脱钙液

快速脱钙液在骨组织脱钙中的应用效果-病理学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——含有骨质的肿瘤，钙化组织及骨髓穿刺组织都很坚硬，要想制成几微米的漂亮HE 切片是很困难的。

脱钙液是决定骨骼、牙齿、病理性钙化或骨化组织切片质量、染色效果的关键技术之一。

目前使用的脱钙液大多数是无机强酸类制剂，虽然脱钙效果好，但造成组织形态，特别是细胞结构的破坏。

因此，在本实验中我们选择了传统的脱钙液和快速脱钙液两种脱钙液进行比较，进而寻找一种更适合于骨组织脱钙的方法。

研究中发现快速脱钙液在不破坏组织结构及影响染色的同时，它可促进脱钙并加快脱钙速度，防止纤维性组织过度膨胀，并且保证了切片的质量，现报道如下。

1 材料与方法1．1 材料收集内蒙古医科大学附属医院2009 －2011 年手术切除的骨肿瘤、病变骨及骨髓穿刺病人标本共40 例。

根据标本的不同将骨组织取成体积为1．5cm 1．5 cm 0．5 cm 的薄片( 骨髓一般直径均为0．1 cm) ，放入10% 中性福尔马林固定24 h，用于脱钙实验。

1．2 普通脱钙液及脱钙方法与步骤普通脱钙液是5%的硝酸，即5 ml 硝酸加入95ml 蒸馏水配制而成。

具体脱钙步骤: ①先把大块骨组织标本切成小段，小块骨组织标本不用改刀，然后放入10%中性福尔马林中固定24 h 左右后再进行脱钙。

②将待脱钙的标本放入5% 硝酸脱钙液中，脱钙液不少于待脱钙标本总体积的10 倍。

③室温下进行脱钙: 骨髓穿刺标本需30 －60 min，肋骨、指趾骨需3 －6 d，皮质骨需要5 －7 d。

④脱钙后的组织经流水冲洗后进行取材、脱水、透明、常规石蜡包埋、制片。

1．3 快速脱钙液及脱钙方法与步骤快速脱钙液是由36% －38% 盐酸8 ml、冰醋酸5 ml、水杨酸10 g 、蒸馏水87 ml 混合而成。

用微波炉进行微波时，微波辐射可加速组织内部分子运动，加快脱钙速度，因标本在酸性溶液中滞留的时间短，所以对组织的损伤小。

EDTA脱钙液使用说明书储存条件：常温保存，有效期1年。

产品内容：Components SL1500 EDTA脱钙液（pH7.2-7.4）500mL说明书1份产品说明：1.在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。

由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。

骨组织含钙量最多。

除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。

脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。

2.为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织中的抗原不受破坏，需要对含钙的组织固定之后再进行脱钙。

然后再行常规制片。

3.EDTA与羟基磷灰石结晶的外层钙结合，形成可溶性的非离子化合物，同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。

借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解，pH中性时可起螯合作用。

其特点是脱钙时间长，对骨组织的损伤少，酶活性(碱性磷酸酶)和细胞抗原性保存较好，制作的切片可用于组织化学和免疫组化分析。

4.主要用途：用于骨组织、牙齿等脱钙。

使用说明：1.骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。

2.组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。

3.组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。

4.组织转移至20～30倍体积的EDTA脱钙液中，脱钙10～30天或更长时间。

如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。

如果必要，更换新的EDTA脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙2周～3个月即可，每周更换一次，直至终点。

亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3～5min，中间间隔3～5min。

5.用蒸馏水冲洗数次。

6.常规脱水、包埋。

注意事项：1．为使脱钙更为充分，每次最好更换新液，这既弃去脱掉的钙盐，增加脱钙强度，又起到降低脱钙的温度。

2．脱钙时间以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。

3．脱钙温度不要太高，一般以室温(25℃)为宜，高温可加快脱钙速度，但可破坏组织中的核酸而影响染色效果。

冰醋酸脱钙液配制方法
冰醋酸脱钙液的配制方法如下：
1. 根据实际需要，如果要求不高，可以用量杯或量筒来量取冰醋酸。

如果要求有更高的精度，建议使用天平来量取冰醋酸。

2. 冰醋酸是弱酸，有腐蚀性，有刺激性，配制时需戴好口罩、眼镜和手套。

3. 取一定量的冰醋酸（例如20毫升），再量取适量的水（例如80毫升），将冰醋酸倒入水中。

4. 使用搅拌棒轻轻搅拌，确保冰醋酸和水混合均匀。

5. 静置一段时间后，将溶液装瓶。

请注意，冰醋酸脱钙液是一种强酸性的溶液，具有腐蚀性，因此应小心操作，避免直接接触皮肤和眼睛。

同时，配制时应遵循相关安全规定和指导，确保操作安全。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。

方法选择12例骨组织，随机分为3组。

A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。

结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。

PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。

结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。

但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。

硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。

标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。

如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。

本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。

1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。

1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。

③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。

骨组织脱钙液介绍骨组织脱钙液概述在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。

由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。

骨组织含钙量最多。

除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。

脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。

为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需要对含钙的织固定之后再进行脱钙或采用固定兼有脱钙的液体处理，固定并脱钙。

然后再行常规制片。

用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid EDTA）除此之外还有电解脱钙法。

强有机酸，如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙，在短时间内可除去大量的钙。

令人遗憾的是这些强酸对组织形态会产生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。

细小的组织，例如，骨髓组织不推荐用强酸脱钙。

虽然可以使用各种附加剂，如缓冲液具有保护组织的作用，但也降低了脱钙速度。

因此，各种脱钙液的配方都围绕着脱钙速度和消除对组织的不良影响而设计。

在酸类脱钙液中醋酸和甲酸比较适合于骨髓组织脱钙。

甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂。

甲酸脱钙 10% 浓度比较合适。

醋酸和甲酸的作用比较弱，脱钙速度比较慢，它们不适合密皮质骨的脱钙。

EDTA 是一种比较温和的脱钙剂（EDTA 不是酸）。

对组织的渗透性差，作用慢。

大剂量使用价格较贵。

电解脱钙对组织损害最小，因为它的脱钙速度太慢，所以，不适合常规使用。

不同的脱钙液对骨组织的脱钙作用不同，脱钙效果也不完全相同。

为了达到良好的脱钙效果，建议使用EDTA脱钙液，该脱钙液对组织损伤较小，缺点就是脱钙时间会比较长些，但脱钙时间也要根据组织块大小而定。

目前国内生产EDTA脱钙液的公司也很少，个人感觉上海舜百生物的EDTA脱钙液使用效果还不错，脱钙脱的比较彻底，而且对组织损伤很小，就是周期长了些。

edta脱钙液配制方法EDTA脱钙液是一种常用的化学试剂，适用于在生化、分子生物学以及细胞生物学实验中，去除镁和钙离子的干扰。

本文将介绍一种EDTA脱钙液配制方法。

1.原料准备：1) 乙二胺四乙酸(EDTA)：分子式为C10H16N2O8，化学纯，实验室常备品，一定要质量优良。

2) 纯水：经过蒸馏或离子交换处理的自来水。

3) 氢氧化钠(NaOH)：实验室常备品，化学纯。

4) 氯化钙(CaCl2)：实验室常备品，纯度要求95%以上。

2. 配制方法：1) 取EDTA 10克，加入100毫升蒸馏水中，并充分搅拌至完全溶解。

2) 用氢氧化钠溶液调节pH值至8.0，溶液会变成无色透明。

3) 用蒸馏水将溶液加至总体积200毫升，均匀混合。

4) 氯化钙和氯化镁分别加入到50毫升蒸馏水中，若有残留颗粒，则需过滤至溶液无颗粒为止。

5) 将氯化钙和氯化镁溶液缓慢滴加到EDTA水溶液中，同时用磁力搅拌器搅拌，注意滴加时不要加的过快，需滴加至完全反应。

6) 倒入500毫升容量瓶中，并用蒸馏水加至刻度处，摇匀。

3. 注意事项：1) 在配制EDTA脱钙液时，应严谨操作，确保实验的准确性。

2) 水溶液的pH值应被精确地测量，并调节至8.0，以确保溶液的准确性与稳定性。

3) 在溶液调节和滴加氯化钙和氯化镁的过程中，应缓慢平稳，反应完全，避免产生沉淀和反应失误。

4) 为了得到稳定的EDTA脱钙液，应将其保存在阴凉、避光的环境中，并尽量降低其与大气中的CO2接触的机会。

总结：以上就是制备EDTA脱钙液的方法，这是适用于实验室的一种方法。

在添加脱钙剂到实验中时，确保您了解反应的机理和适用于您实验的最佳体系。

脱钙液配制30%盐酸溶液1000 ml(10%中性福尔马林液700 ml+浓盐酸300 ml)加入140 g 氯化钠,待其完全溶解后再加入20 ml冰醋酸。

在日常病理技术工作中,有多种对骨骼的脱钙方法和脱钙组织切片的制作方法,本文所述脱钙方法和脱钙液从脱钙速度,对组织的损伤程度以及切片染色等方面效果都比较理想,这种脱钙液与其他酸类脱钙液相比较,对组织损伤小,脱钙时间短,并作用温和,其中30%的盐酸溶液对脱钙组织造成的损害较小,对组织不膨胀,不至于导致脱钙过程缓慢,但核染色不佳。

加入氯化钠可以防止脱钙组织因经过盐酸脱钙后导致的切片染色偏红,加入冰醋酸可使脱钙组织软化,有利于切片,从而使制片效果更加理想。

对照组以单纯30%盐酸为主的脱钙液与新方法脱钙液对同等体积、大小、部位相同的骨组织同时进行脱钙,前者制作的骨骼切片不平整,染色偏红,胞核红染,核质不清晰,切片整体组织结构显示不清。

经新方法脱钙后所制作的切片组织结构显示清晰,切片中的软组织和骨组织结构均可完整显示,细胞染色清晰,核质对比鲜明,制片中所用的固定剂、脱水剂、透明剂等都为日常技术工作必备试剂,而且制作出的切片效果很好,在本方法中所用的固定、脱水、透明、浸蜡、染色试剂都可以数次重复使用,试剂配制和操作方法简单,值得临床推广应用。

王淑兰，制作骨骼组织切片的新脱钙液改良的Plank·Rycho脱钙液的配制:氯化铝7g ,盐酸815ml ,甲酸5ml ,甲醛15ml ,TritonX-1000.5ml ,蒸馏水100ml。

为了保持良好的骨组织形态结构,达到脱钙目的,我们在Plank·Rycho脱钙液中加入甲醛和TritonX-100 ,更加充分发挥各自的作用,使固定、脱脂、脱钙同时进行。

甲醛不仅是优良的固定剂,还可适度保护组织免受酸的侵蚀。

TritonX-100 (聚乙醇辛基苯基醚)是一种表面活性剂,虽不具备脱钙作用,但能溶解脂质,改善细胞膜的通透性〔1 ,2〕,使骨组织中的脂质在短时间内脱去,加快了脱钙速度。

不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用【摘要】目的比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对HE染色的影响。

方法选取50例手术切除的新鲜骨标本，运用4种常用的脱钙液(14%硝酸、10%盐酸、20%甲盐酸和EDTA脱钙液)进行脱钙，比较其脱钙效果和对HE染色的影响。

结果不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别。

结论14%硝酸脱钙能力最强，用时间最短，染色的效果最差；10%盐酸对骨组织的损伤小，HE染色的效果最好，但用时较长；20%甲盐酸脱钙能力和HE染色效果都介于10%盐酸和EDTA脱钙液之间；EDTA脱钙液脱钙用时最长, 对骨组织的损伤最小。

【Abstract】Objective To investigate the different ability of four different decalcifying solutions to decalcify and their influence of HE stain and immunohistochemistry. Methods 50 cases of fresh human bone example are selected. The bones had been decalcified with four kinds of decalcifying solution (including 14% nitric acid, 10% hydrochloric acid, 20% a hydrochloric acid and EDTA). Results Different decalcifying solutions had the different decalcified ability and the influence of HE stain and immunohistochemistry. Conclusion 14% nitric acid can decalcify strongly and rapidly. But its deficiency is the infection of HE coloration and immunohistochemistry. 10% hydrochloric acid doesn’t destroy the tissue and has the best influence for HE stain. The effect of 20% a hydrochloric acid and HE stain between 10% hydrochloric acid and EDTA decalcifying acid. EDTA can decalcify for a long , have the minimum damage for bone tissue.【Key words】Decalcifying solution; HE stain; Bone tissue骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成，骨基质内含大量无机盐，主要是羟磷灰石-磷酸钙和碳酸钙。