大鼠不同分离纯化方法对胰岛细胞丢失的影响

第29卷第3期2008年6月西安交通大学学报(医学版)Jo ur nal of X i an Jiao to ng U niv ersity (M edical Scie nce s)V ol.29N o.3Jun.2008技术方法大鼠不同分离纯化方法对胰岛细胞丢失的影响宋焕瑾,薛武军,李 杨,田晓辉,丁小明,冯新顺,田普训,丁晨光,靳占奎,宋 勇,牛晓丽(西安交通大学医学院第一附属医院肾病中心肾移植科,陕西西安 710061)摘要:目的 探讨提高大鼠胰岛细胞产量和纯度的最佳分离纯化方法。

方法 40只大鼠分为4组,每组10只。

A 组:H anks 液灌注+胶原酶V 消化+Fico ll400梯度纯化;B 组:组织剪碎研磨+筛网过滤;C 组:胶原酶V 灌注+Fico ll400梯度纯化;D 组:胶原酶V 灌注+筛网过滤。

对用四种不同方法分离纯化的结果进行比较。

结果 完全随机设计的方差分析显示,A 、B 、C 、D 组收获量及纯度比较均有显著性差异(P <0.05);组间多重比较显示,A 组收获量均高于B 、D 组(P <0.05),与C 组比较差异无统计学意义(P >0.05);A 组纯度与其他组比较均无显著性差异(P >0.05)。

结论 用胶原酶V 或H anks 液灌注,F icoll400梯度纯化法所收获胰岛细胞的产量和纯度较高,而且价格低廉,是一种较理想的胰岛细胞分离纯化方法。

关键词:胰岛细胞;分离;纯化;大鼠中图分类号:R355.6 文献标识码:A 文章编号:1679 8259(2008)03 0346 03Effects of different methods of isolating andpurifying rat islet cells on their lossSong H uanjin,Xue Wujun,Li Yang,T ian Xiaohui,Ding Xiaom ing ,Feng Xinshun,T ian Puxun,Ding Chenguang ,Jin Zhankui,Song Yo ng,Niu Xiao li (Departm ent of Kidney Tr ansplantation,the First Affiliated H ospital,M edical Scho ol o f Xi an Jiaotong Univ er sity,Xi an 710061,China)ABSTRAC T:Objective T o ex plo re the best me thod o f iso lat ing a nd pur ifying r at isle t cells to impr ov e theharv est a nd pur ity o f r at isle t cells.Methods F or ty r ats w er e divided into f our gr oups,w ith ten r ats per gr o up.Gr o up A :R at pancre ases wer e pe rf use d with Ha nks and digest ed by colla gens V ,islet cells wer e isolated and purified by gr adient F ico ll400.G r oup B:Pancr eases w er e c ut and gr o und,then f ilter ed w ith gr id.G r oup C:R at Pancre ases wer e per fused with co llag ens V ,islet cells wer e iso lated a nd pur if ied by g r adient Ficoll400.G ro up D :Ra t pa ncr eases w ere per f used w ith co llage ns V ,but f ilter ed by gr id.T he ha rv est and pur it y o f islet ce lls fr o m f our gr oups wer e co mpare d a nd ana lysed.Resu lts T he dif fer ences in the har vest and purity of isle t cells isolated andpurified by the f o ur m ethods (A ,B,C and D g ro ups)w ere significant by co mplete ly r andom var ia nce analy sis.Inter cla ss multiple co mpar iso n manifested that the har ve st in A g ro up was hig her than tha t in Gr o up B a nd D ,but not o bviously dif fer ent f ro m that in G ro up C.T he pur ity in A gr o up w as no t sig nif icantly dif fer ent fr o m that in other gr oups.Conclusion T he har vest and pur ity o f isle t ce lls iso lated thr o ug h Ha nks per fusion and/o rcolla genase V digestio n wer e higher tha n tho se of o ther me thods.T he cost o f this me thod is low er,so it sugg ests that it is a be tter m etho d f or islet ce ll iso lation.KEY WORDS:isle t cell;iso la tio n;pur if ica tio n;r at 收稿日期:2007 11 23 修回日期:2007 12 24基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.30471640;30571799)通讯作者:薛武军,教授,博士生导师,主任医生.E mail:XW 5886@作者简介:宋焕瑾(1971 ),男(汉族),博士研究生,主要从事器官移植临床及科研工作.E mail:sh jwn h@1型糖尿病主要因为胰岛细胞迅速被破坏,机体胰岛素分泌不足所致。

大鼠胰岛分离、培养条件的优化及miR-126表达的检测方法比较王玉琢;袁文俊;米志强;安小平;童贻刚【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2015(026)001【摘要】目的:优化SD大鼠胰岛细胞的分离、纯化和培养方法与条件,为研究miR-126在Ⅱ型糖尿病中的作用机制提供活性与功能良好的胰岛细胞及miR-126表达的检测方法.方法:水合氯醛腹腔注射麻醉SD大鼠,采用8 mL胶原酶Ⅴ(含DNase Ⅰ 100 U)逆行注射、原位消化后Hitopaque-1077梯度离心分离纯化SD 大鼠胰岛细胞,从培养后的胰岛细胞中提取总RNA,分别用加尾法和茎环法进行miR-126的反转录,实时定量PCR(qPCR)检测miR-126的表达量.结果:用该方法可从每只SD大鼠中分离、纯化得到胰岛细胞372±45个,胰岛细胞纯度＞90％,胰岛细胞存活率＞95％;用加尾法和茎环法qPCR检测miR-126的Cp值分别为34.56±2.56和32.47±2.01.结论:胶原酶Ⅴ(含DNase Ⅰ100 U)逆行注射、原位消化可有效避免因消化时胶状物质的产生而导致的胰岛细胞分离失败,Hitopque-1077梯度离心分离方法具有操作简单、便捷、成功率高等特点,可得到活性与功能较好的胰岛细胞;与加尾法相比,茎环法能够更灵敏地检测胰岛细胞miR-126的表达量.【总页数】5页(P102-106)【作者】王玉琢;袁文俊;米志强;安小平;童贻刚【作者单位】宁夏医科大学基础医学院,宁夏银川750004;宁夏医科大学基础医学院,宁夏银川750004;第二军医大学,上海200433;军事医学科学院微生物流行病研究所,北京100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,北京100071;军事医学科学院微生物流行病研究所,北京100071【正文语种】中文【中图分类】Q81;Q78【相关文献】1.大鼠骨髓间充质干细胞分离与培养条件的优化研究 [J], 晏丹;舒赛男2.三种大鼠胰岛分离纯化方法的比较 [J], 于湄;张雪莲;薛桂凤;杨金奎3.多种分离纯化大鼠胰岛细胞的实验方法比较 [J], 陈创奇;詹文华;汪建平;蔡世荣;兰平;吴小剑;贺德4.不同分离方法与培养条件下大鼠骨髓间充质干细胞生长增殖情况比较 [J], 王文;李静;王宗仁;张金洲;师长宏5.胰岛素治疗对糖尿病大鼠阴茎组织中miR-126、VEGF、eNOS表达的影响 [J], 胡睿;张威;欧宁静;梁震;杨永姣;刘莉;刘晓强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

文章编号: 1007-6611(2007)09-0845-03大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究吴东军1, 赵振林1, 王慧珍2, 张 栋2, 张 勇1, 张巧芬1 (1山西医科大学第二临床医学院普通外科, 太原 030001; 2山西医科大学生化与分子生物学实验室)摘要: 目的 优化胰岛细胞分离纯化的方法,提高胰岛产量、纯度和功能。

方法 本实验经胰管注射胶原酶、胰腺静止消化分离成年大鼠胰岛,葡聚糖离心纯化,获得胰岛细胞,进行记数和功能鉴定。

结果 纯化后胰岛收获量为7021 861 IEQ/胰腺(IEQ=胰岛当量,一个胰岛当量为一个150 m直径的胰岛),纯度达86%;胰岛形态结构完整,胰岛素释放试验显示胰岛细胞功能良好。

结论 细节优化可以显著提高胶原酶消化、葡聚糖不连续梯度离心分离胰岛的效率。

关键词: 胰岛; 分离纯化; 优化中图分类号: R 33 文献标识码: AIsolation and purification of islet cells in ratsWU Dong jun,ZHAO Zhen lin,W ANG Hui zhen,et al(D ep t of Gener al Surgery,Second Clinical M edical College,Shanx i M edical Univer sity,T aiyuan030001,China)Abstract: Obj ectiv e T o improv e output,purification and function of islet cells by optimizing isolat ion and purification methods. M ethod Rat islets w er e isolated with in situ ductal collagenase distentio n,stationary digestion and dex tran gradient separation.T he islet cells w er e counted,and the function was identified. Res ults After purificat ion,(7021 861)I EQ/pancreas were obtained, with an av erag e purit y of86%islets.T he isolated islets demonstrated a well preserved cell ultrastructure,and well r esponded to glu cose st imulation. Conclusion Detail optimization could improve the effectiv eness of stationar y digestion and dextran gr adient sepa ration of islet cells.Key words: islets of L angerhans; isolat ion and purification; optimizion由于饮食结构的不合理、遗传因素、以及环境因素,胰岛素依赖型糖尿病发病率逐年升高,面对该现象学者们提出新的治疗方案胰岛移植[1]。

成年大鼠胰岛分离纯化的实验研究张鑫;高居忠;王学明;许建军【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2003(024)003【摘要】为探讨成年大鼠胰岛分离、纯化的方法,为成人胰岛细胞的分离纯化奠定基础,采用胰管内注射胶原酶水浴孵化以及不连续密度梯度法进行成年Lewis大鼠胰岛分离纯化,并对获得的胰岛细胞通过体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验进行功能活性检测.分离后获得(938±218)个胰岛细胞,染色观察胰岛细胞形态完好.纯化后获得(802±181)个胰岛细胞,平均纯度为(68±11)%,纯化后细胞回收率为(85.9±5.9)%,纯化后细胞形态完好.体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,低糖情况下胰岛素分泌量为(2.53±0.18) mIU/L,高糖情况下为(5.41±0.31) mIU/L,两者相比有极显著性差异(P=0.001).低糖刺激下C肽分泌量为(7.51±1.09) ng/L,高糖情况下为(8.56±1.06) ng/L,具有极显著性差异(P=0.006).提示:采用胰管内胶原酶灌注水浴孵化进行成年大鼠胰岛分离及不连续密度梯度法纯化可获得较多的[(802±181)个]形态及功能完好的胰岛细胞,为临床进行成人胰岛分离纯化打下了基础.【总页数】3页(P314-316)【作者】张鑫;高居忠;王学明;许建军【作者单位】首都医科大学附属北京朝阳医院泌尿科;首都医科大学附属北京朝阳医院泌尿科;首都医科大学附属北京朝阳医院泌尿科;首都医科大学附属北京朝阳医院泌尿科【正文语种】中文【中图分类】R587.1【相关文献】1.大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究 [J], 章洁;李华;朱伟锋;许宝华;万福生2.半自动纯化法分离纯化成年猪胰岛细胞的实验研究 [J], 王珏;侯宗柳;李汝红3.大鼠胰岛分离纯化实验研究 [J], 刘杰;陈谦;翁俊;喻亚群;谭李军;王安阳;刘红4.成年大鼠胰岛的分离纯化及体外培养 [J], 刘惊涛;惠晓丽;王惠芳;刘靖芳5.成年猪和大鼠胰岛分离纯化的实验研究 [J], 黄跃南;吴德全;单世光;郭欣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一种改进的简便经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离提纯方法【摘要】目的: 探索一种简单、经济和稳定的胰腺腺泡分离纯化的新方法，并探讨其对细胞功能的影响. 方法: 16只SD大鼠随机分成改进方法组和内灌注方法组，戊巴比妥腹腔麻醉后，其中8只按改进方法迅速切取并剪碎胰腺组织后置于新鲜配制的细胞分离液中，37℃，CO2孵箱中孵育30 min，过滤获得细胞悬液， Hanks液(不含钙离子)清洗后获得胰腺腺泡细胞，另外8只采用内灌注方法获取胰腺腺泡细胞，然后进行细胞计数、活力测定、纯化鉴定和细胞内钙离子测定. 结果: 改进方法所获得的胰腺腺泡数量［(±)×106］、纯度［(78±6)%］与内灌注方法所获得的胰腺腺泡数量［(±)×106］、纯度［(79±7)%］比较无统计学意义()，而细胞活力［(93±4)%］显着高于内灌注方法［(84±3)%］()，细胞内钙离子浓度显着低于内灌注方法组(). 结论: 改进方法是一种稳定高效且对细胞活力及功能影响较小的胰腺腺泡细胞分离提纯方法.【关键词】胰腺/细胞学;腺泡细胞;细胞分离/方法0引言长期以来，胰腺腺泡细胞的分离、纯化都是非常棘手的难题. 从1978年Williams等创建了经典的胰腺腺泡细胞分离纯化方法［1］以来，人们从未停止对这一难题的探索和改进，采用各种办法进行改进. 这些方法虽然稳定、可靠，但实验步骤繁琐，费用昂贵，实验条件和设备要求高，甚至有些还可以影响细胞的生理状态，引起病理变化，影响实验结果的准确性，不便于推广应用. 本研究参照已有的国内外研究，对现有的胰腺腺泡细胞分离纯化方法进行改进，拟建立一种简单、经济和稳定的胰腺腺泡分离纯化的新方法.1材料和方法材料健康SD大鼠16只，雌雄不拘，体质量150～200 g (西安交通大学医学院动物中心). I型胶原酶(Sigma)，使用时以新鲜配制的Hanks液(不含钙离子)配制 g/L细胞分离液. 100 mL/L的小牛血清(四季青生物公司)DMEM组织培养液方法胰腺腺泡细胞的分离、纯化大鼠16只，术前12 h禁食，不禁水. 25 g/L戊巴比妥钠按每100 g体质量 mL进行腹腔内注射麻醉后，将其浸于750 mL/L乙醇中30 min消毒. 其中8只动物在无菌条件下，固定于超净工作台上，开腹后于肝脏下缘寻找十二指肠和胰腺，迅速切取胰腺约1 g (1 cm×1 cm)浸于100 mL/L小牛血清DMEM培养液中，洗净血液、去除脂肪和淋巴等组织后，将其移入盛有5 mL预热至37℃新鲜配置的细胞分离液的烧杯中，将胰腺组织剪碎为~ mm的小块，置于37℃， 50 mL/L CO2孵箱中孵育30 min，依次用100目筛网和200目筛网过滤得细胞悬液，Hanks液(不含钙离子)清洗两次，收集细胞加5 mL 100 mL/L小牛血清DMEM培养液混匀后移入培养瓶，置于37℃，50 mL/L CO2孵箱内. 另外8只动物，采用内灌注方法提取胰腺腺泡细胞培养［2］.细胞计数吸取20 μL细胞悬液，加到细胞计数板上，在倒置显微镜下(20×物镜)计数细胞数. 按公式计算，细胞数目=(4大格细胞数之和/4)×104×细胞原液量(mL).细胞活性测定(台盼蓝排斥实验)吸取2 μL 细胞悬液加入4 g/L台盼蓝5 μL，混匀后在3 min内计数活细胞和死细胞数目，计算细胞活性率/细胞总数）.腺泡细胞纯化与鉴定将细胞悬液调整到1×108～1×109个/L浓度后，制备细胞涂片，分别给予HE染色和酶原颗粒的亚甲蓝染色. 方法如下:涂片用亚甲蓝溶液染色后，以 moL/L醋酸盐缓冲液分色并用4 g/L钼酸胺溶液处理后观察，计算出腺泡细胞纯化率. 分别计数10个高倍视野的HE切片上的细胞数和亚甲蓝染色切片上的细胞数，计算出腺泡细胞纯化率.细胞内Ca2+测定将所获得的胰腺腺泡细胞用PBS洗两遍，调整细胞密度为5×108个/L，取2 mL加入，使其终浓度为5 μmoL/L，混匀，置入37℃水浴箱中避光孵育30~45 min，PBS洗3遍后加1mL PBS混匀，于流式细胞仪上检测，激发波长488 nm，随机测定单个胰腺泡细胞的荧光强度值，取10万个胰腺腺泡细胞的荧光强度值的平均值为每份标本的测定值.统计学处理: 数据均以x±s表示，切应用SPSS 统计软件进行独立样本t检验，有统计学意义.2结果细胞计数采用改进方法平均每克大鼠胰腺组织可提取细胞数量为(±)×106，与内灌注方法相比较无统计学意义（, 表1).表1不同方法分离胰腺腺泡细胞4项指标的比较细胞活性率台盼蓝染色蓝染者为死细胞.改进方法组活细胞率为(93±4)%，显着低于内灌注方法（, 图1, 表1).A: 改良方法组; B: 内灌注方法组. 绿色箭头所示细胞为活细胞，红色箭头所示为死细胞.图1不同方法分离的胰腺腺泡细胞台盼蓝染色×20腺泡细胞纯化率HE染色可见胰腺腺泡细胞呈卵圆形或不规则形，核圆形偏向细胞一侧，亚甲蓝染色后腺泡细胞内除细胞核蓝染外，酶原颗粒呈鲜蓝色而背景不着色. 本实验得到胰腺腺泡细胞的纯化率与内灌注方法得到的腺泡细胞纯化率比较无统计学意义. 细胞内Ca2+的变化改良方法组胰腺腺泡细胞内Ca2+显着低于内灌注方法组(, 表1).A: HE染色; B: 亚甲蓝染色.图2亚甲蓝法鉴定分离胰腺腺泡细胞的纯化率×403讨论大多数胰腺细胞提取方法由于多原因所制约，而难以推广应用. 既往方法步骤过于繁琐，从时限上不利于应用于胰腺急性疾病的研究；且胶原酶用量大而花费昂贵. 人们在这方面做出大量努力，采用各种方法来减少胶原酶的用量，降低费用. 如在胰腺细胞的分离中， Amsterdam等［2］采用了将胶原酶和透明质酸酶混合溶液向胰腺实质中注射的方法，结果大大减少了胶原酶的用量. 现在许多文献介绍的胰胆管内灌注法也是旨在提高胶原酶的利用效能、降低胶原酶的使用量和成本，如张桦等［3］向胰胆管内注射大量Hanks液，以机械方法分离胰腺细胞，也同样减少了胶原酶的用量. 而何忠野等［4］所采用的是向胰胆管中逆行注射大量I型胶原酶稀释液. 而这些方法在降低胰酶使用量的同时也带来了第二个问题，对胰腺腺泡细胞功能的损害. 如采用胶原酶和胰蛋白酶的混合分离液注射［5］，根据胰腺炎的胰酶消化学说，其中的胰蛋白酶可激活胰腺中多种无活性的酶原使之成为活性酶，如胰淀粉酶、胰脂肪酶等，从而势必造成程度不一的胰腺腺泡细胞的损伤；而采用胰胆管逆行注射Hanks液或胶原酶稀释液，尽管采用了“低压”、“缓慢”等原则，但通过胰胆管向大鼠胰腺中注射3~5 mL甚至多达20 mL左右的液体，其压力仍然很大，其结果类似结石梗阻，将对胰腺腺泡细胞造成损害，而有可能成为阻碍其应用于各种实验研究、尤其是急性胰腺炎细胞水平的研究. 细胞内钙离子浓度异常升高，即钙超载，不仅是SAP发病环节之一，而且通过作用于其他环节而促进SAP的发生发展，是急性胰腺炎的重要早期事件［6-7］；而且我们在前期研究中也发现在重症急性胰腺炎时胰腺腺泡细胞的钙离子调节机制出现失衡，胰腺细胞内钙超载，和胰腺细胞损伤程度相关［8］. 所有我们在本研究中选择细胞内钙离子浓度作为评价胰腺腺泡细胞功能的标准.本研究所建立的胰腺腺泡分离纯化的方法，分离细胞总数和内灌注方法相比较更为高效. 即所采用的胰腺组织更少，步骤更简洁，省时间. 同时由于采用的胰腺组织少，所以消耗的胶原酶量也更少，有效的降低了实验费用. 而且，在本研究中我们发现改良方法所获取的胰腺腺泡细胞活力显着高于内注射法，而细胞内钙离子浓度显着低于内注射法. 这说明改良方法对细胞造成的损害更小，这和本研究所采用的不经胰胆管逆行注射、快速的取材方法和较低浓度胶原酶消化等措施关系密切. 所以，由本方法所获取的胰腺腺泡细胞不仅细胞数量和纯度稳定，而且细胞损害较小，基本保持了活体组织时的功能状态. 本研究所采用的方法稳定可靠、经济简单，重点着眼于避免或最大程度的减少胰腺腺泡细胞的损伤，从而为胰腺炎细胞水平的研究提供了良好的平台.【参考文献】［1］ Williams JA, Korc M, Dormer RL. Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini［J］. Am J Physiol, 1978, 235:517-524.［2］ Amsterdam A, Jamieson JD. Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells ［J］. Proc Nat Acad Sci USA, 1972, 69(10):3028-3032.［3］张桦，蔡德鸿，徐春生，等. 一种简易高效的大鼠胰岛分离纯化方法［J］. 第一军医大学学报, 2001, 21(2):119-121. ［4］何忠野, 郭仁宣. 一种简易经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离提纯方法［J］. 中国普通外科杂志, 2006,15(11):866-868. ［5］司徒镇强, 吴军正. 细胞培养［M］. 北京: 世界图书出版公司北京公司, 2004: 100-103.［6］李永渝，张红. 胰腺腺泡钙超载与急性胰腺炎［J］. 中国中西医结合外科杂志, 2001, 7(2):123-125.［7］ Pandol SJ. Acute pancreatitis［J］. Curr Opin Gastroententernl, 2005,21(5):538-543.［8］王连才,马清涌,沙焕臣,等. 白藜芦醇对重症急性胰腺炎钙离子调节失衡的影响［J］. 中华普通外科杂志, 2005, 20(12): 809-810.。

大豆多肽对糖尿病模型大鼠的血糖控制及对胰岛细胞的保护作用杨宇轩;胡森科;张敬华;郭坤;于燕【摘要】目的研究大豆多肽对四氧嘧啶(AXN)糖尿病(DM)模型大鼠的降血糖作用及对AXN损伤大鼠胰岛细胞的保护作用.方法用AXN建立大鼠DM模型,分别用500、250mg/kg体质量大豆多肽连续灌胃2周后,观察其对空腹血糖、糖耐量的影响.观察胰腺超微结构变化,分离并培养大鼠胰岛细胞并观察大豆多肽对AXN损伤的大鼠胰岛细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量的影响.结果大豆多肽高、低剂量均能降低DM模型大鼠血糖,其血糖绝对降低值(mmol/L)分别为10.65±5.33、8.84±4.66,显著高于DM模型组的4.16±4.48(P<0.05);改善DM大鼠的糖耐量,降低餐后血糖水平,与DM模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);但对餐后血糖的控制能力低于膳食纤维(P<0.05).胰腺超微结构观察显示,大豆多肽组胰岛β细胞分泌颗粒内电子密度较高,颗粒外有较大的空隙,细胞质内线粒体、高尔基体水肿明显缓解.在培养的AXN损伤大鼠胰岛细胞中,大豆多肽的SOD水平(U/mL)较对照组显著升高(7.44±3.59、29.48±2.40),MDA和NO水平(μmol/L)降低,分别为5.59±0.88、2.39±0.15和81.38±3.79、61.85±1.84(P<0.05);且随着大豆多肽浓度的增加,其对AXN损伤的大鼠胰岛细胞的保护作用明显增强(P<0.05).结论大豆多肽可明显降低AXN DM 大鼠血糖,改善糖耐量,并对AXN损伤的大鼠胰岛细胞有保护作用.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2014(035)002【总页数】5页(P191-195)【关键词】大豆多肽;四氧嘧啶;糖尿病模型;血糖;糖耐量;胰岛β细胞;超氧化物歧化酶(SOD);丙二醛(MDA);一氧化氮(NO)【作者】杨宇轩;胡森科;张敬华;郭坤;于燕【作者单位】西安交通大学医学院,陕西西安710061;西安交通大学医学院,陕西西安710061;西安交通大学医学院,陕西西安710061;西安交通大学医学院,陕西西安710061;西安交通大学医学院,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】R587.1随着生活水平的提高和老龄人口的急剧增加，慢性病已成为城乡居民死亡的主要原因。

大鼠胰岛分离技术的建立及胰岛活性的影响因素常宝成;张宏;郑凝;赵伟;张秋梅;卫立君;方佩华【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2006(026)009【摘要】目的建立稳定有效的大鼠胰岛分离方法,探讨影响胰岛活性的因素.方法通过胆管注射胶原酶方法提取大鼠胰岛,通过水浴法比较不同条件下葡萄糖刺激的胰岛素分泌,用放免法(RIA)测定胰岛素.结果牛血清白蛋白(BSA)能明显提高葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平,长时间培养(＞7 d)的胰岛,其葡萄糖刺激的胰岛素分泌下降约25%,而新鲜分离的胰岛和经1～5 d培养的胰岛未见明显差异.RPMI1640培养液中葡萄糖浓度11.1 mmol/L组,其胰岛素分泌明显高于5.5 mmol/L和25 mmol/L这2组.结论 BSA、RPMI1640培养液中葡萄糖浓度及培养时间均与分离胰岛活性有关.【总页数】4页(P1004-1007)【作者】常宝成;张宏;郑凝;赵伟;张秋梅;卫立君;方佩华【作者单位】天津医科大学,代谢病医院,天津,300070;天津医科大学,代谢病医院,天津,300070;天津医科大学,代谢病医院,天津,300070;天津医科大学,代谢病医院,天津,300070;天津医科大学,代谢病医院,天津,300070;天津医科大学,代谢病医院,天津,300070;天津医科大学,总医院,核医学科,天津,300070【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.大鼠胰岛的分离和胰岛移植 [J], 徐尔侃;杜成友2.三氯化铬对大鼠胰岛细胞活性及胰岛素分泌的影响 [J], 张宏馨;李兰会;杨宏莉;王燕;李军;廉海晨;卢淑兰3.原代分离的大鼠胰岛细胞对葡萄糖刺激胰岛素分泌的反应性研究 [J], 谢晓雁;王晓;顾燕云;李纪平;李果;罗敏4.小鼠胰岛分离纯化后肾被膜下胰岛移植动物模型的建立 [J], 夏小林;田磊;韩小乐;糜亮亮;肖慧敏5.山药多糖对体外培养大鼠胰岛细胞活性及胰岛素分泌的影响 [J], 杨宏莉;张宏馨;李兰会;王燕;李军;廉海晨;卢淑兰;张伟伟;蒋雪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究吴东军;赵振林;王慧珍;张栋;张勇;张巧芬【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2007(038)009【摘要】目的优化胰岛细胞分离纯化的方法,提高胰岛产量、纯度和功能.方法本实验经胰管注射胶原酶、胰腺静止消化分离成年大鼠胰岛,葡聚糖离心纯化,获得胰岛细胞,进行记数和功能鉴定.结果纯化后胰岛收获量为7021±861IEQ/胰腺(IEQ=胰岛当量,一个胰岛当量为一个150μm直径的胰岛),纯度达86%;胰岛形态结构完整,胰岛素释放试验显示胰岛细胞功能良好.结论细节优化可以显著提高胶原酶消化、葡聚糖不连续梯度离心分离胰岛的效率.【总页数】4页(P845-847,封3)【作者】吴东军;赵振林;王慧珍;张栋;张勇;张巧芬【作者单位】山西医科大学第二临床医学院普通外科,太原 030001;山西医科大学第二临床医学院普通外科,太原 030001;山西医科大学生化与分子生物学实验室;山西医科大学生化与分子生物学实验室;山西医科大学第二临床医学院普通外科,太原030001;山西医科大学第二临床医学院普通外科,太原 030001【正文语种】中文【中图分类】R-33【相关文献】1.大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究 [J], 章洁;李华;朱伟锋;许宝华;万福生2.原代大鼠胰岛细胞分离纯化及单细胞培养初探 [J], 罗瑞琼;韦芳;荣曦;刘红3.大鼠胰岛分离纯化实验研究 [J], 刘杰;陈谦;翁俊;喻亚群;谭李军;王安阳;刘红4.大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究 [J], 庞新路;薛武军;冯新顺;田晓辉;滕琰;郭奇;何晓利5.大鼠骨髓间充质干细胞与大鼠胰腺岛管上皮细胞间接共培养向胰岛细胞分化的实验研究 [J], 王海澜;龙爱梅;马真;李慧丰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一种简便分离纯化大鼠胰岛方法的探索郝丽萍;胡学锋;曲巍;赵要武;杨年红;孙秀发【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2005(034)001【摘要】目的探索可大量获取纯化大鼠胰岛的最佳方法.方法采用胰管内灌注生理盐溶液KRBB,外置胶原酶消化法及用单核细胞分离液Histopaque-1077纯化胰岛.结果成年Wistar大鼠胰腺消化后能获得(540±84)胰岛/胰腺,纯化后获得(335±81)胰岛/胰腺,纯度可达90%.纯化后的胰岛培养上清液中未检测到胰淀粉酶.胰岛培养1周后,胰岛素分泌量仍保持较旺盛状态.结论本方法能获得大量纯度较高且活性好的胰岛,是一种简便高效的胰岛分离方法.【总页数】3页(P69-71)【作者】郝丽萍;胡学锋;曲巍;赵要武;杨年红;孙秀发【作者单位】华中科技大学同济医学院公共卫生学院营养与食品卫生学系,武汉,430030;华中科技大学同济医学院公共卫生学院营养与食品卫生学系,武汉,430030;华中科技大学同济医学院公共卫生学院营养与食品卫生学系,武汉,430030;华中科技大学同济医学院公共卫生学院营养与食品卫生学系,武汉,430030;华中科技大学同济医学院公共卫生学院营养与食品卫生学系,武汉,430030;华中科技大学同济医学院公共卫生学院营养与食品卫生学系,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R322.5;R329.2【相关文献】1.三种大鼠胰岛分离纯化方法的比较 [J], 于湄;张雪莲;薛桂凤;杨金奎2.一种简易高效的大鼠胰岛分离纯化方法 [J], 张桦;蔡德鸿;徐春生;陈宏;刘宏3.简便快捷的小鼠胰岛分离纯化方法研究 [J], 合湫;苏恒;李超;沈涛;严新民;薛元明4.简便快捷的小鼠胰岛分离纯化方法研究 [J], 合湫;苏恒;李超;沈涛;严新民;薛元明5.大鼠不同分离纯化方法对胰岛细胞丢失的影响 [J], 宋焕瑾;宋勇;牛晓丽;薛武军;李杨;田晓辉;丁小明;冯新顺;田普训;丁晨光;靳占奎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

多种分离纯化大鼠胰岛细胞的实验方法比较陈创奇;詹文华;汪建平;蔡世荣;兰平;吴小剑;贺德【期刊名称】《中山大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2002(023)002【摘要】[目的] 采用不同的分离或消化方法,探讨如何提高大鼠胰岛细胞分离纯化后的收获量和质量.[方法] 将25只供体SD雄性大鼠依胰腺分离或消化的方法不同随机地分为5组:①A组:胆总管灌注胶原酶P;②B组:胆总管灌注Hanks液;③C组:胆总管不灌注液体;A、B、C 3组胰腺直接分次消化;④D组:胆总管不灌注,胰腺剪碎后分次消化;⑤对照组:胆总管灌注胶原酶P,胰腺直接单次消化.将分离的胰岛沉淀物用Ficoll-400纯化并培养,再把胰岛细胞移植于糖尿病裸鼠受体腹腔内.[结果] 纯化后的胰岛细胞在收获量上A和B组明显多于对照组或C组,而D组最低;A、B和D 3组的纯度均高于对照组或C组;在胰岛成活率方面,A、B、C 3组均高于对照组或D组.移植于糖尿病裸鼠受体内的大鼠胰岛细胞均可逆转高血糖状态.[结论] 经胆总管灌注胶原酶后的大鼠胰腺用分次消化的方法可提高胰岛细胞的收获量、纯度和活性.【总页数】3页(P118-120)【作者】陈创奇;詹文华;汪建平;蔡世荣;兰平;吴小剑;贺德【作者单位】中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院胃肠胰外科,广东,广州,510080【正文语种】中文【中图分类】R657.5;R617;Q959.837【相关文献】1.大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究 [J], 章洁;李华;朱伟锋;许宝华;万福生2.三种大鼠胰岛分离纯化方法的比较 [J], 于湄;张雪莲;薛桂凤;杨金奎3.大鼠肝星状细胞体外分离纯化方法的建立及多种CYP450亚型的表达 [J], 廖长秀;汪晖4.大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究 [J], 吴东军;赵振林;王慧珍;张栋;张勇;张巧芬5.大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究 [J], 庞新路;薛武军;冯新顺;田晓辉;滕琰;郭奇;何晓利因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。