MTT法检测乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的研究

肿瘤细胞原代培养及药敏(MTT法)的质量控制徐文科1,乔小云2(1.安徽省皖南医学院弋矶山医院,安徽芜湖241001;2.江苏省南京市鼓楼医院,江苏南京210008)摘要:目的考察肿瘤细胞原代培养及药敏(MTT法)各项操作规程,为质量控制提供实践依据。

方法在操作过程中,注意强化无菌操作、规范化取舍标本、显微镜下控制单细胞悬液浓度、培养和测定条件的控制、工作液稳定性的研究。

结果肿瘤细胞原代培养及药敏(M TT法)的结果稳定性有了很大的提高。

结论通过严格控制实验操作程序,肿瘤药敏M TT 法的临床相符性令人满意,可在实际工作中推广。

关键词:肿瘤细胞;培养;药敏;质量控制肿瘤细胞培养和药敏实验是筛选抗肿瘤药物的主要研究方法[1,2]。

不合适的临床抗肿瘤化疗药物不仅使治疗失败,同时能诱导肿瘤细胞产生耐药性。

因此,对提高临床疗效、减轻毒副作用也具有重要的意义[3]。

目前国内的医疗机构中,对肿瘤组织进行细胞培养及药敏实验大多采用体外四氮唑盐(M TT)法,具有操作简便、成本低廉、耗时少、无放射性等优点[4~6]。

该法主要的缺陷是,结果不稳定导致与临床相符性差。

究其原因,因为在整个操作过程中,需要严格质量控制的步骤较多,各种操作过程需要多次试验来验证[7,8]。

我们在实际工作中,通过流程质量控制,获得了比较满意的结果。

现报道如下。

1操作规范化1.1强化无菌操作在细胞培养及药敏实验时,需要配制1640培养液、工作浓度的试剂和抗肿瘤药物、含有抗生素的生理盐水等。

这些药液的配制要求必须在净化的空间中配制,以免有细菌的污染。

参与配制的玻璃瓶、培养皿、不锈钢细胞滤筛、试管、移液管、吸头等器械均需在清洗后121e、30 m i n水蒸汽湿热灭菌。

对微量移液系统、洗耳球等不宜湿热灭菌的物品,在实验操作前后,用75%乙醇或0.1%醋酸氯己定溶液擦拭灭菌,可以获得较好的无菌效果。

1.2病理标本的规范化取舍一般来说,在室温条件下,组织细胞离体2h,后,活性受影响。

PKC家族成员对乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬的调
节作用的开题报告
背景：
自噬是一种细胞自我降解过程，可以分解老化、损伤或无用的细胞成分，从而为细胞生存和代谢能量提供必要的物质。

自噬能在多种疾病中发挥作用，而且在肿瘤的发生和发展中也发挥着重要的作用。

PKC家族是一类通过磷酸化作用来控制细胞信号传导的重要蛋白，已经发现可以通过多种途径诱导或抑制自噬。

研究目的：
探究PKC家族成员对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬的调节作用，并为进一步阐明细胞机制提供基础支持。

研究方法：
利用MTT法检测1NT1对MDA-MB-231细胞增殖活性的影响；Western blot法检测PKC家族成员及其下游信号分子在MDA-MB-231细胞内的表达和磷酸化水平；荧光染色法观察细胞自噬现象；RNAi技术靶向干扰PKC家族成员基因表达，研究其对细胞自噬的影响。

预期结果：
研究结果将探究PKC家族成员对乳腺癌细胞自噬的具体调节作用，揭示其细胞信号传导的分子机制，并为研发针对自噬的治疗药物提供理论支持。

三阴性乳腺癌是指雌激素受体（ER ）、孕激素受体（PR ）和人表皮生长因子受体（HER-2）均为阴性的一类乳腺癌，具有肿瘤体积大、分化低、转移率和复发率高等特点，发病率占乳腺癌总数的15%~25%［1-3］，并且呈现出较高的致死率［4-5］。

乳腺癌的治疗方式主要包括乳房切除、化疗、放疗以及联合疗法等［6］。

与其他乳腺癌相比，三阴性乳腺癌易发生远处转移且无靶向治疗药物，主要依赖化疗方法［7-9］，但总体预后较差，5年存活率低于30%［3］，且存在较高的复发风险［10］。

目前，临床上应用的Preparation of warangalone-loaded liposomes and its inhibitory effect on breast cancer cellsMAO Lianzhi 1,LIU Huiping 2,LIU Huahuan 1,BIAN Zhongbo 1,ZHANG Qiuyu 1,LIAO Wenzhen2,SUN Suxia 11Department of Nutrition and Food Hygiene,School of Public Health,Southern Medical University,Guangzhou 510515,China;2ERA (Shenzhen)Biotechonology,Shenzhen 518000,China摘要：目的制备和鉴定攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体并研究其抗乳腺癌作用。

方法MTT 法检测攀登鱼藤异黄酮、大豆异黄酮和金雀异黄酮对人乳腺癌细胞（MDA-MB-231、MCF7、SKBR3）增殖活性影响；克隆形成实验探讨攀登鱼藤异黄酮对三阴性乳腺癌细胞（MDA-MB-231）克隆形成的影响；细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移；蛋白印迹法检测MDA-MB-231细胞迁移和侵袭蛋白MMP2，MMP9表达量；薄膜水化法制备温敏脂质体及攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体；透射电子显微镜、动态光散射扫描仪以及紫外分光光度计分别鉴定攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体形貌、粒径、包封率及稳定性，并用MTT 法检测攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体抗小鼠乳腺癌细胞（4T1）增殖活性。

第1篇一、实验目的本实验旨在探究抗肿瘤生物治疗技术在肿瘤防治中的应用效果，通过体外实验验证生物治疗技术对肿瘤细胞的杀伤作用，为肿瘤的综合治疗提供科学依据。

二、实验材料1. 肿瘤细胞系：人乳腺癌细胞系MCF-7、人肺癌细胞系A549。

2. 生物治疗制剂：DC细胞、CIK细胞、细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞等。

3. 实验试剂：胎牛血清、DMEM培养基、胰蛋白酶、MTT试剂盒、细胞计数板等。

三、实验方法1. 细胞培养：将肿瘤细胞系MCF-7、A549分别接种于培养瓶中，在37℃、5%CO2的条件下培养至对数生长期。

2. 生物治疗制剂制备：收集DC细胞、CIK细胞等，进行体外培养、扩增，制备成生物治疗制剂。

3. 肿瘤细胞处理：将培养好的肿瘤细胞用胰蛋白酶消化，调整细胞密度至1×10^5个/孔，接种于96孔板。

4. 实验分组：- 对照组：仅加入等量DMEM培养基。

- 治疗组1：加入DC细胞制剂。

- 治疗组2：加入CIK细胞制剂。

- 治疗组3：加入DC细胞+CIK细胞联合制剂。

5. MTT实验：将各组细胞在37℃、5%CO2的条件下培养24小时后，加入MTT试剂，继续培养4小时，用酶标仪检测吸光度值。

6. 统计学分析：采用SPSS软件对实验数据进行统计分析，比较各组间差异。

四、实验结果1. 细胞活力检测：与对照组相比，各治疗组的细胞活力均显著降低，说明生物治疗制剂对肿瘤细胞具有杀伤作用。

2. 统计学分析：与对照组相比，治疗组1、2、3的细胞活力分别降低了47.5%、52.3%、59.1%，差异具有统计学意义（P<0.05）。

五、实验结论1. DC细胞、CIK细胞等生物治疗制剂对肿瘤细胞具有显著的杀伤作用。

2. DC细胞+CIK细胞联合制剂对肿瘤细胞的杀伤作用优于单一生物治疗制剂。

3. 抗肿瘤生物治疗技术在肿瘤防治中具有广阔的应用前景。

六、实验讨论1. 本实验采用MTT法检测细胞活力，结果显示生物治疗制剂对肿瘤细胞具有显著的杀伤作用，为抗肿瘤生物治疗技术提供了实验依据。

一、实验目的本研究旨在探讨某种新型抗肿瘤药物在体外细胞模型中的抗肿瘤活性，为该药物的临床应用提供实验依据。

二、实验材料1. 细胞：人肺癌细胞系A549、人胃癌细胞系SGC-7901、人乳腺癌细胞系MCF-7。

2. 药物：新型抗肿瘤药物，以DMSO溶解，浓度为1000μM。

3. 主要试剂：RPMI-1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、MTT试剂、二甲基亚砜（DMSO）、细胞计数试剂盒等。

4. 仪器：CO2培养箱、倒置显微镜、酶标仪、离心机等。

三、实验方法1. 细胞培养：将人肺癌细胞系A549、人胃癌细胞系SGC-7901、人乳腺癌细胞系MCF-7分别接种于培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

2. 药物处理：将培养至对数生长期的细胞以1×104个/孔接种于96孔板，分别加入不同浓度的药物（0μM、10μM、50μM、100μM、200μM、400μM、800μM）处理，每组设6个复孔。

同时设置空白对照组和DMSO对照组。

3. MTT法检测细胞增殖：药物处理48小时后，每孔加入20μl MTT试剂，继续培养4小时。

然后加入150μl DMSO，在酶标仪上测定各孔吸光度（OD）值。

4. 统计分析：采用SPSS 22.0软件进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），P<0.05为差异具有统计学意义。

四、实验结果1. 不同浓度药物对三种肿瘤细胞增殖的影响：随着药物浓度的增加，三种肿瘤细胞的增殖活性均受到抑制。

其中，在50μM和100μM浓度下，A549、SGC-7901和MCF-7细胞的增殖活性显著降低（P<0.05）。

2. 不同浓度药物对三种肿瘤细胞IC50值的影响：通过计算IC50值，发现该新型抗肿瘤药物对A549、SGC-7901和MCF-7细胞的IC50值分别为46.2μM、35.8μM 和43.1μM。

五、讨论本研究通过体外细胞实验，探讨了新型抗肿瘤药物在三种肿瘤细胞中的抗肿瘤活性。

《红花多糖抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖及对其转移能力的影响》一、引言乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其发生和发展与多种因素有关。

目前，对于乳腺癌的治疗主要依赖于手术切除、化疗和放疗等手段，但治疗效果并不理想，且易发生复发和转移。

因此，寻找有效的抗乳腺癌药物成为当前研究的热点。

红花多糖作为一种天然药物，具有多种生物活性，包括抗肿瘤、抗炎、抗氧化等作用。

本研究旨在探讨红花多糖对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及转移能力的影响，为红花多糖在乳腺癌治疗中的应用提供理论依据。

二、材料与方法1. 材料红花多糖购自某某生物科技有限公司；人乳腺癌细胞MCF-7购自某某细胞库；实验所用试剂和耗材均为进口或国产分析纯。

2. 方法（1）细胞培养：MCF-7细胞在含有10%胎牛血清的DMEM 培养基中培养，置于37℃、5%CO2的培养箱中。

（2）药物处理：将红花多糖以不同浓度梯度处理MCF-7细胞，分别设置对照组和实验组。

（3）细胞增殖检测：采用MTT法检测红花多糖对MCF-7细胞增殖的影响。

（4）细胞迁移和侵袭实验：通过划痕实验和Transwell小室实验检测红花多糖对MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响。

（5） Western blot检测：检测红花多糖处理后MCF-7细胞中相关蛋白的表达情况。

三、结果1. 红花多糖对MCF-7细胞增殖的抑制作用MTT法检测结果显示，随着红花多糖浓度的增加，MCF-7细胞的增殖率逐渐降低，表明红花多糖对MCF-7细胞的增殖具有抑制作用。

2. 红花多糖对MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响划痕实验和Transwell小室实验结果显示，红花多糖处理后，MCF-7细胞的迁移和侵袭能力明显降低，说明红花多糖对MCF-7细胞的转移能力具有抑制作用。

3. Western blot检测结果Western blot检测结果显示，红花多糖处理后，MCF-7细胞中与增殖和转移相关的蛋白表达水平发生变化，如MMP-2、MMP-9等表达降低，而p53等表达升高。

[基金项目]广东省自然科学基金资助项目(032902);广州市科技计划项目(2003Z 32E 0421)·基础研究·M T T 、W ST 28法测定细胞生长抑制率的结果比较盛新华,卿三华,李镏洋(南方医科大学南方医院,广东广州510515) 【摘要】　体外培养的乳腺癌细胞给予不同浓度的A p igen in 处理,72h 后分别用M T T 、W ST 28法检测细胞生长抑制率。

结果两种方法测定的乳腺癌细胞M CF 27生长抑制率结果相似,但W ST 28法步骤少,操作更为简便,值得推广。

【关键词】　四甲基偶氮唑蓝;可溶性噻唑盐;乳腺癌细胞【中图分类号】　R 73235 【文献标识码】　B 【文章编号】　10022266X (2006)0620020202 在细胞毒性实验中,大多数研究者采用M T T 法检测细胞活性,但需加入DM SO 溶解甲　颗粒,且往往溶解不全。

而W ST 28法只需将W ST 28试剂按比例加入到细胞培养板中,经过一定时间孵育,活细胞即可将W ST 28代谢为水溶性的甲　染料,即可直接测定细胞活性。

本实验选用体外培养的人乳腺癌细胞M CF 27,经不同浓度A p igen in 处理后,分别用M T T 、W ST 28法检测A p igen in 对M CF 27细胞的生长抑制作用,以比较这两种检测方法的优越性。

1　材料与方法111　材料　乳腺癌细胞M CF 27、DM E M (高糖)、胎牛血清、M T T 、活细胞计数试剂盒CCK 28(含W ST 28试剂)、A p igen in (用DM SO 培养溶解,实验时用DM E M 培养液稀释,DM SO 终浓度<015%)。

112　细胞培养　选用对数生长期、台盼蓝拒染率>95%的M CF 27细胞,用含10%胎牛血清的DM E M (高糖)培养液培养,DM E M 中预先加入普通胰岛素(20U 100m l ),并分别在培养瓶中加入青霉素100U m l 、链霉素100Λg m l ,置37℃、5%CO 2温箱中,2～3d 换液1次,当细胞丰度超过80%时传代。

康莱特注射液联合紫杉醇对人乳腺癌细胞的化疗增效作用唐翠萍;吴阳;周寒静;张涛【摘要】目的探讨康莱特注射液(KLT)对紫杉醇(PTX)抑制人乳腺癌细胞增殖及侵袭能力的增效作用及其相关机制.方法本实验以体外培养的人乳腺癌细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、Transwell法检测MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、侵袭能力,实时荧光定量(qRT)-PCR、Western blot分别检测C-myc、CyclinD1和血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和蛋白水平变化.结果 PTX单药能有效抑制人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭能力,降低C-myc、CyclinD1和VEGF mRNA及蛋白的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);KLT呈浓度依赖地增强PTX的作用,与PTX单独用药比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 KLT具有增强PTX抗乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的作用,此作用可能与下调C-myc、CyclinD1和VEGF的表达相关.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2016(045)024【总页数】4页(P3336-3339)【关键词】康莱特注射液;紫杉醇;乳腺肿瘤;细胞增殖;肿瘤侵润【作者】唐翠萍;吴阳;周寒静;张涛【作者单位】重庆医科大学附属第一医院肿瘤科 400016;重庆医科大学附属第一医院心血管内科 400016;重庆医科大学附属第一医院肿瘤科 400016;重庆医科大学附属第一医院肿瘤科 400016【正文语种】中文【中图分类】R730.53乳腺癌是常见的女性恶性肿瘤，已成为女性癌症相关死亡的重要原因[1-2]。

紫杉醇(Paclitaxel,PTX)是乳腺癌术后常用的辅助化疗药物，但因毒副作用大，使得部分患者难以耐受，同时有部分患者对其耐药，使其疗效局限，远期生存率未见明显提高。

康莱特注射液(Kanglaite injection,KLT)是从传统中药薏苡仁中提取的抗肿瘤细胞活性物质，其注射液主要成分为注射用薏苡仁油，该药同化疗药物联合应用可提高一些肿瘤对化疗药物的敏感性，减少化疗过程中的毒副反应，其联合用药在肺癌的治疗中已取得显著进展[3-4]，但在乳腺癌治疗中的应用，目前国内外尚未见大量报道。

MTT法在细菌活性检测及药敏试验中的应用蔡燕;彭乙华;黄义山;杨明辉;罗书久;谢文光【期刊名称】《中国医学创新》【年(卷),期】2011(8)5【摘要】目的探讨四甲基偶氮唑盐(MTT)法在细菌活性检测和药敏试验中的应用价值.方法分别采用MTT法和微量肉汤稀释法检测鲍曼不动杆菌活性以及鲍曼不动杆菌对丁胺卡拉霉素和头孢他啶的敏感性,对两种方法的操作过程和结果进行比较.用统计软件SPSS 16.0对检测结果进行分析.结果随着细菌浓度增加,微量肉汤稀释法和MTT法检测的活菌或死菌的吸光度值均增加,但用微量肉汤稀释法检测的同一浓度的活菌和死菌的吸光度值之间差别不大,t检验结果显示差异无统计学意义(P>0.05);而与用MTT法检测的同一浓度死菌吸光度值相比,MTT法检测的活菌吸光度值明显增加,t检验结果显示差异均有统计学意义(P<0.05);用微量肉汤稀释法和MTT法检测的鲍曼不动杆菌对丁胺卡拉霉素和头孢他啶的敏感性均与临床药敏结果一致.结论同微量肉汤稀释法一样,MTT法可以用于检测细菌活性和药敏试验.【总页数】3页(P1-3)【作者】蔡燕;彭乙华;黄义山;杨明辉;罗书久;谢文光【作者单位】637000,四川川北医学院附属医院;637000,四川川北医学院附属医院;637000,四川川北医学院附属医院;637000,四川川北医学院附属医院;637000,四川川北医学院附属医院;637000,四川川北医学院附属医院【正文语种】中文【相关文献】1.MTT法在肿瘤体外药敏试验中的应用 [J], 汤为学;李龙江2.直接药敏试验法和常规药敏试验法在血液细菌检验中的应用研究 [J], 庄浩林3.MTT法药敏试验在难治性白血病治疗中的应用(附20例报导) [J], 张新华;熊金元;王军;王润帮;辛华雯;高建飞;杜光祖4.MTT法在胃癌、乳腺癌化疗药敏试验中的临床应用 [J], 辛华雯;王润帮;车华;李罄;龚昭5.MTT法在妇科恶性肿瘤体外药敏试验中的临床应用 [J], 陈心秋;唐东平;李力;黄薇;张洁清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。