　方华丰,周宜开,任恕.生物素化壳聚糖微球的体外抗癌活性.药学学报,2000,35(5):38513　张灿,丁娅,沈健.新型肝靶向载体N-乳糖酰化壳聚糖的制备与表征.中国药科大学学报.2003,34(5):38714　王银松,李英霞,宋妮,等.靶向抗肿瘤药物甲氨喋呤-琥珀酰壳聚糖缀合物的制备及其体外稳定性的初步探讨.高等学校化学学报, 2003,24(11):210315　余艺华,薛博,孙彦,等.壳聚糖亲和磁性毫微粒的制备及其对蛋白质的吸附性能研究,高分子学报,2000,3:34016　刘利萍,李苹,吴泽志,等.肺靶向利福平壳聚糖磁微球的构建.化学世界,2003,4:20017　周永国,杨越冬,郭学民,等.磁性壳聚糖微球的制备、表征及其靶向给药的研究,应用化学,2003,19(12):1178中药指纹图谱的应用吕春平1,关　铭2(1.吉林大学公共卫生学院,长春　130021;　2.吉林大学药学院,长春　130021)摘　要　阐述了中药指纹图谱用于中药质量控制已被国内外认可。

麻黄药材HPLC指纹图谱的研究
符继红;张丽静
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2008(030)002
【摘要】目的:采用高效液相色谱法建立麻黄药材的指纹图谱,为其品质控制提供依据.方法:采用RP-HPLC,CLC phenyl(5 μm 4.6 mm×150 mm)色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长215 nm.结果:10批产各地麻黄药材指纹图谱有17个共有峰,峰面积之和大于总峰面积的90%.对各产地的药材进行了相似度比较,建立了麻黄药材的HPLC指纹图谱.结论:采用该法可为控制麻黄药材的内在质量提供依据.
【总页数】4页(P163-166)
【作者】符继红;张丽静
【作者单位】新疆大学理化测试中心,新疆,乌鲁木齐,839646;新疆大学理化测试中心,新疆,乌鲁木齐,839646
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.麻黄汤配方颗粒剂与标准汤剂的HPLC指纹图谱研究 [J], 王丽莉;刘晓秋;陈发奎
2.药材、制剂、半成品中麻黄碱、伪麻黄碱和苦杏仁苷的同时定量研究 [J], 韩桂茹;赵志军;黄占群;吴广
3.麻黄药材中麻黄碱含量与产地生态环境关系的初步研究 [J], 盛萍;张立福;时晓娟;李朋收;刘洋洋;李春娜;徐暾海
4.甘肃道地药材掌叶大黄药材的HPLC指纹图谱研究 [J], 周浓;庞婕;胡文帅;王永祥
5.HPLC指纹图谱结合反向传播人工神经网络和判别分析鉴定不同的麻黄药材 [J], 王丽琼;范琦;易珍奎;王以武
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HPLC指纹图谱结合主成分分析对不同产地头顶一颗珠质量的评价目的通过HPLC指纹图谱结合主成分分析（PCA）对不同产地头顶一颗珠药材的质量进行评价，为其质量控制提供依据。

方法采用Hibar C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为203 nm，柱温为30 ℃，利用相似度评价软件和PCA对14批头顶一颗珠药材检测结果进行分析比较。

结果HPLC指纹图谱的方法学考察符合相关要求，共标定了头顶一颗珠药材HPLC指纹图谱的15个共有峰，14批药材的相似度为0.389～0.979。

PCA结果显示前3个主成分的累积方差贡献率为87.674%，S2样品综合得分最高（4.926）、质量最好。

结论所建立的HPLC指纹图谱结合PCA可以客观、有效地评价不同产地头顶一颗珠药材的质量。

Abstract：Objective To evaluate the quality coherence of Trillium tschonoskii Maxim. from different producing areas by HPLC fingerprint and PCA；To provide a method for quality control. Methods Samples were separated by Hibar C18 （4.6 mm × 250 mm，5 ?m）with acetonitrile-water as gradient mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min. The wavelength was 203 nm and the temperature was 30 ℃. Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System and PCA were used to analyze the data. Results The results of method validation of HPLC fingerprint met technical standards. 15 common peaks was verified and the similarities of 14 batches of Trillium tschonoskii Maxim. from different producing areas were among 0.389–0.979. 3 principal components with the characteristic root cumulative contribution rate reaching 87.674% were screened out by PCA results. The composite score of S2 was the highest （4.926），and the quality was the best. Conclusion The application of HPLC combined with PCA can objectively and effectively evaluate the quality difference of Trillium tschonoskii Maxim. from different producing areas.Key words：Trillium tschonoskii Maxim.；fingerprint；HPLC；principal component analysis；similarity analysis头顶一颗珠，又名芋儿七，为百合科延龄草属植物延龄草Trillium tschonoskii Maxim.的干燥根和根茎，主要分布于我国陕、川、鄂、湘等地，是土家族、苗族等少数民族常用药材。

第42卷第4期郑州大学学报(理学版)Vo l 42No 4 2010年12月J.Zhengzhou U niv.(Nat.Sci.Ed.)Dec 2010不同市售野菊花药材的RP-HPLC指纹图谱毕跃峰, 符 玲, 王蒲菊, 孙孝莉, 刘晓庆(郑州大学药学院新药研发中心 河南郑州450001)摘要:采用反相高效液相色谱(RP-H P LC)法,以甲醇和醋酸(体积分数4%)为流动相梯度洗脱,建立了野菊花药材的指纹图谱,并标定出25个共有峰,指认出9个特征峰.测定了12批不同市售野菊花药材的相似度.所建立的野菊花药材R P-H PL C色谱指纹图谱重复性好,专属性强,可用于野菊花药材的质量评价.关键词:野菊花;RP-H PL C;指纹图谱中图分类号:O657.63 文献标识码:A 文章编号:1671-6841(2010)04-0092-030 引言野菊花是菊科菊属植物野菊的干燥头状花序,秋、冬二季初开放时采摘,晒干或蒸后晒干,具有清热解毒、清肝明目的功效,临床主要用于治疗疔疮痈肿、目赤肿痛、头痛眩晕[1].作者对野菊花药材指纹图谱进行了研究,并在此基础上对12批不同市售野菊花药材进行了质量考察,以期建立和完善评价野菊花质量优劣的分析方法,为市面上野菊花药材的质量评价和相关制剂生产提供科学依据和参考[2-3].1 实验部分1.1 仪器与试剂H PLC系统:G1314A VWD紫外检测器;G1311A四元泵;Agilent Chemstation色谱工作站;BP211D分析天平(德国赛多利斯);KQ5200E超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司);FW177中药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司);PA6-GF30闪式提取器(北京金鼐科技发展有限公司);BXH W电热套(北京科伟永兴有限公司);RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);滤纸;微孔滤膜(0.45 m).乙腈为色谱纯,水为超纯水,甲醇、醋酸为分析纯.蒙花苷、木犀草素、芹菜素、木犀草苷、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、刺槐素、香草醛对照品均来自提取分离;12批不同市售野菊花药材的来源及性状见表1.1.2 实验方法1.2.1 色谱条件 色谱柱:YMC-C18色谱柱(250mm 4 6mm,5 m);流动相A为甲醇,流动相B为4% (体积分数)醋酸(pH2 26),梯度洗脱程序见表2,流速0 7m L/min;进样量20 L;柱温25 ;检测波长320nm,记录时间90min.以蒙花苷作为指纹图谱的内参比峰.1.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约2g,精密称定,置圆底烧瓶中,加入75%(体积分数)甲醇溶液200mL,浸泡20min,加热回流,保持微沸60min,滤过,残渣加200m L甲醇溶液再次回流60min,合并提取液,减压浓缩,用甲醇溶液溶解定容到25mL容量瓶,0 45 m微孔滤膜滤过,即得供试品溶液.1.2.3 对照品溶液的制备 分别取对照品少许,加甲醇溶液适量溶解,做成对照品溶液备用.1.2.4 精密度实验 取同一供试品溶液10 L,连续进样5针,测定结果导入 中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版软件,以蒙花苷作参比峰,各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于5%,符合指纹图谱的技术要求.1.2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别在0,2,4,8,24h进样检测,结果导入 中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版软件,以蒙花苷作参比峰,各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于5%,收稿日期:2009-11-12基金项目:国家自然科学基金资助项目,编号30973872.作者简介:毕跃峰(1969-),女,副教授,博士,主要从事天然药物化学及新药开发研究,E-m ail:2000byf@;通讯联系人:符玲(1978-),女,讲师,硕士,主要从事生药成分及质量分析研究,E-mail:fuling1011@.第4期毕跃峰,等:不同市售野菊花药材的RP -H PLC 指纹图谱表1 12批不同市售野菊花药材的来源和性状Tab.1 T he or ig in and char acter of F los Chr y s anthemi indici fro m 12differ ent so ur ces来源性状鉴定结果安徽未开花、棕黄色、芳香味较淡正品野菊(Chr y santhemumindicum L.)的干燥花蕾山东1未开花、棕色、几乎无芳香味正品野菊(Chr y santhemum indicum L.)的干燥花蕾山东2半开花、棕黄色、芳香味较浓正品野菊(Chr y santhemum indicum L.)的干燥花贵州半开花、棕黄色、芳香味较浓正品野菊(Chr y santhemum indicum L.)的干燥花信阳半开花、棕黄色、芳香味较浓正品野菊(Chr y santhemum indicum L.)的干燥花云南半开花、棕黄色、芳香味较淡正品野菊(Chr y santhemum indicum L.)的干燥花江西半开花、棕黄色、芳香味较浓正品野菊(Chr y santhemum indicum L.)的干燥花郑州半开花、棕色、几乎无芳香味正品野菊(Chr y santhemum indicum L.)的干燥花济源已开花、黄色、芳香味较浓正品野菊(Chr y santhemum indicum L.)的干燥花广西已开花、亮黄色、芳香味较淡正品野菊(Chr y santhemum indicum L.)的干燥花桐柏未开花、棕黄色、芳香味较淡正品野菊(Chr y santhemum indicum L.)的干燥花蕾南阳未开花、棕黄色、芳香味较淡正品野菊(Chr y santhemumindicumL.)的干燥花蕾表2 流动相梯度洗脱条件Tab.2 T he g radient elutio n parameter of mobile phase 时间/min 0104045657585溶剂A /%304547606298100溶剂B/%70555340382说明供试品溶液在24h 内稳定.1.2.6 重现性试验 取同一供试品溶液,按照1 2 2的制备方法,平行制备样品5份,同法进行检测,结果导入 中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版软件,以蒙花苷作参比峰,各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的R SD 均小于5%,符合指纹图谱的技术要求.3.绿原酸;5.咖啡酸;6.香草醛;12.木犀草苷;13.阿魏酸;21.蒙花苷;22.木犀草素;24.芹菜素;25.刺槐素图1 12批不同市售野菊花药材的共有峰和特征峰Fig .1 T he same fing erprint peak and char act eristic peak ofFlos Chry s anthemi ind ici fro m 12different so ur ces2 结果与讨论2.1 野菊花药材指纹图谱及共有峰、特征峰的指认12批不同市售野菊花药材按照供试品的制备方法提取制备并且检测,以蒙花苷为参比峰,计算相对保留时间并以此来标定共有峰,通过与对照品溶液相对照,共标定出25个共有峰,指认出9个特征峰,如图1所示.2.2 相似度分析将12批野菊花样品数据(简称为S1~S12)导入 中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版软件进行分析,生成共有模式对照图谱(简称为S 对照),进行各个市售样品的相似度评价,见图2 12份样品和共有模式对照图谱的相似度值分别为:0 765,0 496,0 364,0 662,0 729,0 514,1 720,0 613,0 314,0 531,0 528,0 424.2.3 讨论2.3.1 提取溶剂的考察 考察了不同的溶剂如甲醇、75%(体积分数)甲醇溶液、纯水,结果显示,采用75%甲醇溶液作为提取溶剂,野菊花中的黄酮类和有机酸类成分均较单用甲醇和水出峰多,且基线平稳,故选择75%甲醇溶液作为提取溶剂.2.3.2 流动相的考察 流动相参考文献[4],分别筛选了甲醇-水、乙腈-0 1%(体积分数)甲酸、乙腈-0 05%(体积分数)磷酸、甲醇-0 05%(体积分数)磷酸、甲醇-4%(体积分数)醋酸等.由于乙腈洗脱能力太强,色谱峰的保留时间均比较短,分离效果不好,因而选择洗脱能力相对较弱的甲醇,考虑到甲醇易挥发,因此,选择甲醇-4%醋酸作为流动相.93郑州大学学报(理学版)第42卷图2 12批不同市售野菊花药材的指纹图谱和共有模式对照图谱Fig.2 T he finger print atlas and the same pattern contrast fing erprint at lasfo r Flos Chr y santhemi indici f rom 12differ ent sources2.3.3 柱温和波长的考察 选择了20,25,30,35 4个柱温进行考察,25 时各色谱峰的分离度最好;此外,比较了249,254,320,350nm 4个波长,320nm 检测到的色谱数和基线及峰形等较为满意,故确定25 ,320nm 分别为最佳柱温和检测波长.2.3.4 讨论 共指认出9个特征峰,分别是:绿原酸、咖啡酸、香草醛、木犀草苷、阿魏酸、蒙花苷、木犀草素、芹菜素、刺槐素.而文献[4]中只指认了绿原酸、咖啡酸、木犀草素-7-O -葡萄糖苷、蒙花苷、刺槐素5个特征峰.从12批野菊花药材的指纹图谱可以看出,市场上所售该药材质量差别较大,所建立的野菊花标准指纹图谱为进一步评价该药材质量提供了科学依据和方法.参考文献:[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:化学工业出版社,2005:219.[2] 吴钉红,杨立伟,苏薇薇.野菊花化学成分及药理研究进展[J].中药材,2004,23(2):142-144.[3] 毕跃峰,裴姗姗,贾陆,等.野菊花中挥发油及氨基酸成分分析[J].郑州大学学报:理学版,2008,40(2):91-93.[4]谭晓杰,贾英,齐丹丹,等.野菊花R P -H PL C 色谱指纹图谱的建立及其质量标准的研究[J].药物分析杂志,2007,27(1):29-31.RP -HPLC Fingerprint for Flos Chry santhemi indicifrom Different SourcesBI Yue -feng, FU Ling, WANG Pu -ju, SUN Xiao -li, LIU Xiao -qing(N ew Dr ug s Resear ch and D evelop ment Center ,S chool of P harmaceutical Sciences ,Zhengz hou Univer sity ,Zheng z hou 450001,China)Abstract:RP -H PLC fingerprint methods for Flos Chr y santhemi I nd ici is established.The RP -H PLC system consists of a mix ture of methanol and 4%acetic acid w ith gradient elution.25sam e characteristic peaks of F los Chr y santhemi indici are established and 9characteristic peaks are recognized.Based on the chrom ato graphic fingerprints,the similarity o f Flos Chr y santhemi indici from 12differ ent sources is analy zed.T he results show that the chr omatogr aphic finger -pr int for Flos Chr y santhemi indici is repeatable,feasible and can be used to estimate the quality of F los Chry santhemi indici .Key w ords:F los Chr y santhemi indici ;RP -H PLC;fing erprint94。

丁座草药材指纹图谱的建立及质量评价李宜航;宋美芳;吕娅娜;李学兰;李光;陈曦【摘要】目的:研究并建立丁座草药材的指纹图谱,为有效控制其质量提供可靠方法.方法:采用反相超高效液相色谱法,Purospher C18色谱柱,乙腈-0.05％磷酸溶液梯度洗脱,流速:0.8 mL·min-1,检测波长:278 nm,并且采用“中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件”进行了指纹图谱相似度评价.结果:不同产地丁座草指纹图谱相似度较好,在指纹图谱中确定了10个共有峰,各色谱峰的分离较好,符合指纹图谱检测要求.结论:该指纹图谱检测方法重现性好,可用于丁座草药材的质量评价.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2016(018)004【总页数】4页(P440-443)【关键词】丁座草;指纹图谱;超高效液相色谱法【作者】李宜航;宋美芳;吕娅娜;李学兰;李光;陈曦【作者单位】中国医学科学院药用植物研究所云南分所,云南景洪 666100;西双版纳州傣药南药重点实验室,云南景洪 666100;中国医学科学院药用植物研究所云南分所,云南景洪 666100;西双版纳州傣药南药重点实验室,云南景洪 666100;中国医学科学院药用植物研究所云南分所,云南景洪 666100;西双版纳州傣药南药重点实验室,云南景洪 666100;中国医学科学院药用植物研究所云南分所,云南景洪666100;西双版纳州傣药南药重点实验室,云南景洪 666100;中国医学科学院药用植物研究所云南分所,云南景洪 666100;西双版纳州傣药南药重点实验室,云南景洪 666100;中国医学科学院药用植物研究所云南分所,云南景洪 666100;中国医学科学院药用植物研究所,北京 100193【正文语种】中文·基础研究·丁座草Boschniakia himalaica Hook.f.et Thoms为列当科草苁蓉属植物，常寄生于杜鹃花属植物根上；以球形块茎入药，具有理气止痛、止咳祛痰、消胀健胃的功效[1]，为千草脑脉通口服液的主要组方药物，临床多用于治疗缺血性卒中及后遗症，疗效确切[2]。