ctDNA在局部进展期直肠癌治疗中的生物标志物作用

ctdna数值ctDNA（循环肿瘤DNA）是指从肿瘤组织释放出的DNA片段，可以通过血液样本中的检测方法进行检测和测量。

ctDNA数值是指血液中循环肿瘤DNA的浓度，可以用来评估患者的肿瘤负荷以及疾病进展的情况。

近年来，ctDNA的研究和临床应用得到了广泛的关注。

ctDNA作为一种非侵入性、可重复采集、可以监测肿瘤动态变化的生物标志物，具有许多优势。

通过检测ctDNA数值，可以更早地发现肿瘤复发和转移，帮助医生进行有效的治疗决策。

首先，ctDNA数值可以用于评估肿瘤负荷。

在肿瘤发展的过程中，癌细胞会释放出大量的DNA片段，这些片段可以通过血液循环到达全身各个部位。

通过检测血液样本中的ctDNA数值，可以间接地反映肿瘤细胞的数量和活跃程度。

高ctDNA数值通常表示肿瘤负荷较大，需要积极干预治疗。

而低ctDNA数值则可能表示肿瘤负荷较轻，需要进一步观察。

其次，ctDNA数值可以用于监测疾病进展。

在治疗过程中，肿瘤细胞可能会发生耐药、突变等变化，这会导致ctDNA数值的变化。

通过不断地检测ctDNA数值，可以实时了解肿瘤细胞的变化情况，及时调整治疗方案。

例如，当ctDNA数值上升时，可能意味着肿瘤细胞发生了耐药变异，需要更换治疗药物或者增加剂量。

而当ctDNA数值下降时，可能表示治疗效果良好，可以继续当前的治疗方案。

此外，ctDNA数值还可以用于预测患者的预后和预测治疗效果。

许多研究表明，ctDNA数值与患者的存活率具有一定的相关性。

高ctDNA数值通常与较差的预后相关，而低ctDNA数值则与较好的预后相关。

通过检测ctDNA数值，可以帮助医生更准确地评估患者的预后风险，制定更合理的治疗方案。

此外，ctDNA数值的变化也可以用来评估治疗效果。

如果治疗有效，ctDNA数值会下降；如果治疗无效或者出现耐药，ctDNA数值可能会上升。

总的来说，ctDNA数值作为一种重要的肿瘤生物标志物，可以帮助医生及时了解患者的肿瘤负荷、疾病进展以及预后风险。

ctdna的检测评价方法标题：ctDNA的检测评价方法解析循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，简称ctDNA）是近年来肿瘤诊断及治疗领域的研究热点。

ctDNA携带了与肿瘤相关的遗传信息，其检测在肿瘤的早期诊断、疗效评估及预后监测等方面具有重要意义。

本文将对ctDNA 的检测评价方法进行详细解析。

一、ctDNA概述ctDNA是指循环血液中来源于肿瘤细胞的DNA片段，其存在于肿瘤患者的血液中，与肿瘤的种类、分期及治疗效果密切相关。

ctDNA检测具有非侵入性、实时性和动态监测等优点，为肿瘤患者的个体化治疗提供了新的思路。

二、ctDNA检测方法1.数字PCR（digital PCR）数字PCR是一种基于单分子计数的技术，通过将待测DNA模板分配到大量微小的反应体系中，实现对目标DNA的绝对定量。

数字PCR具有较高的灵敏度和特异性，适用于ctDNA的检测。

2.实时荧光定量PCR（real-time PCR）实时荧光定量PCR是一种基于荧光信号的累积与DNA扩增同步的检测技术。

通过特异性引物和探针，实现对ctDNA的定量分析。

实时荧光定量PCR 具有操作简便、灵敏度高、特异性好等特点。

3.下调式PCR（downstream PCR）下调式PCR是一种基于目标DNA与内参DNA比值的变化来评估肿瘤负荷的方法。

该方法通过设计特异性引物，使目标DNA与内参DNA在PCR反应中竞争扩增，从而实现对ctDNA的检测。

4.高通量测序（next-generation sequencing，简称NGS）高通量测序技术可在短时间内对大量DNA片段进行测序，通过生物信息学分析，识别出肿瘤相关的基因变异。

NGS在ctDNA检测中具有较高的灵敏度和广泛的应用前景。

5.液滴微流控技术（droplet microfluidics）液滴微流控技术将单个细胞或DNA分子包裹在微小的液滴中，实现单分子水平的检测。

该方法具有高通量、低消耗、快速检测等特点，适用于ctDNA 的检测。

中国结直肠癌肝转移诊断和综合治疗指南(V2023)重点内容摘要肝脏是结直肠癌血行转移最主要的靶器官，结直肠癌肝转移是结直肠癌治疗的重点和难点之一。

为了提高我国结直肠癌肝转移的诊断和综合治疗水平，自2008年起联合编写《中国结直肠癌肝转移诊断和综合治疗指南》并后续进行了多次修订，以期指导对结直肠癌肝转移患者进行全面评估，精准地制定个体化的治疗目标，开展综合治疗，达到预防肝转移发生、提高肝转移灶局部毁损率、延长长期生存和改善生活质量的目的。

本次修订后的2023版《指南》包括结直肠癌肝转移的诊断和随访、预防、MDT作用、手术及其他毁损治疗、可达到“无疾病证据”状态结直肠癌肝转移的新辅助和辅助治疗、无法达到“无疾病证据”状态结直肠癌肝转移的综合治疗等六部分，汇集总结国内外该领域的先进经验和最新成果，内容详尽，可操作性强。

第一部分诊疗指南肝脏是结直肠癌血行转移最主要的靶器官，结直肠癌肝转移(co1orecta1cancer1ivermetastases)是结直肠癌治疗的重点和难点之一。

有15%〜25%结直肠癌患者在确诊时即合并有肝转移，而另15%〜25%的患者将在结直肠癌原发灶根治术后发生肝转移，其中绝大多数（80Q90%）的肝转移灶初始无法获得根治性切除。

肝转移也是结直肠癌患者最主要的死亡原因。

未经治疗的肝转移患者的中位生存期仅6.9个月，无法切除患者的五年生存率低于5%o而肝转移灶能完全切除［或可以达到“无疾病证据（noevidenceofdisease,NED）”状态］患者的中位生存期为35个月，五年生存率可达30%~57%o研究表明，有一部分最初肝转移灶无法根除的患者，经治疗后可以转化为可切除或达到NED状态。

因此，通过多学科团队（mu1tidiscip1inaryteam,MDT）对结直肠癌肝转移患者进行全面的评估，个性化地制定治疗目标，开展相应的综合治疗，以预防结直肠癌肝转移的发生、提高肝转移灶手术切除率和五年生存率。

㊃指南与解读㊃结直肠癌分子检测高通量测序中国专家共识∗主要执笔人：陈㊀功，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｇｏｎｇ＠ｓｙｓｕｃｃ．ｏｒｇ．ｃｎ；王㊀峰，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｗａｎｇｆｅｎｇ＠ｓｙｓｕｃｃ．ｏｒｇ．ｃｎ㊀㊀通讯作者：梁智勇，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｌｉａｎｇｚｈｉｙｏｎｇ１２２０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ；徐瑞华，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｘｕｒｈ＠ｓｙｓｕｃｃ．ｏｒｇ．ｃｎ中国抗癌协会肿瘤靶向治疗专业委员会∗㊀㊀ʌ摘㊀要ɔ㊀结直肠癌是我国发病率及病死率最高的恶性肿瘤之一，随着对Ｒａｓ㊁ＢＲＡＦ㊁错配修复／微卫星不稳定（ＭＭＲ／ＭＳＩ）等肿瘤相关分子标志物的深入研究及检测水平的发展，合理的检测技术及应用已经成为目前临床实践重要的组成部分㊂为了解决目前临床应用中存在的问题，提高相关行业从业者对结直肠癌分子检测高通量测序（ＮＧＳ）的了解及应用，由临床医师结合结直肠癌实际诊疗需求发起，业内诸多检测公司参与，病理及检验专家指导，从结直肠癌ＮＧＳ检测的临床角度及实验室流程质控角度共同起草了中国专家共识及标准，以指导ＮＧＳ检测技术在结直肠癌诊疗中的规范应用，帮助临床医师解读报告，为结直肠癌靶向治疗和免疫治疗提供更加标准的参考㊂㊀㊀ʌ关键词ɔ㊀结直肠癌；㊀高通量检测；㊀分子标志物；㊀共识中图分类号：Ｒ７３５ ３㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀文章编号：１００９⁃０４６０（２０２１）０３⁃０２５３⁃１２㊀㊀结直肠癌在我国的发病率呈逐年上升的趋势，世界卫生组织国际癌症研究机构（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＡｇｅｎｃｙｆｏｒＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＣａｎｃｅｒ，ＩＡＲＣ）数据显示，我国２０２０年结直肠癌的新发病例数为５６万例，因结直肠癌死亡病例达２９万例［１］㊂约２５％的结直肠癌患者在诊断时已出现远处转移，此外，２５％的患者在治疗过程中发生转移，晚期患者预后较差，５年生存率不足１５％［２］㊂分子标志物检测是筛选靶向治疗获益人群的前提，近年来随着检测技术的飞速发展，高通量测序，也称为下一代测序（ｎｅｘｔｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ＮＧＳ），因其在通量㊁成本及效率等方面的综合优势，在肿瘤基因突变检测中展现出越来越广阔的应用前景㊂然而ＮＧＳ检测技术流程复杂，对实验室环境条件㊁人员能力及质量管理要求高，任何一个环节出现问题，均会影响检测结果的准确性，进而影响临床决策［３］㊂为保证临床诊疗工作的准确性和规范性，本共识由临床医师结合结直肠癌实际诊疗需求发起，业内诸多检测公司参与，病理及检验专家指导，从结直肠癌ＮＧＳ检测的临床角度及实验室流程质控角度共同起草中国专家共识，以指导ＮＧＳ检测技术在结直肠癌诊疗中的规范应用㊂１㊀生物标志物在结直肠癌中的临床意义１ １㊀结直肠癌诊疗必须／可选检测的生物标志物㊀结直肠癌诊疗的相关生物标志物具体见表１㊂１ ２㊀遗传性结直肠癌相关检测㊀目前较明确的肠癌相关遗传性疾病主要有３类：Ｌｙｎｃｈ综合征㊁家族性腺瘤性息肉病（ｆａｍｉｌｉａｌａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓｐｏｌｙｐｏｓｉｓ，ＦＡＰ）和黑斑息肉病（Ｐ⁃Ｊ综合征）㊂遗传性结直肠癌筛查和基因诊断原则可参考‘中国临床肿瘤学会（ＣＳＣＯ）结直肠癌诊疗指南２０２０版“［４］㊂见表２㊂在Ｌｙｎｃｈ综合征个体中已发现ＭＭＲ基因ＭＬＨ１㊁ＭＳＨ２㊁ＭＳＨ６和ＰＭＳ２，或上皮细胞粘附分子（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ，ＥＰＣＡＭ）的胚系突变㊂ｄＭＭＲ或ＭＳＩ⁃Ｈ患者可能会提示Ｌｙｎｃｈ综合征（１０％ １５％的散发性结直肠癌也存在肿瘤组织ＭＬＨ１蛋白的缺失，表现为ＭＳＩ⁃Ｈ）㊂ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变的存在与否可以初步确定是Ｌｙｎｃｈ综合征还是散发性结直肠癌㊂如果突变存在提示为散发性结直肠癌，无ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变时提示Ｌｙｎｃｈ综合征可能［５］㊂若存在ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变的情况下，则应谨慎进行胚系变异检查以排除具有强家族史的病例［１０⁃１１］㊂需要强调的是，ＭＭＲ／ＭＳＩ检测是Ｌｙｎｃｈ综合征的筛查手段，Ｌｙｎｃｈ综合征的确诊有赖于基因测序㊂ＦＡＰ推荐进行ＡＰＣ外显子测序／片段缺失测序，有突变提示ＦＡＰ或衰减型ＦＡＰ（ＡＦＡＰ）；无突变则推荐行ＭＵＴＹＨ外显子测序／片段缺失测序，有突变提示ＭＵＴＹＨ相关息肉病（ＭＵＴＹＨ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｏｌ⁃ｙｐｏｓｉｓ，ＭＡＰ）㊂对于无任何已知的息肉病综合征基因表１㊀结直肠癌诊疗的相关生物标志物基因名称标本类型检测方法临床意义临床意义解读必须要检测的生物标志物ａＭＳＩ／ＭＭＲｂ组织血液ＩＨＣＰＣＲＮＧＳ疗效预测预后评估对于Ⅱ期结直肠癌：ＭＳＩ⁃Ｈ可能无法从氟尿嘧啶类单药辅助治疗中获益［４］，患者预后较好［５］㊂ｄＭＭＲ或ＭＳＩ⁃Ｈ的晚期结直肠癌患者可从ＰＤ⁃１／ＰＤ⁃Ｌ１治疗中获益［５］㊂Ｋ⁃Ｒａｓ（Ｅｘｏｎ２㊁３㊁４）Ｎ⁃Ｒａｓ（Ｅｘｏｎ２㊁３㊁４）ＢＲＡＦＶ６００Ｅ组织ｄ血液ＩＨＣＳａｎｇｅｒＰＣＲ／ｄＰＣＲＮＧＳ疗效预测预后评估Ｒａｓ野生型／ＢＲＡＦ野生型结直肠癌患者可从抗表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）单抗治疗中明确获益［４⁃５］㊂ＢＲＡＦＶ６００Ｅ突变型患者可从ＢＲＡＦ抑制剂㊁ＭＥＫ抑制剂以及抗ＥＧＦＲ单抗两药或三药联合的靶向治疗方案中获益［４］㊂可选开展检测的生物标志物液体活检ｃｔＤＮＡ，如：Ｋ⁃Ｒａｓ㊁Ｎ⁃Ｒａｓ㊁ＢＲＡＦ㊁Ｔｐ５３㊁ＡＰＣ㊁ＤＰＹＤ等早癌筛查和基因甲基化检测血液ＰＣＲ／ｄＰＣＲＮＧＳ其他预后评估疗效预测疾病监测ｃｔＤＮＡ突变负荷检测用于检测Ⅰ Ⅲ期结直肠癌患者微小残留病灶和辅助治疗反应以及识别高复发风险［６］㊂血液样本ｃｔＤＮＡ基因突变检测用于帮助结直肠癌患者选择合适的靶向治疗［７］㊂通过ｃｔＤＮＡ状态的变化实现结直肠癌治疗全程管理（如抗ＥＧＦＲ治疗再挑战［８］和ＮｅｏＲａｓ突变清除［９］）㊂肿瘤相关标志物筛查和甲基化检测有助于早期结直肠癌诊断，手术疗效评估及复发监测㊂ＮＴＲＫ基因融合组织ＦＩＳＨＮＧＳ疗效预测在有条件的情况下，对标准治疗后失败的结直肠癌患者可以进行ＮＴＲＫ基因融合检测［４］，ＮＴＲＫ基因融合的患者可从ＮＴＲＫ抑制剂中获益㊂ＨＥＲ⁃２基因扩增组织ＦＩＳＨＮＧＳ疗效预测在有条件的情况下，对标准治疗后失败的结直肠癌患者可以进行ＨＥＲ⁃２状态检测［４］（目前结直肠癌ＨＥＲ⁃２阳性的判断标准仅来自于临床研究，尚未建立经过权威机构认证的伴随诊断的判读标准），根据正在进行的两项研究，专家小组推荐两种药物组合作为ＨＥＲ⁃２基因扩增（且Ｒａｓ和ＢＲＡＦ野生型）晚期结直肠癌后续治疗的选择：曲妥珠单抗联合帕妥珠单抗或拉帕替尼［１０⁃１１］㊂ＵＧＴ１Ａ１／ＤＰＹＤ基因变异血液ＳａｎｇｅｒＰＣＲＮＧＳ化疗药物剂量调整ＵＧＴ１Ａ１影响ＵＤＰ⁃葡萄糖醛酸酶／二氢嘧啶脱氢酶活性，结直肠癌患者使用伊立替康治疗时，应对相关位点（ＵＧＴ１Ａ１∗２８和∗６）进行检测以指导用药剂量调整［５］㊂ＤＰＹＤ基因编码二氢嘧啶脱氢酶，该酶参与体内氟尿嘧啶代谢，如ＤＰＹＤ基因中存在影响该酶活性的变异时，可能会增加氟尿嘧啶类药物的毒性㊂结直肠癌患者使用氟尿嘧啶㊁卡培他滨㊁替加氟等化疗药物时，应对相关位点进行检测以指导用药剂量调整［１２］㊂续表１：基因名称标本类型检测方法临床意义临床意义解读可选开展检测的生物标志物ＰＩＫ３ＣＡ基因突变ＰＴＥＮ基因变异组织ＳａｎｇｅｒＰＣＲＦＩＳＨＮＧＳＰＩＫ３ＣＡ突变的结直肠癌患者服用阿司匹林能提高生存率［１３］㊂ＰＩＫ３ＣＡ和ＰＴＥＮ突变对抗ＥＧＦＲ治疗疗效预测证据尚不充分［１４］㊂免疫治疗疗效正相关预测标志物：１ＰＯＬＥ／ＰＯＬＤ１基因突变；２ＴＭＢｃ；３其他相关标志物，如：Ｔｐ５３㊁Ｋ⁃Ｒａｓ基因突变等组织ＳａｎｇｅｒＮＧＳ疗效预测１ＰＯＬＥ／ＰＯＬＤ１基因突变：近期研究发现，ＰＯＬＥ／ＰＯＬＤ１基因的体细胞非同义突变可以作为泛癌种免疫检查点抑制剂疗效预测标志物㊂其在结直肠癌中的突变率为５％８％，在筛选结直肠癌患者进行免疫治疗的指标时，可考虑ＭＳＳ作为进一步评估使用免疫检查点抑制剂治疗的参考［１５］㊂２肿瘤突变负荷（ＴＭＢ）：有研究报道了在ＭＳＩ⁃Ｈ型结直肠癌患者中，ＴＭＢ⁃Ｈ患者较ＴＭＢ⁃Ｌ患者更能够从ＰＤ⁃１／ＰＤ⁃Ｌ１抗体治疗中获益，ＴＭＢ是免疫治疗的潜在生物标志物［１６］㊂３存在免疫正相关预测标志物（如Ｔｐ５３㊁Ｋ⁃Ｒａｓ基因突变等）的患者对免疫药物更敏感，生存获益更长［１７］㊂免疫治疗疗效负相关预测标志物，如：Ｂ２Ｍ㊁ＪＡＫ１／２㊁ＳＴＫ１１㊁ＰＴＥＮ等基因变异组织ＳａｎｇｅｒＮＧＳ疗效预测当存在免疫负相关预测标志物基因突变时，通过影响ＰＤ⁃Ｌ１表达㊁抗原呈递㊁肿瘤淋巴细胞浸润等方式，影响免疫治疗效果［１８］㊂免疫治疗疗效超进展预测标志物，如：ＥＧＦＲ㊁ＭＤＭ２㊁ＭＤＭ４㊁ＤＮＭＴ３Ａ等基因变异组织ＳａｎｇｅｒＮＧＳ疗效预测约９％的患者在接受免疫治疗后会出现超进展现象，相关超进展预测标志物检测能及时识别免疫超进展的患者，以提示免疫治疗的指导意义，帮助治疗决策［１９］㊂注：ａ：结合‘中国临床肿瘤学会（ＣＳＣＯ）结直肠癌诊疗指南２０２０版“和‘结直肠癌诊疗规范“推荐［４，２０］㊂ｂ：微卫星不稳定（ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ＭＳＩ）：建议采用美国国家癌症研究院（ＮＣＩ）推荐的５个微卫星（ＭＳ）检测位点（ＢＡＴ２５㊁ＢＡＴ２６㊁Ｄ５Ｓ３４６㊁Ｄ２Ｓ１２３和Ｄ１７Ｓ２５０）㊂判断标准为３级：所有５个位点均稳定为微卫星稳定（ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓｔａｂｌｅ，ＭＳＳ），１个位点不稳定为微卫星低度不稳定（ＭＳＩ⁃Ｌ），２个及２个以上位点不稳定为微卫星高度不稳定（ＭＳＩ⁃Ｈ）㊂ＭＳＩ多由错配修复（ＭＭＲ）基因突变及功能缺失导致，也可以通过检测ＭＭＲ蛋白（ＭＬＨ１㊁ＭＳＨ２㊁ＭＳＨ６㊁ＰＭＳ２）的表达情况来反映ＭＳＩ状态㊂一般而言，错配修复缺陷（ｄＭＭＲ）相当于ＭＳＩ⁃Ｈ，ｐＭＭＲ相当于ＭＳＩ⁃Ｌ或ＭＳＳ［４］㊂根据共识推荐，已报道的基于ＮＧＳ平台的ＭＳＩ算法包括但不限于ＭＳＩｓｅｎｓｏｒ㊁ｍＳＩＮＧＳ㊁ＭＡＮＴＩＳ㊁ＭＳＩＣｏｌｏｎＣｏｒｅ和ＭＳＩＦＯｎｅ等［２１］㊂临床应用时建议使用国家药品监督管理局（ＮａｔｉｏｎａｌＭｅｄｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｓＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ＮＭＰＡ）批准的ＭＳＩ试剂盒㊂ｃ：美国食品药品监督管理局（ＦＤＡ）批准ＰＤ⁃１抑制剂用于治疗组织肿瘤突变符合高（ＴＭＢ⁃Ｈ，ȡ１０Ｍｕｔｓ／Ｍｂ），既往治疗后病情进展且无满意替代治疗方案的不可切除或转移性成年和小儿实体瘤患者㊂ｄ：治疗针对复发和／或转移灶时，应首选对复发灶或转移灶进行检测㊂复发灶或转移灶标本不可获得时，可用原发灶切除组织标本替代进行检测㊂如无法获得任何组织学标本时，血液ｃｔＤＮＡ检测可替代组织学检测，支持相应的治疗决策㊂的致病性变异，首选多基因突变检测，多基因Ｐａｎｅｌ应包括所有息肉和结直肠癌相关基因［２２⁃２３］㊂１ ３㊀结直肠癌中常见ＴＭＢ判读方法及检测范围汇总㊀ＴＭＢ检测有助于帮助筛选免疫治疗潜在获益的患者，显著提升晚期恶性肿瘤患者的客观缓解率和总生存期㊂ＭＳＩ⁃Ｈ／ｄＭＭＲ通常也伴随ＴＭＢ⁃Ｈ，ＭＳＩ⁃Ｈ肿瘤样本中有约８３％表现为ＴＭＢ⁃Ｈ，且有９７％的样本ＴＭＢȡ１０Ｍｕｔｓ／Ｍｂ［２４］㊂在临床研究和实践过程中，ＴＭＢ的评估判读标准在不同癌种中存在差异，而不同靶向测序Ｐａｎｅｌ的ＴＭＢ检测体系之间ＴＭＢ阈值不能通用［２５］㊂表格中收集了目前市场上部分检测公司的ＴＭＢ判读方法及检测信息（表３），为临床医师综合判断ＴＭＢ标准提供参考㊂表２㊀遗传性结肠癌筛查和基因诊断的一般原则疾病类型筛查基因（或标志物）Ｌｙｎｃｈ综合征ＭＬＨ１／ＭＳＨ２／ＭＳＨ６／ＰＭＳ２ＢＲＡＦＶ６００Ｅ／ＥＰＣＡＭＦＡＰＡＰＣ／ＭＵＴＹＨＰ⁃Ｊ综合征ＳＴＫ１１表３㊀ＴＭＢ判读方法及检测范围信息汇总检测公司ＴＭＢ判读方法ＴＭＢ检测范围ＡＴＭＢ⁃Ｈ：ＴＭＢ＞１０Ｍｕｔｓ／Ｍｂ３２４基因靶向测序Ｐａｎｅｌ大小（２ ２Ｍ）Ｂ五分位法４６８基因靶向测序Ｐａｎｅｌ大小（１ ５３Ｍ）Ｃ四分位法ＴＭＢ⁃Ｈ：ＴＭＢ＞１０Ｍｕｔｓ／ＭｂＴＭＢ⁃Ｍ：２ ５Ｍｕｔｓ／ＭｂɤＴＭＢɤ１０Ｍｕｔｓ／ＭｂＴＭＢ⁃Ｌ：ＴＭＢ＜２ ５Ｍｕｔｓ／Ｍｂ编码区域大小（１ ３９Ｍ）Ｄ四分位法５９９基因靶向测序Ｐａｎｅｌ大小（２ ３Ｍ）Ｅ三分位法ＴＭＢ⁃Ｈ：ＴＭＢ＞１０Ｍｕｔｓ／Ｍｂ４２５基因靶向测序Ｐａｎｅｌ大小（１ ２６Ｍ）Ｆ三分位法Ｐａｎｅｌ靶向区域Ｇ给出ＴＭＢ具体数值Ｍｕｔｓ／Ｍｂ，以及ＴＭＢ的临床意义，ＴＭＢ在不同癌种中的报道㊁获批情况和对应的阈值情况，供临床医师综合参考判断编码区域大小（约１Ｍ）１ ４㊀生物标志物时机及检测内容㊀根据结直肠癌患者制定相关治疗方案的过程，结合结直肠癌生物标志物相关临床意义，建议检测作如下推荐㊂（１）Ⅰ Ⅲ期结直肠癌（表４）：表４㊀Ⅰ Ⅲ期结直肠癌治疗阶段及检测时机推荐检测推荐结直肠癌术前阶段结直肠癌术后阶段辅助治疗决策前术后监测随访必选ＭＳＩ／ＭＭＲ可选液体活检Ｋ⁃Ｒａｓ／Ｎ⁃Ｒａｓ／ＢＲＡＦＵＧＴ１Ａ１／ＤＹＰＤ液体活检液体活检㊀㊀（２）Ⅳ期结直肠癌（表５）：表５㊀Ⅳ期结直肠癌治疗阶段及检测时机推荐检测推荐一线治疗方案决策前治疗过程监测随访二线治疗疾病进展后或后线治疗决策前必选Ｋ⁃Ｒａｓ／Ｎ⁃Ｒａｓ／ＢＲＡＦＭＳＩ／ＭＭＲ可选免疫治疗疗效预测标志物液体活检液体活检液体活检ＨＥＲ⁃２ＮＴＲＫ２㊀样本处理及转运２ １㊀ＦＦＰＥ样本㊀为保证核酸质量，手术或活检组织应在离体３０ｍｉｎ内浸入到１００ｍｌ的４％甲醛溶液中进行固定，避免使用酸性及含有重金属离子的固定液㊂其中，大标本固定时间为６４８ｈ，不超过７２ｈ；小活检体可固定６ １２ｈ㊂对其中１张ＦＦＰＥ样本进行切片染色，并在显微镜下观察肿瘤细胞的含量和数量㊂若肿瘤含量不足，则实验室需要对通过富集后符合质量要求的标本进行评估，或者制备成ＦＦＰＥ细胞学蜡块后进行核酸提取㊂值得注意的是，开展ＮＧＳ检测前应通过ＨＥ染色评估肿瘤细胞含量，至少满足肿瘤细胞含量在２０％以上㊂２ ２㊀手术或活检的新鲜组织样本㊀新鲜组织可提取到高质量的核酸㊂新鲜组织应在离体３０ｍｉｎ内将其保存于液氮罐或者－８０ħ冰箱中，防止ＲＮＡ等核酸降解㊂如需评估肿瘤细胞含量，可采用冷冻切片染色体方法，若肿瘤细胞含量不足，可通过标记肿瘤区域进行富集㊂新鲜组织可在液氮㊁－８０ħ冰箱或稳定剂中长期保存㊂２ ３㊀血浆样本㊀对于存在于血浆中的循环ＤＮＡ，即ｃｔＤＮＡ，取样时可使用专用的ｃｔＤＮＡ保存管采血，采血后轻柔颠倒８ １０次，确保采血管中的ｃｔＤＮＡ保存液与血液充分混匀，常温转运保存即可，严禁冻融血液；到达实验室后，分离血浆，提取游离ＤＮＡ［２６］㊂也可使用一次性ＥＤＴＡ抗凝真空采血管，采集８ １０ｍｌ全血，冷藏运输，２ｈ内分离血浆，提取游离ＤＮＡ，如需保存，请置于－８０ħ冰箱中，并避免反复冻融㊂２ ４㊀样本运送规范㊀实验室应建立详细的样本运送标准操作规范（ＳＯＰｓ）以确保运送过程中各类样本的安全性和过程的可控性（详见第４节）㊂石蜡材料可以常温运输，血液样本需要在干冰条件下运输，核酸样本需在４ħ或冷冻条件下运输［３，２７］㊂３㊀报告解读及标准模板３ １㊀ＮＧＳ临床报告包含内容㊀基因检测的临床报告应当包括：（１）基础信息：实验室名称㊁实验操作人员㊁报告审核人员㊁联系方式㊂（２）受检者的基本信息：应包括受检者姓名㊁性别㊁出生日期㊁接受检测的日期㊁检测的目的和受检者的临床指征等㊂（３）样本的信息：样本类型，如ＤＮＡ㊁外周血㊁唾液㊁新鲜组织㊁ＦＦＰＥ组织等；采集时间和采集部位㊁样本编号㊁送检时间㊁检测报告时间和样本主要质控情况，如ＤＮＡ质量评估以及测序质量评估等㊂（４）检测项目：基因Ｐａｎｅｌ的检测位点及检测范围㊁检测仪器㊁检测试剂，是否为ＮＭＰＡ批准使用的检测试剂以及ＮＭＰＡ获批的基因位点信息，或实验室自建检测（ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｄｅ⁃ｖｅｌｏｐｅｄｔｅｓｔｓ，ＬＤＴｓ）试剂㊁检测方法㊁检测范围㊁检测下限（ＬｏＤ）等㊂（５）检测结果及变异解读：对基因变异的检测结果进行解读，如检出的基因型㊁变异结果㊁染色体变化情况㊁检测结果的致病性分级㊁药物信息及临床意义㊁变异解读引用的参考文献等㊂（６）标注检测方法的实验室内部验证结果，检测局限性及不确定性，进一步检测的建议［３］㊂３ ２㊀基因变异的命名㊀对基因变异的描述应遵循一定的原则和规范，推荐使用人类基因组变异协会命名指南（ｗｗｗ．ｈｇｖｓ．ｏｒｇ），转录本的选择建议采用基因座参考基因组序列数据库（ＬｏｃｕｓＲｅｆｅｒｅｎｃｅＧｅ⁃ｎｏｍｉｃ，ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｌｒｇ⁃ｓｅｑｕｅｎｃｅ．ｏｒｇ）界定的转录本或者多个国际数据库公认的主要转录本㊂对遗传性结直肠癌相关基因变异的说明，建议以美国医学遗传学学院（ＡｍｅｒｉｃａｎＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭｅｄｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＧｅｎｏｍｉｃｓ，ＡＣＭＧ；ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｃｍｇ．ｎｅｔ）指南为标准，在检测结果中列出具体的变异位点信息，包括基因名称㊁所参考的人类基因组版本号㊁转录本参考序列版本号㊁核苷酸变异㊁氨基酸变异㊁外显子／内含子序号㊁等位基因杂合性㊁染色体编号及坐标等［２８］㊂３ ３㊀临床意义的解读和批注３ ３ １㊀对于肿瘤体细胞突变，采用分级处理的方式㊀综合伴随诊断㊁临床指南㊁数据库或文献证据，可以将肿瘤体细胞基因突变分为临床意义明确（Ⅰ级）㊁有潜在临床意义（Ⅱ级）㊁临床意义不明确（Ⅲ级）和良性或可能良性突变（Ⅳ级）㊂实验室需要建立分类及分级和报告的ＳＯＰｓ，ＳＯＰｓ应至少包括两个方面：（１）对体细胞基因突变进行分级的流程；（２）在日常检测中报告哪一级或哪几级突变位点㊂分级的流程应有记录，包括证据来源的指南㊁文献㊁数据库㊁证据等级㊁分级结果等㊂临床证据决定突变位点分级，可根据‘高通量测序技术临床规范化应用北京专家共识“［２９］发表的体细胞突变位点和临床证据分为以下４级㊂见表６㊂表６㊀体细胞基因突变分级及证据等级的标准［２９］突变分级证据等级Ⅰ级⁃临床意义明确等级Ａ或等级ＢⅡ级⁃有潜在临床意义等级Ｃ或等级ＤⅢ级⁃临床意义不明确在人群数据库和肿瘤相关数据库中均没有较高的发生率；没有确定的与肿瘤相关的临床证据Ⅳ级⁃良性或可能良性突变在人群数据库中突变频率较高；没有与肿瘤相关的文献证据３ ３ ２㊀对胚系突变的检测㊀除了中外诊疗指南及重要参考文献外，另有ＯｎｌｉｎｅＭｅｎｄｅｌｉａｎＩｎｈｅｒｉｔａｎｃｅｉｎＭａｎ（ｈｔｔｐ：／／ｏｍｉｍ．ｏｒｇ）和美国ＡＣＭＧ可参考㊂ＡＣＭＧ指南将变异位点致病性的等级分为致病㊁疑似致病㊁临床意义未明㊁疑似良性和良性５个等级㊂报告中应列出与遗传性结直肠癌（如ＦＡＰ㊁Ｌｙｎｃｈ综合征等）相关的致病以及疑似致病变异，并对变异的致病性进行分析解读［２８］㊂３ ３ ３㊀意义不明位点的处理㊀无论是肿瘤体细胞突变，或是胚系突变，都存在意义不明位点㊂实验室需制定相关政策用来确定是否报告或者不报告临床意义不明的位点，并附上说明和参考数据库，并且要在报告中注明本实验室出具临床报告的规则㊂３ ３ ４㊀ＤＰＹＤ检测结果㊀中等代谢型患者，应基于活性分值降低起始剂量；慢代谢型应避免使用氟尿嘧啶及其前体药物㊂ＵＧＴ１Ａ１检测结果中，ＵＧＴ１Ａ１∗２８和∗６为纯合变异型或双杂合变异型的患者应降低伊立替康的剂量，推荐剂量为１５０ｍｇ／ｍ２㊂３ ４㊀低丰度突变结果的处理㊀对样本进行ＮＧＳ检测时如出现较低丰度的突变结果（通常组织学样本低于５％，血液样本低于１％或低于检测ＬｏＤ）时，建议综合评估ＮＧＳ实验平台性能㊁测序深度以及肿瘤细胞比例等因素综合考虑㊂特别对于靶向治疗相关的基因建议使用其他检测方法进行进一步验证确认（如Ｓａｎｇｅｒ，ｄＰＣＲ等）㊂３ ５㊀知情同意㊀建议提供患者手写或者在线版的知情书㊂３ ６㊀报告模板㊀实验室应根据检测项目，给出对应的检测报告模板（表７），并形成ＳＯＰ文件㊂模板中应明确列出检测报告中应提供的信息，如患者基本信息㊁样本信息㊁检测信息㊁检测结果㊁结果解释㊁实验室信息㊁检测方法的局限性以及其他内容等［４，２８］㊂表７㊀结直肠癌ＮＧＳ检测标准模板［３０］患者信息：姓名ＸＸＸ㊀性别ＸＸ㊀病理诊断ＸＸＸ送检医院ＸＸＸ㊀年龄Ｘｙｒｓ标本信息：标本编号标本类型新鲜手术组织㊀肿瘤细胞含量Ｘ％㊀㊀ＤＮＡ含量及质控ＸＸＸ取材部位㊀㊀㊀㊀㊀㊀标本接收日期２０２０⁃ＸＸ⁃ＸＸ㊀㊀报告日期２０２０⁃ＸＸ⁃ＸＸ检测内容及范围：使用ＮＧＳ技术检测结直肠癌中ＸＸ个基因外显子突变㊂外显子和这些基因剪接位点附近的序列进行大规模平行测序㊂样本处理㊁文库构建㊁测序和分析均在ＸＸ实验室进行㊂检测平台为ＸＸ，分析软件为ＸＸ㊂参考基因组为ＧＲＣｈ３８㊂详细技术说明及基因参见’附录１检测基因列表，检测方法和检测局限性」㊂检测项目内容：肠癌相关ＸＸ基因突变检测检测方法：高通量测序法检测下限：Ｘ％检测结果：数据参数：ＸＸｎｇ核酸构建测序文库；Ｘ％目标区域有效测序至ＸＸ深度㊂结果小结：检测类型检测结果体细胞变异共１个体细胞变异，其中具有明确或潜在临床意义的变异有１个具有临床意义的变异Ｔｐ５３基因ｐ．Ａｒｇ１７５Ｈｉｓ，ＰＴＣＨ１基因微卫星不稳定（ＭＳＩ）微卫星稳定（ＭＳＳ）胚系致病变异未检出样品总体质量评估合格㊀㊀１）肿瘤体细胞突变的结果及解读变异结果丰度变异解读证据等级药物推荐明确临床意义的变异（Ⅰ类变异）未检出具有明确临床意义的变异潜在临床意义的变异（Ⅱ类变异）Ｔｐ５３基因（ＮＭ＿００１１２６１１２ ２）５号外显子ｐ．Ｒ１７５Ｈ错义突变ｃ．５２４Ｇ＞Ａ（ｐ．Ａｒｇ１７５Ｈｉｓ）３４％Ｔｐ５３突变在转移性结直肠癌中可能与结直肠癌预后相关㊂Ｄ级临床意义尚不明确的变异（Ⅲ类变异）此样本未检出临床意义尚不明确的变异（Ⅲ类变异）㊀㊀２）胚系突变的检测结果解读基因检测结果㊀㊀㊀㊀㊀纯合／杂合㊀㊀㊀㊀㊀ＡＣＭＧ分级㊀㊀㊀㊀㊀临床意义此样本未检出致病或可能致病的胚系变异㊀㊀３）化疗药物基因组学检测结果基因检测位点基因型临床提示证据等级ＤＰＹＤｒｓ３９１８２９０ｃ．［１９０５＋１Ｇ＞Ａ］；［１９０５＋１Ｇ＞Ａ］ｒｓ５５８８６０６２ｃ．［１６７９Ｔ＞Ｇ］；［１６７９Ｔ＞Ｇ］ｒｓ６７３７６７９８ｃ．［＝］；［＝］ｒｓ７５０１７１８２ｃ．［＝］；［＝］ｒｓ１８０１２６５ｃ．［８５Ｔ＞Ｃ］；［＝］ｒｓ１８０１１５９ｃ．［＝］；［＝］ｒｓ１８０１１６０ｃ．［＝］；［＝］患者二氢嘧啶脱氢酶活性分值为０，是二氢嘧啶脱氢酶慢代谢型，应避免使用氟尿嘧啶㊁卡培他滨㊁替加氟等治疗药物㊂１ＡＵＧＴ１Ａ１ｒｓ８１７５３４７ｃ．［⁃５３＿⁃５２ｉｎｓＴＡ］；［⁃５３＿⁃５２ｉｎｓＴＡ］（ＵＧＴ１Ａ１∗２８／∗２８）ｒｓ４１４８３２３ｃ．［２１１Ｇ＞Ａ］；［２１１Ｇ＞Ａ］（ＵＧＴ１Ａ１∗６／∗６）ＵＧＴ１Ａ１∗６／∗２８双纯合变异型，应降低伊立替康的剂量，推荐剂量为１５０ｍｇ／ｍ２㊂１Ａ㊀㊀４）样本主要质控质量参数数值质控标准病理评估∗恶性肿瘤细胞占比组织肿瘤占比＞２０％ＤＮＡ质量评估∗ＤＮＡ总量＞３０ｎｇＤＮＡ片段降解程度可设置ＡＢＣ等级∗预文库总量＞３００ｎｇ测序质量评估∗平均测序深度组织血液分别设置质控标准插入片段长度组织血液分别设置质控标准碱基质量Ｑ３０占比＞８０％∗序列回帖比率＞９５％配对样本纯合子一致性＞９０％总体质量评估合格／警戒／不合格注：∗：必须体现的质控参数，其余为可选参数备注：（１）指南及共识推荐的肠癌基因检测背景：Ａ：结直肠癌ＮＣＣＮ指南推荐检测的基因：Ｋ⁃Ｒａｓ㊁Ｎ⁃Ｒａｓ㊁ＢＲＡＦ㊁ＭＳＩ／ＭＭＲ㊁ＮＴＲＫ融合㊁ＨＥＲ⁃２扩增㊂Ｂ：ＣＳＣＯ结直肠癌诊疗指南２０２０版推荐检测的基因：ＭＳＩ（Ⅰ级推荐），Ｋ⁃Ｒａｓ㊁Ｎ⁃Ｒａｓ㊁ＢＲＡＦ（Ⅱ级推荐），ＮＴＲＫ融合㊁ＨＥＲ⁃２扩增（Ⅲ级推荐）㊂Ｃ：ＣＳＣＯ结直肠癌诊疗指南２０２０版中指出，使用ＮＧＳ等定量检测方法检测Ｒａｓ和ＢＲＡＦ突变时，建议以５％作为突变丰度的截断值［４］㊂（２）在检测结果中列出具体的变异位点信息，包括基因名称㊁所参考的人类基因组版本号和转录本参考序列版本号㊂（３）根据人类基因组突变学会（ＨＧＶＳ）基因突变命名法（ｗｗｗ．ｈｇｖｓ．ｏｒｇ）以起始密码子Ａ为第一核苷酸计数， ｃ． 表示ｃＤＮＡ序列， ｐ． 表示蛋白序列㊂（４）化疗药物证据水平划分依据参考ＰｈａｒｍＧＫＢ数据库，共分为１Ａ／１Ｂ／２Ａ／２Ｂ／３／４这６个等级：１Ａ级（由临床药物基因组学实施联盟（ＣＰＩＣ）或遗传药理学指南认可，或者应用于其他主要卫生系统），１Ｂ级（注释基于多项有统计显著性的研究），２Ａ级（注释基于多项重复研究，并且该基因为明确的药物代谢基因），２Ｂ级（注释基于多项重复研究，但其中一些研究没有统计学意义或影响较小），３级（注释仅基于一项有显著性差异的研究，或多项研究，但缺乏明显药效关联），４级（注释仅基于病例报告，非权威性研究或体外分子功能研究）㊂（５）ＣＰＩＣ指南中，二氢嘧啶脱氢酶活性评分是取活性分值最低的２个位点的分值之和（根据每个位点对酶活性的影响，活性分值有０／０ ５／１３种）；活性分值（ａｃｔｉｖｉｔｙｓｃｏｒｅ）为２的是正常代谢型，活性分值为１或１ ５的是中等代谢型，活性分值为０或０ ５的是慢代谢型㊂（６）附录：检测基因列表㊁检测方法和检测局限性见附录１，ＮＧＳ质量参数列表见附录２，本检测所有突变和变异列表见附录３㊂本分析结果仅对试验样本负责㊂技术员（签名）：ＸＸＸ㊀㊀日期：㊀㊀㊀年㊀㊀月㊀㊀日审核人（签名）：ＸＸＸ㊀㊀日期：㊀㊀㊀年㊀㊀月㊀㊀日４㊀ＮＧＳ实验室建设的要求ＮＧＳ检测实验室的总体设计与要求应参考‘分子病理诊断实验室建设指南（试行）“㊁‘医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则“㊁‘个体化医学检测质量保证指南“㊁‘肿瘤个体化治疗检测技术指南“㊁‘个体化医学检测实验室管理办法“㊁‘测序技术的个体化医学检测应用技术指南（试行）“㊁‘高通量测序技术临床检测规范化北京专家共识（２０１９年版）“进行［３１］㊂４ １㊀人员资质㊀实验室应具有可满足开展结直肠癌基因检测要求的医学和生物学等专业人员，包括实验室负责人或技术负责人㊁ 湿实验 的操作人员㊁ 干实验 的生物信息学分析人员㊁报告解读人员和信息系统相关人员等㊂报告签发人员应具备医学分子生物学和临床肿瘤学知识背景，了解结直肠癌的临床治疗指南㊁靶向治疗㊁化学治疗㊁免疫治疗及临床试验最新进展㊂对遗传性结直肠癌的基因检测，实验室应当根据需要配备具有遗传咨询资质的人员㊂签发报告人员应能够熟练使用肿瘤基因相关数据库，掌握相关临床诊疗指南，了解肿瘤靶向和免疫治疗药物及其相关肿瘤基因突变研究的最新进展㊂对于疑难病例或必要时，可由相关临床医师㊁病理医师㊁影像医师㊁医学遗传学家㊁肿瘤突变分子检测人员㊁相关的实验室其他人员㊁相关药师等来自不同专业的专家组成分子肿瘤专家组（ＭＴＢ），依据基因突变检测结果，结合患者状况㊁临床表现㊁病理和。

分子生物学技术在肿瘤早期诊断方面新进展近年来，随着分子生物学技术的不断发展和完善，人们在肿瘤早期诊断方面取得了一系列新的进展。

这些技术在肿瘤的早期发现、鉴定和个性化治疗方面发挥着重要作用。

本文将介绍一些分子生物学技术在肿瘤早期诊断方面的新进展，以及它们在临床实践中的应用。

一、循环肿瘤DNA循环肿瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）指的是肿瘤患者血液中可检测到的肿瘤源性DNA片段。

由于肿瘤细胞的死亡和分解，这些DNA片段会释放入血液中。

通过检测和分析ctDNA，可以实现对肿瘤患者的早期诊断和治疗监测。

近期研究发现，ctDNA在肿瘤早期诊断中具有很高的敏感性和特异性，可以提供关于肿瘤发生、发展、转移和耐药机制的重要信息。

二、循环肿瘤细胞循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTCs）是在肿瘤转移过程中脱落和进入体液的恶性肿瘤细胞，在血液或体液中具有极低的浓度。

目前，通过分子生物学技术，可以从血液或体液中检测到极低数量的CTCs，并进行进一步的鉴定和分析。

CTCs的检测可以用于肿瘤的早期诊断和预后判断，并可作为监测治疗效果和药物耐药性的指标。

三、微小RNA微小RNA（microRNA，miRNA）是一类长度为18-25个核苷酸的非编码RNA分子，可以通过抑制特定基因的翻译和调节特定基因的表达来影响细胞的功能。

研究发现，肿瘤细胞中的miRNA与正常组织相比存在差异，这些差异可用于肿瘤的早期诊断和预后判断。

通过分子生物学技术，可以从血液、尿液等体液中检测和分析miRNA的表达水平，为肿瘤的早期筛查和个体化治疗提供重要依据。

四、基因组学基因组学是研究基因组结构、组成、功能和调控等方面的学科，通过分析肿瘤细胞基因组的变化，可以揭示肿瘤的发生机制和演化过程。

目前，高通量测序技术和基因编辑技术的发展使得我们可以更加全面和深入地研究肿瘤的基因组学特征。

通过分析肿瘤细胞中的基因突变、拷贝数变异和染色体重排等，可以实现对肿瘤的早期诊断和个性化治疗的精准定位。

临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical 2019 年第 6 卷第 9 期2019 Vol.6 No.9198结直肠癌液体活检临床研究进展及国内应用现状和精准治疗侯文运，李旭斌，杨亚斌（首都医科大学附属北京康复医院，北京 100000）【摘要】随着精准医疗在肿瘤临床领域中的广泛开展，人们对循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)和循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA，ctDNA)的认识逐渐加深，以血液为基础的肿瘤分子诊断广泛应用于临床中，为肿瘤患者的早发现早治疗提供了可能。

本文针对液体活检的两种技术:循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA检测技术的特点，总结国内国外在结直肠癌液体活检及精准医疗领域的最新研究进展，探讨结直肠癌液体活检的应用现状及临床前景。

【关键词】液体活检；结直肠肿瘤；循环肿瘤细胞；循环肿瘤DNA【中图分类号】R735.3 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.09.198.011 液体活检的概念肿瘤是危害人类健康的主要疾病之一，随着生物技术的不断发展和精准医疗的推进，直肠癌的治疗模式也逐渐发展为以手术治疗为主的综合性治疗。

[1]目前虽然组织活检是诊断肿瘤的金标准，医生通常采用组织活检的方法对患者进行检测与诊断，但不可否认这种方式也存在一些弊端，如对患者造成的创伤较大，易导致肿瘤转移等。

近年，随着肿瘤的液体活检[2]这一分子诊断的概念被提出，并且备受关注，液体活检有望迅速进入临床指导肿瘤的诊断与治疗。

这项系统而精细的“医学工程”中，从组织到细胞直至分子层面的关于肿瘤的全方位信息，为早期诊断、用药指导、术后监测和疗效评估等临床诊疗环节提供了保障。

液体活检（liquid biopsy）。

液体活检是指对患者血液样本中的细胞和核酸的检测，主要包括循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA两类。

以循环肿瘤细胞、循环肿瘤DNA检测为代表的液体活检技术受到临床医师的高度重视，有望成为补充或替代传统组织学活检的新兴检测手段，并成为精准医学时代乳腺癌诊治的重要工具。

·4165··述评·【编者按】　根据世界卫生组织国际癌症研究中心发布的2020年全球最新癌症负担数据，2020年结直肠癌在全球新发病例排名第三、死亡病例排名第二。

如何有效降低我国结直肠癌疾病负担是亟待解决的重大公共卫生问题。

然而我国民众对肠癌筛查的认知不足，2019年我国建议接受结直肠癌筛查的人口渗透率为16.4%，远低于美国的60.1%。

因此，国家出台了一系列政策推广结直肠癌早筛，助力结直肠癌行业发展。

2021-04-15，首个“中国癌症早筛日”启动，结直肠癌早筛率先进入发展新阶段。

本期“述评”“结直肠癌筛查专题研究”栏目聚焦结直肠癌筛查进展，分析国内外结直肠癌筛查共识，探索结直肠癌筛查新工具，旨在为临床实践提供参考并提高民众早筛意识，远离癌症。

结直肠癌筛查策略的研究现状与思考胡茜玥，刘正*，王锡山*【摘要】　结直肠癌在我国发病率逐年升高，严重威胁人们生命健康，造成了沉重的社会经济负担。

众多国家的实践经验表明，采取有效的结直肠癌筛查策略能够降低结直肠癌的疾病负担，然而我国人群结直肠癌筛查项目覆盖尚不广泛，方法不统一，有待形成完善的国家结直肠癌筛查体系。

本文结合国内外最新指南、共识，阐述国内外结直肠癌筛查的研究现状，探讨常用的结直肠癌筛查方法，并对我国结直肠癌筛查的发展提出了展望，以期未来能够建立具有我国特色的结直肠癌筛查策略。

【关键词】　结直肠肿瘤；筛查；防控；早期诊断；早期治疗【中图分类号】　R 735.34　【文献标识码】　A　DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2021.02.049胡茜玥，刘正，王锡山. 结直肠癌筛查策略的研究现状与思考［J］. 中国全科医学，2021，24（33）：4165-4171. ［］HU X Y，LIU Z，WANG X S. Colorectal cancer screening：current strategies and thoughts［J］. Chinese General Practice，2021，24（33）：4165-4171.Colorectal Cancer Screening ：Current Strategies and Thoughts HU Xiyue ，LIU Zheng *，WANG Xishan *Department of Colorectal Surgery ，National Cancer Center/National Clinical Research Center for Cancer/Cancer Hospital ，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College ，Beijing 100021，China*Corresponding authors ：LIU Zheng ，Chief physician ；E-mail ：WANG Xishan ，Chief physician ；E-mail ：【Abstract 】　The incidence of colorectal cancer has shown an upward trend in China. Colorectal cancer turns to be agreat threat to people 's health，and also brings serious negative socio-economic impacts. The screening for colorectal cancer using effective strategies has been proven efficacious for reducing colorectal cancer burden in many countries. In China，due to incomplete coverage of colorectal cancer screening programs implemented using non-uniform strategies，there is a need to develop a comprehensive colorectal cancer screening system used throughout the country. We overviewed colorectal cancer screening researches at home and abroad，and discussed the common screening strategies based on the reviewing of the latest guidelines and consensuses on colorectal cancer screening，then predicted the prospects of colorectal cancer screening in China，with a view to assisting the development of colorectal cancer screening strategies with Chinese characteristics.【Key words 】　Colorectal neoplasms；Screening；Prevention and control；Early diagnosis；Early therapy结直肠癌（colorectal cancer ，CRC ）是全球范围内常见的恶性肿瘤之一，估计2020年全球CRC 年龄标化发病率为19.5/10万，死亡率为9.0/10万［1］。

第1篇一、前言随着生物技术的飞速发展，分子病理学作为一门融合了分子生物学、遗传学、免疫学和临床病理学等多学科交叉的领域，已经成为现代医学诊断和治疗的重要工具。

在过去的一年里，分子病理学在临床应用、基础研究以及技术创新等方面都取得了显著的进展。

本文将对2023年度分子病理学的发展进行总结和展望。

二、临床应用进展1. 肿瘤分子诊断- 驱动基因检测：针对肿瘤发生发展的关键基因进行检测，如EGFR、ALK、ROS1等，为肿瘤的精准诊断和治疗提供了重要依据。

- 肿瘤免疫治疗：通过检测PD-L1、PD-1等免疫检查点分子，为免疫治疗的选择提供了参考。

- 肿瘤复发监测：通过检测循环肿瘤DNA（ctDNA）等标志物，实现对肿瘤复发的早期发现和监测。

2. 遗传病诊断- 基因测序技术：高通量测序技术的普及，使得遗传病的诊断更加快速、准确。

- 单基因遗传病检测：针对常见单基因遗传病，如唐氏综合征、囊性纤维化等，开展大规模筛查。

3. 心血管疾病诊断- 基因检测：通过检测与心血管疾病相关的基因，如APC、BRCA1等，为心血管疾病的早期诊断和预防提供依据。

三、基础研究进展1. 基因组学研究- 人类基因组计划：完成人类基因组草图绘制，为后续研究奠定了基础。

- 肿瘤基因组学：通过对肿瘤基因组进行测序和分析，揭示了肿瘤的发生发展机制。

2. 蛋白质组学研究- 蛋白质组学技术：通过蛋白质组学技术，研究蛋白质的表达和修饰，为疾病诊断和治疗提供新靶点。

3. 代谢组学研究- 代谢组学技术：通过检测生物体内代谢产物的变化，揭示疾病的发生发展机制。

四、技术创新1. 高通量测序技术- 测序速度和准确性的提高：第三代测序技术的出现，使得测序速度和准确性得到了显著提升。

- 测序成本的降低：随着测序技术的进步，测序成本逐渐降低，使得分子病理学应用更加广泛。

2. 生物信息学技术- 生物信息学平台：开发了一系列生物信息学平台，如GATK、CNVnator等，为分子病理学研究提供了有力支持。

肿瘤DNA甲基化标志物检测及临床应用专家共识(2024版)无
【期刊名称】《中国癌症防治杂志》
【年(卷),期】2024(16)2
【摘要】随着生物医学的发展,DNA甲基化(DNA methylation)标志物在癌症诊断、治疗选择及预后评估中的重要性日益凸显。

本专家共识旨在全面梳理DNA甲基化标志物的检测技术、临床应用及其在肿瘤管理中的潜力。

此外,本共识将围绕DNA甲基化标志物的定义、临床意义、检测规范、数据处理及其在肿瘤的筛查、辅助诊断、伴随诊断及复发监测中的应用,结合最新研究进展和实际临床经验,提出一系列关于DNA甲基化标志物检测及应用的共识推荐,旨在提升临床医技人员对这一新兴标志物的认识,规范检测流程,促进其在肿瘤诊疗全程中的应用,从而为患者提供更加精准有效的治疗方案。

【总页数】14页(P129-142)
【作者】无
【作者单位】中国抗癌协会肿瘤标志专业委员会
【正文语种】中文
【中图分类】R730
【相关文献】
1.降钙素原的检测和应用——《感染相关生物标志物临床意义解读专家共识》解读
2.乳腺癌肿瘤组织及血液游离DNA中特异性甲基化生物标志物的临床应用
3.DNA
甲基化相关肿瘤标志物临床研究进展4.《中国肿瘤临床》文章推荐:中国人群肺癌血清标志物临床应用及参考区间建立规范化流程专家共识5.骨肿瘤二代测序及分子检测技术临床应用专家共识
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分子生物学在癌症研究中的应用癌症是一种严重威胁人类健康的疾病，其发展和治疗一直是科学界的热门研究方向。

分子生物学作为现代生物科学的重要组成部分，为癌症研究提供了有力的工具和理论基础。

本文将着重探讨分子生物学在癌症研究中的应用，并分析其对癌症预防、早期诊断和治疗的重要意义。

一、基因突变的检测和分析癌症的发生与基因的突变密切相关。

分子生物学通过DNA测序技术和PCR等方法，可以快速、准确地检测和分析基因的突变情况。

通过对癌症相关基因的检测，可以帮助科学家更好地了解癌症的发生机制，为癌症的预防和治疗提供依据。

二、肿瘤标志物的筛查和诊断分子生物学技术对肿瘤标志物的筛查和诊断起着重要作用。

肿瘤标志物是指在癌症患者体内产生的一种特殊蛋白质或其他生物分子，其表达数量与癌症的发生、发展和预后相关。

通过检测肿瘤标志物的水平，可以帮助早期发现癌症，并评估患者的治疗效果和预后。

三、药物靶点的发现和研发分子生物学技术在药物研发中发挥了重要作用。

通过对癌症相关基因和蛋白质的研究，科学家发现了许多与癌症发生和发展密切相关的靶点。

这些靶点可以作为潜在的药物治疗对象，帮助研发出更加针对性和有效的抗癌药物。

四、免疫治疗的开拓和创新分子生物学对免疫治疗的开拓和创新起着重要作用。

免疫治疗是一种通过激活和增强机体免疫系统来消灭癌细胞的方法。

利用分子生物学技术，可以研究和改造免疫相关基因和蛋白质，增强机体的抗癌能力，为免疫治疗提供新的途径和策略。

五、癌症遗传学的研究和防治分子生物学在癌症遗传学的研究和防治方面有着重要的应用价值。

通过对癌症的家族遗传病例的研究，可以揭示不同基因和环境因素对癌症易感性的影响，并为个体化防治提供科学依据。

综上所述，分子生物学在癌症研究中的应用具有重要的意义。

通过对基因突变、肿瘤标志物、药物靶点、免疫治疗和癌症遗传学等方面的研究，可以更好地了解癌症的发生机制，提高癌症的早期诊断和治疗水平，为癌症防治工作提供科学依据和技术支持。