第五章指纹图谱
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中药制剂分析第一章绪论一、单选题1.中药制剂分析的任务是()A 对中药制剂的原料药进行质量分析B 对中药制剂的成品进行质量分析C 对中药制剂的各个环节进行质量分析D 对中药制剂的体内代谢过程进行质量检测2.中药制剂分析的特点是()A 大多由复方组成B中药材炮制的重要性C 制剂工艺的复杂性D 化学成分的多样性和复杂性3.《中国药典》规定,热水温度指()A 40-60℃B 50-60℃C 60-70℃D 70-80℃4.中药制剂化学成分的多样性是指()A.含有多种类型的有机物质B.含有多种类型的无机元素B.含有多种中药材D.含有多种类型的有机和无机化合物C.5.中药制剂分析的主要对象是()A.中药制剂中的有效成分B.中药制剂中的贵重药材C.中药制剂中的毒性成分D.影响中药制剂疗效和质量的化学成分6. 中药分析中最常用的分析方法是()A.光谱分析法B.化学分析法C.色谱分析法D.联用分析法7. 中药分析中最常用的提取方法是()A.溶剂提取法B.煎煮法C.沉淀法D.超临界流体萃取8. 指纹图谱可用于中药制剂的()A.定性B.鉴别C.综合质量测定D.含量测定9. 取样的原则()A.对中药制剂的定性鉴别B.对中药制剂的性状鉴别C.对中药制剂的检查D.对中药制剂的鉴别、检查和含量测定等方面的评价10 粉末状样品的取样方法可用()A.抽取样品法B.分层取样法 C 圆锥四分法 D 抽取样品法和分层取样法二、多选题1.中药制剂分析的任务包括()A 对原料药材进行质量分析B.对成品进行质量分析C.对半成品进行质量分析D.对有毒成分进行质量控制E.中药制剂成分的体内药物分析2.中药制剂分析中常用的提取方法有()A.冷浸法B.超声提取法C.回流提取法D.微柱色谱法E.水蒸气蒸馏法3.中药制剂分析中常用的净化方法有()A.液—液萃取法B.微柱色谱法C.沉淀法D.蒸馏法E.超临界流体萃取法4. 中药制剂中化学成分的复杂性包括()A.含有多种类型的有机和无机化合物B.含有多种类型的同系物C.药用辅料的多样性D.在制剂工艺过程中产生新的物质E.有些成分之间可生成复合物5. 影响中药制剂质量的因素有()A.原料药材的品种、规格不同B.原料药材的产地不同C.原料药材的采收季节不同D.原料药材的产地加工方法不同E.饮片的炮制方法不同三、简答题1. 简述中药制剂的检查包括的主要内容。
中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南(试行)说明:本实验研究规程指南为在原技术要求的基础上规范中药注射剂色谱指纹图谱试验研究而制订。
本指南未能概括的内容,通过实践可自行补充调整,但申报资料或复核资料中须有相应的说明和申述。
指南中的"色谱指纹图谱"指采用柱色谱及薄层色谱等各种色谱技术实验研究的指纹图谱。
光谱指纹图谱将另行规定。
一、供试品收集供试品收集是研究指纹图谱最初也是最关键的步骤,由于不可能对一个药材的所有样本进行试验,而且生长环境条件对药材代谢产物有影响,所以要收集有代表性的供试品。
收集不少于10批供试品的含义是指样本的数和量要有足够的代表性。
(一)原料药材:在药材的化学成分与中医临床疗效的之间的关联尚未能阐明的现阶段,基本上是在承认其传统的功能主治及临床验证的基础上进行指纹图谱的实验研究。
原料药材的指纹图谱主要是反映其自然状态的内在质量情况,研究其指纹图谱是以此作为选择原药材投料或混批提取的依据,同时作为研究注射剂成品指纹图谱相关性的基础。
由于自然条件的变化,药材个体之间指纹图谱的差异是正常的,在品种鉴定无误的基础上,力争药材有较为固定和稳定的来源,个体之间的指纹图谱主要特征大致相似即可,使成品指纹图谱特征的稳定有起码的保证。
药材的"批" 不是工业生产的"批",是指相互独立的供试品,即不能将同一地点或同一渠道同一时间获得的供试品分成若干份供试品,以保证试验结果的代表性。
由于收集药材供试品受主观和客观的条件限制,供试验的供试品严格讲均没有统计学的意义,所以供试品数越多越好,10批是最低的要求。
供试品应保证其真实性,应有完整采样原始记录,内容包括:药材名称供试品来源(真实记录供试品来自何处:传统产地收集或是资源丰富的产地收集,或者来自GAP基地供应;还是产地购买、市场购买或委托购买,等,以便于生产原料的采购选择和测试数据的可追溯)。
样品前处理:1.冷冻保存:-80℃组织应在离体30min内,快速取材,放入专用冷冻管中,并编上号,登记在册。
1.从组织提取基因组DNA一、材料外囊、外膜、“外膜”附近肝组织、正常肝组织(多组标本)二、设备移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。
三、试剂1、分离缓冲液:10mmol/L Tris·Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。
2、其它试剂:10% SDS,蛋白酶 K (20mg/ml或粉剂),乙醚,酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),无水乙醇及70%乙醇,5mol/L NaCl,3mol/L NaAc,TE。
四、操作步骤:1. 切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。
2. 倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。
3. 加1ml 10% SDS, 混匀,此时样品变得很粘稠。
4. 加50ul或1mg 蛋白酶 K, 37℃保温1-2小时, 直到组织完全解体。
5. 加1ml 5mol/L NaCl, 混匀,5000rpm离心数秒钟。
6.取上清液于新离心管,用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。
待分层后,3000rpm离心 5分钟。
7. 取上层水相至干净离心管, 加2倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。
8. 移去上层乙醚,保留下层水相。
9. 加1/10 体积3mol/L NaAc, 及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。
室温下静止10-20分钟,DNA沉淀形成白色絮状物。
10. 用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml TE 中,-20℃保存。
11. 如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm短暂离心,取上清; 如要除去其中的RNA,可加5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃保温30分钟, 用酚抽提后, 按步骤9-10重沉淀DNA。
基因组DNA的检测(即定性及定量分析)上述方法得到的DNA一般可以用作Southern, RFLP、PCR等分析。
中药指纹图谱概述中国科学院兰州分院甘肃省天然药物重点实验室邸多隆中药与化学药品的根本区别在于,存在于中药中的任何一种活性成分均不能反映中医用药所体现的整体疗效。
运用先进的现代分析分离手段,将复杂的天然产物分析的越细,目标越缩小,可能离中药整体疗效的距离越远。
中医药理论和实践的非线性特点要求综合评价中药的质量。
中药的化学分析由分解、微观分析向宏观、综合分析发展将成为必然的趋势,色谱指纹图谱分析是对中药及其制剂进行宏观分析的可行手段。
在充分利用现代分离分析仪器对复杂的中药多组分体系进行分离检测和表征的同时,结合化学计量学和计算机技术,最大限度地从中抽取不同特性样本中的化学信息,以整体的、宏观的、模糊的概念表达中药的特性,是指纹图谱独具有的优势。
实现中药现代化首先要解决的问题是中药的现代化标准,即中药可控、可量化的问题,解决这一问题的有效手段便是建立中药的指纹图谱。
一、指纹图谱的涵义广义的指纹图谱包括DNA指纹图谱、波谱指纹图谱和色谱指纹图谱。
常见的指纹图谱主要指波谱或色谱指纹图谱:即采用一定的方法(如HPLC,GC,TLC,HPLC-MS,GC-MS,FTIR,X-ray,UV等),建立特定对象如中药材、提取物、饮片、中药注射液等的有特征性的相对稳定的图谱,所得到的图谱可以作为鉴别和质量控制的参照依据。
这种指纹图谱强调的是“共有特征性”,属狭义的指纹图谱范畴,也属化学指纹图谱,是研究的主要对象。
二、中药指纹图谱的提出中药学是一门历史悠久的传统学科,中药是几千年来我国人民赖以防病治病的重要药物。
随着应用面的日益扩大,许多药材已面临供不应求的状况。
面对这种情况,中药市场出现了混乱,混淆品种、伪劣药材以及人为掺杂时有出现。
如平贝充川贝,棉花根充黄芪,海马中灌水泥、石灰,金银花中掺盐等等,不一而足。
因此,如何区分真伪优劣,保证药品质量已成燃眉之急。
在中药分析和研究中发现,植物药是多种化学成分的混合体,其活性成分大部分都是生物体内次生代谢产物,少数为初生代谢产物,药材本身就有它内在的不稳定性,再加上现阶段的中药农业基本不规范现状,如种植粗放,品种资源、栽培地域以及收获时节混乱,农药和化肥残留等问题的普遍存在,造成中药材生产、质量的波动性较大,难以保证中药质量稳定、疗效可靠。
DNA指纹图谱实验上课地点:化学楼120 上课时间:选课时任课教师:薛闯办公地点:生化楼215 电话:84706308课程要求:预习实验内容,掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤;手写完成预习报告(实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤),课堂检查预习报告情况。
自带U盘和尺子。
实验注意事项:1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐;2、实验废物按实验室管理老师要求收集;3、实验结束后,经老师检查后方可离开。
实验纪律:1、按时上课2、穿实验服(白大衣)3、不许吃东西,课堂严禁大声喧哗4、手机静音实验成绩:预习报告:20分实验操作:40分报告内容:结果和讨论40分DNA指纹图谱实验(指导教师:薛闯)一.实验目的1. 掌握DNA 指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程2. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术,学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA 片段的长度。
3. 掌握对DNA指纹数据进行基本统计分析方法。
二. DNA指纹图谱实验原理1984 年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys 及其合作者首次将分离的人源小卫星DNA 用作基因探针,同人体核DNA 的酶切片段杂交,获得了由多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带图纹,这种图纹极少有两个人完全相同,故称为"DNA指纹",意思是它同人的指纹一样是每个人所特有的。
DNA 指纹的图像在X光胶片中呈一系列条纹,很像商品上的条形码。
由于DNA 指纹图谱具有高度的变异性和稳定的遗传性,且仍按简单的孟德尔方式遗传,成为目前最具吸引力的遗传标记。
DNA 指纹具有下述特点:1. 高度的特异性:研究表明,两个随机个体具有相同DNA 图形的概率仅3×10-11 ;如果同时用两种探针进行比较,两个个体完全相同的概率小于5×10 -19。
全世界人口约50 亿,即5×109。
因此,除非是同卵双生子女,否则几乎不可能有两个人的DNA 指纹的图形完全相同。