单核细胞增生李斯特氏菌多位点序列分型

单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究引言：单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种潜伏在食品中常见的致病菌，能引起严重的食物中毒，威胁着人类的健康与生命安全。

因此，研究和发展一种快速、高效的检测技术对于食品安全至关重要。

本文旨在探讨目前关于单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术的研究进展，并为进一步的研究和应用提供参考。

一、单核细胞增生性李斯特菌简介单核细胞增生性李斯特菌是一种革兰氏阳性菌，能在广泛的温度（0-45℃）和pH（4.4-9.6）范围内生长，且具有金属抗药性。

在食品中，该菌可以通过肉类、蔬菜和奶制品等途径传播，使其成为食品安全的重要隐患之一。

由于该菌对常规的煮沸和加热处理具有一定的抵抗能力，因此需借助有效的检测技术对其进行快速、准确的检测。

二、传统检测方法的局限性目前常用的单核细胞增生性李斯特菌检测方法主要包括传统培养方法、蛋白酶结合效应（ELISA）和分子生物学方法等。

然而，这些方法存在着以下局限性：1. 传统培养方法耗时长，需要较长的培养时间才能获得结果，无法快速检测；2. ELISA方法虽然具有较高的灵敏度和特异性，但其需要复杂的样品处理和实验步骤，使得检测过程繁琐；3. 分子生物学方法虽然能够提供较快的检测结果，但其仪器成本高，技术要求较高，限制了其在实际应用中的推广。

三、快速检测技术的研究进展随着科学技术的发展，研究人员不断探索和开发更为快速、准确的单核细胞增生性李斯特菌检测技术。

以下是几种常见的快速检测技术：1. 荧光定量聚合酶链反应（qPCR）技术：该技术以其高效、精确和快速的特点，被广泛应用于单核细胞增生性李斯特菌的检测。

qPCR技术可以快速扩增和定量样品中的特定基因片段，结合荧光定量技术实现李斯特菌的快速检测和定量。

2. 微生物芯片技术：微生物芯片是基于生物芯片技术的一种新型检测平台，可实现对多种菌种的快速识别和检测。

食品中单核细胞增生性李斯特氏菌耐药性与分子分型研究作者：逯岩来源：《中国卫生产业》 2014年第21期逯岩辽宁省抚顺市疾病预防控制中心，辽宁抚顺 113006[摘要] 目的了解单核细胞增生性李斯特氏菌（L．monocytogenes LM）的耐药性质以及分子分型的具体特点，探讨耐药表型与PFGE基因组型之间所具备哪些关联。

方法采取自2011—2013年期间我市各区的熟食、牲畜肉类、以及海鲜水产品等食品中采取80株LM,采用微量肉汤稀释法观察抗生素的敏感性。

结果发现16.25％（13/80）的菌株存在耐药。

结论在所选取的LM存在一定的耐药性,LM的PFGE分型与其药敏分型无对应关系。

[关键词] 单核细胞增生性；李斯特氏菌；耐药性；分子分型[中图分类号] R852 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2014）07（c）-0031-021 资料与方法1.1 一般资料在2011年3月—2013年3月期间，主要采用我市的熟食、牲畜生肉类、速冻海鲜水产品，以及各个类型的凉拌菜作为主要研究对象，在选取的食品中采取80株LM,具体食物来源渠道详见表1。

1.2 研究方法1.2.1微量肉汤稀释法通过采用微量肉汤稀释法观察抗生素的敏感性,同时采用PFGE进行分子分型。

[1]按照美国公司临床试验标准推荐的LM药敏试验原则，并相应结合临床使用药物数量共计选择15种抗生素，推荐使用美国Bio-Rad公司的脉冲场电泳仪仪器，同时采用微量肉汤稀释法进行试验，详细操作步骤需要按照说明书严格执行。

1.2.2 PFGE分型方法 PFGE分型方法需要按照参考文献执行。

[1]耐药谱与PFGE型别关系的分析：对菌株的每种耐药谱分别统计其对应的PFGE型别数目，分析比较两者之间的关系。

1.2.3结果判定标准统计软件：BioNumerics分析软件；版本：7.1；PFGE图谱采用软件BioNumerics进行分析处理，选用Nice-UPGMA方法进行分析，同源性为100%的为同一PFGE型，小于100%为不同的PFGE型。

龙源期刊网 单核细胞增生李斯特菌检测技术是什么作者：周林来源：《学习与科普》2019年第31期单核细胞增生李斯特菌包含在食源性致病菌范围当中。

就目前来看，免疫学检测方法和分子学检测方法是很多单增李斯特菌检测方法中使用最频繁的两种方法。

免疫学检测方法具有操作简便、时间短的特点，然而其非常依赖高特异性的抗体，结果容易出现失误，需要对检测结果进行详细判定。

和免疫学检测法相比，分子学检测方法具有灵敏度高、省时省力等特点，然而分子学检测方法在使用过程中需要较多的操作经验，同时不能在大批量检测中应用。

一、单核细胞增生李斯特菌概述（一）生物学特征单核细胞增生李斯特菌是一种革兰阳性短杆菌，其对营养的需求量较少，生长温度通常最低不能低于2摄氏度，最高不能超过42摄氏度，同时可以在弱酸、弱碱和6.5%NaCl肉汤中得到快速成长，并且能够形成β-溶血。

在其生长过程中还可以发酵出很多种糖类物质，按照O抗原以及H抗原能够分解成十三中血清型，其中1/2a与4b这两种类型在致病菌株中的占比最大。

（二）污染源及流行病学单核细胞增生李斯特菌是自然界中常见的一种致病菌，抗冻能力非常强，其主要传播路径是通过粪-口这种方式进行。

健康人粪便中的单核细胞增生李斯特菌携带率通常为0.6%至16.0%，然而奶制品、水产品以及家禽中均携带相应的单核细胞增生李斯特菌。

另外，单核细胞增生李斯特菌通过胎盘、黏膜、性以及产道鞥部位都可以进入到体内，从而导致感染。

单核细胞增生李斯特菌的致病性与其具有的毒作用、宿主的免疫状况以及年龄具有密不可分的关系，宿主的细胞免疫可以有效的解除单核细胞增生李斯特菌中存在的病菌。

各种免疫力弱的人群都属于易感人群，比如新生儿、四十岁以上的成人等。

健康成人感染后会出现和感冒相似的情况，然而其他免疫力功能较低的人可能会出现更加严重的症状，乃至会直接死亡。

二、相关检测技术（一）聚合酶链反应技术就目前来看，聚合酶链反应技术得到了广泛的普及与运用。

单核细胞增生性李斯特氏菌溶血素基因克隆及序列分析任艳红;李一经;王新生;姜宗敏【期刊名称】《东北农业大学学报》【年(卷),期】2004(035)001【摘要】构建单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria Monocytogenes,LMO)溶血素基因重组质粒.文章采用PCR方法扩增出LMO 0586株溶血素(Hemolysin,hly)基因,将其克隆到pMD18-T中,转化E.coil TGI.经酶切及PCR鉴定,而后进行测序.hly 基因体外扩增产物大小约为1 646 bp.重组质粒经酶切及PCR鉴定表明为正确重组子.核苷酸序列鉴定表明,其核苷酸序列与国外报道的LMO F6789株、LMOF2365株同源性分别为99.70%和99.39%.推导出的氨基酸序列与其相应菌株比较,同源性分别为99.82%和98.90%.在国内首次克隆到LMO hly全基因,为研究hly 的功能和探讨hly蛋白作为特异性诊断靶抗原的研究奠定了基础.【总页数】4页(P46-49)【作者】任艳红;李一经;王新生;姜宗敏【作者单位】东北农业大学动物医学院,黑龙江,哈尔滨,150030;东北农业大学动物医学院,黑龙江,哈尔滨,150030;内蒙古乌兰察布盟兽医卫生防疫站;东北农业大学动物医学院,黑龙江,哈尔滨,150030【正文语种】中文【中图分类】Q785;Q78;Q939.1【相关文献】1.食品中单核细胞增生性李斯特氏菌耐药性与分子分型研究 [J], 逯岩2.单核细胞增生性李斯特氏菌溶血素基因克隆及原核表达载体构建 [J], 任艳红;李一经;王新生3.单核细胞增生性李斯特氏菌virR和mprF基因分布 [J], 李欣华;韩军;于宏伟;贾英民4.实时定量 PCR 检测食品中单核细胞增生性李斯特氏菌 [J], 肖莉;左泽彦5.单增李斯特氏菌溶血素基因的克隆及原核表达 [J], 吴晓薇;徐成刚;马保华;江经纬;叶贺佳;区燕宜;徐小芹;廖明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

单核细胞增生李斯特氏菌生化鉴定
李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性杆菌，是一种常见的细菌性食物中毒病原体。

单核细胞增生组织均为生化鉴定的一种常见方法。

以下是李斯特氏菌生化鉴定的一些特征：
1. 嗜冷性：李斯特氏菌生长适宜温度为2-45℃，菌株能够在4℃下生长，并在冷藏食品中繁殖。

2. β-溶血素产生：李斯特氏菌能够产生β-溶血素，可以通过血琼脂（Blood agar）培养基上的溶血环进行观察。

3. 乳酸发酵：李斯特氏菌是一种革兰氏阳性乳酸菌，能够进行乳酸发酵。

可以使用乳糖发酵基质（Lactose fermentation medium）进行鉴定，如果产生乳酸则为阳性。

4. 半胱氨酸脱羧：李斯特氏菌具有半胱氨酸脱羧酶活性，可以将半胱氨酸转化为硫代氨基酸。

可使用兰氏差异培养基（LDC medium）进行鉴定。

5. 半乳糖酶活性：李斯特氏菌具有半乳糖酶活性，可以将乳糖转化为半乳糖。

可使用半乳糖发酵基质（Rhamnose fermentation medium）进行鉴定。

此外，李斯特氏菌还可以进行PCR扩增目标基因进行鉴定，
如16S rRNA基因、Internal Transcribed Spacer（ITS）区域等。

需要指出的是，单纯进行生化鉴定可能存在一定的误判率，结合其他检测方法可以提高鉴定的准确性。

此外，由于李斯特氏菌在环境中广泛存在，饮食中也常常带菌，所以对于临床病例的确诊还需要结合患者的临床表现、流行病学调查等综合分析。

单核细胞增生李斯特菌培养方法前言本文档旨在介绍一种关于单核细胞增生李斯特菌（L is te ri am on oc yt o ge ne s）的培养方法。

这种培养方法可以帮助研究人员在实验室中有效地培养和研究单核细胞增生李斯特菌，提供便利的实验操作流程和相关规范。

材料和试剂-培养基：大肠杆菌肉汤培养基（LB Br ot h）。

-平板培养基：L BA ga r平板。

-培养器具：试管、枪口鳌头瓶、平板培养基瓶。

-紧缩酶（R es tr ic ti o nE nz ym es）：用于D NA修饰。

步骤1.准备试管：将适量的LB Br ot h培养基加入试管中，每株文化需要一个试管。

试管要标记清楚，以便记录。

2.孵育菌种：将单核细胞增生李斯特菌取出，置于L BA ga r平板上，静置于37°C培养箱中孵育12-16小时。

3.菌种接种：从平板上挑取一小块单核细胞增生李斯特菌菌落，用枪口鳌头瓶内的紧缩酶捉摄菌落悬液，均匀地滴入LB Br oth培养基试管中。

4.培养：将接种的试管放入37°C恒温培养箱中，培养12-16小时。

在培养过程中，营养条件适宜的单核细胞增生李斯特菌会迅速繁殖生长。

5.存储：选择健康生长、菌量适宜的菌株，用含有20%甘露醇的L B Br ot h培养基制备菌液，并将其分装保存于枪口鳌头瓶中，并在-80°C低温冰箱中保存，确保菌株的长期保存。

结论本文档提供了一种针对单核细胞增生李斯特菌的培养方法。

通过遵循上述步骤，我们可以在实验室中成功培养和研究单核细胞增生李斯特菌。

这一方法的重要性在于为相关研究提供了可靠的实验操作流程，并且可以在不同实验室间进行标准化操作。

希望本文档能够对相关研究工作者提供帮助，并促进单核细胞增生李斯特菌领域的研究进展。