不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用
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两种骨髓活检标本脱钙方法比较
Ｅ Ｄ Ｔ Ａ， 前 者 在 水 中 的溶 解 度 远 大 于后 者 。 极 个 别 标 本 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ
度脱钙 或者脱钙不完全 ， 残 留在组 织间 的强 酸成分还会影 响 常规染色 。其次 ， 强酸类脱钙液容易使组织抗原丢失 ， 从而影
响 免 疫 组 织 化 学 的 表 达 。 乙 二胺 四 乙酸 （ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ） 是 科 研 中 首
每份标本做苏木精一 伊红 （ Ｈ Ｅ） 染色 、 缸 染色和免疫组织化学 染色（ Ｉ ＨＣ ｏ第二组 ５ ０份标本用 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ螯合剂在 ３ ７℃下处
理２ ０ ｈ ， 组织变软后用流水 冲洗 ４ ｈ ， 然后常规脱水 、 包埋 、 切 片， 最后每份标 本做 Ｈ Ｅ染色 、 Ａ Ｇ染 色和 Ｉ ＨＣ染色 。 １ ． ４ 注意 事项 ： Ｅ Ｄ Ｔ Ａ螯合 剂配制 应选 择 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ ． Ｎ ａ 而 不是
『 ６ ］ 毕晓芳 陈利萍． 免疫组化和原位杂交联合应用 在尖锐湿疣临 床诊 断中的价值 ｆ Ｊ １ ． 宁夏 医学杂志 ， ２ ０ ０ ８ ， ２ １ （ ６ ） ： ５ ２ ９ ５ ３ ０ ．
［ ７ Ｊ 王鹤 ， 乔友林． 人乳 头瘤病 毒型别及其相关疾病 ［ Ｊ 】 ． 中国医学 科学 院学报 ，２ ０ ０ ７ ， ２ ９ （ ５ ） ： ６ ７ ８ — ６ ８ ４ ．
依据 。
参 考 文 献
… １ 孙丽君 ， 蔡 路兵 ． 利用组织芯 片研究原位杂 交和免疫组化法检
［ ８ ８ 】 任 占平 ， 凌艳娟 ， 陈蔚麟 ， 等． １ ５ ３ 例女 阴尖锐湿疣 病理学 与
ＨＰ Ｖ ． Ｄ Ｎ Ａ原位杂交 的对 比研究 ［ Ｊ １ ． 广 西医学 ， ２ ０ ０ ０， ２ ２ （ ２ ） ：
度脱钙 或者脱钙不完全 ， 残 留在组 织间 的强 酸成分还会影 响 常规染色 。其次 ， 强酸类脱钙液容易使组织抗原丢失 ， 从而影
响 免 疫 组 织 化 学 的 表 达 。 乙 二胺 四 乙酸 （ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ） 是 科 研 中 首
每份标本做苏木精一 伊红 （ Ｈ Ｅ） 染色 、 缸 染色和免疫组织化学 染色（ Ｉ ＨＣ ｏ第二组 ５ ０份标本用 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ螯合剂在 ３ ７℃下处
理２ ０ ｈ ， 组织变软后用流水 冲洗 ４ ｈ ， 然后常规脱水 、 包埋 、 切 片， 最后每份标 本做 Ｈ Ｅ染色 、 Ａ Ｇ染 色和 Ｉ ＨＣ染色 。 １ ． ４ 注意 事项 ： Ｅ Ｄ Ｔ Ａ螯合 剂配制 应选 择 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ ． Ｎ ａ 而 不是
『 ６ ］ 毕晓芳 陈利萍． 免疫组化和原位杂交联合应用 在尖锐湿疣临 床诊 断中的价值 ｆ Ｊ １ ． 宁夏 医学杂志 ， ２ ０ ０ ８ ， ２ １ （ ６ ） ： ５ ２ ９ ５ ３ ０ ．
［ ７ Ｊ 王鹤 ， 乔友林． 人乳 头瘤病 毒型别及其相关疾病 ［ Ｊ 】 ． 中国医学 科学 院学报 ，２ ０ ０ ７ ， ２ ９ （ ５ ） ： ６ ７ ８ — ６ ８ ４ ．
依据 。
参 考 文 献
… １ 孙丽君 ， 蔡 路兵 ． 利用组织芯 片研究原位杂 交和免疫组化法检
［ ８ ８ 】 任 占平 ， 凌艳娟 ， 陈蔚麟 ， 等． １ ５ ３ 例女 阴尖锐湿疣 病理学 与
ＨＰ Ｖ ． Ｄ Ｎ Ａ原位杂交 的对 比研究 ［ Ｊ １ ． 广 西医学 ， ２ ０ ０ ０， ２ ２ （ ２ ） ：
制作骨骼组织切片的新脱钙液
制作骨骼组织切片的新脱钙液
王淑兰
【期刊名称】《延安大学学报（医学科学版）》
【年(卷),期】2009(007)003
【摘要】目的制作人体骨骼组织脱钙及脱钙组织的病理切片.方法用日常病理技术工作中常用的脱钙液与新的脱钙液对人体不同部位骨骼组织同时进行脱钙处理后,制作的病理切片显微镜下观察.结果新脱钙液制备的骨骼组织切片完整,染色鲜艳,组织结构清晰;而旧脱钙液制作的骨骼组织切片不平整,染色偏红,切片整体效果不佳.结论新的脱钙液脱钙速度快,对组织损伤小,切片染色效果好,试剂配制方法简单,值得临床推广应用.
【总页数】2页(P155-156)
【作者】王淑兰
【作者单位】延安大学附属医院病理科,陕西,延安,716000
【正文语种】中文
【中图分类】R36
【相关文献】
1.甲酸脱钙液的浓度对骨组织脱钙后切片染色效果的研究 [J], 黄勋福;韩福兰;吴燕杏;房惠琼;李启明;毛荣军
2.一种用于制作骨骼组织切片的新脱钙液 [J], 魏国联;沈贵华;孙耘田
3.混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析 [J], 吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣
4.改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较 [J], 谢玲;邹丽宜;张志平;崔红晶;林坚涛
5.甲酸脱钙液的浓度对骨组织脱钙后切片染色效果的研究 [J], 黄勋福; 韩福兰; 吴燕杏; 房惠琼; 李启明; 毛荣军
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甲酸脱钙液
甲酸脱钙液简介：在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。
这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。
对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。
然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。
在有机酸中，甲酸、乙酸比较适合于骨髓组织脱钙。
甲酸脱钙液是一种使用范围广泛的脱钙剂，但是该法脱钙速度太慢，不适合密皮质骨的脱钙。
Leagene 甲酸脱钙液主要由甲酸、福尔马林等组成。
其优点：①对细胞核染色结果较好；②兼具脱钙和组织固定的作用；③适用于小块组织和牙齿的脱钙。
其缺点：①脱钙速度比较慢，不适合常规标本脱钙使用；②不适合密皮质骨脱钙使用；③脱钙后需要硫酸钠溶液进行碱处理。
组成：自备材料：1、 PBS2、 蒸馏水3、 5%硫酸钠溶液操作步骤(仅供参考)：1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚。
2、 组织固定后，用PBS 清洗。
3、 组织用蒸馏水洗清洗。
4、 组织转移至甲酸脱钙液中，脱钙3～10天或更长时间。
如有必要，更换新的甲酸脱钙液继续脱钙直至终点，多数组织脱钙1周即可。
5、 用蒸馏水冲洗数次。
6、 组织立即入硫酸钠溶液进行碱处理。
7、 充分流水冲洗。
8、 常规脱水、包埋。
编号 名称 DD0012 Storage 甲酸脱钙液 500ml RT 避光 使用说明书 1份注意事项：1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙3~10天即可。
2、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。
脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。
3、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。
4、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
JYBL-Ⅳ脱钙液
JYBL-Ⅳ脱钙液简介：在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。
这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。
对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。
然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。
Leagene JYBL-Ⅳ脱钙液主要由甲醛、甲酸等组成，不含强酸，特别适用于骨组织穿刺脱钙。
其优点是：①37℃加热时迅速，2～3h 即可；②对组织的结构损害小；③脱钙完全。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm 。
2、 组织固定后，用PBS 清洗3次。
3、 组织用蒸馏水洗清洗3次。
4、 组织转移至20~30倍体积的JYBL-Ⅳ脱钙液中。
如果普通脱钙，应延长脱钙时间。
5、 用蒸馏水冲洗数次。
6、 常规脱水、包埋。
注意事项：1、 厚度5mm 的骨组织块脱钙时间一般脱钙24～36h 即可。
2、 脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。
脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。
3、 脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。
4、 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。
5、 每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。
6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
编号 名称 DD0019 DD0019 Storage JYBL-Ⅳ脱钙液 500ml 5L RT 避光 使用说明书 1份有效期：12个月有效。
附录：脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。
物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。
不同脱钙液对钙化性主动脉瓣膜脱钙效果的比较
不同脱钙液对钙化性主动脉瓣膜脱钙效果的比较李灿波;李海清;叶晓峰;赵强【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2015(035)008【摘要】目的比较不同脱钙液对钙化性主动脉瓣膜标本的脱钙效果.方法选择6例主动脉瓣钙化患者的病变瓣膜标本,每个瓣膜等分成3份后随机分配到5％硝酸(硝酸组)、10％甲酸(甲酸组)、10％ EDTA(EDTA组)溶液中进行脱钙,观察和比较各组病理切片的苏木精-伊红染色(H-E染色)和免疫组织化学染色效果.结果 EDTA 组脱钙速度较慢,但显示瓣膜组织结构完整,形态清晰,脱钙及免疫组织化学染色效果最佳.硝酸组脱钙时间最短,也能获得良好的脱钙效果.甲酸组脱钙时间较短,但脱钙效果最差.结论在钙化性主动脉瓣的病理学研究中,EDTA脱钙液仍是脱钙的最佳选择.而在考虑时间因素的情况下,硝酸脱钙液则是良好的替代.甲酸脱钙液由于对钙化瓣膜的脱钙效果较差,不推荐使用.【总页数】4页(P1234-1237)【作者】李灿波;李海清;叶晓峰;赵强【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025【正文语种】中文【中图分类】R542.52【相关文献】1.三种不同脱钙液在骨组织石蜡切片中的应用比较 [J], 杜洪;金荣2.临床病理检验中不同骨组织脱钙液效果的比较 [J], 李玉莲;徐晓艳3.不同脱钙条件下三种脱钙液脱钙效果的比较 [J], 陈敬文;张伟;王天娲;程俊;罗金风4.不同成份脱钙液对骨组织脱钙效果的比较 [J], 祁宏枝; 罗添友; 唐涛5.三种脱钙液对狗牙齿及牙槽骨脱钙效果的比较 [J], 于洪藻;李玉林;张丽红;王成坤;蔡家骏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
EDTA 脱钙液使用说明书
EDTA脱钙液使用说明书储存条件：常温保存，有效期1年。
产品内容：Components SL1500 EDTA脱钙液（pH7.2-7.4）500mL说明书1份产品说明：1.在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。
由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。
骨组织含钙量最多。
除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。
脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
2.为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织中的抗原不受破坏，需要对含钙的组织固定之后再进行脱钙。
然后再行常规制片。
3.EDTA与羟基磷灰石结晶的外层钙结合，形成可溶性的非离子化合物，同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。
借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解，pH中性时可起螯合作用。
其特点是脱钙时间长，对骨组织的损伤少，酶活性(碱性磷酸酶)和细胞抗原性保存较好，制作的切片可用于组织化学和免疫组化分析。
4.主要用途：用于骨组织、牙齿等脱钙。
使用说明：1.骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。
2.组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。
3.组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。
4.组织转移至20～30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。
如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。
如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次，直至终点。
亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。
5.用蒸馏水冲洗数次。
6.常规脱水、包埋。
注意事项：1．为使脱钙更为充分，每次最好更换新液，这既弃去脱掉的钙盐，增加脱钙强度，又起到降低脱钙的温度。
2．脱钙时间以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。
3．脱钙温度不要太高，一般以室温(25℃)为宜，高温可加快脱钙速度，但可破坏组织中的核酸而影响染色效果。
不同脱钙液对牙齿牙周联合石蜡切片HE染色的影响
不同脱钙液对牙齿牙周联合石蜡切片HE染色的影响【摘要】目的探讨不同脱钙液对牙齿牙周联合切片HE染色质量的影响。
方法选用10%乙二胺四乙酸钠(EDTA)、复合酸(Plank-Rychlo脱钙液)和5%硝酸3种不同的脱钙液,分成A、B、C 3组用于犬和大鼠牙齿牙周组织联合石蜡切片脱钙,通过记录脱钙时间,观察HE染色效果,评价室温下(20℃～28℃)不同脱钙液对切片制作的影响。
结果A组脱钙液所制切片染色效果良好,但脱钙速度缓慢,所需时间较长;B组脱钙液脱钙速度快,所制切片染色好;C组脱钙液所制切片的染色强度和对比度均不如前两种脱钙液。
结论在制作牙齿牙周联合切片时,EDTA 脱钙液和Plank-Rychlo脱钙液所制切片均能取得良好的染色效果,但EDTA脱钙液脱钙周期过长;Plank-Rychlo脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合于临床速检工作;硝酸脱钙液组染色效果较差。
【关键词】脱钙;牙齿;牙周组织;石蜡切片;HE染色【Abstract】Objective To investigate the effect of different decalcifying fluid on HE color of teeth and periodontal tissue united sections.Methods 10%EDTA decalcifying fluid, mixed acid(Plank-Rychlo)and 5% nitric acid were divided into three groups: group A, group B and Group C, which were used to decalcify the united paraffin sections of tooth and periodontal tissue from dogs and rats. The effect of three kinds of decalcifying fluid on manufacture of united sections was evaluated at room temperature(20℃~28℃)by decalcification time and HE staining quality.Results Group A had a good effect of HE staining, but its decalcification time was too long. Group B had either high speed decalcification or high staining quality.Group C was the last choice with the regard of poor staining intensity and contrast.ConclusionEDTA decalcifying fluid and Plank-Rychlo decalcifying fluid can get a favorable staining effect, but has a long decalcification period,Plank-Rychlo decalcifying fluid is more suited to clinical quick examination due to well-distributed and high speed decalcification. Nitric acid decalcifying fluid has a poor staining effect.【Key words】Decalcification;Tooth;Periodontal tissue;Paraffin section;Hematoxylin/eosin staining在涉及口腔组织病理的研究中,需要制作牙齿牙周组织联合切片进行诊断、观察和对比分析,但由于牙齿是全身硬度最高的组织,特别是牙釉质,其无机物成分羟基磷灰石[Ca10(PO4)6(OH)2] 含量占97%,硬度与石英相似;牙本质、牙骨质及牙槽骨坚硬致密、易碎难切,而牙髓、牙龈、牙周膜等软组织在切片过程中易受挤压、牵拉、分离变形甚至脱落。
骨组织脱钙方法
骨组织脱钙方法
一、化学脱钙法
化学脱钙法是一种常用的骨组织脱钙方法，通过使用酸性溶液或者强酸来溶解骨组织中的钙盐，从而去除骨组织中的钙离子。
常用的化学脱钙溶液包括盐酸、硝酸、硫酸等。
这种方法的优点是操作简单、脱钙效果好，但同时也存在一些缺点，如酸性溶液对骨组织本身有一定的损伤，且脱钙过程中会产生有毒气体，需要良好的通风设施。
二、酶解脱钙法
酶解脱钙法是一种较为温和的骨组织脱钙方法，通过使用酶制剂来分解骨组织中的胶原蛋白和钙盐，从而达到脱钙的目的。
常用的酶制剂包括胶原酶、弹性蛋白酶等。
酶解脱钙法的优点是操作简单、对骨组织损伤小、不产生有毒气体，但同时也存在一些缺点，如脱钙速度较慢，需要较长时间才能完成脱钙。
三、微波脱钙法
微波脱钙法是一种新型的骨组织脱钙方法，通过使用微波辐射来加速骨组织中的水分子运动，产生热量使骨组织内部的温度升高，从而加
速骨组织中的钙盐溶解和脱钙过程。
微波脱钙法的优点是脱钙效果好、速度快、对骨组织损伤小，但同时也存在一些缺点，如需要使用特殊的微波设备，且操作技术要求较高。
综上所述，不同的骨组织脱钙方法各有优缺点，应根据实际需求和实验条件选择适合的脱钙方法。
脱钙液在微波辐射下对骨组织作用效果及免疫组织化学染色的影响.
脱钙液在微波辐射下对骨组织作用效果及免疫组织化学染色的影响中华病理学杂志/990220 骨组织脱钙常规多采用酸性液体(如硝酸、盐酸、甲酸等)进行脱钙，一般需较长时间，组织细胞结构很难保持完整清晰，有些甚至破坏组织结构很严重，从而影响病理学的诊断和研究。
骨组织中的蛋白抗原得不到很好的保存，有时甚至丢失。
为此我们对9例骨组织用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)作为脱钙液，利用微波辐射脱钙[1，2]并进行免疫组织化学方法定位，观察骨组织结构改变和蛋白抗原保存情况，得到较满意的结果。
一、材料与方法1.材料：9例骨组织为我科活检标本(骨肉瘤3例，肋骨2例，胫骨2例，股骨2例)，其组织大小为1.0 cm×1.0 cm×0.2 cm；微波炉为浙江临安生产的YWY781B型；EDTA为进口分装，购于北京化学试剂公司；免疫组化试剂为福州迈新生物技术开发公司赠。
2.脱钙液配制：A液：EDTA10 g，PBS缓冲液(pH 7.2)100 ml，加NaOH搅拌溶解后，用1 mol/L HCl调pH至7.2，再加甲醛15 ml。
B液：甲酸15 ml，甲醛10 ml，蒸馏水75 ml。
C液：硝酸5 ml，甲醛10 ml，蒸馏水85 ml。
D液：甲酸10 ml，硝酸3 ml，盐酸5 ml，冰醋酸2 ml，甲醛10 ml，蒸馏水70 ml。
3.脱钙方法：本实验9例骨组织各分两组，即微波脱钙组和室温脱钙组。
微波组：将骨组织放入平底小烧杯内，分别装有上述各种脱钙液，表面加一层液体石蜡[3]，以微波4档间歇脱钙，每次辐射1分钟，每次辐射之间都将烧杯移至室温冷却5分钟，以保证每次的微波辐射脱钙液的温度不至于太高。
室温组：每隔4小时更换一次脱钙液。
以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。
4.免疫组织化学方法：组织脱钙后经常规组织处理切片，枸橼酸微波恢复抗原后，应用SP法进行免疫组织化学反应[4]，检测骨组织中骨形成蛋白(BMP单抗)和波形蛋白(Vimentin单抗)。
一种用于制作骨骼组织切片的新脱钙液
、
℃
。
in
后 二 甲苯脱蜡依 次 经 过 梯
。
对照组
30 ％
盐 酸 脱 钙 液 制 备 的 切 片 ：布 满 波 纹 染 色 偏 红 对
， ，
度 乙 醇 由高 到低 至
m
7 0 ％ 乙 醇后水洗
，
(5 ) 人 苏 木精染液
、
10
。
比度 及 整 体 观 不 佳
in
后水洗
、
1％
盐 酸 乙 醇 分化 水洗
m
1％
、
氨水返 蓝 水洗
，
( 6 ) 入 1 ％ 水溶 性 伊 红 染 液 2
in
后 水 洗 梯 度 乙 醇 脱 水 由低
。
3
讨论
到 高至 无 水 乙 醇溶 液
间
、
二
甲苯 透 明 中性树 胶封 固
，
注 意事 项 ： ( 1 ) 脱 钙 的 骨 骼 体 积 若 加 大 应 延 长 脱 钙 时
。
在 Et 常 病 理 技术 工 作 中 有 多 种 对 骨 骼 的 脱 钙方 法 和 脱
、
、
在 捞 片 前 载 玻 片 上 薄 层 涂 抹 蛋 白甘 油
( 4 ) 切 片 在 烤 箱 中烤
30
m
捞 片水 温
44
用 新 脱 钙液制 备 的切 片 ：骨 小 梁 形 态 完 整 骨 髓染 色 适 中
、
图3 图
4
用 新 脱 钙 液 制 备 的切 片 ：骨 小 梁 形 态 完 整 骨 髓 显 示 清 晰
，
脱 钙 液 制备 的 切 片布 满 波 纹 染 色 偏 红 颜 色 对 比 度 及 切 片
整体观 不佳 ( 图
℃
。
in
后 二 甲苯脱蜡依 次 经 过 梯
。
对照组
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，
(5 ) 人 苏 木精染液
、
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。
比度 及 整 体 观 不 佳
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、
1％
盐 酸 乙 醇 分化 水洗
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、
氨水返 蓝 水洗
，
( 6 ) 入 1 ％ 水溶 性 伊 红 染 液 2
in
后 水 洗 梯 度 乙 醇 脱 水 由低
。
3
讨论
到 高至 无 水 乙 醇溶 液
间
、
二
甲苯 透 明 中性树 胶封 固
，
注 意事 项 ： ( 1 ) 脱 钙 的 骨 骼 体 积 若 加 大 应 延 长 脱 钙 时
。
在 Et 常 病 理 技术 工 作 中 有 多 种 对 骨 骼 的 脱 钙方 法 和 脱
、
、
在 捞 片 前 载 玻 片 上 薄 层 涂 抹 蛋 白甘 油
( 4 ) 切 片 在 烤 箱 中烤
30
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捞 片水 温
44
用 新 脱 钙液制 备 的切 片 ：骨 小 梁 形 态 完 整 骨 髓染 色 适 中
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图3 图
4
用 新 脱 钙 液 制 备 的切 片 ：骨 小 梁 形 态 完 整 骨 髓 显 示 清 晰
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脱 钙 液 制备 的 切 片布 满 波 纹 染 色 偏 红 颜 色 对 比 度 及 切 片
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14% nitric acid can decalcify strongly and rapidly． But its deficiency is the infection of HE coloration and immunohistochemistry． 10% hydrochloric acid doesn＇t destroy the tissue and has the best influence for HE stain． The effect of 20% a hydrochloric acid and HE stain between 10% hydrochloric acid and EDTA decalcifying acid． EDTA can decalcify for a long ，have the minimum damage for bone tissue．
检的手术标本 50 例，其中有长骨、短骨、不规矩骨，包含骨干 2. 3 对组织损伤 EDTA 脱钙液对骨组织的损伤最小，对组
和骨端的骨皮质、骨髓质。
织损伤： EDTA 脱钙液 ＜ 10% 盐酸 ＜ 20% 甲盐酸 ＜ 14% 硝酸
1. 2 材料与设备 所有化学试剂均由广州化学试剂一厂生 （ 见表 1） 。
产； 切片机、染色机和切片刀片均由英国 shandan 公司生产。 2. 4 切片质量 14% 硝酸切片质量最好。EDTA 脱钙液切片
1. 3 脱钙液 的 配 制 14 份 浓 硝 酸 加 86 份 自 来 水 配 制 成 质量最差，骨组织中钙盐残存，出现“返砂”现象，切片在镜下
14% 硝酸； 10 份浓盐酸加 90 份自来水配制成 10% 盐酸； 盐酸 或肉眼可见非常明显的“刀痕”现象，甚至影响观察（ 见表 1） 。
【Abstract】 Objective To investigate the different ability of four different decalcifying solutions to decalcify and their influence of HE stain and immunohistochemistry． Methods 50 cases of fresh human bone example are selected． The bones had been decalcified with four kinds of decalcifying solution （ including 14% nitric acid，10% hydrochloric acid，20% a hydrochloric acid and EDTA） ． Results Different decalcifying solutions had the different decalcified ability and the influence of HE stain and immunohistochemistry． Conclusion
物质，使得抗原的免疫活性降低，在免疫组化染色中抗原不 脱钙对组织细胞或多或少都有影响，苏木素染色可以适当延
细胞核 淡红色-不着色 蓝色，对比清晰 蓝色，对比清晰 蓝色，对比清晰
切片质量 好，无“返砂” 好，无“返砂” 稍有“返砂”
有“返砂”
作者单位： 510085 中山大学附属第一医院病理科（ 罗灿峤 钟觉民） ， 耳鼻喉科（ 莫木琼）
·28·
中国实用医药 2011 年 7 月第 6 卷第 19 期 China Prac Med，Jul 2011，Vol． 6，No． 19
中国实用医药 2011 年 7 月第 6 卷第 19 期 China Prac Med，Jul 2011，Vol． 6，No． 19
·27·
不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用
罗灿峤 莫木琼 钟觉民
【摘要】 目的 比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对 HE 染色的影响。方法 选取 50 例手术切除的新鲜骨标本，运用 4 种常用的脱钙液（ 14% 硝酸、10% 盐酸、20% 甲盐酸和 EDTA 脱钙液） 进行脱钙，比较其脱钙效果和对 HE 染色的影响。结果 不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、 HE 染色效果影响有显著区别。结论 14% 硝酸脱钙能力最强，用时间最短，染色的效果最差； 10% 盐酸 对骨组织的损伤小，HE 染色的效果最好，但用时较长； 20% 甲盐酸脱钙能力和 HE 染色效果都介于 10% 盐酸和 EDTA 脱钙液之间； EDTA 脱钙液脱钙用时最长，对骨组织的损伤最小。
【Key words】 Decalcifying solution； HE stain； Bone tissue
骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成， 二钠盐 10 g，PBS 溶液 100 ml（ 滴加 NAOH 溶液至溶解，然后
骨基质内含大量无机盐，主要是羟磷灰石-磷酸钙和碳酸钙。 用 HCL 中和至 pH 7. 0） 配制成 EDTA 脱钙液。
酸、醋酸、甲酸等） ，也可以利用电解、微波等进行物理脱钙， 进行常规脱水、石蜡包埋、HE 染色。 或混和使用［1］。本研究希望通过对比各种脱钙液的脱钙效 2 结果
果及其后 HE 染色和免疫组化效果，探讨既方便临床应用，又 2. 1 脱 钙 效 果 14% 硝 酸 最 好。14% 硝 酸 ＞ 10% 盐 酸 ＞
标本出现“返砂”现象，制片易出现明显“刀痕”现象，影响观 EDTA 脱钙液脱钙作用较缓慢，一般要 4 ～ 5 周，大多要 5 ～ 6
察。另外，14% 硝酸脱钙液对组织的损伤最大，脱钙后组织肿 胀明显，组织细胞的形态结构难以保持完整清晰。由于 14%
周，脱钙温度以常温为宜，可加温至 37°C 快速脱钙，但脱钙效 果不理想［3］。另外，EDTA 脱钙液在使用过程中还需注意不
由于 EDTA 是一种优良的脱钙螯合剂，故 EDTA 脱钙液
要是因为其脱钙能力最强，脱钙时间最短，但这也使得骨组织 的脱钙作用优于酸性溶液，对组织破坏极小，能保持组织细
的脱钙程度较难掌握，往往造成过度脱钙。同时，14% 硝酸的 胞的完整结构，尤其细胞显微化学改变甚微，且能保存组织
渗透能力差，对骨组织特别是比较硬的骨组织渗透能力更差， 中的抗原物质和某些酶类的活性，有利于组织免疫组化和组 导致其对不同组织的渗透程度不相同，脱钙效果不一样，部分 织化学染色，从而更进一步地保证了实验结果的精确性［2］。
或使组织抗原丢失，从而影响对病变组织的病理诊断或科学 cm × 1. 5 cm × 0. 3 ～ 0. 5 cm，厚 0. 3 cm ～ 0. 5 cm，然后充分浸
实验工作。因此，必须寻找一种合适的脱钙液进行骨组织脱 泡在不同脱钙液中，间隔一定时间后更换脱钙液，当用缝衣针
钙。现时的脱钙液有无机酸（ 硝酸、盐酸、硫酸） 和有机酸（ 蚁 顺利穿过无阻力感、手术刀可顺利切开即为脱钙成功。继而
硝酸为强酸，脱钙后细胞核的染色能力下降，切片经常规 HE 宜用金属容器，尽量用玻璃容器； 同时，组织经过脱钙后必须
染色后细胞核着色能力下降而返蓝困难而变成淡红色，对比 在流动的自来水充分冲洗，自来水的弱碱性可中和残留在组
度差。此外，强酸在溶解骨组织钙盐的同时也容易破坏抗原 织中的脱钙液酸性，有利于组织切片苏木素的着色，同时由于
适合科学研究的脱钙方法。
20% 甲盐酸 ＞ EDTA 脱钙液（ 见表 1） 。
1 资料与方法
2. 2 脱钙时间 14% 硝酸时间最短。14% 硝酸 ＞ 10% 盐酸
1. 1 标本 选取 2008 年 1 月至 2008 年 8 月我院手术室送 ＞ 20% 甲盐酸 ＞ EDTA 脱钙液（ 见表 1） 。
20 ml，甲酸 20 ml，自来水 100 ml，配制成 20% 甲盐酸； EDTA
表 1 4 种脱钙液效果比较
组别 14% 硝酸 10% 盐酸 20% 甲乙酸 EDTA 脱钙液
时间 6 ～8 h 3 ～4 d 1 ～2 周 5 ～6 周
肉眼观察组织颜色 淡黄-黄 无变化 无变化 无变化
细胞形态 稍肿胀 无变化 无变化 无变化
2，3-吲哚醌在大鼠体内的药代动力学研究
张继国 岳旺
【摘要】 目的 考察单次静脉注射和口服给予大鼠 2，3-吲哚醌后的药代动力学，为该药的新药开 发提供依据。方法 大鼠给药后经眼眶静脉采大约 0. 25 ml 血液，采集时间点为： 给予受试物前（ 0 hr） 和给予受试物后 5、15、30 min、1、2、4、6、8 h 和 24 h。血液样本采集后置于冰上，并立即取出 50 μl 全血 采用甲醇蛋白沉淀进行预处理，奎硫平作为内标。预处理后样品采用 LC / MS / MS 法进行测定，并用药动 学处理软件 WinNonlin 5. 2 采用非房室模型计算相关药代动力学参数。结果 Sprague Dawley 大鼠静脉 注射和口服两种制剂的药动学参数（ 平均值 ± 标准偏差） 如下。静脉注射： Tmax 为（ 0. 83 ± 0. 29） hr，Cmax 为 （ 141. 53 ± 10. 99） μg / L，t1 /2 为（ 1. 68 ± 0. 84） hr，AUC0-t 为（ 1068. 15 ± 389. 06） μg / hr / L，AUC0-∞ 为（ 1211. 19 ± 469. 18） μg·hr / L，Vz 为（ 4. 13 ± 1. 41） L / kg，CLz 为（ 1. 89 ± 0. 94） L / hr / kg； 口服： Tmax 为（ 0. 05 ± 0. 00） hr，Cmax 为 （ 1725. 53 ± 469. 70 ） ng / ml，t1 /2 为 （ 4. 21 ± 2. 78 ） hr，AUC0-t 为 （ 7711. 21 ± 2533. 12 ） μg / hr / L， AUC0-∞ 为（ 7986. 07 ± 2623. 38） μg / hr / L，以 AUC0-t 计算，生物利用度平均为（ 57. 75 ± 18. 97） % 。结论 2，3-吲哚醌大鼠体内消除较快，可能存在非线性消除，口服吸收较好。
检的手术标本 50 例，其中有长骨、短骨、不规矩骨，包含骨干 2. 3 对组织损伤 EDTA 脱钙液对骨组织的损伤最小，对组
和骨端的骨皮质、骨髓质。
织损伤： EDTA 脱钙液 ＜ 10% 盐酸 ＜ 20% 甲盐酸 ＜ 14% 硝酸
1. 2 材料与设备 所有化学试剂均由广州化学试剂一厂生 （ 见表 1） 。
产； 切片机、染色机和切片刀片均由英国 shandan 公司生产。 2. 4 切片质量 14% 硝酸切片质量最好。EDTA 脱钙液切片
1. 3 脱钙液 的 配 制 14 份 浓 硝 酸 加 86 份 自 来 水 配 制 成 质量最差，骨组织中钙盐残存，出现“返砂”现象，切片在镜下
14% 硝酸； 10 份浓盐酸加 90 份自来水配制成 10% 盐酸； 盐酸 或肉眼可见非常明显的“刀痕”现象，甚至影响观察（ 见表 1） 。
【Abstract】 Objective To investigate the different ability of four different decalcifying solutions to decalcify and their influence of HE stain and immunohistochemistry． Methods 50 cases of fresh human bone example are selected． The bones had been decalcified with four kinds of decalcifying solution （ including 14% nitric acid，10% hydrochloric acid，20% a hydrochloric acid and EDTA） ． Results Different decalcifying solutions had the different decalcified ability and the influence of HE stain and immunohistochemistry． Conclusion
物质，使得抗原的免疫活性降低，在免疫组化染色中抗原不 脱钙对组织细胞或多或少都有影响，苏木素染色可以适当延
细胞核 淡红色-不着色 蓝色，对比清晰 蓝色，对比清晰 蓝色，对比清晰
切片质量 好，无“返砂” 好，无“返砂” 稍有“返砂”
有“返砂”
作者单位： 510085 中山大学附属第一医院病理科（ 罗灿峤 钟觉民） ， 耳鼻喉科（ 莫木琼）
·28·
中国实用医药 2011 年 7 月第 6 卷第 19 期 China Prac Med，Jul 2011，Vol． 6，No． 19
中国实用医药 2011 年 7 月第 6 卷第 19 期 China Prac Med，Jul 2011，Vol． 6，No． 19
·27·
不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用
罗灿峤 莫木琼 钟觉民
【摘要】 目的 比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对 HE 染色的影响。方法 选取 50 例手术切除的新鲜骨标本，运用 4 种常用的脱钙液（ 14% 硝酸、10% 盐酸、20% 甲盐酸和 EDTA 脱钙液） 进行脱钙，比较其脱钙效果和对 HE 染色的影响。结果 不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、 HE 染色效果影响有显著区别。结论 14% 硝酸脱钙能力最强，用时间最短，染色的效果最差； 10% 盐酸 对骨组织的损伤小，HE 染色的效果最好，但用时较长； 20% 甲盐酸脱钙能力和 HE 染色效果都介于 10% 盐酸和 EDTA 脱钙液之间； EDTA 脱钙液脱钙用时最长，对骨组织的损伤最小。
【Key words】 Decalcifying solution； HE stain； Bone tissue
骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成， 二钠盐 10 g，PBS 溶液 100 ml（ 滴加 NAOH 溶液至溶解，然后
骨基质内含大量无机盐，主要是羟磷灰石-磷酸钙和碳酸钙。 用 HCL 中和至 pH 7. 0） 配制成 EDTA 脱钙液。
酸、醋酸、甲酸等） ，也可以利用电解、微波等进行物理脱钙， 进行常规脱水、石蜡包埋、HE 染色。 或混和使用［1］。本研究希望通过对比各种脱钙液的脱钙效 2 结果
果及其后 HE 染色和免疫组化效果，探讨既方便临床应用，又 2. 1 脱 钙 效 果 14% 硝 酸 最 好。14% 硝 酸 ＞ 10% 盐 酸 ＞
标本出现“返砂”现象，制片易出现明显“刀痕”现象，影响观 EDTA 脱钙液脱钙作用较缓慢，一般要 4 ～ 5 周，大多要 5 ～ 6
察。另外，14% 硝酸脱钙液对组织的损伤最大，脱钙后组织肿 胀明显，组织细胞的形态结构难以保持完整清晰。由于 14%
周，脱钙温度以常温为宜，可加温至 37°C 快速脱钙，但脱钙效 果不理想［3］。另外，EDTA 脱钙液在使用过程中还需注意不
由于 EDTA 是一种优良的脱钙螯合剂，故 EDTA 脱钙液
要是因为其脱钙能力最强，脱钙时间最短，但这也使得骨组织 的脱钙作用优于酸性溶液，对组织破坏极小，能保持组织细
的脱钙程度较难掌握，往往造成过度脱钙。同时，14% 硝酸的 胞的完整结构，尤其细胞显微化学改变甚微，且能保存组织
渗透能力差，对骨组织特别是比较硬的骨组织渗透能力更差， 中的抗原物质和某些酶类的活性，有利于组织免疫组化和组 导致其对不同组织的渗透程度不相同，脱钙效果不一样，部分 织化学染色，从而更进一步地保证了实验结果的精确性［2］。
或使组织抗原丢失，从而影响对病变组织的病理诊断或科学 cm × 1. 5 cm × 0. 3 ～ 0. 5 cm，厚 0. 3 cm ～ 0. 5 cm，然后充分浸
实验工作。因此，必须寻找一种合适的脱钙液进行骨组织脱 泡在不同脱钙液中，间隔一定时间后更换脱钙液，当用缝衣针
钙。现时的脱钙液有无机酸（ 硝酸、盐酸、硫酸） 和有机酸（ 蚁 顺利穿过无阻力感、手术刀可顺利切开即为脱钙成功。继而
硝酸为强酸，脱钙后细胞核的染色能力下降，切片经常规 HE 宜用金属容器，尽量用玻璃容器； 同时，组织经过脱钙后必须
染色后细胞核着色能力下降而返蓝困难而变成淡红色，对比 在流动的自来水充分冲洗，自来水的弱碱性可中和残留在组
度差。此外，强酸在溶解骨组织钙盐的同时也容易破坏抗原 织中的脱钙液酸性，有利于组织切片苏木素的着色，同时由于
适合科学研究的脱钙方法。
20% 甲盐酸 ＞ EDTA 脱钙液（ 见表 1） 。
1 资料与方法
2. 2 脱钙时间 14% 硝酸时间最短。14% 硝酸 ＞ 10% 盐酸
1. 1 标本 选取 2008 年 1 月至 2008 年 8 月我院手术室送 ＞ 20% 甲盐酸 ＞ EDTA 脱钙液（ 见表 1） 。
20 ml，甲酸 20 ml，自来水 100 ml，配制成 20% 甲盐酸； EDTA
表 1 4 种脱钙液效果比较
组别 14% 硝酸 10% 盐酸 20% 甲乙酸 EDTA 脱钙液
时间 6 ～8 h 3 ～4 d 1 ～2 周 5 ～6 周
肉眼观察组织颜色 淡黄-黄 无变化 无变化 无变化
细胞形态 稍肿胀 无变化 无变化 无变化
2，3-吲哚醌在大鼠体内的药代动力学研究
张继国 岳旺
【摘要】 目的 考察单次静脉注射和口服给予大鼠 2，3-吲哚醌后的药代动力学，为该药的新药开 发提供依据。方法 大鼠给药后经眼眶静脉采大约 0. 25 ml 血液，采集时间点为： 给予受试物前（ 0 hr） 和给予受试物后 5、15、30 min、1、2、4、6、8 h 和 24 h。血液样本采集后置于冰上，并立即取出 50 μl 全血 采用甲醇蛋白沉淀进行预处理，奎硫平作为内标。预处理后样品采用 LC / MS / MS 法进行测定，并用药动 学处理软件 WinNonlin 5. 2 采用非房室模型计算相关药代动力学参数。结果 Sprague Dawley 大鼠静脉 注射和口服两种制剂的药动学参数（ 平均值 ± 标准偏差） 如下。静脉注射： Tmax 为（ 0. 83 ± 0. 29） hr，Cmax 为 （ 141. 53 ± 10. 99） μg / L，t1 /2 为（ 1. 68 ± 0. 84） hr，AUC0-t 为（ 1068. 15 ± 389. 06） μg / hr / L，AUC0-∞ 为（ 1211. 19 ± 469. 18） μg·hr / L，Vz 为（ 4. 13 ± 1. 41） L / kg，CLz 为（ 1. 89 ± 0. 94） L / hr / kg； 口服： Tmax 为（ 0. 05 ± 0. 00） hr，Cmax 为 （ 1725. 53 ± 469. 70 ） ng / ml，t1 /2 为 （ 4. 21 ± 2. 78 ） hr，AUC0-t 为 （ 7711. 21 ± 2533. 12 ） μg / hr / L， AUC0-∞ 为（ 7986. 07 ± 2623. 38） μg / hr / L，以 AUC0-t 计算，生物利用度平均为（ 57. 75 ± 18. 97） % 。结论 2，3-吲哚醌大鼠体内消除较快，可能存在非线性消除，口服吸收较好。