最新多次完整皮肤刺激试验

急性皮肤刺激试验1 目的确定化学品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用及程度，为制定化学品对皮肤的保护措施提供依据。

2 制定依据《化妆品卫生规范（2007版）》。

3试验方法3.1受试样品处理液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。

若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。

使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。

需稀释后使用的产品，先进行产品原型的皮肤刺激性/腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮肤刺激性/腐蚀性试验。

受试物为强酸或强碱（pH 值≤2 或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。

此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50 小于200 mg/kg 体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为2000 mg/kg 体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。

3.2实验动物和饲养环境多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。

应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。

实验动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。

实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d 时间。

实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。

选用常规饲料，饮水不限制。

3.3急性皮肤刺激性试验步骤3.3.1试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。

3.3.2 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。

另一侧皮肤作为对照。

采用封闭试验，敷用时间为4h。

对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。

对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2h 敷用试验。

试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。

目次前言 (I)1 范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 术语和定义 (1)4 原材料卫生要求 (2)5 生产过程卫生要求 (3)6 产品卫生要求 (3)7 检测方法 (5)8 包装、运输和贮存 (6)9 标识 (6)附录A （规范性附录）生产环境卫生要求检测方法 (8)附录B （规范性附录）消毒效果检测评价方法 (10)附录C （规范性附录）产品环氧乙烷残留量检测方法 (11)附录D （规范性附录）产品杀菌性能、抑菌性能与稳定性检测方法 (14)附录E （规范性附录）产品毒理学试验方法 (29)附录F （规范性附录）产品微生物检测方法 (31)一次性使用卫生用品卫生要求1 范围本文件规定了一次性使用卫生用品的原材料卫生要求、生产过程卫生要求、产品卫生要求、检测方法、包装、运输和贮存以及标识要求。

本文件适用于在中国境内销售和使用的一次性使用卫生用品。

本文件不适用于用于物体表面的卫生湿巾。

2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 191 包装储运图示标志GB 5749 生活饮用水卫生标准GB/T 8939 卫生巾（护垫）GB 15981-1995 消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB/T 26367 胍类消毒剂卫生标准GB/T 26369 季铵盐类消毒剂卫生标准GB/T 27741 纸和纸板可迁移性荧光增白剂的测定GB/T 27947 酚类消毒剂卫生要求GB/T 38496 消毒剂安全性毒理学评价程序和方法GB 38598消毒产品标签说明书通用要求GB 50073 净化厂房设计规范消毒技术规范（2002年版） [卫生部（卫法监发〔2002〕282号）]中华人民共和国药典（2020年版）化妆品安全技术规范国家食品药品监督管理总局消毒产品生产企业卫生规范卫生部3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

多次完整皮肤刺激试验中国科学院广州化学研究所分析测试中心卿工---189--3394--6343手和皮肤消毒剂：除按第一类、第二类或第三类消毒剂的要求进行毒理学试验外，还必须进行完整皮肤刺激试验。

如果偶尔使用或间隔数日使用的消毒剂，采用一次完整皮肤刺激试验；如果每日使用或连续数日使用的消毒剂，采用多次完整皮肤刺激试验。

接触皮肤伤口的消毒剂，还必须增做一次破损皮肤刺激试验；接触创面的消毒剂，应增做眼刺激试验。

使用过程中，必需接触皮肤的其它消毒剂，也应增做完整皮肤刺激试验。

根据消毒剂的成分，估计可能有致敏作用者，还需增做皮肤变态反应试验。

一、检测项目多次完整皮肤刺激试验。

二、检测依据中华人民共和国卫生部. 《消毒技术规范》（2002年版），皮肤刺激试验，多次完整皮肤刺激试验。

三、检测结论在本试验条件下，*****公司送检的样品（对新西兰兔多次完整皮肤刺激强度为是否具有刺激性。

(本页以下无正文)四、检测方法多次完整皮肤刺激试验（1）试验前动物皮肤准备同2.3.3.3.1 （1）。

（2）次日将受试物[浓度同2.3.3.3.1 (2)]0.5ml（g）涂在一侧皮肤上，另一侧涂溶剂作为对照，在涂抹后4h，用水或无刺激的适宜溶剂清洗，除去残留物。

每天涂抹一次，连续涂抹14d。

在每次涂抹后24h观察结果，按表2-11评分。

为了便于受试物的涂抹和结果观察，必要时应剪毛。

对照区的处理方法同试验区。

2.3.3.4 评价规定2.3.3.4.1一次皮肤刺激试验在各个观察时间点，按照表2-11对动物的皮肤红斑与水肿形成情况进行评分，并分别按时间点将3只动物的评分相加，除以动物数，获得不同时间点的皮肤刺激反应积分均值(刺激指数)。

取其中最高皮肤刺激指数，按表2-12 评定该受试物对动物皮肤刺激强度的级别。

2.3.3.4.2多次皮肤刺激试验按下列公式计算每天每只动物平均积分（刺激指数），并以表2-12判定皮肤刺激强度。

∑（每只动物14d的红斑和水肿总积分）每天每只动物平均积分=受试动物数×14表2-11 皮肤刺激反应的评分标准皮肤刺激反应皮肤刺激反应评分红斑形成：无0勉强可见 1明显 2严重 3紫红色红斑，并有焦痂 4水肿形成:无0勉强可见 1皮肤隆起，轮廓清楚 2水肿隆起约1mm 3水肿隆起超过1mm 4表2-12 皮肤刺激强度分级皮肤刺激指数刺激强度级别0～＜0.5 无刺激性0.5～＜2.0 轻刺激性2.0～＜6.0 中等刺激性6.0～8.0 强刺激性涉及地区：广东省、浙江省、福建省、海南省、云南省、广西省、贵州省、新疆省、四川省、重庆市、西藏省、湖南省、江西省、湖北省、上海市、北京市、天津市、安徽省、江苏省、甘肃省、宁夏省、内蒙古省、黑龙江省、吉林省、辽宁省、山东省、陕西省、山西省、河南省、河北省。

实验名称：皮肤刺激试验实验日期：2023年11月15日实验目的：本实验旨在通过皮肤刺激试验评估受试物质对皮肤的可能刺激性，以判断其安全性。

通过本实验，我们可以了解受试物质对皮肤的潜在损伤，为产品的安全性评价提供科学依据。

实验原理：皮肤刺激试验是一种评估物质对皮肤刺激性的体外实验方法。

本实验采用经适当方法制备的动物皮肤，通过涂抹受试物质于皮肤表面，观察涂抹部位是否出现红斑、水肿等刺激性反应，从而判断受试物质的刺激性。

实验材料：1. 受试物质：某化妆品原料2. 动物：大白鼠（雌性，体重200-250g）3. 实验器材：皮肤刺激试验仪、玻璃滴管、剪刀、镊子、生理盐水、纱布、酒精棉球、敷料等实验方法：1. 选取健康大白鼠，雌性，体重200-250g，随机分为两组，每组5只。

2. 将动物麻醉，取腹部皮肤，用剪刀剪去毛发，清洁皮肤。

3. 将受试物质和溶剂分别稀释至适当浓度。

4. 将受试物质涂抹于动物腹部皮肤上，溶剂作为对照组。

5. 涂抹4小时后，用水或无刺激的适当溶剂清洗，去除残留物。

6. 每天连续涂抹1次，连续14天。

7. 涂布后每24小时观察一次结果，记录红斑、水肿等刺激性反应。

实验结果：1. 对照组：涂抹溶剂的动物皮肤未出现明显刺激性反应。

2. 试验组：涂抹受试物质的动物皮肤在第2天开始出现红斑，第4天红斑面积逐渐扩大，第7天达到最大面积，第10天红斑开始消退，第14天基本恢复正常。

讨论：根据实验结果，受试物质在涂抹于动物皮肤后，可引起局部红斑反应，但无水肿等刺激性反应。

这表明受试物质具有一定的刺激性，但在一定浓度范围内，其刺激性可被皮肤耐受。

结论：本实验结果表明，受试物质对动物皮肤具有一定的刺激性，但在一定浓度范围内，其刺激性可被皮肤耐受。

在实际应用中，应控制受试物质的浓度，以确保其安全性。

建议：1. 对受试物质进行进一步的研究，以确定其最适宜的浓度。

2. 对受试物质进行长期毒性试验，以评估其对动物皮肤的影响。

０引言太极贴以当归、干姜、冰片、生草乌、生川乌、麻黄、三七、红花、樟脑为原料，经加工而成，具有使用简便、有效、价廉特点，把药物贴敷于机体的相应穴位，使药物刺激穴位、疏通经络而调节机体的功能状态[1]。

在临床上用于治疗骨质增生，颈椎病，关节炎，肌肉疼痛，急、慢性扭、挫伤。

本文主要对太极贴的家兔多次皮肤刺激试验进行观察[2]，为临床用药安全及相关刺激性研究提供依据。

１材料1.1受试样品由某公司提供的太极贴(一种膏贴)。

1.2受试物处理把原样品剪成2.5cm×2.5cm大小用于试验。

1.3实验动物和饲养环境普通级日本大耳兔3只，体重2300—2500g，皮肤完好健康，由南昌龙平兔业有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（赣）2009-0001。

实验兔饲养在本疾控中心动物实验室，实验动物使用许可证号：SYXK(赣)2007-0001。

室温21.6—24.5℃，湿度40.0%～70.0%RH，单笼饲养。

２方法2.1实验方法实验前24h把动物背部脊柱两侧被毛剪去，每块面积约3cm×3cm，实验时将受试物2.5cm×2.5cm样品贴在一侧去毛区，另一侧为空白对照，在斑贴后4h，用水清洗，去除残留物。

每天斑贴一次,连续斑贴14天，每次斑贴后24h观察结果。

2.2评分与计算按《消毒技术规范》（2002年版）中皮肤刺激反太极贴对家兔多次皮肤刺激试验的结果和分析ＲｅｓｕｌｔｓａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤｅｒｍａｌＩｒｒｉｔａｔｉｏｎＴｅｓｔｏｆＴａｉＣｈｉＳｔｉｃｋｅｒｓｏｎＲａｂｂｉｔ＇ｓｋｉｎ肖岗夏芝璐曾立爱谌乐礼蔡宏丁晟Xiao Gang Xia Zhilu Zeng Liai Shen Yueli Cai Hong Ding Sheng（江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029）（Jiangxi Province Center for Disease Control and Prevertion，Jiangxi Nanchang330029）摘要：目的：对太极贴进行动物多次皮肤刺激试验，为其提供使用前安全性评价。

化妆品多次皮肤刺激性试验结果分析分析化妆品多次皮肤刺激性试验结果,了解化妆品对动物皮肤的刺激作用,并进行安全性的评价。

方法按《化妆品卫生规范》中的“皮肤刺激性/ 腐蚀性试验”方法进行检测。

结果2010年共对269份化妆品进行了多次皮肤刺激性试验,总合格率为98.14%。

除防晒类和芳香类，其他化妆品的合格率均为100 %。

国产化妆品合格率为100 % ,进口化妆品的合格率为97.38%。

所有受检样品中,无刺激性的占84.76% ,轻刺激性的占13.38%,中刺激性的占1.86%。

结论大部分化妆品对动物皮肤不具刺激性，表明有较高的安全性，但任有一部分化妆品具有不同程度的刺激性,即具有潜在危害性。

卫生毒理随着化妆品在生活中的广泛的使用，其使用的安全性显得越来越重要。

为了保证化妆品的质量，在起投入市场前必须对其进行安全性检测。

化妆品可用于人体表面任何部位（皮肤、毛发、指甲、口唇等），但在安全使用化妆品时首先表现在皮肤。

多次皮肤刺激性试验是反映受试物对皮肤的慢性积累刺激性作用，是评价化妆品卫生质量的一项重要的毒理学指标。

根据《化妆品卫生规范》（2007）对2010年送检的269份化妆品进行了多次皮肤刺激性试验，结果分析如下。

1 材料和方法1.1 样品来源及处理2010年由化妆品生产企业或经销企业委托本中心检验的化妆品，其中国产化妆品105份，进口化妆品297份。

液体受试物一般不需稀释，直接使用原液。

若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。

使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。

特殊产品如染发类、育发类等按其使用说明书中规定的比例和方法配制后用于试验。

1.2 试验动物由四川省实验动物专委会养殖场提供的日本大耳白兔，雌雄各半，体重2.0-2.5kg，动物合格证号：SCXK(川)2008-14，普通级。

动物采用单笼饲养，动物房使用许可证号SYXK[川]2008-043、开放系统，温度18～-28℃，相对湿度40%～-70%。

一、实验背景化妆品、药物、化工产品等在使用过程中，可能会对皮肤和眼睛产生刺激作用。

为了评估这些物质的安全性，本实验对某化妆品进行了急性皮肤眼刺激试验，以观察其对皮肤和眼睛的刺激反应。

二、实验目的1. 评估某化妆品对皮肤和眼睛的急性刺激作用；2. 为该化妆品的安全性评价提供依据。

三、实验材料1. 实验动物：成年白色家兔，体重2.0-2.5kg，共8只；2. 受试化妆品：某品牌化妆品，生产批号：20231201；3. 赋形剂：无刺激性乳液；4. 实验仪器：皮肤刺激试验箱、电子天平、滴管、纱布、胶布、绷带等。

四、实验方法1. 急性皮肤刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。

（2）皮肤准备：实验前24小时，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，去毛范围各约3cm×6cm，不可损伤表皮。

（3）涂抹受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴在2.5cm×2.5cm大小的四层纱布上，敷贴在一侧皮肤上；对照组将相同体积的赋形剂敷贴在另一侧皮肤上。

然后用一层油纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。

（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察涂抹部位皮肤反应，按照表1和表2进行皮肤反应积分和刺激强度评价。

2. 急性眼刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。

（2）眼刺激准备：实验前24小时，将实验动物眼部用生理盐水清洗，去除分泌物。

（3）滴加受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴入每只实验动物的一侧眼结膜囊内；对照组将相同体积的赋形剂滴入另一侧眼结膜囊内。

（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察眼睛刺激反应，按照表1和表2进行刺激强度评价。

五、实验结果1. 急性皮肤刺激试验实验组：1只家兔在试验结束后1小时出现轻微红斑，24小时后红斑消退；2只家兔在试验结束后24小时出现轻微红斑和水肿，48小时后症状消失；1只家兔在试验结束后48小时出现轻微红斑和水肿，72小时后症状消失。

一、实验目的本研究旨在评估某新型化学物质对皮肤和黏膜的刺激性，为该化学物质的安全评价提供科学依据。

二、实验材料1. 受试化学物质：某新型化学物质（以下简称化学物质A）2. 实验动物：家兔（雌性，体重2.5kg左右）3. 试剂与仪器：生理盐水、脱脂棉、敷料、显微镜、病理切片机、病理显微镜等4. 实验环境：温度20-25℃，相对湿度40-70%三、实验方法1. 皮肤刺激试验（1）将家兔随机分为两组，每组6只，分别命名为A组和B组。

（2）A组为受试组，将化学物质A配制成0.5%的溶液；B组为对照组，使用等量的生理盐水。

（3）将受试溶液和生理盐水分别涂抹在受试家兔的背部皮肤上，面积约为1cm²，厚度约0.1cm。

（4）涂抹后，用敷料覆盖固定，粘贴时间为4小时。

（5）4小时后，去除敷料，观察并记录皮肤反应。

2. 黏膜刺激试验（1）将家兔随机分为两组，每组6只，分别命名为C组和D组。

（2）C组为受试组，将化学物质A配制成0.5%的溶液；D组为对照组，使用等量的生理盐水。

（3）将受试溶液和生理盐水分别滴入受试家兔的鼻腔，剂量约为0.1ml。

（4）滴入后，观察并记录鼻腔黏膜反应。

（5）1小时后，重复滴入受试溶液和生理盐水，观察并记录鼻腔黏膜反应。

四、实验结果1. 皮肤刺激试验（1）A组：受试家兔背部皮肤出现红斑、水肿，部分家兔出现瘙痒。

（2）B组：受试家兔背部皮肤无异常反应。

2. 黏膜刺激试验（1）C组：受试家兔鼻腔黏膜出现充血、水肿，部分家兔出现打喷嚏、流涕。

（2）D组：受试家兔鼻腔黏膜无异常反应。

五、实验结论1. 化学物质A对家兔皮肤具有刺激性，表现为红斑、水肿、瘙痒等症状。

2. 化学物质A对家兔鼻腔黏膜具有刺激性，表现为充血、水肿、打喷嚏、流涕等症状。

六、实验讨论1. 本实验结果表明，化学物质A对家兔皮肤和黏膜具有刺激性，提示该化学物质在实际应用中可能对人体造成潜在危害。

2. 皮肤刺激试验和黏膜刺激试验结果表明，化学物质A的刺激性与其浓度和接触时间有关。