凯基抗酒石酸酸性磷酸酶染液试剂盒

碱性磷酸酶（ALP）测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中的碱性磷酸酶（ALP）的活性。

1.1包装规格1.2主要组成成分试剂1主要组分：AMP缓冲液 42 0mmol/L试剂2主要组分：4-硝基苯磷酸二钠 56mmol/L2.1外观2.1.1试剂1应为无色或淡黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物。

2.1.2试剂2应为无色或淡黄色透明溶液，无混浊，无未溶解物。

2.2装量液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度：ALP试剂盒在波长395～415nm处测定试剂的空白吸光度值，应不大于0.8。

2.3.2试剂空白吸光度变化率：ALP试剂盒在波长395～415nm处测定试剂的空白吸光度变化率，应不大于0.0050。

2.4分析灵敏度测试120U/L碱性磷酸酶时，吸光度变化率应不小于0.01。

2.5准确度用本公司ALP试剂盒和已上市ALP试剂盒同时测定40个临床样本，相关系数r2应不小于0.95，在[20，100]U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±10U/L；在(100，800]U/L区间内，线性相对偏差应不超过±10%。

2.6精密度2.6.1重复性重复测试（120±12）U/L的样本，所得结果的变异系数CV应不大于5%；2.6.2批间差测试（120±12）U/L的样本，所得结果的批间相对极差应不大于10%。

2.7线性范围ALP试剂盒在[20，800]U/L范围内，线性相关系数（r）应不小于0.990；在[20，100]U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±10U/L；在(100，800]U/L区间内，线性相对偏差应不超过±10%。

2.8稳定性原包装的ALP试剂盒在2℃～8℃避光保存，有效期为12个月。

在ALP试剂盒有效期满后2个月内，分别检测2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果应符合各项目的要求。

7-AAD染色试剂盒凯基7-AAD染色试剂盒(Cell Apoptosis 7-AAD Detection Kit)Cat number：KGA For Research Use OnlyStore at4℃for one yearExpire date：A．试剂盒说明7-AAD （7-amino-actinomycin D）是一种核酸染料，它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD标记DNA的强弱，将细胞分为三群：7-AAD强为死亡细胞，7-AAD弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。

7-AAD同PI 有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的最佳替代品，可与Annexin V-EGFP/FITC/PE联合使用。

本试剂盒适用于培养的细胞染色，可应用于荧光显微镜、激光共聚焦计或流式细胞仪检测。

二、储存条件组分KGA219（100 assays）7-AAD染液0.5 mL 4℃,避光10×Assays Buffer 5 mL4℃1×10倍。

三、试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪、激光共聚焦或荧光显微镜：激发波长546nm，发射波长647 nm微量移液器、1.5m L Microtube、载玻片四、使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。

2．7-AAD避光保存及使用。

3．7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。

4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。

五、操作方法1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用胰酶消化收集用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；2．加入5μL 7-AAD染液，混匀；室温、避光、反应5～15min；3．加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞；4．请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。

土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒使用说明货号:BC0280规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。

通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。

产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

用前加50mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。

（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。

操作步骤：催化反应：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。

10000rpm室温离心10min，取上清液置于冰上待测。

显色反应：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。

2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸馏水，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。

3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。

4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A测定管。

如钼酸铵-硫酸溶液，用 于与水解产物反应生成
有色络合物。
用于提取植物组织中的 酸性磷酸酶。
用于调节实验溶液的pH 值。
03
实验操作过程
实验步骤一：样本制备
准备不同浓度的酸性磷酸酶溶液，以 便后续实验对比。
准备适量的底物溶液，以备后续使用。
将样本分别置于离心管中，标记好浓 度和编号。
实验步骤二：显色反应
中孵育15分钟。
02
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4. 加入4-氨基安替比林和铁 氰化钾，混匀。
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5. 用分光光度计测量各试管 在550nm处的吸光度。
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材料与试剂
实验材料
新鲜植物组织样品
如菠菜叶片、豌豆叶片等。
缓冲液
用于保持实验环境的pH稳定。
实验试剂
酸性磷酸酶溶液
显色剂
无水乙醇
醋酸
用于催化磷酸酯的水解 反应。
混合液以及准确测量吸光度值等细节，以确保实验结果的准确性和可靠性。
04
结果分析
数据分析
01
02
03
实验数据整理
将实验过程中记录的数据 进行整理，包括不同时间 点的吸光度值、温度、pH 值等。
数据清洗
去除异常值和缺失值，确 保数据分析的准确性。
数据转换
对数据进行适当的转换， 如求平均值、中位数等， 以便更好地反映实验结果。
通过实验数据，可以得出酸性磷酸酶的浓度与显色深浅呈正相关，可以通过观察颜 色变化来间接判断酶的浓度变化。
结果应用与意义
酸性磷酸酶在生物学、医学和农业等 领域具有广泛的应用价值，例如在骨 代谢、癌症诊断和治疗以及植物抗病 研究中都发挥着重要作用。
本实验结果可以为这些领域的研究提 供参考，帮助人们更好地了解酸性磷 酸酶的性质和作用机制，从而为相关 研究和应用提供有益的启示。

2019-2020学年湖南省四校高三（下）联考生物试卷（2月份）副标题题号一二总分得分一、单选题（本大题共6小题，共6.0分）1.抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）是一种含铁蛋白，在破骨细胞和活化的吞噬细胞中表达。

测定血清中TRACP浓度，有助于了解骨代谢状况。

下列相关叙述正确的是（）A. 可用双缩脲试剂来检测破骨细胞中TRACP的氨基酸含量B. 重金属盐作用可直接使TRACP的氨基酸排列顺序发生改变C. TRACP基因及相关mRNA只存在于吞噬细胞、破骨细胞中D. 细胞中内质网、高尔基体的参与使TRACP具有特定的功能2.因发现控制“昼夜节律”分子机制，三位美国科学家获诺贝尔生理学奖。

PER、TIM基因是控制生命体昼夜节律的基因，PER基因编码的蛋白质在细胞核中夜间累积，而白天降解。

下列叙述错误的是（）A. PER蛋白是大脑皮层作为自动节律性中枢选择性表达的产物B. 细胞核的核孔对于通过的物质既有大小限制也有选择透过性C. 若抑制TIM蛋白的合成，则PER蛋白不能在细胞核中积累D. PER蛋白的含量升高抑制PER基因的表达实现生物节律性3.下列关于生命活动调节与人体内环境及稳态关系的叙述，正确的是（）A. 内环境中的血浆、淋巴、组织液等成分稳定→机体达到稳态B. 饮水不足，内环境渗透压升高，抗利尿激素增加→机体稳态失调C. 组织细胞的代谢活动减弱时→生成与回流的组织液中CO2的含量相等D. 注射等渗透压的5%的葡萄糖溶液→血浆中胰岛素/胰高血糖素的比值增大4.免疫系统通过多个检查点或“免疫刹车”来避免免疫系统的过度激活，CTLA4和PD-1是T细胞上的两个重要的检查点。

CTLA4检查点的功能（阻止T细胞被激活）类似于不让汽车发动起来，而PD-1检查点的功能（抑制T细胞的活性）类似于让跑动的汽车停下来。

下列有关说法错误的是（）A. CTLA4检查点和PD-1检查点对T细胞的作用机理不同B. CILA4检査点和PD-1检查点的存在能一定程度上避免引起自身免疫性疾病C. 通过调节免疫细胞活性的免疫检查点疗法治疗癌症无副作用D. 机体对癌细胞进行特异性免疫主要通过T细胞来完成5.2022年北京冬奥会吉祥物“冰墩墩”，大熊猫是其设计原型。

碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。

测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。

2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。

3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。

5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。

在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。

−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。

AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。

试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。

7.4试剂准备：试剂为即用式。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

Qu Renfei1, Mai Yuying2, Chen Xiaowei1, Hu Huanying1, Chen Guozhi1, Li Dongdong1, Liao Hongbing2 (1Guangxi Key Laboratory of Oral and Maxillofacial Rehabilitation and Reconstruction, Guangxi Clinical Research Center for Craniofacial Deformity, Guangxi Key Laboratory of Oral and Maxillofacial Surgery Disease Treatment, Medical Science Experimental Center of Guangxi Medical University, 2Department of Prosthodontics, College of Stomatology, Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China)
曲任飞，男，1992 年生， 山东省荣成市人，汉族， 广西医科大学在读硕士， 主要从事牙颌面部硬组织 材料与组织工程学研究。
通讯作者：廖红兵，博士， 教授，广西医科大学附属 口腔医学院口腔修复科， 广西壮族自治区南宁市 530021
文献标识码:A 投稿日期：2019-06-04 送审日期：2019-06-11 采用日期：2019-07-27 在线日期：2019-10-24
Abstract BACKGROUND: Preliminary study found that polylactic acid composite material could accelerate the bone construction rate, and the underlying mechanism still needs to be studied further. OBJECTIVE: To investigate the effect of lactic acid at different concentrations on osteoclast differentiation of mononuclear cells in mice. METHODS: Mouse RAW264.7 cells were cultured in DMEM with 0 (control group), 5, 10 and 20 mmol/L lactic acid, respectively, under the induction of 50 μg/L RANKL for 5 days. The effect of lactic acid concentration on the cell proliferation rate was analyzed by cell counting kit-8 assay. Tartrate resistant acid phosphatase positive polykaryotic cells were stained and counted with tartrate resistant acid phosphatase staining kit. mRNA expression levels of acid phosphatase 5, nuclear factor of activated T-cells 1 and RANK were detected by RT-PCR. Protein expression levels of cathepsin K and nuclear factor of activated T-cells 1 were detected by western blot assay. RESULTS AND CONCLUSION: (1) 5 mmol/L lactic acid produced the highest proliferation rate of raw264.7 cells, whereas the 20 mmol/L lactic acid produced lowest cell proliferation rate. Compared with the control group, the proliferation rate of raw264.7 cells by 10 mmol/L lactic acid was insignificant. (2) Tartrate resistant acid phosphatase staining showed the highest positive rate and mRNA expression levels of acid phosphatase 5, nuclear factor of activated T-cells 1 and RANK under the condition of 10 mmol/L lactic acid. (3) With the increase of lactic acid concentration, the expression level of cathepsin K increased, while the expression level of nuclear factor of activated T-cells 1 was on a decline. (4) Under the current experimental conditions, with the increase of lactic acid concentration, the ability of lactic acid to promote the osteoclast differentiation of mouse RAW264.7 cells is firstly increased and then decreased, and 10 mmol/L lactic acid was the optimal concentration to promote the osteoclast differentiation of mouse RAW264.7 cells. Lactic acid can affect the osteoclastic differentiation of mouse raw264.7 cells by nuclear factor of activated T-cells 1 in nuclear factor-κB signaling pathway. Key words: lactic acid; mononuclear cells; osteoclasts; differentiation; nuclear factor of activated T-cells 1; cell proliferation; the National Natural Science Foundation of China Funding: the National Natural Science Foundation of China, No. 81860201 and 81560190 (both to LHB)

绝经后骨质疏松症相关骨代谢指标的分析杨立顺;袁海生;沈兴娅;康建华;王艾云【摘要】目的观察调控破骨细胞活性的主要因子和骨吸收及骨形成标志物在绝经后骨质疏松症(PMOP)患者体内水平的变化,为临床早期防治骨质疏松提供依据.方法测定38例PMOP患者、50例骨量减低患者及94名绝经后骨量正常者(正常对照组)血清骨保护素(OPG)、核因子-kβ受体活化因子配体(RANKL)、骨源性碱性磷酸酶(BAP)、血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)-5b、雌二醇(E2)、血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平.剔除年龄、E2因素后对部分指标进行偏相关分析;对所有指标进行独立危险因素分析及二分类Logistic回归分析;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价诊断准确度.结果 PMOP组、骨量减低组与正常对照组之间E2、Hcy、OPG、RANKL、TRACP-5b、BAP水平差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01、P<0.001);PMOP组BAP水平明显高于骨量减低组及正常对照组(P<0.001),E2水平则明显低于骨量减低组(P<0.001)及正常对照组(P<0.05).正常对照组与骨量减低组之间E2、BAP水平无明显差异(P＞0.05).控制年龄因素后,E2与TRACP-5b、BAP呈负相关[r值分别为-0.198(P=0.007)、-0.157(P=0.035)];控制年龄、E2因素后,Hcy与RANKL、TRACP-5b、BAP呈正相关(r值分别为0.368(P<0.001)、0.193(P=0.009)、0.224(P=0.002)],与OPG呈负相关(r值＝-0.330,P<0.001).OPG与TRACP-5b呈负相关(r=-0.458,P=0.008),RANKL与BAP呈正相关(r=0.228,P=0.044).E2、Hcy、OPG、RANKL、TRACP-5b、BAP 诊断骨质疏松的ROC曲线下面积分别为0.819、0.686、0.803、0.776、0.731和0.719.骨质疏松影响因素的Logistic回归分析表明,独立于年龄,E2、OPG、TRACP-5b、Hcy对骨质疏松有显著影响,优势比(OR)分别为0.901、0.046、4.165、9.112.结论 TRACP-5b、Hcy和BAP对骨质疏松症的诊断准确度较好,可以作为临床早期防治PMOP的依据.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2013(028)008【总页数】5页(P685-689)【关键词】骨保护素;核因子-kβ受体活化因子配体;骨源性碱性磷酸酶;抗酒石酸酸性磷酸酶;雌二醇;同型半胱氨酸;骨代谢;绝经后骨质疏松症【作者】杨立顺;袁海生;沈兴娅;康建华;王艾云【作者单位】天津市中医药大学附属北辰中医医院检验科,天津,300400;天津市中医药大学附属北辰中医医院检验科,天津,300400;天津市中医药大学附属北辰中医医院检验科,天津,300400;天津市中医药大学附属北辰中医医院检验科,天津,300400;天津市中医药大学附属北辰中医医院检验科,天津,300400【正文语种】中文【中图分类】R446.1绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis，PMOP)为高转换型骨质疏松症。

凯基BCA蛋白含量检测试剂盒一、试剂盒说明BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。

检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。

三、操作步骤2.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；3. 各孔加入200μL BCA工作液；4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。

以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5.稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6.根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。

B．分光光度计测定2.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；3.各管加入1000μL BCA工作液；4.各管充分混匀，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。

以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5.稀释待测样品至合适浓度，样品稀释液总体积为100μL，加入BCA工作液1000μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6.根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（100μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。

、注意事项1.配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。

凯基Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit）Cat number：KGA For Research Use OnlyStore at4℃ for one yearExpire date：一、 试剂盒说明在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。

Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

与FITC的绿色荧光信号相比，EGFP的绿色荧光信号具有信号强，不易淬灭，稳定性高等优点，故本试剂盒采用EGFP作为荧光标记探针。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。

因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。

二、 试剂盒组份组份Cat: KGA10110 assays Cat: KGA10220 assaysCat: KGA10350 assaysCat: KGA104100 assays储存条件AnnexinV-EGFP 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光Propidium Iodide 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光Binding Buffer 5 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 4℃三、 试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液四、 使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。

广东药科大学学报Journal of Guangdong Pharmaceutical University Mar.2024,40(2)基于STING/NF-κB信号通路探讨茯苓酸对去卵巢小鼠骨质疏松的作用黄成硕1，陈驹2，吴晓静3，郑锦畅1，梁振1，郭伟雄1，陈继铭1（1.广东医科大学附属医院骨科中心，广东湛江524001；2.广东医科大学附属医院药学部，广东湛江524001；3.广东医科大学附属医院培训部，广东湛江524001）摘要：目的评价茯苓酸通过调控STING/NF-κB信号通路对去卵巢小鼠骨质疏松的影响。

方法取40只SPF级雌，10µg/kg）和茯苓酸组（FL，5mg/kg），性C57BL/6小鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（OVX）、17β-雌二醇组（E2通过切除双侧卵巢建立小鼠骨质疏松模型。

8周实验结束后分别检测血清碱性磷酸酶（ALP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）水平，观察股骨远端形态学和胫骨（皮质骨）骨形成动态变化，测定右侧股骨的生物力学和STING/NF-κB通路关键蛋白表达水平。

结果与OVX组比较，E组和FL组小鼠血清StrACP和ALP水平明显降低（P<0.01），2股骨远端骨小梁面积百分数明显增加（P<0.01），皮质骨双荧光间距明显减少（P<0.01），股骨最大载荷和断裂载荷明显升高（P<0.01），股骨STING和p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。

结论茯苓酸通过调控STING/NF-κB信号通路抑制骨吸收和促进骨形成，从而有效减少去卵巢小鼠骨丢失。

关键词：茯苓酸；小鼠；卵巢摘除；骨质疏松；17β-雌二醇中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：2096-3653（2024）02-0119-05DOI:10.16809/ki.2096-3653.2023122001Effect of pachymoic acid on osteoporosis in ovariectomized mice based on STING/NF-κB signaling pathwayHUANG Chengshuo1,CHEN Ju2,WU Xiaojing3,ZHENG Jinchang1,LIANG Zhen1,GUO Weixiong1,CHEN Jiming1*(1.Orthopaedic Center,Affiliated Hospital of Guangdong Medical University,Zhanjiang524001,China;2.Department of Pharmacy,Affiliated Hospital of Guangdong Medical University,Zhanjiang524001,China;3.Training department,Affiliated Hospital of Guangdong Medical University,Zhanjiang524001,China)*Corresponding author Email:**************Abstract:Objective To evaluate the effect of pachymoic acid on osteoporosis in ovariectomized mice by regulatingSTINGNF-κB signaling pathway.Methods Forty SPF female C57BL/6mice were divided into sham operation,10µg/kg)and pachymoic acid group(FL,5mg/kg),and group(Sham),model group(OVX),17β-estradiol group(E2the osteoporosis model of mice was established by bilateral ovariectomy.After8weeks,the levels of serum alkalinephosphatase(ALP)and tartrate-resistant acid phosphatase(StrACP)were detected,the morphology of distal femurand the dynamic changes of tibia(cortical bone)bone formation were observed,and the biomechanics of the rightfemur and the expression levels of key proteins in STING/NF-κB pathway were determined.Results Compared withgroup and FL group were significantly lowered(P<0.01),the OVX group,the levels of serum StrACP and ALP in E2area percentage of trabecular bone in distal femur was increased(P<0.01),and the double-fluorescence distancebetween cortical bones was decreased(P<0.01).The maximum load and fracture load of femur were significantlyelevated(P<0.01),and the expression levels of STING and p-NF-κB p65/NF-κB p65protein in femur weresignificantly increased(P<0.01).Conclusion Pachymoic acid can inhibit bone resorption and promote boneformation by regulating STING/NF-κB signaling pathway,thereby effectively reducing bone loss in ovariectomized mice.Key words:pachymoic acid;mice;ovariectomization;osteoporosis;17β-estradiol收稿日期：2023-12-20基金项目：广东省医学科学技术研究基金项目（B2021148）；2021年度广东省科技专项资金（“大专项+任务清单”）竞争性分配项目（2021A05234）；湛江市非资助课题（2020B01275）作者简介：黄成硕（1986－），男，副主任医师，主要从事骨科疾病诊治，Email：*****************通信作者：陈继铭（1980－），男，主任医师，主要从事骨科疾病诊治，Email：**************。

土壤磷酸酶测定（酸性、中性和碱性磷酸酶）1. 分析意义土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。

在pH4-9的土壤中均有磷酸酶。

积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。

研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。

磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。

2. 试验原理Kroll等（1955）最早提出用苯基磷酸盐作基质，以酚的释放量表示磷酸酶活性。

测定磷酸酶主要根据酶促作用生成的有机基团量或无机磷量计算磷酸酶活性。

前一种通称为有机基团含量法，是目前较为常用的测定磷酸酶的方法。

后一种称为无机磷含量法。

研究证明，磷酸酶有三种最适pH：4-5，6-7和8-10。

所以，测定酸性、中性和碱性反应土壤的磷酸酶，要提供相应的pH缓冲液才能测出该土壤的磷酸酶最大活性。

测定磷酸酶常采用的pH缓冲体系有醋酸盐缓冲液（pH5.0-5.4），柠檬酸盐缓冲液（pH7.0），三羟甲基氨基甲烷缓冲液（pH7.0-8.5），硼酸缓冲液（pH9-10）。

测定磷酸酶时，用各种磷酸一酯作为基质。

常用的基质有苯磷酸二钠、酚酞磷酸钠、甘油磷酸钠、α或β萘酚磷酸钠、ρ-硝基苯磷酸钠等。

3. 试剂配制a. 0.5％磷酸苯二钠（用缓冲液配制）；b. pH5醋酸盐缓冲液、pH7柠檬酸盐缓冲液、pH9.4硼酸盐缓冲液；c. 氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2.6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10mL 96％乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。

保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用；d. 酚的标准溶液：酚原液－取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中；酚工作液－取10mL 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01毫克酚）；e. 甲苯；f. 0.3％硫酸铝溶液。

4. 标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11和13mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mL缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，即得0.0002、0.0006、0.0010、0.0014、0.0018、0.0022和0.0026mg ·g -1浓度的酚标准溶液梯度。

产品简介： 碱性磷酸酶（简称 ALP 或 AKP）为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内。细胞
中的碱性磷酸酶，在碱性的缓冲液中，催化底物水解，生成物进而与一种稳定的黑色沉淀。 经本试剂盒染色后，阳性者胞浆中出现棕褐色或咖啡色颗粒。
本试剂盒采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性。此法以天然存在的 beta-甘油磷酸钠 为底物，经酶水解释放出磷酸，磷酸根与钙离子结合为磷酸钙沉淀，再依次被置换为磷酸钴 和硫化钴，最终产物为黑色硫化钴沉淀。
结果分析： 酶活性部位：
黑色沉淀
对照片处理方法： 切片入孵育液前，先经碘、5%硫代硫酸钠溶液各 3 分钟，充分水洗后，用试剂 D 取代
试剂 A，按上述步骤处理即可。
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试剂盒以外自备试剂和仪器
● 蒸馏水
● 温箱或水浴锅

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电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
使用方法： 1、 石蜡切片脱蜡至蒸馏水。 2、 冰冻切片在丙酮-氯仿等量混合液中 4℃固定 2-5 分钟。 3、 切片入试剂 A，37℃孵育。冰冻切片 5-15 分钟，石蜡切片 2-12 小时。 4、 流水冲洗 2 分钟后入蒸馏水。 5、 入试剂 B，37℃，5 分钟。 6、 流水冲洗 5 分钟后入蒸馏水。 7、 试剂 C 用蒸馏水 50 倍稀释，即配即用。 8、 切片入试剂 C 稀释液 2 分钟。 9、 流水冲洗 10 分钟后入蒸馏水。 10. 冰冻切片用甘油明胶封片；石蜡切片常规脱水，透明，树胶封片。

补肾壮骨丸抗骨质疏松的药效学作用及机制探讨邢爽;康学【摘要】目的：探讨北京积水潭医院院内制剂补肾壮骨丸抗骨质疏松的药效学作用及其机制。

方法6个月龄雌性SD大鼠60只,随机分为正常对照组、模型对照组、补肾壮骨丸低(1.2 g/kg)、中(2.4 g/kg)、高(4.8 g/kg)剂量组以及阳性药雷洛昔芬组,每组10只。

双侧卵巢摘除术建立大鼠骨质疏松模型,去势手术1周后,补肾壮骨丸低、中、高剂量组及阳性药组分别灌胃给予不同剂量补肾壮骨丸混悬液及雷洛昔芬混悬液治疗12周,正常及模型对照组灌服等体积的生理盐水。

分别检测血清碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、甲状旁腺激素(PTH)、促甲状腺激素(CT)以及垂体-性腺轴相关激素雌二醇(E2)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量；测定骨密度、骨生物力学性能。

结果去势后,模型对照组血清ALP、TRAP、PTH活性显著升高(P<0.05或P<0.01),含量分别为(16.347±2.957)U/100 mL、(27.691±7.042)U/L、(45.829±17.007)pg/mL,CT水平显著下降,含量为(20.469±7.343)pg/mL,全股骨和股骨头骨密度为(0.1859±0.0137)、(0.1871±0.0193)g/cm2,股骨最大载荷为(63.448±17.540)N,最大挠度为(0.5848±0.1595)mm,均较正常对照组显著降低(P<0.05或P<0.01)；性激素E2和T含量显著降低(P<0.01),分别为(5.935±1.621)pg/mL、(3.382±1.405)ng/mL,促性腺激素LH和FSH水平明显上调(P<0.05),含量分别为(12.549±2.376)、(15.841±1.896)mU/mL；与模型对照组比较,补肾壮骨丸中、高剂量组ALP含量为(13.619±2.881)、(12.720±3.044)U/100 mL,TRAP含量为(20.904±6.454)、(19.933±5.988)U/L,PTH含量为(26.753±13.013)、(25.630±15.618)pg/mL,三者活性均显著下调(P<0.05或P<0.01)；高剂量组CT含量显著升高,为(28.350±7.827)pg/mL,中、高剂量组全股骨密度及高剂量组股骨头密度显著升高,分别为(0.2081±0.0113)、(0.2135±0.0139)、(0.2304±0.0290)g/cm2,高剂量组股骨最大载荷及挠度分别为(81.314±16.413)N、(0.7358±0.1488)mm,较模型组显著升高(P<0.05)；高剂量组E2、T显著升高(P<0.05或P<0.01),含量为(8.799±2.204)pg/mL、(5.086±1.668)ng/mL；中、高LH含量分别为(10.740±1.652)、(10.575±0.886)mU/mL,FSH含量分别为(13.244±2.089)、(13.348±2.170)mU/mL,二者水平均显著下调(均P<0.05)。

凯基质粒大提试剂盒说明书修改日期：20200706Cat Number：KGA1710Store at RT/-20℃ for 12 monthsFor Research Use Only一、产品简介凯基质粒大提试剂盒是将硅胶薄膜的优点与经典的强碱-SDS裂解细菌法结合，可在1h 获取高质量的质粒DNA。

本试剂盒利用特制的纯化柱简化了结合、洗涤和洗脱步骤，可同时处理多种样品。

获得的纯化质粒为高纯度级别，适用于酶切、PCR、测序及转化等要求。

二、产品组分三、操作步骤使用前请先在Washing buffer加入90 mL无水乙醇（10 assays），其余规格加入无水乙醇的体积请参照瓶身标签。

Solution I在使用前请将提供的全部RNase A加入，混匀，置于4℃保存。

如非特别指明，所有离心步骤均在室温下操作。

1. 接种新鲜的单个菌落到LB培养基（含适量抗生素），37℃震荡培养14-16小时。

收集菌液，10000 rpm离心3min，尽量吸除上清。

注意：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。

2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入10 mL Solution I (确保已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，会影响菌体裂解，导致质粒提取量和纯度偏低。

3. 向离心管中加入10 mL Solution II，温和地上下翻转5-10次室温放置2-4min。

注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏。

4.向离心管中加入14 mL Solution III，温和地上下翻转5-10次，室温放置3-5min，此时会出现白色絮状沉淀。

5.12000 rpm离心15 min，用移液器小心地将上清转移到干净离心管中，尽量不要吸出沉淀（若上清中还有白色沉淀，可再次离心后取上清）。