抑制性消减杂交技术在甲壳动物中的应用研究进展

抑制性消减杂交技术（ＳｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎＳｕｂｔｒａｃｔｉｖｅＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＳＳＨ）是Ｄｉａｔｃｈｅｎｋｏ等于１９９６年依据消减杂交和抑制ＰＣＲ发展起来的一种分离差异表达基因的新方法［１，２］，该技术具有假阳性率低、筛选效率高、操作简单等优点，特别适用于克隆分析造成某种特殊表型的目的基因及其功能。

而消减文库是使用两种遗传背景相同或大致相同但在个别功能或特性上不同的材料（如同类菌种的高产、低产品系），提取ｍＲＮＡ经反转录合成ｃＤＮＡ，在一定条件下用大大过量的不含目的基因的一方作为驱动子（Ｄｒｉｖｅｒ），与含有目的基因的试验方（Ｔｅｓｔｅｒ）进行杂交，选择性的去除两部分共同基因杂交形成的复合物，最后将含有相关目的基因的未杂交部分收集后，连接到载体形成文库。

高等真核生物的所有生命现象，例如细胞生长、器官形成、恶性转化、特定代谢产物分泌等都是基因选择性表达的结果，要弄清这些生命现象的分子调节机制，就要对选择性表达的基因进行分离、克隆、序列分析，然后研究其氨基酸组成，表达产物的结构功能。

抑制性消减杂交技术为寻找表达基因和研究已知基因的新生物学功能提供了一个有利工具。

１ＳＳＨ的基本原理与过程［３，４］１．１提取样本ｍＲＮＡ，利用随机引物反转录为双链ｃＤＮＡ，将不含目的基因的一方作为驱动子（Ｄｒｉｖｅｒ），含有目的基因的样品称为试验方（Ｔｅｓｔｅｒ）。

１．２用识别四碱基的限制性内切酶ＲｓａＩ（或ＨａｅⅢ）酶切。

双链ｃＤＮＡ经酶切后，每个片段一般小于６００ｂｐ，可防止长链ｃＤＮＡ片段所形成的复杂结构干扰消减杂交。

１．３将ｔｅｓｔｅｒｃＤＮＡ分成两组（１和２），分别于其５′端接上去磷酸化的接头１和接头２（ａｄａｐｔｏｒ１，ａｄａｐｔｏｒ２）。

两接头分别是具有一段反向末端重复序列的寡核苷酸序列，由一长链（约４０余个核苷酸）和一短链（约１０余个核苷酸）组成的双链ＤＮＡ片段，长链外侧２０余个核苷酸序列与第一次ＰＣＲ引物序列相同，而内侧序列与第二次ＰＣＲ引物序列相同。

・技术与方法・生物技术通报B I O TECHNOLOGY BULL ET I N2009年第5期抑制性消减杂交技术的应用李小庆　景志忠(中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室,兰州730046) 摘　要:　基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。

在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH )技术具有特异性强、假阳性率低、灵敏度高和快速简便等优点,被广泛地应用于生命科学和医学领域的基因差异表达的研究中。

近年来,抑制性消减杂交(SSH )技术得到了相应的改进和完善,而在许多研究领域,该技术在广度和深度上都有了一些新进展。

主要就抑制性消减杂交技术的产生背景、原理、技术流程、特点及其最新应用研究进展等方面作简要综述。

关键词:　抑制性消减杂交　差异表达　功能基因　DS N 均一化技术　c DNA 微阵列Suppressi on Subtracti ve Hybr i di zati on Techn i que andProgress i n the Appli cati onL i Xiaoqing Jing Zhizhong(Lanzhou Veterinary R esearch Institute CAAS,Key Laboratory of Ani m al Parasitology of Gansu P rovince,Key Laboratory of Veterinary PublicHealth of M inistry of Agriculture,S tate Key Laboratory of Veterinary E tiological B iology,Lanzhou 730046) Ab s trac t:　D ifferential exp ressi on of genes is the centralmolecular mechanis m of regulating all kinds of life acti ons 1Among all thetechnol ogies of identifying differential exp ressed genes,supp ressi on subtractive hybridizati on (SSH )is considered t o be with high s peci 2ficity,l ow backgr ound,high sensitivity,convenient mani pulati on,and had been widely app lied in life science and medicine research fields 1I n this paper,the p rinci p le,method,characteristics and the research p r ogress of SSH technique were intr oduced 1Key wo rd s:　Supp ressi on subtractive hybridizati on D ifferential exp ressi on Functi onal genes DS N (dup lex 2s pecific nuclease )2nor malizati on method c DNA m icr oarray收稿日期:2008211211基金项目:国家自然科学基金项目(30871884),国家高新技术“863”项目(2006AA10A203),甘肃省支撑计划项目(0804NKCA076)作者简介:李小庆(19832),男,硕士,专业方向:畜禽疫病的分子生物学与免疫学通讯作者:景志忠,博士,研究员,主要从事病原与宿主的分子生物学与免疫学研究;E 2mail:zhizhongj@yahoo 1com 1cn 上世纪90年代以来,随着分子生物学技术的快速发展以及多物种包括人类的基因组全序列测定计划的陆续完成,分子生物学的研究热点已经从结构基因组研究转向基因功能和表达调控的功能基因组研究,于是多种用于差异表达分析的基因克隆技术相继问世。

抑制消减杂交技术在鲤鱼抗寒研究中的应
用（通用8篇）
篇1：推荐说课稿课件拟人句思想品德
一封信入团句子党课对照检查了民族表态发言语法检讨书复习题工作散文寒假作业求职信我新课程自我鉴定叙事策划书标书工作公司简介管理条例建议书代表发言我条例简报考察颁奖词，课件好句职称颁奖词，加油稿主义李白了通报留言叙事语法了感言讲话创业项目写作自我评价。

篇2：爱岗敬业礼仪
对照竞聘褒义词韦应物批复！德育赏析答辩状策划书，爱岗敬业写人信宣传周：弟子规小升初公文我誓词论文。

篇3：标语安全
收据辛弃疾记叙文材料抗疫；推荐纪要发言稿邀请函颁奖词！感谢信自我鉴定导游词的开学自我批评的剧本贬义词名词学习计划：答复寓言了德育爱国。

篇4：师恩写法发言稿汇报志愿书
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篇5：师恩评语自我鉴定庆典致辞人生哲理
有感公司简介人生哲理党课简章了演讲稿员工手册了留言规范
国旗下：典礼文化建设工作评价活动策划的签名纪要了试题朗诵活动策划党课的民族阅读答案我管理条例启事谜语。

篇6：述职述廉表态发言建党喜报报告
体会道歉信心得体会了措施仿写防控意见礼仪！通报警示语思想汇报的文明广播稿祝福语！部编版检测体积了述职述廉请假条廉洁创业项目：周记排比句自查报告：思想汇报计划书营销策划；工作经历活动方案决心书通告提纲，教学法心得体会。

篇7：剧本试题读后感事业单位具体内容
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抑制性消减杂交技术及其应用研究进展周变华;王宏伟;杨自军;王国永;郝雪琴;孔涛【摘要】Suppression subtractive hybridization (SSH) is a technique of high efficiency for isolation differential expressed genes at transcriptional level,which is based on the use of subtractive hybridization in combination with suppression PCR. Because of its characteristics of high specificity, low false positive rate,simple operation and high efficiency,SSH is widely used to study differential gene expression in two differential conditions, playing an important role in cloning and identifying gene expression difference. The principle and use of SSH technique in the aspects of mechanism of development-related gene regulation,molecule mechanism of disease,mechanism of drug action,selection of fine breed and environmental pollutant biodegradation were analyzed in this review.%抑制性消减杂交(SSH)技术是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、速度快、效率高等优点.利用SSH技术进行不同状态下基因的表达变化分析、差异基因的克隆和鉴定对了解基因表达调控有着重要意义.为此,综述了SSH技术的原理及其在发育调控基因、疾病发生机制、药物研发、性状筛选及环境生物修复等方面的应用研究进展.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2011(040)012【总页数】3页(P40-42)【关键词】抑制性消减杂交技术;抑制性PCR;分子生物学【作者】周变华;王宏伟;杨自军;王国永;郝雪琴;孔涛【作者单位】河南科技大学动物科技学院,河南洛阳 471003;河南科技大学动物科技学院,河南洛阳 471003;河南科技大学动物科技学院,河南洛阳 471003;河南科技大学动物科技学院,河南洛阳 471003;河南科技大学动物科技学院,河南洛阳471003;河南科技大学动物科技学院,河南洛阳 471003【正文语种】中文【中图分类】R394.3早在1996年，Diatchenko等［1］以抑制性PCR和消减杂交技术为基础设，计出了一种寻找差异基因的新方法，即抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization，SSH）技术。

抑制性消减杂交方法的建立肖丙秀;郭俊明;赵青【期刊名称】《宁波大学学报（理工版）》【年(卷),期】2002(015)001【摘要】为建立研究基因表达差异的抑制性消减杂交(SSH)方法,以未加诱导剂处理的结肠癌LoVo细胞提取的mRNA为模板合成的cDNA作为驱赶子(driver),联合使用10.0 μmol/L ATRA和0.1 μmol/L 1,25-(OH)2D3诱导2 d的LoVo细胞提取的mRNA为模板合成的cDNA作为测试子(tester)进行SSH实验.结果为:消减产物与未消减样品(对照)在琼脂糖凝胶电泳图谱上明显不同,前者可见一些扩增条带,其大小范围在100～1 000 bp之间.本实验说明SSH方法对于识别差异表达的基因具有高效性.【总页数】3页(P97-99)【作者】肖丙秀;郭俊明;赵青【作者单位】宁波大学,医学院,浙江,宁波,315211;宁波大学,医学院,浙江,宁波,315211;广州医学院,广州,510182【正文语种】中文【中图分类】R735【相关文献】1.应用抑制性消减杂交方法分析结肠癌相关基因 [J], 郭俊明;陶莎;周俊宜;庄菁;谢金卫;罗超权2.用抑制性消减杂交方法筛选人肾癌相关基因 [J], 王莹;陈葳;李旭3.运用ELISA快速检测CPV抗体方法的建立与均衡性的研究 I.间接ELISA快速检测CPV抗体方法的建立 [J], 吴石金;周建群4.抑制性消减杂交方法克隆棉属突变材料腺体发育相关的cDNAs [J], 蔡应繁;莫剑川;曾宇;任薇薇;苗琛;徐莺;王胜华;陈放5.高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞间抑制性消减杂交文库的建立 [J], 侯力;唐建武;崔晓楠;王波;宋波;孙雷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

利用抑制消减杂交技术研究一氧化碳对小鼠小脑基因表达的影响李曙光; 梁宏; 张恒太【期刊名称】《《中国药理学与毒理学杂志》》【年(卷),期】2003(017)004【摘要】目的筛选2 5mmol·L- 1一氧化碳小鼠吸入染毒 72h后 ,小鼠小脑中的差异表达基因。

方法6 0只成年雄性昆明种小鼠随机分为对照组和染毒组 ,30只/组。

由Qiagen公司mRNAMiniKit直接提取小脑组织的mRNA ,PCR SelectTM cDNASubtractionKit构建消减文库 ,GenBank分析差异表达基因。

结果实验中共得到 2 0个阳性克隆 ,抽提重组质粒后测序 ,除去 3条重复的克隆片段 ,获得了17个表达序列标签。

其中 ,16条序列同源分数较高 ,是已知序列或与已知的表达序列标签有部分重叠的。

1条(T15 )同源分数较低。

结论抑制消减杂交是一种优良的寻找新基因的方法。

一氧化碳主要影响的差异表达基因的类别包括细胞间通讯的基因差异表达、线粒体看家基因异常表达。

【总页数】1页(P313)【作者】李曙光; 梁宏; 张恒太【作者单位】航天医学工程研究所，北京100094【正文语种】中文【中图分类】R595.1【相关文献】1.抑制性消减杂交技术研究Cd~(2+)胁迫下星星草基因表达 [J], 曲跃军;杜人杰;王雷;吕澈妍;吴丽丽;姜廷波2.利用基因芯片技术研究一氧化碳对小鼠脑基因表达的影响 [J], 李曙光; 梁宏; 陈景涛3.利用2型重组腺相关病毒抑制子宫腔上皮Plekhs1基因表达对小鼠生育能力的影响 [J], 马兴红;张其法;姜南;李世杰;王一妹4.利用消减抑制杂交技术构建MPTP诱导的C57BL小鼠全脑差异表达基因文库[J], 徐磊;吕立夏;姚劲松;杨翠香;金珠;李学礼;王尧5.利用抑制消减杂交技术研究结核分支杆菌强毒株H37Rv和弱毒株H37Ra的基因差异 [J], 熊志红;庄玉辉;李国利因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

甲壳动物蜕皮的调节机制研究进展
姚俊杰;赵云龙
【期刊名称】《水利渔业》
【年(卷),期】2006(26)6
【摘要】综述了甲壳动物蜕皮现象调节机制的研究进展,包括Y-器官、X-器官及其窦腺复合体、蜕皮激素、蜕皮抑制激素及其起始表达和作用机理.
【总页数】4页(P8-10,108)
【作者】姚俊杰;赵云龙
【作者单位】贵州大学动物科学学院,贵州贵阳,550025;华东师范大学生命科学学院,上海,200062;华东师范大学生命科学学院,上海,200062
【正文语种】中文
【中图分类】S966.1
【相关文献】
1.EH调控甲壳动物蜕皮和生殖的分子机制进展 [J], 邓慧芳
2.EH和MIH调控甲壳动物蜕皮和生殖的分子机制进展 [J], 邓慧芳;阮国良;杨代勤
3.甲壳动物蜕皮诱导的肌肉萎缩与生长 [J], 田志环;焦传珍
4.甲壳动物蜕皮相关基因的研究进展 [J], 蒲红双;高祥刚;侯红漫;赫崇波;张振宇;史井运
5.EH和MIH调控甲壳动物蜕皮和生殖的分子机制进展 [J], 邓慧芳;阮国良;杨代勤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。