肿瘤患者外周血淋巴细胞化疗药物敏感性检测的应用研究

卵巢癌细胞ＭＴＴ法对化疗药物敏感性的研究目的：研究卵巢癌細胞对化疗药物的敏感性，从而指导临床用药。

方法：选用临床上常用的20种化疗药物，应用3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法，严格无菌操作，对20例卵巢实体肿瘤细胞进行化疗药药敏测定。

结果：表明同一肿瘤细胞对不同化疗药物的敏感性各不相同，与药物对体内肿瘤细胞的杀伤作用呈正相关。

结论：药敏结果与临床用药吻合率高，可以很好地指导临床个体化化疗。

[Abstract] Objective: To study the chemotherapy drug susceptibility to ovary tumor cells,then provide reference to clinical drug use. Methods: Selected twenty kinds of chemotherapy drugs commonly used in clinical medicine and twenty kinds of ovary tumor cells,then detected the susceptibility of chemotherapy drugs to ovary tumor cells by MTT methods in sterile circumstances. Results: Same ovary tumor cells showed different susceptibility to different chemotherapy drugs,the susceptibility had positive correlation with the killing effect of chemotherapy drugs to tumor cells in vivo. Conclusion: There is high accordance rate between the drug sensitive test and clinical drug use, then can effectively guide the clinical drug use.[Key words] MTT methods;Ovary cancer; Tumor cells; Drug therapy卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一，我国卵巢癌的发病率位于宫颈癌和宫体癌之后，居第三位，又因为卵巢癌患者在出现症状而得以诊断时已经发展到Ⅲ期或Ⅳ期。

微小残留病灶(MRD)监测在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的应用进展任雨虹【摘要】慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)是西方国家最常见的成人白血病,在我国的发病率也日益增加.近年来针对CLL的新药层出不穷,微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)监测逐渐成为评估疗效的重要手段.本文总结了目前常用的MRD检测方法,包括流式细胞学和基于PCR法的分子学检测,并介绍了其在初治CLL疗效评价、预后评估和在移植后CLL复发预警方面的应用进展.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2019(046)003【总页数】5页(P404-407,419)【关键词】慢性淋巴细胞白血病(CLL);微小残留病灶(MRD);监测【作者】任雨虹【作者单位】复旦大学附属中山医院血液科上海 200032【正文语种】中文【中图分类】R733.72慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)是一种成熟B淋巴细胞克隆增殖性肿瘤,以淋巴细胞在外周血、骨髓、脾脏和淋巴结聚集为特征,在西方国家的年发病率为4.2/10万,80岁以上人群年发病率甚至超过30/10万[1]。

CLL的治疗方案经历了从传统化疗到化学免疫治疗的转变,但CLL的首要治疗目标仍是获得更深程度的缓解和更持久的无进展生存(progression free survival,PFS)。

能达到更深检测程度的微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)监测逐渐成为了疗效评估的重要指标。

不同于其他白血病,CLL预后的高度异质性和累及多部位的特点使得针对其MRD的监测比其他白血病更复杂。

本文将对目前MRD监测在CLL中的应用进展进行介绍。

MRD在CLL中的检测方法作为一项评估疗效深度的监测指标,理想的MRD检测方法需满足可定量、标准化、便捷性的要求。

jtmUiMeKR l f2021'心40⑵％243-247・243・•综述・肿瘤浸润淋巴细胞在三阴性乳腺癌中作用的研究进展孙雨露，尤鑫，赵怡欣,姚永忠（东南大学医学院南京鼓楼医院普外科，江苏南京210008"&摘要］三阴性乳腺癌（TNBC f具有高度异质性，侵袭性强，没有特定的分子治疗靶点，因而临床预后较差。

肿瘤浸润淋巴细胞（TILs f在肿瘤微环境中扮演重要角色，可以参与抗肿瘤免疫反应，被认为是TNBC的预后指标。

高水平的TILs与TNBC患者病理完全反应增加有关。

目前'有关自体TILs给药或免疫检查点抑制剂的研究受到广泛关注，可以为TNBC提供免疫治疗靶点，并改善TNBC的临床预后。

&关键词］三阴性乳腺癌；肿瘤浸润淋巴细胞；预后；免疫治疗；综述&中图分类号］R737.9；R730.3&文献标志码］A&文章编号］1671-6264（2021"02-0243-05doR10.3969/j.Rsn.1671-6264.2021.02.019三阴性乳腺癌（tWple-neyativv breast cancer，TN-BCf是一类不表达雌激素受体（estrogen receptor，ERf、孕激素受体（pngestenne receptor，PR f和人表皮生长因子受体2（human epidevnal growth factor receptor2，HER2f的乳腺癌亚型［1］。

与其他类型乳腺癌相比, TNBC的侵袭性更强'治疗手段相对有限，预后较差，因此，寻找有效的TNBC治疗方向迫在眉睫&2'（尽管传统上认为乳腺癌的免疫原性较低，但是TNBC的基因组相对不稳定且突变率较高,是最具免疫原性的亚型。

近些年,研究发现肿瘤免疫微环境在TNBC的发生发展过程中发挥着重要作用，其中，肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocytes，TILs f作为肿瘤免疫微环境的重要组成部分已成为研究焦点，越来越多的证据表明TILs是乳腺癌尤其是TNBC的重要免疫生物标志物。

《NLR、PLR在乳腺癌新辅助化疗疗效中预测价值研究》一、引言乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，新辅助化疗是乳腺癌治疗的重要手段。

然而，新辅助化疗的疗效预测一直是临床研究的热点和难点。

近年来，中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）和血小板与淋巴细胞比值（PLR）作为炎症反应的指标，在肿瘤患者中得到了广泛的应用。

本研究旨在探讨NLR、PLR在乳腺癌新辅助化疗疗效中的预测价值。

二、研究方法1. 研究对象本研究纳入2020年至2023年间在我院接受新辅助化疗的乳腺癌患者，共200例。

所有患者均经病理学检查确诊为乳腺癌，并签署知情同意书。

2. 实验方法（1）采集患者治疗前、后的血常规数据，计算NLR和PLR。

（2）根据患者的NLR和PLR水平，将患者分为高、中、低三组。

（3）比较各组患者在新辅助化疗后的临床疗效、无病生存期（DFS）和总生存期（OS）。

（4）采用统计学方法分析NLR、PLR与新辅助化疗疗效的关系。

三、结果1. 患者基本情况本研究共纳入200例乳腺癌患者，其中高NLR组67例，中NLR组73例，低NLR组60例；高PLR组74例，中PLR组79例，低PLR组47例。

患者年龄、肿瘤大小、病理类型等基本情况详见表格1。

表1：患者基本情况表（略）2. NLR、PLR与新辅助化疗疗效的关系（1）高NLR组患者在化疗后的临床疗效较中、低NLR组差，差异有统计学意义（P<0.05）。

高PLR组患者的化疗疗效与中、低PLR组相比无显著差异。

（2）高NLR组患者的DFS和OS均较短于中、低NLR组（P<0.05）。

高PLR组与中、低PLR组在DFS和OS方面无显著差异。

3. NLR、PLR与其他临床指标的关系NLR和PLR水平与患者的年龄、肿瘤大小、病理类型等有一定关系，具体详见表格2。

表2：NLR、PLR与其他临床指标的关系表（略）四、讨论本研究表明，高NLR组乳腺癌患者在接受新辅助化疗后的疗效较差，DFS和OS均较短于中、低NLR组。

肺癌患者外周血中MDR1的表达及临床意义左翠云;孙志强;吴平;周志忠;黎喜梅;胡耀斌;吴建伟【摘要】目的检测多药耐药基因-1(MDR1)在肺癌患者外周血中的表达,探讨MDR1的表达水平与肺癌病理类型及临床化疗进程之间的关系.方法应用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,动态监测45例肺癌患者化疗前后外周血中MDR1的表达水平,并与48例健康者进行对照比较.结果肺癌组化疗前MDR1的阳性率28.89%(13/45),明显高于健康对照组2.08%(1/48),差异显著(P<0.05);各种病理类型的肺癌随着化疗次数的增多MDR1的表达均增强;化疗前后各期MDR1的表达程度:非小细胞肺癌(NSCLC,肺鳞癌和肺腺癌)明显高于小细胞肺癌(SCLC),差异具有统计学意义(P<0.05),而肺鳞癌和肺腺癌之间MDR1的表达程度相当,无显著差异,(P＞0.05).结论化疗可诱导各种病理类型肺癌MDR1表达增加;病理类型不同诱导化疗耐药的机制可能不同:NSCLC可能为原发性MDR,SCLC可能为获得性MDR;动态检测肺癌患者外周血中MDR1的表达水平,有利于进行肺癌耐药的监测与评价.【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2013(018)011【总页数】3页(P2055-2057)【关键词】肺癌;多药耐药基因-1;外周血;荧光定量PCR【作者】左翠云;孙志强;吴平;周志忠;黎喜梅;胡耀斌;吴建伟【作者单位】361100,福建,厦门,厦门市第三医院呼吸一科;361100,福建,厦门,厦门市第三医院呼吸一科;361100,福建,厦门,厦门市第三医院呼吸一科;361100,福建,厦门,厦门市第三医院呼吸一科;361100,福建,厦门,厦门市第三医院呼吸一科;361100,福建,厦门,厦门市第三医院呼吸一科;361100,福建,厦门,厦门市第三医院呼吸一科【正文语种】中文肺癌对抗癌药产生耐药性是影响肺癌治疗疗效的重要因素，至今尚无确切有效的解决方法。

细胞培养技术在肿瘤学研究中的应用1 细胞培养技术在肿瘤学研究中的应用（姓名：缪延栋学号：2008275 昆明医学院第一附属医院）【关键词】：细胞培养技术肿瘤 【摘要】 恶性肿瘤是危害人类生命健康最严重的疾病之一，是细胞性疾病。在人体内研究单个肿瘤细胞或某一类细胞的功能活动十分困难，将活细胞在体外研究则方便得多，这首先要求在体外进行细胞培养，培养肿瘤细胞可为癌变机理的探讨，肿瘤生物学特性的研究、临床诊断、药物筛选以及抗肿瘤单克隆抗体的制备等方面的研究，提供良好的细胞实验模型。尤其在实验肿瘤学研究中，细胞培养于后基因组学时代日益显出其重要性——因为作为一种泛基因组分析方法，它使得研究者能藉以分析基因组改变对细胞的影响。 1 肿瘤细胞培养的机理 肿瘤细胞来源于正常细胞，正常细胞转变成肿瘤细胞是由于原癌基因和抑癌基因的突变失去了正常的增殖性调节功能所致，正常细胞一旦恶变，它的形态、功能、代谢和增殖都会发生深刻的可遗传的变化，肿瘤细胞不需外源性生长因子的激活作用而持续地进行繁殖，肿瘤细胞在体外培养瓶中培养形成多层堆积，它区别于正常细胞在体外培养瓶中只能贴壁生长增殖合成单层后即停止分裂，肿瘤细胞并不因为细胞密度增殖到相互接触而停止，恶性肿瘤细胞可无限传代成为细胞系。 肿瘤细胞培养是研究癌变机理，抗癌药的敏感性，肿瘤细胞和癌分子生物学特性的重要手段。当前所建立的细胞系中癌细胞是最多的。应用体外细胞培养技术进行肿瘤研究具有许多优点：可免受机体内环境因素的影响，避免了个体差异性，便于探索各种物理，化学和生物因素对肿瘤细胞生命活动的影响；既便于从细胞水平上研究肿瘤细胞的结构与功能，又便于从基因及分子水平上研究癌变的发生机理；可长期传代，保存，便于观察肿瘤细胞生物学特性和遗传行为的改变；可用于快速筛选抗癌药物和研究耐药机理；研究周期短，比较经济。但是它也有缺点，如长期培养可使细胞生物学特性发生改变；体外实验所得的结果不能完全代表体内的情况，应与体内试验结合研究更为合理等。培养肿瘤细胞的材料一般来自患者，对实体瘤患者可取原发肿瘤组织或转移灶，有胸，腹水患者可取胸水或腹水，白血病患者可取血液或骨髓液进行培养。肿瘤细胞对培养基要求不如正常细胞严格，一般常用RPM1640、DMEM、Mc-Coy-5A 等培养基，血清浓度不高，10%即可，建议在原代培养时最好能加入生长因子或原患者血清（1%~2%）以利细胞生长，培养方法很多，主要有组织块法、酶消化法、钽网法、脱落细胞法等。为了在肿瘤细胞中排除成纤维细胞，常采用5种方法，即机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法、胶原酶消化法、密度梯度离心法。根据人们的经验，肿瘤细胞在体外不易培养，建立能够传代的细胞系更为困难。总之，要根据各种肿瘤细胞的特点采取具有针对性强的培养方法，才能确 保体外培养的成功。 2 肿瘤细胞培养在肿瘤研究中的作用 2.1 肿瘤病因和发病机制的研究 癌细胞在体内发生恶变时，易于形成肿瘤，但到体外培养时又难于培养成功，这不仅仅是因成纤维细胞的抑制作用，更重要的体外缺乏有利于生长的微环境，由此可见环境对癌发生和发展是有很大作用的。在肿瘤的动物致癌实验时，所选择的动物都是经理化因素处理后造成骨髓和免疫抑制的动物或细胞免疫功能 缺陷的无胸腺裸鼠，这也可以证明肿瘤细胞在这种动物体内易于形成肿瘤，也是与动物体内微环境有关。体外正常细胞的转化试验中更进一步证明了物理因素（如射线）、化学因素（化学致癌剂）及生物因素（致癌病毒、EB 病毒、SV40和多发瘤病毒等），均能使正常细胞发生转化，胃癌的诱发因素和环境提供了实验依据，环境因素或药物的致畸，致突变研究也可以为该环境条件或药物的致癌性提供实验依据，因此细胞培养是癌的发生和发展的理想实验研究手段。 2.2 癌基因和抑癌基因方面的研究 细胞的恶性变不仅与癌基因（原癌基因）的活化有关，而且与抑癌基因功能受阻也有关。人体细胞中既存在有癌基因（原癌基因），又有抑癌基因的存在，实验证明癌的发生和发展与这两种基因的表达和调控密切相关。这些基因在细胞内表达水平，我们可以采用RNA探针或特意蛋白测定来进行研究，由此可见体外 细胞培养既利于测定癌基因及癌基因表达产物，又可以测定抑癌基因的表达水平。癌细胞的体外培养是定量研究癌基因和抑癌基因表达调控的理想工具。 2.3.1 抗癌药物筛选方面的研究 不同的癌细胞对不同的化疗药物有不同的敏感性，因此采用癌细胞体外培养方法，既可以研究某种药物对不同癌细胞的敏感性，为药物抗癌敏感谱提供依据，同时又可采用某种癌细胞对不同药物，不同剂量的敏感性研究，以筛选出对该肿瘤最敏感的化疗药物和使用剂量，供人体治疗时参考。 2.3.2 导向药物的应用 导向药物既用某种特异抗体为载体，将放射性核素等细胞毒性物质带到病灶处，特异地杀伤靶细胞，从理论上讲，导向药物是比较理想的抗肿瘤制剂。 2.3.3 诱导肿瘤分化药物 是指在分化诱导剂的存在下，恶性肿瘤细胞的形态、生物学或生物化学方面的诸多标志均向正常细胞的方向演化分化，甚至完全转变成正常细胞，目前恶性肿瘤的诱导分化治疗已成为肿瘤生物学和肿瘤治疗学的研究热点和前沿领域。 3癌细胞的诱导分化和逆转方面的研究 血癌往往是由低分化的幼稚细胞的单克隆恶性增生所引起，若将血癌的体细胞通过体外诱导分化，促使向终未细胞分化成为功能性血液细胞，这就可使血癌患者获得完全缓解或达到治 愈的目的，有人将HL-60的粒细胞白血病细胞系，加入诱导分化剂，可分化成为有功能的粒细胞，近而为血癌细胞的诱导分化发生逆转提供了可能。实体瘤的癌细胞，MEC-1表皮癌、Bel-7402、HT-29结肠癌，LA-N-1神经母细胞瘤和人黑色素瘤细胞分化的诱导实验，说明实体瘤细胞在特定的分化诱导剂的作用下，也有不同程度的向正常细胞分化的趋势，至少是恶性程度改变，如果再结合其它的诱导方法有可能会有突破，一旦有所突破，攻克癌症就大有希望，如果能通过细胞培养筛选出特效药物或细胞能使癌细胞的恶性变消失，对人体正常细胞毒性又很低，再结合手术，放疗和生物治疗，治愈癌症是有可能的。这些试验只有采用细胞培养法才能在短期内观察到细胞的变化，动物试验很难判定药物的直接作用，更不可能用人来做试验，因此细胞培养及癌的细胞诱导分化的细胞工程是进行抗癌研究，癌细胞的恶性逆转研究理想的实验诱导模型。 4癌细胞的杀伤效应研究 抗癌的间接效应，往往是药物作用于机体免疫系统促使免疫细胞发生对肿瘤细胞的特异性和非特异性的免疫应答，如通过免疫系统释放免疫调节因子（如IFNα/γ、IL-2等）或细胞毒因子（LT、TNFα/β）,以及激活杀伤肿瘤的淋巴细胞如NK、K、TCL、LAK、TIL发挥杀肿瘤效应，这种效应均可通过体外杀肿瘤细胞试验来证实，取同体淋巴细胞经体外培养后，并加入IL-2/IFN-γ等，能明显增强NK、TCL、LAK和TIL杀肿瘤活性。经扩增达 一定数量后再回输给病人，其疗效明显。又为肿瘤的生物治疗提供了细胞移植的新途径，尽管该项技术还存在不少问题，如标准化问题，制备工艺问题，实验室环境条件问题及审批问题，目前还不规范，有待统一调整和审批。目前虽然在许多单位已开展应用研究，但还不能进行大量推广应用。癌细胞能否被免疫系统杀伤细胞杀死，不仅与免疫系统的杀伤应答有关，而且与癌细胞本身的表面抗原的表达有关，特别是HLA相关抗原，癌细胞HLA 表达受阻。因此机体免疫细胞难以识别和发挥杀伤效应，产生了免疫逃避，为此常采用体外培养患者肿瘤细胞，将HLA的相关基因导入细胞内产生HLA抗原的表达，以利于免疫系统的识别和发挥杀伤效应，这样就可抑制或避免免疫逃避现象的产生。 5 抗肿瘤单克隆抗体的制备 自从Kohler 和Milstein 在1975 年首次介绍了发展杂交瘤的技术大规模生产单克隆抗体以来，经过多年努力于1998 年10 月FDA 分别通过了用于临床肿瘤治疗的2 个单克隆抗体桼ituximab(Rituxan)和Thastuzumab(Herceptin)。它们的问世引起了国际肿瘤学界的极大关注。 单克隆抗体即一个B淋巴细胞经过无性增殖成为一个细胞系（一个克隆）所分泌的抗体仅仅针对一种抗原决定簇的成份单一的抗体。得到单克隆抗体的方法是通过B淋巴细胞杂交瘤技术，其基本原理是把产生抗体的B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合在一起，成为一个杂交瘤细胞，其保留两个亲本细胞的特性，即B 细 胞可以产生抗体的特性和骨髓瘤细胞可以在体外长期培养传代的特性，在体内或体外培养繁殖杂交瘤肿瘤就可以获得大量纯一的单克隆抗体。 【结语】 采用细胞培养技术可建立肿瘤细胞系为体外进行抗癌防癌的研究以及癌的发生机理的研究创造了条件，提供了极好的研究模型，如上介绍的应用方面还是局限的，随着细胞工程技术的发展，其应用面更大，有待于共同研究，细胞培养技术和细胞工程将会在攻克癌症中得到更大的发展和更加广泛的应用。 【参考文献】 1 D. L . 斯佩克特、R. D. 戈德曼、L . A. 莱因万德著,黄培堂 译. 细胞实验指南[ M ] . 北京:科学出版社,1 -5. 2司徒镇强, 吴军正. 细胞培养[ M ].西安：世界图书版出版公司，2004.78－202. 3邵婉华. 肿瘤细胞的培养在临床研究方面的进展. 中国社区医师,2005, 7(16): 121. 4曹丹，赵丹玉，马贤德。体外细胞培养及其在肿瘤方面的应用研究。辽宁中医药大学，2008，6（10）：61 5薛庆善. 体外培养的原理与技术[ M ] . 北京:科学出版社, 2001. 1 -2. 6林福玉, 陈昭烈, 刘红等. 大规模动物细胞培养的问题及对策.生物

Hans Journal of Biomedicine 生物医学, 2017, 7(3), 54-58Published Online July 2017 in Hans. /journal/hjbm https:///10.12677/hjbm.2017.73009文章引用: 葛琴, 谢国栋, 蔡晶, 赵季忠, 刘继斌, 杨百霞, 崔娟娟, 储春霞. 免疫细胞功能检测在恶性肿瘤患者外周Expression of Immune Cell Function in Peripheral Blood of Patients with Malignant Tumor and Its Clinical SignificanceQin Ge 1, Guodong Xie 1, Jing Cai 1*, Jizhong Zhao 1, Jibin Liu 2, Baixia Yang 1, Juanjuan Cui 1, Chunxia Chu 11Department of Radiotherapy, Tumor Hospital of Nantong, Nantong Jiangsu 2Biotherapy Center, Tumor Hospital of Nantong, Nantong JiangsuReceived: Jun. 22nd , 2017; accepted: Jul. 9th , 2017; published: Jul. 12th , 2017AbstractObjective: To investigate the clinical value of immune cell in peripheral blood of patients with ma-lignant tumor, and to explore its clinical value in the diagnosis and treatment of cancer patients. Methods: 60 cases of cancer patients, including 20 cases of esophageal cancer, lung cancer in 20 cases, 10 cases of nasopharyngeal carcinoma, other tumors (including laryngeal cancer in 1 case, tongue cancer in 1 case, breast cancer in 3 cases, 1 case of skin malignant melanoma, rectal cancer 4 cases) and 20 normal control group peripheral blood T lymphocyte subsets percentage, B lym-phocyte percentage, NK cell percentage, compared with the differences of normal control group. Results: The percentage of total T lymphocytes CD3+, assisted/induced T lymphocyte CD4+ and helped inhibited T lymphocyte ratio CD4+/CD8 in peripheral blood of tumor patients was signifi-cantly lower than that of healthy group (P < 0.05). The percentage of inhibition cytotoxicity T lymphocyte CD8+ was slightly higher than that in the healthy group (P > 0.05). There was no sig-nificant difference between the percentage of total B lymphocytes and the percentage of NK cells in the tumor group and the control group. Conclusions: T lymphocyte subsets are a good method for detecting immune dysfunction in cancer patients, which are of great significance to monitor the disease and judge the prognosis.KeywordsTumor, Immune Cells, Percentage, Immune Function免疫细胞功能检测在恶性肿瘤患者外周血中的表达和临床意义葛 琴1，谢国栋1，蔡 晶1*，赵季忠1，刘继斌2，杨百霞1，崔娟娟1，储春霞1*通讯作者。