任务一水中菌落总数的测定习题(精)

中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验方法微生物指标Standard examination methods for drinking water一Microbioloical parameters1、菌落总数1.1平皿计数法1.1.1范围本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定。

1.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

1.1.2.1菌落总数standard plate - count 加cteria水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1ml水样所含菌落的总数1.1.3培养基与试剂1.1.3.1营养琼脂1.1.3.1.1成分：A 蛋白陈10gB 牛肉膏3gC 氯化钠5gD 琼脂10g——20gE 蒸馏水1000ml1.3.1.2制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4一7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43 kPa (121℃，15lb）灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

1.1.4仪器1.1.4.1高压蒸汽灭菌器。

1.1.4.2干热灭菌箱。

1.1.4.3培养箱36℃士2℃。

1.1.4.4电炉。

1.1.4.5天平。

1.1.4.6冰箱。

1.1.4.7放大镜或菌落计数器。

1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。

1.1.4.9灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等1.1.5检验步骤1.1.5.1生活饮用水1.1.5.1.1门以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注人灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照1.1.5.1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃士1℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为水样1 ml 中的菌落总数1.1.5.2水源水1.1.5.2.1以无菌操作方法吸取lml充分混匀的水样，注入盛有9ml、灭菌生理盐水的试管中，混匀成1 : 10稀释液。

水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。

一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。

二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。

2．干热灭菌(烘箱)。

3．水浴隔热培养箱。

4．冰箱。

5.培养皿(直径9ml)。

6．吸管(10.0ml、1.0m1)。

三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。

四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。

[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。

二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。

菌落总数试题及答案一、选择题（每题2分，共10分）1. 菌落总数是指在一定条件下，每克（毫升）样品中所含菌落的总数，通常以CFU/g（mL）表示。

以下哪个选项是正确的？A. CFU代表的是菌落数量B. CFU代表的是菌落体积C. CFU代表的是菌落密度D. CFU代表的是菌落类型答案：A2. 在进行菌落总数测定时，以下哪种方法不是常用的菌落计数方法？A. 直接计数法B. 稀释涂布法C. 比浊法D. 膜过滤法答案：C3. 菌落总数测定中，稀释倍数的选择对结果的影响是？A. 稀释倍数越大，计数越准确B. 稀释倍数越大，计数越不准确C. 稀释倍数的选择对结果没有影响D. 稀释倍数的选择对结果的影响取决于样品的种类答案：B4. 在菌落总数测定中，如果样品稀释后得到的菌落数超过了计数板的计数范围，应该如何处理？A. 重新稀释样品B. 增加稀释倍数C. 减少稀释倍数D. 重新取样答案：B5. 菌落总数测定中，如果样品中存在多种类型的菌落，应该如何进行计数？A. 只计数一种类型的菌落B. 将所有类型的菌落都计数C. 根据菌落的颜色和形状进行分类计数D. 根据菌落的生长速度进行分类计数答案：B二、填空题（每题2分，共10分）1. 菌落总数测定的目的是评估样品中的______。

答案：微生物污染程度2. 在进行菌落总数测定时，样品的稀释液通常使用______。

答案：无菌生理盐水或无菌磷酸盐缓冲液3. 菌落总数测定中，常用的培养基是______。

答案：营养琼脂4. 在菌落总数测定中，如果样品的菌落数过少，可能需要______。

答案：减少稀释倍数5. 菌落总数测定的实验结果通常在______后进行计数。

答案：培养24-48小时三、简答题（每题5分，共20分）1. 简述菌落总数测定的一般步骤。

答案：菌落总数测定的一般步骤包括样品的采集、稀释、涂布或接种、培养和计数。

2. 为什么在菌落总数测定中需要进行稀释？答案：进行稀释是为了确保菌落能在培养基上均匀分布，避免菌落重叠，从而便于计数。

食品微生物检验复习题（附参考答案）一、单选题（共60题，每题1分，共60分）1、生物安全防护水平为二级的实验室( )。

A、低个体危害,低群体危害B、中等个体危害,有限群体危害C、高个体危害,低群体危害D、高个体危害,高群体危害正确答案：B2、在进行菌落总数的测定时,稀释液移入培养皿后,应及时将凉至( )左右平板计数琼脂培养基注入培养皿约15-20mL,并转动培养皿使混合均匀。

A、56℃B、46 ℃C、26 ℃D、36 ℃正确答案：B3、关于肠道杆菌的描述不正确的是( )A、所有肠道杆菌都不形成芽胞B、肠道杆菌都为Gˉ杆菌C、肠道杆菌中致病菌一般可分解乳糖D、肠道杆菌中非致病菌一般可分解乳糖正确答案：C4、哪一项符合金黄色葡萄球菌在BP平板上的特征( )。

A、菌落直径为2-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色B、菌落颜色为金黄色，少数为白色C、长期保存的冷冻货干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，革兰氏染色一定为阳性。

D、菌落颜色呈红色，周围为一浑浊带，在其外层有一透明圈正确答案：A5、关于菌落总数的计数中以下说法错误的是()。

A、平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用 ,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数B、当平板上出现菌落间无明显接线的链状生长时,则将忽略不计C、低于30CFU的平板记录具体菌落数D、大于300CFU的课记录为多不可计6、菌落计数时,菌落数在100以内,四舍五入后,报告整数,大于100 时,采用( )有效数字。

A、3 位B、2 位C、4 位D、1 位正确答案：B7、根据菌落总数的报告原则,某样品经菌落总数测定的菌落总数数据为3775个,应报告为( )CFU/mL。

A、3775B、3.8*103C、37800D、4.0*104正确答案：B8、大肠菌群系指一群在37℃条件下,能发酵乳糖,需氧或兼性厌氧的( )无芽孢杆菌。

A、革兰氏阴性B、革兰氏阳性C、不产酸产气D、产酸不产气正确答案：A9、某固体饮料检测霉菌及酵母菌时,取样 25g 放入盛有 225m1 无菌蒸馏水的均质袋中,用拍击式均质器拍打( ),制成 1:10 稀释液。

一、选择题
1.在进行菌落计数时，以下哪项操作是必要的？
A.将培养皿放在阳光下暴晒
B.使用无菌工具进行接种（正确答案）
C.用手直接触摸培养基表面
D.将培养皿放在潮湿环境中
2.菌落计数时，以下哪种情况可能导致计数结果偏高？
A.培养基被污染（正确答案）
B.培养时间过短
C.培养基营养成分不足
D.培养温度过低
3.以下哪项不是影响菌落计数准确性的因素？
A.培养基的pH值
B.接种量的多少
C.培养皿的颜色（正确答案）
D.培养时间的长短
4.在进行菌落计数时，如何区分不同种类的菌落？
A.根据菌落的颜色、形状和大小等特征（正确答案）
B.仅根据菌落的颜色
C.仅根据菌落的形状
D.仅根据菌落的大小
5.以下哪项操作可能导致菌落计数结果偏低？
A.培养基倾倒过厚
B.培养基表面过于干燥
C.接种前未充分摇匀菌液（正确答案）
D.培养温度适宜
6.在进行菌落计数时，以下哪项操作是不正确的？
A.使用无菌接种环挑取适量菌液
B.将接种环在培养基表面轻轻划线
C.用嘴吹凉培养基以加速其凝固（正确答案）
D.将培养皿倒置放在恒温培养箱中培养
7.菌落计数时，以下哪种情况可能导致计数结果无效？
A.培养基上无菌落生长
B.培养基上菌落生长过多，无法准确计数（正确答案）
C.培养基上菌落形态各异
D.培养基上菌落大小不一
8.在进行菌落计数实验时，以下哪项措施有助于提高计数准确性？
A.使用过期培养基
B.接种前对菌液进行适当稀释（正确答案）
C.培养过程中频繁打开培养箱门
D.使用不洁净的接种工具。

细菌总数复习试题一、填空题1.细菌总数测定是测定水中、和密度的方法。

答：需氧菌；兼性厌氧菌；异养菌2.细菌学监测对玻璃皿的要求是所用的玻璃器皿应是玻璃制品，必须不附着任何，应剔除已、有的有的器皿。

答：硼硅；洁净；残渍；破损；划痕；气泡3.进行细菌学检验，一般从取样到检验不宜超过小时，不然应使用10℃以下冷藏设备保存样品，但不得超过小时。

答：2；64.作平板菌落计数时，可用观察；必要时用或，以防遗漏。

答：肉眼；放大镜；菌落计数器。

5.在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板有较大片状菌落生长时则，而应以作为该稀释度的平均菌落数。

答：不宜采用；无片状菌落生长的平皿。

二、选择题1.我国生活饮用水的细菌总数标准为：A、每升小样小于100个；B、每升水样小于或等于3个；C．每毫升水样≤100个菌落答：C2.细菌总数测定中，菌落数大于100时采用报出结果。

A.按实数报出；B.两位有效数字，用10的指数表示；C、三位有效数字答：B3.报告细菌总数测定结果时，首先应选择平均菌数在进行计算。

A．30～300之间；B．＜30；C．＞30答：A4.下列各项中不是营养琼脂培养基的成分。

A、蛋白胨；B、牛肉膏；C、氯化钠；D、乳糖答：D三、判断题1.在报告菌落数为“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。

（）2.制备营养琼脂培养基时，调整pH值为9.4～9.6。

（）答：1.√ 2.×四、问答题1.叙述生活饮用水细菌总数测定的主要步骤？答：①将水样用力震摇20—50次便可能存在的细菌凝团分散。

②以无菌操作吸限1ml摇匀的水样，注入灭菌平皿，然后倾注约15ml已融化并放冷却到45℃左右的营养琼脂，并旋转平皿，使水样琼脂充分混匀，每个水样做二个平皿，并作空的对照；③待平皿琼脂全部凝固后，翻转平皿，使底面向上，置37④℃温箱24小时，取出、计数、报告每ml小样细菌总数。

2.怎样制备营养琼脂培养基？答：将10克蛋白胨、3克牛肉膏、5克氯化钠、10～20克琼脂、1000毫升蒸馏水混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，过滤后分装于玻璃容器中，经121℃高压蒸汽灭菌20分钟，储存于冷暗处备用。

细菌学监测(一)基础知识分类号：B1-0一、填空题1．用于细菌学检测的吸管上端要用填塞，并注意，使其快速、准确流出所用体积。

答案：普通棉花松紧适度2．测定水中细菌学指标的采样瓶口用牛皮纸等防潮纸包扎后，置于干燥箱中，于℃干热灭菌2h，或用高压蒸汽灭菌器℃灭菌15min；不能用加热方法灭菌的塑料瓶，应浸泡在0.5％过氧乙酸10min或环氧乙烷气体进行低温灭菌；聚丙烯耐热塑料瓶，可用℃高压蒸汽灭菌器灭菌15min。

答案：160～170 121 1213．测定自来水样中的细菌学指标时，采水前将水龙头开至最大，放水 min，然后关闭水龙头，用酒精灯火焰灼烧约 min消毒水龙头或用75％酒精溶液消毒水龙头，再打开水龙头、开足放水1min，以充分去除水管中的滞留杂质。

答案：3～5 34．测定水样中细菌学指标时，从取样到检验不宜超过 h，否则应使用1O℃以下冷藏设备保存样品，但不得超过 h。

答案：2 65．分层检测地表水中的细菌学指标时，应自而 (方向)进行采样，以免不同层次的搅扰；与理化监测项目同时采样时，应先采集细菌学检验样品。

答案：上下6．配制好的用于细菌学检测的培养基，不宜保存过久，以少量勤配为宜。

每批应注明，已灭菌的培养基可在4～1O℃存放一个月，存放时应避免阳光直射，并且要避免和液体蒸发。

答案：配制日期杂菌侵入二、判断题1．检测水中的细菌学指标时，每次试验要以无菌水为样品，对培养基、滤膜、稀释水、玻璃器皿和冲洗用水做无菌性检验。

( )答案：正确2．新购置的用于细菌学指标测定的玻璃器皿，因含游离碱，应先在2％盐酸中浸泡数小时，用自来水冲洗干净后，再用蒸馏水冲洗1～2次沥干备用。

( )答案：正确3．培养细菌的玻璃器皿，应先经灭菌，倒出培养基，用肥皂水或洗涤剂刷洗残渍，再用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1～2次，沥干备用。

( )答案：正确4．细菌学检测用的高压蒸汽灭菌器，每次使用时，在压力上升之前，必须先用蒸汽将器内的冷空气完全驱尽，并要记录温度、气压和灭菌的时间。

习题作业一、选择题1、下列成分中不是配制测定空气中菌落总数的营养培养基的是（）。

A、蛋白胨；B、牛肉浸膏；C、乳糖；D、琼脂2、下列仪器设备中，（）不是撞击法测定室内空气中菌落总数所需要的。

A、干热灭菌器；B、冰箱；C、恒温培养箱；D、显微镜3、微生物检验过程中采用下列哪种操作（）方法：A ：定量方法B ：定性方法C ：化学方法D ：无菌操作二、填空题1、制备培养基用一般设备有：____________，___________，pH计或精密______ 。

2、营养培养基的制法：将各成分混合，，校正pH值至，过滤分装，℃， min高压灭菌。

3、食品中细菌________越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差；__________越小，则食品含有致病菌的可能性越小。

须配合_______和______的检验，才能对食品做出较全面的评价。

三、应用题1、菌落总数的定义？2. 问题：菌落总数的检验程序？习题作业答案一、选择题1、C2、D3、D二、填空题1、量筒；三角烧瓶；pH试纸-2、加热溶解；7.4；121；20。

3、菌落总数、菌落总数、大肠菌群、致病菌三、应用题1.答：菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。

2.答：1.检样（取样）2. 10倍系列稀释3. 选择2个~3个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内4. 每个培养皿中加入15~20mL平板计数培养基，混匀5. 在36摄氏度左右条件下经过48小时左右，计算各平板的菌落数。

6.计算菌落总数7.书写报告。

（新编）自来水中菌落总数的测定一、实验目的1.学习水的细菌学检查方法，看其是否合乎饮用标准。

2.了解水源的平板菌落计数的原则二、实验原理饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总指数和大肠菌群数来确定。

细菌总指数是指lml水样在普通肉膏蛋白琼脂培养基中，37℃24小时培养后所生长的菌落数。

一般规定，1ml自来水的总菌数不得超过100个。

三、实验器材肉膏蛋白琼脂培养基、灭菌水、灭菌三角烧瓶、灭菌的带玻璃塞瓶、灭菌培养皿、灭菌吸管、灭菌试管等。

四、实验步骤1．水样的采取(1)先将自来水龙头用火焰烧灼三min灭菌，再开放水龙头使水流5min后，以无菌容器接取水样。

以待分析。

(2)池水、河水或湖水应取距水面10～15cm的深层水样，先将无菌的带瓶塞的小口瓶，口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，样品最好立即检查，否则须放入冰箱中保存。

2．细菌总数测定(1)自来水1)用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。

共做2份样品。

2)分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的普通琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。

3)另取一空的灭菌培养皿，倾注普通琼脂培养基15m1，作空白对照。

4)培养基凝固后，翻转，置37℃培养箱中，培养24h，进行菌落计数。

两个培养皿的平均菌落数即为lml水样中的细菌总数。

(2)池水、河水或湖水等1)稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。

取1ml 水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀；再自第一管摇匀的水样中取1ml至下一灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2与10-3。

稀释度倍数看水样污浊程度而定，以培养平板的菌落数在30～300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需进一步稀释或减小稀释倍数。

一般中等污秽水样，取10-1、10-2与10-3三个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3与10-4三个连续稀释度。

一、选择题1.某种食品在进行菌落总数检测时，5个稀释度的平均菌落数分别为10、20、40、80和160。

其中，符合有效计数范围的稀释度是？A.10和20B.20和40C.40和80D.80和160（答案）2.在进行菌落总数计算时，如果所有稀释度的平均菌落数都大于300，应该如何处理？A.选择最大的稀释度进行计算B.选择最小的稀释度进行计算C.重新稀释样品并计数（答案）D.忽略大于300的数据3.某实验室对一份样品进行菌落总数检测，两个平行样的菌落数分别为55和60。

正确的菌落总数报告方式是？A.55B.60C.57或58（答案）D.1154.在进行菌落总数计算时，如果某个稀释度的平板上出现蔓延菌落，应该如何处理？A.忽略该稀释度的数据B.将蔓延菌落计入总数C.重新接种该稀释度并计数（答案）D.用其他稀释度的数据代替5.一份食品样品的菌落总数检测结果为：10⁻¹稀释度平板上菌落数为150，10⁻²稀释度平板上菌落数为30，10⁻³稀释度平板上菌落数为5。

应选择的菌落总数计算稀释度是？A.10⁻¹B.10⁻²（答案）C.10⁻³D.无法确定6.在进行菌落总数计算时，如果所有稀释度的平板上菌落数都小于30，应该如何处理？A.选择最大的稀释度进行计算B.选择菌落数最接近30的稀释度进行计算C.报告所有稀释度的平均菌落数（答案）D.重新稀释样品并计数7.某实验室对一份样品进行菌落总数检测，发现10⁻²稀释度的平板上菌落数异常偏高，而其他稀释度的平板上菌落数正常。

可能的原因是？A.样品污染严重B.稀释过程中操作失误（答案）C.培养基质量问题D.培养条件不当8.在进行菌落总数计算时，如果两个平行样的菌落数相差超过多少，则认为检测结果无效？A.10%B.15%（答案）C.20%D.25%。

任务一水中菌落总数的测定习题一、名词解释：1.cfu:2.无菌操作:3.细菌总数:二、填空题：1.生活饮用水标准检验方法微生物指标是（写出GB代号）。

2.生活饮用水菌落总数不得超过个/ml，总大肠菌群MPN不得检出。

3.菌落总数测定时对水样进行倍递增稀释，一般选择个连续稀释度。

4.应选取菌落数在之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数作为菌落计数标准。

低于 30cfu的平板记录具体菌落数，大于300 cfu的可记录为多不可计。

5.灭菌的平板计数琼脂培养基应却至℃时倾注平皿。

6.菌落总数测定时培养温度℃，培养时间 h。

7.稀释倍数越高，平板上的菌落数应越。

三、判断题：1.琼脂在46℃以下会发生凝固，故常用于固体培养基的凝固剂和营养剂。

（）2.菌落计数时，菌落数小于 100 cfu 时，按"四舍五入"原则修约，以整数报告。

（）3.菌落计数时，当平板内的菌落数过多（所有稀释度均大于300），但分布很均匀，可取平板的1/4计数，再乘以4作为该平板的菌落数。

（）4.空白对照试验的平板上允许有菌落生长。

（）5.菌落总数测定时，样品如果有包装，应用无水乙醇在包装开口处擦拭后取样。

（）四、简答题1.平皿计数法(GB5750.12-2006)测定的细菌数量是样品中的实际菌数吗？为什么？2.某样品菌落总数测定时，所有稀释度平板上都无菌落生长，试分析出现此结果的原因有哪些。

五、实验题：某种鸡厂对生产用水井的水样进行菌落总数测定时，按国家标准将水样处理及培养后，培养皿上生长的菌落数量记录如下：菌落数稀释倍数10-110-210-3皿号1号平皿291 31 32号平皿279 35 0 请回答下列问题：1.对水样进行处理及培养条件是指什么？2.本次实验选择的稀释度是多少？选择依据是什么？3.列式计算并正确地对测定结果进行报告。

4.该指标（菌落总数）的常规检验依据是什么？简要写出其检验程序。

任务一水中菌落总数的测定习题答案一、名词解释：1.cfu:指水样经过处理，在一定条件下培养所得的1mL检样中细菌菌落的数量。

方案一微生物学检验菌落总数的测定1 原理微生物活体数量的测定方法，常用平板培养计数法。

它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液，再取一定的稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内，最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克（或mL）样品中的活菌数量。

2 材料和仪器2.1 恒温培养箱：36℃±1℃。

2.2冰箱：2～5℃。

2.3灭菌锅。

2.4超净工作台。

2.5 均质器。

2.6 漩涡振荡器。

2.7微波炉。

2.8天平：感量为0.1g。

2.9平皿：φ90mm。

2.10 锥形瓶250ml,500ml。

2.11微量移液器一套（量程分别为：0～1000μl，0～100μl，0～10μl）及吸头。

2.12 涂棒。

2.13精密pH试纸。

2.14 酒精灯。

2.15 指形瓶。

2.16剪刀，镊子。

2.17 牛皮纸。

2.18医用酒精及脱脂棉。

2.19 橡胶手套。

2.20 记号笔。

3 检验程序菌落总数的检验程序见下图。

↓方法①↙ ↘方法②↘ ↙↓↓4 操作步骤 4.1 培养基和试剂的配制4.1.1 平板计数琼脂培养基（pl ）培养基（最常用）胰蛋白胨５．０ｇ酵母浸膏２．５ｇ 葡萄糖１．０ｇ 琼脂１５．０ｇ 蒸馏水 1LpH 7.0～7.2将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH 值，分装锥形瓶中，121℃高压灭菌15分钟。

4.1.2 无菌生理盐水的配制：称取8.5g 氯化钠溶解于1000mL 蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟。

4.2 样品的稀释：4.2.1 称取25ｇ样品置盛有225ｍＬ生理盐水的无菌均质杯内，8000ｒ／min ～10000ｒ／min 均质１min ～２min 。

制成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，10-9稀释液。

4.2.2 根据对样品活菌数量的估计，选择3~4个适宜稀释度的样品均液（比如10-6，10-7，10-8，10-9稀释液）。

检验项目培训（菌落总数的测定）姓名：得分：一、填空题（每空3分，共计84分）：1. 关于操作步骤：固体和半固体样品:称取 25 g样品置盛有 225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成 1∶10 的样品匀液。

2. 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液 1 mL,沿管壁缓慢注于盛有 9 mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成 1∶100 的样品匀液。

3. 及时将 15~20 mL冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1 ℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。

4. 待琼脂凝固后,将平板翻转, 36±1 ℃培养 48h±2 h。

5.关于菌落计数：选取菌落数在 30CFU~300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。

6. 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数 ,作为每g(mL)样品中菌落总数结果。

7. 若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

8. 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。

9. 关于菌落总数报告：菌落数小于100CFU 时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。

10. 菌落数大于或等于100CFU 时,第 3 位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数;也可用 10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。

11. 菌落总数单位：称重取样以 CFU/g 为单位报告,体积取样以 CFU/mL 为单位报告。