EDTA脱钙液

甲酸脱钙液简介：在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。

这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。

对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。

然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。

用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。

在有机酸中，甲酸、乙酸比较适合于骨髓组织脱钙。

甲酸脱钙液是一种使用范围广泛的脱钙剂，但是该法脱钙速度太慢，不适合密皮质骨的脱钙。

Leagene 甲酸脱钙液主要由甲酸、福尔马林等组成。

其优点：①对细胞核染色结果较好；②兼具脱钙和组织固定的作用；③适用于小块组织和牙齿的脱钙。

其缺点：①脱钙速度比较慢，不适合常规标本脱钙使用；②不适合密皮质骨脱钙使用；③脱钙后需要硫酸钠溶液进行碱处理。

组成：自备材料：1、 PBS2、 蒸馏水3、 5%硫酸钠溶液操作步骤(仅供参考)：1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚。

2、 组织固定后，用PBS 清洗。

3、 组织用蒸馏水洗清洗。

4、 组织转移至甲酸脱钙液中，脱钙3～10天或更长时间。

如有必要，更换新的甲酸脱钙液继续脱钙直至终点，多数组织脱钙1周即可。

5、 用蒸馏水冲洗数次。

6、 组织立即入硫酸钠溶液进行碱处理。

7、 充分流水冲洗。

8、 常规脱水、包埋。

编号 名称 DD0012 Storage 甲酸脱钙液 500ml RT 避光 使用说明书 1份注意事项：1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙3~10天即可。

2、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。

脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。

3、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。

4、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

不同脱钙液对钙化性主动脉瓣膜脱钙效果的比较李灿波;李海清;叶晓峰;赵强【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2015(035)008【摘要】目的比较不同脱钙液对钙化性主动脉瓣膜标本的脱钙效果.方法选择6例主动脉瓣钙化患者的病变瓣膜标本,每个瓣膜等分成3份后随机分配到5％硝酸(硝酸组)、10％甲酸(甲酸组)、10％ EDTA(EDTA组)溶液中进行脱钙,观察和比较各组病理切片的苏木精-伊红染色(H-E染色)和免疫组织化学染色效果.结果 EDTA 组脱钙速度较慢,但显示瓣膜组织结构完整,形态清晰,脱钙及免疫组织化学染色效果最佳.硝酸组脱钙时间最短,也能获得良好的脱钙效果.甲酸组脱钙时间较短,但脱钙效果最差.结论在钙化性主动脉瓣的病理学研究中,EDTA脱钙液仍是脱钙的最佳选择.而在考虑时间因素的情况下,硝酸脱钙液则是良好的替代.甲酸脱钙液由于对钙化瓣膜的脱钙效果较差,不推荐使用.【总页数】4页(P1234-1237)【作者】李灿波;李海清;叶晓峰;赵强【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院心脏外科,上海200025【正文语种】中文【中图分类】R542.52【相关文献】1.三种不同脱钙液在骨组织石蜡切片中的应用比较 [J], 杜洪;金荣2.临床病理检验中不同骨组织脱钙液效果的比较 [J], 李玉莲;徐晓艳3.不同脱钙条件下三种脱钙液脱钙效果的比较 [J], 陈敬文;张伟;王天娲;程俊;罗金风4.不同成份脱钙液对骨组织脱钙效果的比较 [J], 祁宏枝; 罗添友; 唐涛5.三种脱钙液对狗牙齿及牙槽骨脱钙效果的比较 [J], 于洪藻;李玉林;张丽红;王成坤;蔡家骏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用
罗灿峤;莫木琼;钟觉民
【期刊名称】《中国实用医药》
【年(卷),期】2011(006)019
【摘要】目的比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异,探讨其对HE染色的影响.方法选取50例手术切除的新鲜骨标本,运用4种常用的脱钙液(14%硝酸、10%盐酸、20%甲盐酸和EDTA脱钙液)进行脱钙,比较其脱钙效果和对HE染色的影响.结果不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别.结论14%硝酸脱钙能力最强,用时间最短,染色的效果最差;10%盐酸对骨组织的损伤
小,HE染色的效果最好,但用时较长;20%甲盐酸脱钙能力和HE染色效果都介于10%盐酸和EDTA脱钙液之间;EDTA脱钙液脱钙用时最长,对骨组织的损伤最小.
【总页数】2页(P27-28)
【作者】罗灿峤;莫木琼;钟觉民
【作者单位】510085,中山大学附属第一医院病理科;510085,中山大学附属第一医院耳鼻喉科;510085,中山大学附属第一医院病理科
【正文语种】中文
【相关文献】
1.介绍一种改良脱钙液在骨组织制片中的应用 [J], 陈世梁;卢志承;董玉英
2.骨组织制片中改良脱钙液与传统脱钙液的比较 [J], 王彦芳;王宪治
3.三种不同脱钙液在骨组织石蜡切片中的应用比较 [J], 杜洪;金荣
4.一种改良脱钙液在骨组织制片中的临床应用 [J], 何蓉;陈建萍;李艳
5.不同成份脱钙液对骨组织脱钙效果的比较 [J], 祁宏枝; 罗添友; 唐涛
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EDTA 普遍应用于生物学各个领域，常用在电泳缓冲体系中，金属依赖性的蛋白水解酶或者核酸酶反应，细胞消化或者样品解聚过程等等。

EDTA 溶液已被用于一项帮助阐明抗原修复在乙醇固定涂片的免疫染色中作用的研究。

EDTA 溶液也被用于研究中以评估生物素标记的荧光素(b-FITC)的摄取和释放。

EDTA 常以二钠或者三钾盐的形式用作抗凝剂，作用机制在于它能够螯合血液中的钙离子从而阻止凝血发生。

Absin 供应的EDTA 是一种重要络合剂/螯合剂，常用做核酸酶、蛋白酶的抑制剂；也可用于消除重金属离子对酶的抑制作用。

1. 乙二胺四乙酸(EDTA) abs44059861生化研究中用作钙螯合剂，消除微量重金属导致的酶催化反应中的抑制作用。

常用络合剂试剂，也用作洗涤剂、血液抗凝剂等。

2. EDTA, 0.5 M, pH 8.0 abs9133本品是用DEPC(diethyl pyrocarbonate ，焦碳酸二乙酯)处理过的EDTA 溶液， 是一种螯合剂，用来消除重金属离子对酶的抑制作用，常用于分子生物学应用。

3. EDTA 二钠盐二水合物 abs44059863科研试剂，用于重金属定量分析剂，用作氨羧络合剂，还用于制药工业、彩色显影等。

4. EDTA 二钠盐 abs42222235是一种重要络合剂，用于络合金属离子和分离金属。

常用于分子生物学及电泳实验5. 10%EDTA 脱钙液 abs9223EDTA 是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。

但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。

不适合常规标本脱钙使用。

对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。

然后进行下游的实验，如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响张大贵;林小芳;张普;周婵萍【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2012(50)24【摘要】目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响.方法选择12例骨组织,随机分为3组.A组用14％硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色.结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大.PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好.结论室温条件下,三种脱钙液巾PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好.但南于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查.硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差.【总页数】3页(P101-103)【作者】张大贵;林小芳;张普;周婵萍【作者单位】温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院泌尿外科,浙江温州 325000;温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000【正文语种】中文【中图分类】R446.4+1【相关文献】1.三种脱钙液对免疫组化染色效果的比较 [J], 孙庆妹;刘军2.三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析 [J], 连丽琴;夏凌志;钟惠霞3.四种脱钙液对骨组织HE和免疫组化染色的影响 [J], 李锐;金玉兰;韩一丁;刘红刚4.混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析 [J], 吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣5.八种脱钙液对骨组织制片后HE染色质量影响的实践探究 [J], 方皓;云杰苗;王雄;袁滋铎;林俞辰;陶子春;薛逢贵;胡爱华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

10％ EDTA、5％硝酸用于大鼠颞骨脱钙处理的效果对比观察卓洋;王巧;杨聪颖;陈昊;李爱民【摘要】目的观察并比较10％乙二胺四乙酸二钠(EDTA)和5％硝酸脱钙处理大鼠颞骨的效果.方法 SD大鼠10只,随机分为EDTA组和硝酸组,取出大鼠颞骨后分别置于10％ EDTA、5％硝酸脱钙液中进行脱钙处理.观察两组脱钙效果,记录脱钙时间,采用甲苯胺蓝染色进行颞骨组织形态学观察,采用免疫荧光双标染色检测α-tubulin蛋白、水通道蛋白1(AQPl).结果两组取材过程中,颅骨硬度适当,颞骨可轻松切下,无砂砾感,切下的颞骨无松散及组织脱落.硝酸组脱钙所需时间分别为(11.20±0.83)d、(26.20 ±2.38) min,两组相比,P＜0.05.EDTA组颞骨整体形态保持完好,蜗管、镫骨肌、岩动脉、神经元、雪旺细胞、郎飞结、神经干可清晰辨识;硝酸组颞骨整体结构保存较理想,神经元形态保持尚可,但存在骨质染色不均、雪旺细胞崩解、轴突肿胀、郎飞结消失现象.EDTA组颞骨脱钙后AQP1、α-tubulin蛋白定位准确,组织区分度高;硝酸组由于细胞膜中AQP1遭受破坏、位于微管内的α-tubulin蛋白漏出细胞,荧光消减明显,组织形态保持较差.结论 10％ EDTA和5％硝酸用于大鼠颞骨脱钙处理效果均较好,两种脱钙液均适用于普通病理及结构观察,若用于蛋白定量及定性方面研究,应首选10％ EDTA.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2016(056)031【总页数】3页(P43-45)【关键词】骨脱钙技术;乙二胺四乙酸二钠;硝酸;颞骨【作者】卓洋;王巧;杨聪颖;陈昊;李爱民【作者单位】徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000【正文语种】中文【中图分类】R446.6颞骨参与构成头颅的侧部与颅底，其中穿行面神经、脑膜中动脉及分支，颞骨同时容纳听觉器官及其附属结构，颞骨骨折可造成上述结构损伤，引起相应并发症[1]。

Leagene 。

com 北京雷根生物技术有限公司Perenyi's 脱钙液简介：用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。

Perenyi's 脱钙液是一种相对较好的温和脱钙剂，固定后对细胞核和细胞浆细微结构着色好，脱钙后无需碱性溶液中和及冲洗。

但脱钙速度较慢，不能用化学方法确定脱钙终点。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚。

2、 组织固定后，用PBS 清洗。

3、 组织用蒸馏水洗清洗。

4、 组织转移至15~20倍体积的Perenyi's 脱钙液脱钙。

5、 (可选)用蒸馏水冲洗数次。

6、 常规脱水、包埋。

注意事项：1、 厚度5mm 的骨组织块脱钙时间一般脱钙即可。

2、 适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃。

3、 脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。

脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。

4、 脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。

5、 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定。

6、 每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。

附录：脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力感即可终止脱钙。

物理检测法会对组织结构有一定的损害，尽量避免用力过大或反复检测。

编号 名称 DD0010 Storage Perenyi's 脱钙液 500ml RT 使用说明书 1份。

EDTA脱钙方法的实验观察
黄美雅;黄云梅;林燕萍;郑良朴
【期刊名称】《福建中医药》
【年(卷),期】2007(038)004
【摘要】骨骼组织是一种坚硬的结缔组织，有机成分类骨质和无机成分骨盐2种成分紧密结合形成骨基质，使其变得十分坚硬，不能直接制片。

我们实验工作中要获得一张优质的骨切片，均需脱钙处理，使钙盐溶解，组织变软后才能制作切片。

然后进行HE染色、特殊染色和免疫组化等观察。

在诸多脱钙方法中，笔者在实践中认为化学螯合物（EDTA）脱钙法是一种较为理想、可行的方法，特别适合科学研究。

本
【总页数】2页(P46-47)
【作者】黄美雅;黄云梅;林燕萍;郑良朴
【作者单位】福建中医学院,福建,福州,350108;福建中医学院,福建,福州,350108;福建中医学院,福建,福州,350108;福建中医学院,福建,福州,350108
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8
【相关文献】
1.混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析 [J], 吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣
2.两种EDTA脱钙方法的比较 [J], 李喜红;杨海新;张睿
3.改良EDTA脱钙法和酸脱钙法在乳腺癌骨转移免疫组织化学中的比较研究 [J], 孙静; 袁俊清; 杨梦迪; 王智煜; 姚光宇; 周亦一; 赵晖
4.EDTA脱钙在骨组织大切片制片中的应用效果 [J], 翁丹枫;傅晓丹;陈淑惠;张真真
5.5％硝酸、10％EDTA用于大鼠尾椎椎间盘组织脱钙处理的效果观察 [J], 齐妍;李建华;王咏梅
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北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com JYBL-Ⅱ脱钙液 简介： 在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。 Leagene JYBL-Ⅱ脱钙液主要由稀酸、甲醛、甲酸等组成。其优点是：①作用迅速，比JYBL-Ⅰ时间更短，一般24h即可；②对组织的结构损害小；③脱钙完全。该脱钙液特别适用于日常病理科骨组织标本脱钙，但不宜用化学方法确定脱钙终点，对组织结构有一定损伤。

组成：

自备材料： 1、 PBS 2、 蒸馏水 3、 加热装置或微波炉

操作步骤(仅供参考)： 1、 骨组织脱钙时，取材不易过厚。 2、 组织固定后，用PBS清洗。 3、 组织用蒸馏水洗清洗。 4、 组织转移至JYBL-Ⅱ脱钙液中，脱钙24h。如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。 5、 用蒸馏水冲洗数次。 6、 常规脱水、包埋。

编号 名称 DD0017 DD0017 Storage

JYBL-Ⅱ脱钙液 500ml 5L RT 避光 使用说明书 1份 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com 注意事项： 1、 厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙24即可。 2、 适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。 3、 脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。 4、 脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。 5、 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。 6、 每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。 7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1．硝酸-间苯三酚液：浓硝酸10ml，间苯三酚1g，通风橱内混合。

混合时会产生浓的棕黄色双硫磷烟雾。

然后加10%硝酸 100ml。

骨组织块5mm厚脱钙时间12-24小时。

优点：该液脱钙速度非常快，大概是所有脱钙液中速度最快的一种脱钙液。

缺点：（1）细胞核染色很差。

（2）如果脱钙时间太长对组织有较大的损害。

（3）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少24小时。

（4）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。

:2．硝酸水溶液：浓硝酸5-10ml，蒸馏水加至100ml。

厚度5mm骨组织块脱钙12-24小时。

优点：（1）硝酸水溶液是一种迅速的脱钙液。

（2）对组织损害较少，细胞核着色比福尔马林-硝酸液要好。

（3）组织可直接通过70%乙醇去除酸。

缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。

3、EDTA 脱钙一般用10%EDTA脱矿液。

此液对组织无损伤，但脱钙速度慢。

组织内酶的活性保留，可用于组织化学染色的小块骨组织。

对组织抗原性的损伤也较小，因此用于免疫组织化学染色也较为理想。

脱钙后的组织，经流水冲洗以除去组织中的EDTA，而后按常规处理。

我的配制方法如下：以1000ml10%EDTA为例1) 称取EDTA100g；2) 加入温热（60~70℃）的蒸馏水约450ml，加入NaOH15g左右，搅拌至透明；3) 加入0.2M的PBS500ml，调节pH值至7.2~7.3，PBS的终浓度为0.1M；4) 蒸馏水定容至1000ml。

注意事项：1) PBS的量需精确，其pH值最好在7.2~7.6之间。

2) 加NaOH助溶时宜少量多次，调节pH时也应少量多次，缓慢进行。

3) 配液前应配好PBS，备好所需的试剂（如NaOH、HCl）、器皿。

用PBS配，缓冲能力要好些，建议还是用PBS配制。

用NAOH的目的是助溶，因为EDTA在pH 8.0左右较易溶解。

等EDTA 溶解了后还是要用盐酸把pH值调到7.2~7.3。

如果过酸或过碱，对蛋白都有影响。

骨髓活检组织制片中改良脱钙液的应用及常见问题分析翁丹枫【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2018(034)010【总页数】3页(P1166-1168)【关键词】骨髓活检;EDTA;制片;HE染色;免疫组织化学【作者】翁丹枫【作者单位】福建医科大学附属第一医院病理科,福州350005【正文语种】中文【中图分类】R446.8在临床病理外检工作中，骨髓组织由于含有大量的钙盐而比较坚硬，需经过脱钙处理后才能进行常规制片，脱钙不全或脱钙过度均影响骨髓HE染色及免疫组化染色效果，降低病理诊断的准确率。

作者在长期的骨髓制片工作中，摸索出一种适合骨髓组织的改良EDTA脱钙液，提高了骨髓制片质量和染色效果。

本文现就骨髓活检标本固定及取材、脱钙、制片和染色等环节进行总结，供广大同仁分析交流，共同提高骨髓活检组织制片和染色质量。

1 材料与方法1.1 材料选取福建医科大学附属第一医院病理科2016年1月～2017年8月骨髓活检穿刺标本1 000余例。

1.2 仪器及试剂 Thermo Pathcenter脱水机，Leica ST5020多功能染色机，Dako全自动免疫组化染色机；苏木精和伊红购自广州维格斯公司；二甲苯、乙醇及乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)购自上海沪试公司；CD3、CD38、CD68、CD138、MPO和Ki-67购自北京中杉金桥公司；CD20、CD42b、CD56、CD235a、Lambda购自福州迈新公司；Kappa购自Dako公司。

1.3 脱钙液配制改良EDTA脱钙液(pH 7.0)：取250 g的EDTA-2Na，溶于1 350 mL磷酸盐缓冲液中，待溶液彻底溶解后加入40%甲醛150 mL，加入氢氧化钠使溶液pH值至7.0。

1.4 HE染色及免疫组化染色送检骨髓组织经固定，3段取材后分别经盐酸甲酸混合酸脱钙液脱钙、不脱钙或改良EDTA脱钙液脱钙(图1)，脱水机脱水浸蜡(表1)，进行HE染色及免疫组化染色。

Perenyi's脱钙液的使用方法步骤货号：G2510规格：500mL保存：室温保存,有效期12个月.产品说明：在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。

这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。

对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。

然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。

用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。

Perenyi's 脱钙液是一种相对较好的温和脱钙剂，固定后对细胞核和细胞浆细微结构着色好，脱钙后无需碱性溶液中和及冲洗。

但脱钙速度较慢，不能用化学方法确定脱钙终点。

自备材料：1、PBS2、蒸馏水3、加热装置或微波炉操作步骤(仅供参考)：1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约5mm。

2、组织固定后，用PBS清洗3次，每次20min。

3、组织用蒸馏水洗清洗3次，每次20min。

4、组织转移至15-20倍体积的Perenyi's脱钙液中，脱钙3-10天或更长时间。

如果想加快脱钙速度，可以置于37℃进行脱钙。

如果必要，更换新的脱钙液继续脱钙，多数组织脱钙1～4周即可，每周更换一次，直至终点。

亦可采用微波快速脱钙法：微波炉设在200W左右的档位，每次加热5min，依据组织厚度和密度重复3-5min，中间间隔3-5min。

5、(可选)用蒸馏水冲洗数次。

6、常规脱水、包埋。

注意事项：1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙3-10天即可。

2、本试剂具有强酸腐蚀性，请小心操作。

3、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37-40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体。

4、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。

脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。

5、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。

6、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。

比较四种脱钙法对人牙免疫组化染色抗原性的影响作者：陈洪伟刘英群温黎明冯晓杰李任来源：《中国美容医学》2012年第06期[摘要]目的：比较四种脱钙方法对人牙牙体组织免疫组化染色抗原活性的影响。

方法：40颗人牙随机分为四组，分别在微波、超声、微波-超声联合及常温下用10%乙二胺四乙酸二钠溶液(EDTA-2Na)脱钙。

应用SABC免疫组化染色技术检测Ⅰ型胶原蛋白、纤维粘连蛋白在各组牙体组织中的表达情况。

结果：在微波-超声联合组脱钙所需时间最短，且免疫组化染色效果最好﹙P＜0.05﹚；微波组脱钙时间较超声组略短，但二者免疫组化染色效果无显著差异（P ＞0.05）。

常温组所需脱钙时间最长且免疫组化染色效果最差。

结论：微波-超声联合法脱钙速度较快，免疫组化染色效果较好，是一种较为理想的脱钙方法。

[关键词]微波；超声；牙齿；脱钙方法；免疫组化[中图分类号]R783.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2012）06-0955-03牙体组织结构较为特殊，其硬组织中含有大量钙盐（洛氏硬度值达340）[1]，是全身最坚硬的组织，不易切片极易脱片，因此在病理制片过程中首先要脱去其中的钙盐再进行制片，而位于牙体硬组织中心的牙髓为柔软的结缔组织，在制片过程中易受挤压、牵拉而至变形、分离甚至脱落流失，脱钙不佳也会影响组织细胞染色效果或使组织抗原丢失[2]，从而影响对病变组织的病理诊断或科学研究工作。

因此合适的脱钙方法成为牙体组织制片，进行免疫组化染色实验首先要解决的难题。

本实验中对微波、超声、微波-超声联合脱钙法的脱钙效果，及不同脱钙方法对牙体组织免疫组化染色抗原的影响程度进行了初步检测，旨在寻找出更适合牙体组织免疫组化染色实验的脱钙方法。

1 材料和方法1.1 材料：收集因正畸拔除的健康人前磨牙40颗,患者年龄17～25岁,牙齿完好。

经生理盐水冲洗后,入4%多聚甲醛溶液固定24h。

1.2 仪器试剂：微光波炉（WG700TL20Ⅱ-k6,广东格兰仕集团有限公司）；KQ118型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Ⅰ型胶原蛋白抗体(武汉博士德公司)；纤维粘连蛋白抗体(武汉博士德公司)；SABC试剂盒(武汉博士德公司)。

Bouin's脱钙液货号：G2530规格：100mL/500mL保存：4℃保存，12个月有效。

产品说明：在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。

这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。

对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。

然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。

用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。

EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。

但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。

Bouin's脱钙液可用于固定，亦可用于脱钙。

该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：1、PBS2、蒸馏水3、加热装置或微波炉注意事项：1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14～60天即可。

2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。

3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。

脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。

4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。

第1页，共2页5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。

6、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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