MMFSCNG食品中胆固醇的测定方法

试剂和溶液：除另有规定外，使用分析纯试剂，水为GB/T6682推荐使用的一级水000 000甲醇：色谱纯0000000无水乙醇0000000石油醚：沸程30-60℃0000000无水乙醚0000000无水硫酸钠0000000氢氧化钾000000060%氢氧化钾溶液：60克氢氧化钾，加水40ML 混合溶解0000000胆固醇：纯度≥99%000000标准贮备液：胆固醇标准品0.05g(精确至0.1mg)，用无水乙醇溶解定容至50mL，溶解每毫升相当于1mg胆固醇，放置4℃密封可贮藏半年000000标准工作溶液：分别吸取标准贮备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml，用无水乙醇定容至10ml，配置相当于0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.5mg/ml浓度标准溶液000000仪器和设备：0000000高效液相色谱仪，具有紫外检测器或相当的检测器0000000分析天平，感量0.1mg000000色谱柱，C18反相色谱柱（4.6mm*150mm,5um）000000分析步骤00000001.样品处理00000001.1皂化0000000称取粉碎均匀的样品0.25-10g（胆固醇含量约为0.5mg-5mg,精确至0.1mg)，于250ml平底烧瓶中，加入30ml无水乙醇，10ml60%氢氧化钾溶液（4.7），混匀，将试样在100℃磁力搅拌加热套皂化回流1h，不时震荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，用5毫升无水乙醇（4.2）自冷凝管顶端冲洗其内部，取下圆底烧瓶，冷却至室温00000001.2提取0000000定量转移全部皂化液于250ml分液漏斗中，用30ml水分2-3次冲洗圆底烧瓶，洗液并入分液漏斗，再用40ml石油醚和乙醚混合液(1+1,体积比）分2-3次冲洗平底烧瓶并入分液漏斗，振摇2min，静置，分层，转移水相于第二个分液漏斗，再用30ml石油醚和乙醚混合液（1+1，体积比）重复提取两次，弃去水相，合并三次有机相，用蒸馏水每次100ml，洗涤提取液至中性，初次水洗时轻轻振摇，防止乳化，提取液通过约10g无水硫酸钠（4.5）脱水，转移到150ml平底烧瓶中000001.3浓缩0000000将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干，用无水乙醇溶解定容至5ml，溶液通过0.45um过滤膜过滤，收集清液于进样瓶中，待色谱仪测定0000002.测定00000002.1色谱参考条件0000000色谱柱：C18反相色谱住0000000柱温：38℃0000000流动相：甲醇0000000流速：1ml/min0000000测定波长：205nm000000进样量：10ul000000标准曲线检测0000000分别取10ul标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰面积），以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，检测标准曲线00000002.3样品中胆固醇的测定0000000取10ul样液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰面积），由标准曲线上差得样液中胆固醇的含量，或利用回归方程式计算样液中胆固醇含量0000003.结果计算0000000样品中胆固醇的含量（x）以毫克每百克（mg/100g)表示，按下式计算：000000x=（c×V）÷m×100000000式中：0000000x-----样品中胆固醇的含量，单位为毫克每百克（mg/100g)0000000c-----样液中胆固醇的含量，单位为毫克每毫升（mg/ml)0000000V-----容体积，单位为毫升（ml)000000m----样品质量，单位为克（g)0000000。

实验一：食品中胆固醇的测定实验一：食品中胆固醇的测定一、实验目的1． 通过本实验的学习，使学生了解测定食品中胆固醇的意义。

通过本实验的学习，使学生了解测定食品中胆固醇的意义。

2． 通过本实验的学习，使学生掌握紫外－可见分光光度检测方法。

二、实验内容1． 样品制备。

样品制备。

2． 分光光度法检测。

三、实验要求采用集中授课形式组织教学。

采用集中授课形式组织教学。

四、实验准备 1． 样品制备及操作。

样品制备及操作。

2． 紫外－可见分光光度仪的使用方法。

紫外－可见分光光度仪的使用方法。

五、实验原理、方法和手段1． 实验原理实验原理当固醇类化合物与酸作用时，当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合发应，可脱水并发生聚合发应，可脱水并发生聚合发应，产生有颜色的物质。

产生有颜色的物质。

产生有颜色的物质。

据据此可先对食品样品进行提取和皂化，而后用硫酸铁铵试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。

胆固醇的含量。

2． 实验方法和手段实验方法和手段食品样品的制备，分光光度计的使用。

食品样品的制备，分光光度计的使用。

六、实验条件1． 主要仪器主要仪器 A ． 电子天平（1/10000）B ． 电热恒温水浴电热恒温水浴C ． 电动振荡器电动振荡器D ． 具塞比色管：10 mL 、25 mL E ． 吸量管：2.0 mL2． 试剂试剂A. 石油醚石油醚B. 无水乙醇无水乙醇C. 浓硫酸浓硫酸D. 冰乙酸：优级纯冰乙酸：优级纯E. 磷酸磷酸F . 胆固醇标准物质胆固醇标准物质G . 胆固醇标准液。

胆固醇标准储备液（1 mg/mL ）：准确称取胆固醇100 mg ，溶于冰乙酸中，并定容至100 100 mLmL 。

此溶液至少在2个月内保持稳定。

胆固醇标准使用液（100 m g/mL ）：吸取胆固醇标准储备液10 mL ，用冰乙酸定容至100 mL 。

此液用时临时配制。

液用时临时配制。

H. 铁矾显色剂。

铁矾储备液：溶解4.463 g 硫酸铁铵[FeNH 4(SO 4)2•H 2O]于100 mL 85％磷酸中，贮于干燥器内，此液在室温下稳定。

MM_FS_CNG_0380食品添加剂.重金属 限量试验 MM_FS_CNG_0380 食品添加剂中重金属限量试验法

1.适用范围 本方法适用于食品添加剂中重金属的限量试验。 2.原理概要 在弱酸性（pH3～4）条件下，试样中的重金属离子与硫化氢作用，生成棕黑色，与同法处理的铅标准溶液比较，做限量试验。 3.主要试剂和仪器 3.1主要试剂 硝酸、硫酸、盐酸\氨水； 6mol／L盐酸：量取50mL盐酸，用水稀释至100mL； 1mol／L盐酸：量取8.3mL盐酸，用水稀释至100mL； 6mol／L氨水：量取40mL氨水，用水稀释至100mL； 1mol／L氨水：量取6.7mL氨水，用水稀释至100mL； pH3.5的乙酸盐缓冲液：称取25.0g乙酸铵溶于25mL水中，加45mL 6mol／L盐酸，用稀盐酸或稀氨水调节pH值至3.5，用水稀释至100mL； 酚酞指示液：1％乙醇溶液； 饱和硫化氢水：将硫化氢气体通入不含二氧化碳的水中，至饱和为止（此溶液临用前制备）； 铅标准溶液：称取0.1598g高纯硝酸铅，溶于10mL 1％硝酸中，定量移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液1mL相当于1.0mg铅。临用前用水稀释100倍，使成1.0mL相当于10μg铅； 1％硝酸：取1mL硝酸加水稀释至100mL。 3.2.仪器 50mL纳氏比色管； 所用玻璃仪器需用（10～20）％硝酸浸泡24h以上，用自来水反复冲洗，最后用水冲洗干净。 4.过程简述 4.1样品处理 一般样品可直接按4.2“测定”进行测定，如A管的色度深于C管的色度，应先经样品处理。 4.1.1.湿法消解：称取5.0g样品，置于250mL凯氏烧瓶或三角烧瓶中，加（10～15）mL硝酸浸润样品，放置片刻（或过夜）后，缓缓加热，待作用缓和后稍冷，沿瓶壁加入5mL硫酸，再缓缓加热，至瓶中溶液开始变成棕色，不断滴加硝酸（如有必要可滴加些高氯酸，在操作过程中应注意防止爆炸）。至有机质分解完全，继续加热，至生成大量的二氧化硫白色烟雾，最后溶液应呈无色或微带黄色。冷却后加20mL水，煮沸除去残余的硝酸至产生白烟为止。如此处理两次，放冷。将溶液移入50mL容量瓶中，用水洗涤凯氏烧瓶或三角烧瓶，将洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混匀。每10mL溶液相当于1.0g样品。 取同样量的硝酸、硫酸，按上述方法做试剂空白试验。 4.1.2.干法消解：本法适用于不适合用湿法消解的样品。 称取样品5.0g，置于坩埚中，加入适量硫酸浸润样品，小火炭化后，加2mL硝酸和5滴硫酸，小心加热，直到白色烟雾挥尽，移入高温炉中，于550℃灰化完全，冷却后取出，加2mL 6mol／L盐酸湿润残渣，于水浴上慢慢蒸发至干。用1滴浓盐酸湿润残渣，并加10mL水，于水浴上再次加热2min，将溶液移入50mL容量瓶中，如有必要须过滤，用少量水洗涤坩埚和滤器，洗滤液一并移入容量瓶中，混匀，每10mL该溶液相当于1.0g样品。 在样品灰化同时，另取一坩埚，按上述方法做试剂空白试验。 4.2测定 A管：吸取含铅量相当于指定的重金属限量的铅标准溶液（不低于10μg铅）于50mL纳氏比色管中（如样品经处理，须同时吸取与样品液等量的试剂空白液），加水至25mL，混匀，加1滴酚酞指示液，用稀盐酸或稀氨水6mol／L或1mol／L调节pH至中性（酚酞红色刚褪去），加入pH3.5的乙酸盐缓冲液5mL，混匀，备用。 B管：取一支与A管所配套的纳氏比色管，加入（10～20）mL（或适量）样品液，加水至25mL，混匀，加1滴1％酚酞指示液，用稀盐酸或稀氨水6mol／L或1mol／L调节pH至中性（酚酞红色刚褪去），加入pH3.5的乙酸盐缓冲液5mL，混匀，备用。 c管：取一支与A、B管所配套的纳氏比色管，加入与B管等量的相同的样品液，再加入与A管等量的铅标准溶液，加水至25mL，混匀，加1滴1％酚酞指示液，用稀盐酸或稀氨水（6mol／L或1mol／L）调节pH至中性（酚酞红色刚褪去），加入pH3.5的乙酸盐缓冲液5mL，混匀，备用。 向各管中加入10mL新鲜制备的硫化氢饱和液，并加水至50mL刻度，混匀，于暗处放置5min后，在白色背景下观察，B管的色度不得深于A管的色度，C管的色度应与A管的色度相当或深于A管的色度。 5.来源 中国国家标准GB 8451—87

MMFSCNG0216 婴幼儿食品乳粉维生素A 维生素D 维生素E 液相色谱法MM_FS_CNG_0216婴幼儿配方食品和乳粉维生素A、D、E的测定1.适用范围本方法适用于各种婴幼儿配方食品和乳粉中维生素A、D、E的测定。

2.原理概要样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，经(用)石油醚萃取后，用高压液相色谱，紫外检测器定量测定。

3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂高峰氏淀粉酶(Taka-Diastase)。

焦性没食子酸的乙醇溶液：15g/L。

氢氧化钾溶液：质量比为100∶50。

石油醚：沸程30～60℃。

甲醇、正己烷、异丙醇、环己烷：色谱纯。

维生素A、E标准溶液：维生素A标准贮备液（含维生素A100μg/mL的甲醇溶液）：称取10mg的维生素A，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

维生素E标准贮备液，含维生素E400μg/mL的甲醇溶液：称取40mg的维生素E，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

维生素A、E标准工作液，其中维生素A的浓度为2μg/mL，维生素E的浓度为20μg/mL：取1mL维生素A标准贮备液和2.5mL维生素E标准贮备液于50mL容量瓶中，用甲醇溶解。

维生素D标准溶液：维生素D2标准贮备液，含维生素D2100μg/mL的甲醇溶液：称取10mg的维生素D2，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

维生素D3标准贮备液，含维生素D3100μg/mL的甲醇溶液：称取10mg的维生素D3，用甲醇定容于100mL容量瓶中。

维生素D标准工作液，其中维生素D2、维生素D3的质量浓度均为1μg/mL：取维生素D2标准贮备液1mL，维生素D3标准贮备液1mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容。

3.2.仪器250mL平底烧瓶、500mL分液漏斗、旋转蒸发器。

高压液相色谱仪：具有可变波长的紫外检测器、数据处理系统或记录仪。

4.过程简述4.1.样品处理含淀粉的样品：准确称取10g样品放入250mL平底烧瓶中，加入1gTaka淀粉酶，再加入30mL45～50℃的蒸馏水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置45℃烘箱内30min。