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【国家自然科学基金】_抑制性消减杂交技术(ssh)_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140730

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抑制性消减杂交(SSH)技术及其应用

抑制性消减杂交(SSH)技术及其应用

抑 制 性 消 减 杂 交 技 术
（ｕｐ ｅｓｏ Ｓ ｐｒ ｓ ｉｎ
１３ 将 ｔ ｓ ｅ Ｄ Ａ分成 两组 （ 和 ２ ，分 别于其 ． ｅｔｒｃＮ １ ）
Ｓ ｂ ｒ ｃ ｉ ｅ Ｈ ｂ ｉ ｉ ａ ｉ ｎＳ Ｈ 是 Ｄ ａ ｃ ｅ ｋ ｕ ｔ ａ ｔ ｖ ｙ ｒ ｄ ｚ ｔ ｏ ，Ｓ ） ｉ ｔｈｎ ｏ
一
阳性率低 、 筛选效 率高 、 操作 简单等优 点 ， 别适用 于 特 克 隆分析造成 某种特 殊表型 的 目相 同但 在
短链 （ １ 约 ０余个核苷 酸 ） 组成 的双链 ＤＡ片 段 ， Ｎ 长
同， 内侧序 列与第二次 Ｐ Ｒ引物序列 相 同。 外 ， 而 Ｃ 此 在
［ 摘
要］ 制性消减杂交技术 （Ｓ ） 抑 Ｓ Ｈ 是一种高效检测差异表达基 因的方法 。 详细论述了抑制性消减杂交的基本原理及过程，
并简要介绍了其在工业生产菌种改 良中的应用 。 ［ 关键词］ 抑制性消减 中 ８ ［ 文献 标 识 码 ］ Ａ ［ 章编 号 ］ １ ０ — ０ ５ ２０ ） ７０ ３ － ３ 文 ０ ３ ５ ９ （０ ８ ０ － ０ １０
５ 端接上 去磷酸 化 的接 头 １ 接 头 ２ （ｄ ｐｏ ， 和 ａ ａｔｒ １
等于 １９ 依据 消减杂 交和 抑制 Ｐ Ｒ发 展起 来 的 ９６年 Ｃ
一
种 分 离差 异表 达 基 因的新 方 法 ［３该 技术 具 有假 ， ２
ａａ ｔｒ２。 ｄｐ ｏ ） 两接头分别是具有一段反向末端重复序 列 的寡核苷 酸序 列 ， 由一长链 （ ４ 约 ０余个 核苷酸 ） 和
含有 目的基 因的样 品称 为试验方 （ｅ ｔ ｒ 。 Ｔ ｓ ｅ ）
除接 头不 同外 是完 全同源 的， 然形成 ａｂＣｄ但第 仍 ，、、，

抑制性差减杂交技术_SSH_在植物学研究中的应用

抑制性差减杂交技术_SSH_在植物学研究中的应用
华 北 农 学 报 20 08 , 23 ( 增 刊 ) : 78- 8 3
抑制性差减杂交技术( SSH) 在植物学研究中的应用
阎爱华, 王冬梅
( 河北农业大学 生命科学学院, 河北 保定 071001)
摘要 : 抑制性差减杂交是一种基于转录水平的杂交技术, 能将差异表达 基因扩增 千倍后富集, 具有 高效、灵 敏、操 作简单, 假阳性率低等特点, 已经越来越多的被应用在植物学研究领域。就该 技术的原理、特点 及其在植物 学方面的 应用研究进展作一简要介绍。
DNA 微阵列技术 DNA microarray
巨克隆技术 M egaclone
将基因片段、寡聚核苷酸、cDNA 等固定 在硅质、塑料、玻 璃或尼龙膜 上, 用不 同组 织或 来源 的 mRNA 制 成探 针, 与芯片杂 交, 根 据信 号 查找 差 异 片段 并 进行 克 隆 和分 析。 cDNA 连上不 同的标签 ( tag ) , 与 带有 antitag 的 microbeads 杂交, 固定 cDNA, 并 且每 个 microbead 上 只与 一个 c。
基因差异表达分析方法
Methods of different gene expression techniques
基本原理
The basic principles of different gene expression techniques
优点 Advantage
缺点 Disadvantage
mRNA 差异显示 PCR mRNA differential display
收稿日期: 2008- 08- 11 基金项目: 国家自然科学基金资助项目( 30671244) ; 河北省应有基础研究计 划重点基础研究 项目资助( 08965505D) ; 河北省自然科 学基金

【国家自然科学基金】_差异筛选_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140801

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107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
科研热词 推荐指数 基因芯片 18 蛋白质组学 15 基因表达谱 11 遗传多样性 9 基因表达 9 rna干扰 9 差异表达基因 8 寡核苷酸序列分析 7 大鼠 7 基因 7 蛋白质组 6 肺肿瘤 6 肿瘤转移 5 肾阳虚 5 细胞凋亡 5 小鼠 5 小麦 5 胞增殖 4 种质资源 4 磁共振成像 4 rapd 4 dna芯片 4 预后 3 遗传多态性 3 葡萄胎 3 胰腺肿瘤 3 聚类分析 3 绿色荧光蛋白 3 筛选 3 磷高效 3 猪 3 水稻 3 核心种质 3 干细胞 3 基因型 3 卵巢肿瘤 3 冠心病 3 光谱法,质量,基质辅助激光解吸电离 3 rt-pcr 3 issr 3 hepg2细胞 3 鼠脑 2 骨髓间充质干细胞 2 骨坏死 2 阅读障碍 2 金匮肾气丸 2
科研热词 基因芯片 基因表达 蛋白质组学 差异表达基因 蛋白质组 抑制性消减杂交 大鼠 基因 小麦 基因表达谱 细胞增殖 双向电泳 胃癌 动物模型 rna干扰 骨髓间充质干细胞 衰老 细胞周期 细胞分化 生物信息学 淋巴细胞 小鼠 基因巢肿瘤 儿童 低氧训练 骨质疏松 转染 质谱 表达 蛋白组学 荧光定量pcr 胃肿瘤 肾阳虚 肝细胞 结核分枝杆菌 细胞凋亡 线粒体 白血病 癌 生长 烧伤 激光捕获显微切割 湖羊 排卵数

【国家自然科学基金】_差减杂交_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140730

【国家自然科学基金】_差减杂交_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140730

2012年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49
科研热词 推荐指数 抑制消减杂交 4 表达序列标签 3 抑制性差减杂交 3 高温胁迫 2 致病性 2 黄龙病 1 黄单胞杆菌水稻致病变种 1 鹿结核病野毒株 1 高温胁迫响应基因 1 青稞 1 青枯菌 1 闭壳肌 1 铁皮石斛 1 适应性变异 1 褐飞虱 1 表达 1 虾夷扇贝 1 菌根真菌 1 花药 1 芯片制备 1 肥胖 1 系列研究 1 类胡萝卜素 1 稻瘟菌 1 磷转运蛋白基因 1 疣粒野生稻 1 椪柑 1 棉花 1 微阵列 1 序列分析 1 干旱胁迫 1 差异表达基因 1 小麦(triticum aestivum l.) 1 大豆 1 基因克隆 1 吡虫啉 1 卡介苗 1 共生 1 克隆 1 ⅲ型分泌系统效应子 1 us 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48
科研热词 推荐指数 抑制差减杂交 5 表达序列标2 马铃薯 1 长春花 1 酵母双杂交 1 辣椒 1 茎线虫 1 茄子 1 芝麻 1 肺发育 1 耐湿性 1 紫外线胁迫 1 类赖氨酰氧化酶-1(loxl-1) 1 生物碱超量合成 1 甘薯 1 猕猴模型 1 特异表达基因 1 激素自养 1 桃蚜 1 新疆野苹果 1 文昌鱼 1 抑制性差异表达 1 差异基因表达 1 差减杂交库 1 实时荧光定量pcr 1 大豆 1传 1 中异表达基因 基因芯片 鲫鱼囊胚细胞 骨质疏松 转座子标签法 西瓜 褐飞虱 表达 缺铁胁迫 糖代谢 睾丸组织 白血病 电子克隆 瓯江彩鲤 热敏感基因 水稻品种抗性 水稻 氨基转移酶 枯萎病 条锈菌 斑点杂交 抑制性差减杂交(ssh) 抑达 基因克隆 向重性 同源序列法 功能克隆 凋亡 克隆 体色 低氧相关基因 三氧化二砷 ssr s-腺苷甲硫 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43

抑制性消减杂交技术(SSH)及其在烟草生物学研究中的应用

抑制性消减杂交技术(SSH)及其在烟草生物学研究中的应用

科学研究表明， 因的选择性差异表达决定植 基 物的生长 、发育、衰老、死亡 、对逆境 的适应等生 理过程 。分离差异表达基因对于了解和揭示植物体 的生长 、发育规律 ， 进而有针对性地对生物性状进 行改良具有重要意义。近年来随着 Ｐ Ｒ 技术 的兴 Ｃ 起， 出现了许多基于 Ｐ Ｒ的分离差别表达基因的新 Ｃ
由于速度快 、假阳性率低 、灵敏度高等优点 ，现 已 广泛应用于植物学研究 的各个领域【 ６ 】 。烟草是我 国
重要 的经济作物之一 ，面积 和总产量都 居世界第
一
。
与此 同时，它作为模式植物 ， 在植物学的研究
领域具有重要 的科研意义 ，尤其是在遗传 、繁育、
生理、 生化和转基 因等研究领域 。 笔者就 Ｓ Ｈ技术 Ｓ
Ｒｅ ｅ ｃ ｓ ａｒ ｈ
ＬＩＬｉ ｎ． ｑｉ ＬＵ ｍｉ Ｌｉ ｎｇ
（ ｒ ｎ ｍｙＣ ｌ ｇ ｆ ｉｈ ａ ｒ ｕｔｒｌ ｎ ｖ ｒ ｔ， ａ ａ ， ｉ ｕ ２ ０ ４ Ｃ ｉａ Ａｇｏ ｏ ｏｌ ｅ ｃ ｕ ｎ ｉ ｌ ａ Ｕ ｉｅｓ ｙ Ｙ ’ Ｓｃ ａ ６ ５ １ ， ｈｎ ） ｅ ｏＳ Ａｇ ｃ ｕ ｉ ｎ ｈｎ Ａｂ ｔａ ｔ Ａ ｎ ｗ ｍｅ ｏ ，ｅｍｅ ｐ ｒｓｉｎｓ ｂｒｃｉｅ ｙ ｒ ｉ ｔ ｎ（ Ｓ ， ａ ｅ ｎｄ ｖ ｌｐ ｄｂ ｓｄｐ ｍａ ｌ ｎｔｅ ｅ ｈ ｉｕ ｓ ｒ ｃ ： ｅ ｔ ｄ ｔｒ ｄｓ ｐ ｅ ｓ ｔ ｔ ｂ ｄｚ ｉ Ｓ Ｈ）ｈ ｓ ｅ ｅ ｅｏ ｅ ａ ｅ ｒ ｒ ｙｏ ｃ ｎｑ ｅ ｈ ｕ ｏ ｕ ａ ｖ ｈ ｉ ａｏ ｂ ｉ ｉ ｈ ｔ
Ｄ Ｉ ０ ９９ ．ｓ． ０—１９ ０１ ３ １ Ｏ ：１． ６￣ｉ ｎ ０７５ １． １． ． ９ ３ ｓ １ ２ ００

【国家自然科学基金】_核酸代谢_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140802

【国家自然科学基金】_核酸代谢_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140802

1 1 1 1 1 1 1
2011年 科研热词 推荐指数 抑制消减杂交 2 龙眼 1 黄芩苷 1 高山植物 1 除草剂 1 银杏叶 1 钙离子 1 钙敏感受体 1 调控作用 1 蛋白质代谢 1 花生四烯酸(aa) 1 脂肪代谢 1 胁迫 1 肉鸡 1 罗汉果 1 缺刻缘绿藻 1 细胞工厂 1 细胞因子信号抑制蛋白2(socs2) 1 细胞因子 1 线粒体膜 1 精脒 1 精胺 1 种子败育 1 磷饥饿 1 研究进展 1 真核表达载体pcdna3.1 1 生物量 1 甜苷v 1 氮饥饿 1 植物毒性 1 心肌缺血再灌注损伤 1 心肌细胞凋亡 1 异源蛋白 1 多胺代谢 1 基因表达 1 基因组学 1 呼吸道合胞病毒 1 化学杀雄剂 1 光合作用 1 作用机理 1 代谢工程 1 乙酰乳酸合成酶 1 丝状真菌 1 丙酮酸肌酸 1 三萜皂苷 1 tdf 1 rna依赖的
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45
科研热词 肿瘤 重型再生障碍性贫血 调控因子 菌群 肿瘤治疗 肥胖 羟喜树碱 紫外线胁迫 盐酸二甲双胍 瘤胃微生态 生物信息学 消化系统 活性污泥 氨甲蝶呤 桃蚜 提取 抗药性 抗肿瘤药物 引物通用性 宏基因组学 多态性 基因 嗜热乙醇杆菌jw200 双子叶作物 单核苷酸 单子叶作物 分子生态遗传 凝胶阻滞 亲和层析 二氢叶酸还原酶 trr mtr mthfr mthfd g3bp fto基因 est-ssr 2-型糖尿病
2012年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52

【国家自然科学基金】_核酸分子杂交_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140802


53 cdna芯片 54 315密码子点突变
推荐指数 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2013年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34
1 1
2011年 科研热词 推荐指数 抑制消减杂交 2 鲤鱼 1 高山植物 1 霍乱弧菌 1 转录因子 1 赭曲霉素a 1 表面等离子体 1 荧光 1 胁迫 1 肿瘤坏死因子α 1 (tnfα 1) 1 罗汉果 1 电化学dna生物传感器 1 甜苷v 1 特异性 1 检测限 1 核酸适配体 1 心肌细胞 1 弓形虫病 1 序列分析 1 基质金属蛋白酶-10 1 基因 1 发夹型核酸探针 1 分子诊断 1 分子识别 1 共振传感器 1 克隆 1 信号转导及转录激活因子3 1 三萜皂苷 1 tlc 1 ruhex 1 pcr 1 p53基因 1 est 1 c反应蛋白 1

【国家自然科学基金】_消减cdna文库_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140731


科研热词 推荐指数 抑制消减杂交 4 抑制性消减杂交 3 配子体 2 表达序列标签 2 海带 2 日本血吸虫 2 差异表达基因 2 麦长管蚜 1 高效液相色谱-质谱法 1 雌性不育 1 转录 1 超氧化物歧化酶(sod) 1 表达研究 1 荧光定量pcr 1 茶树(camellia sinensis) 1 芽休眠 1 花生 1 肾脏 1 肺癌 1 肝胰腺 1 绵毛优若藜 1 维生素c 1 细胞色素b 1 细粒棘球蚴 1 紫外诱导 1 精氨酸甲基转移酶1 1 粒细胞缺乏 1 第2白卵 1 皱纹盘化胁迫 1 毛葡萄 1 格雷夫斯病 1 核甘酸序列 1 抗白粉病 1 抗1 序列荧光定量rt-pcr 1 基因芯片 1
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
2008年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 6导 中国明对虾 trizol试剂法 sds-licl法 rna提取 race-pcr nm23-h1基因 hbuep基因
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75

【国家自然科学基金】_抑制性氨基酸_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140730


科研热词 推荐指数 鸭 1 钠-钙交换体 1 钙离子拮抗剂 1 表位 1 行为 1 自由基清除剂 1 膜片钳技术 1 脑缺血 1 羰基毒性 1 细菌噬菌体 1 牛磺酸 1 流感病毒a型 1 流感 1 氨基酸 1 植食性昆虫 1 杂种优势 1 机制 1 接触化感器 1 抗体 1 抑制性差减杂交 1 心肌细胞 1 寄主选择 1 卵巢 1 冷水应激 1 兴奋性氨基酸神经递质 1 兴奋性氨基酸受体拮抗剂 1 人 1 中华绒鳌蟹 1 丙二醛(mda) 1 γ -氨基丁酸(gaba) 1 tau蛋白磷酸化 1 mrna差异显示 1 hplc 1 h1n1亚型 1 ghr基因 1 ejo3 1 cdna芯片 1
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37
推荐指数 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
科研热词 鸽 高效液相色谱 陆地棉 谷氨酸能神经元 表位 肽库 神经递质 皮质-皮质投射 皮层-丘脑投射 氨基酸 正黏病毒科 柱前衍生 抑制性消减杂交(ssh) 微透析 圆环病毒 囊泡谷氨酸转运体 全基因组序列 ssr分子标记 n+离子注入
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

抑制消减杂交技术(SSH)及其在植物基因克隆上的应用

述：
关 键 词 ：Ｓ Ｓ Ｈ技 术 ；差异 表达 ；Ｐ Ｒ Ｃ 中 图 分 类 号 ： ７５ Ｑ ８ 文 献 标 识 码 ： Ｂ
分 子 生 物 学 研 究 表 明 ， 物 的 生 长 、 育 、 老 和 死 生 发 衰 亡 ， 织 和 细 胞 间 的分 化 ， 组 凋亡 及 变 异 都 是 与 基 因 的选 择 性 差 异 表 达 有 关 ， 基 因 在 时 间 和 空 间 上 的 有 序 表 达 贯 即 穿 和调 控 了 个 体 的整 个 生 命 发 育 过 程 。 因 此 ， 离 并 克 分 隆差 异 表 达 基 因 不 仅 有 助 于 阐 明 生 命 的 奥 秘 ， 且 还 为 而 生 物 的改 良、 因诊 断 与 治 疗 提 供 重 要 的 理 论 依 据 。 近 基 年 来 ， Ｐ Ｒ技 术 的 基 础 上 ， 继 提 出 了 多 种 分 离 克 隆 在 Ｃ 相 差 异 表 达 基 因 的 技 术 ， ９ ２年 Ｈａ ｇ和 Ｐ ｒｅ １９ ｎ ａｄｅ等 … 首 次 提 出 的 差 异 显 示 技 术 （ Ｒ ｉｅｅ ｔ ｉ ｌ ｅｅｓ ｍ ＮＡ ｄｆ ｒｎｉ ｄｓ ａ ｒｖ ｒ ｆ ｌ ａ ｐｙ ｅ ｔ ｎｃｉｔ ｎ Ｐ Ｒ） １ ９ 年 Ｈ ｌ ｒ ｒ ｓｒ ｉ Ｃ ； ９ ４ ａ ｐｏ Ｌ ａｋ等 Ｌ 提 出 的 Ｉ Ｄ ｂ ２ 』 （ ｅｅｅ ｔｔ ｎ ｄｆ ｒｎｅ ａａ ｓ ｒｐ ｓｎａｉ ａ ｏｌ ｉｅ ｃ ｎ ｌ ｉ ｅ ｙ ｓ） 技 术 ； １９ 年 ９６ Ｄ ａ ｃ ｅ ｋ ｌ等 Ｌ ｉａ ｈｎ ｏ ｔ ３ 提 出 的 Ｓ Ｈ （ ｕ ｐｅｓ ｎ ｕ ｔ ｅ ｖ Ｓ ｓｐ ｒｓｉ ｓｂｒ ｔ ｅ ｏ ａｉ ｈ ｂｉｚｔ ｎ ｖ ｒ ａｉ ）技 术 及 １９ 年 Ｊｓ 等 』提 出 的 Ｄ Ｄ ｄ ｏ ９８ ｏｈ Ｓ （ ｉｃｅ ｆ ｌ ｕ ｔ ｃｉ ｉ ｌ ） 术 等 ， 中 ｍ Ｎ 差 异 显 ｄｆ ｒｎ ａ ｓｂｒ ｔ ｎｄｓ ａ 技 ｉ ａ ｏ ｐｙ 其 ＲＡ 示 技 术 已在 筛 选 差 异 表 达 基 因方 面 得 到 了 广 泛 使 用 ， 后 三 者 应 用 还 不 多 ， 别 是 Ｓ Ｈ技 术 的 应 用 主 要 集 中在 肿 特 Ｓ 瘤 基 因 的 克 隆方 面 ， 植 物 研 究 领 域 较 少 。郭 新 红 【 等 在 ５ Ｊ 利 用 ｓ Ｈ技 术 对 渗 透 胁 迫 诱 导 的 梭 梭 幼 茁 差 异 表 达 基 Ｓ 因 片段 进 行 了 分 离 和 克 隆 ， 取 得 了 成 功 。本 文 就 Ｓ Ｈ 并 Ｓ 技术及其应用作一介 绍 。 １ Ｓ Ｈ技 术 的 主 要 原 理 和 基本 过 程 Ｓ Ｓ Ｈ 技 术 主 要 原 理 是 以抑 制 Ｐ Ｒ为 基 础 的 ｅ Ｎ Ｓ Ｃ Ｄ Ａ消 减 杂交 。 所 谓 抑 制 Ｐ Ｒ是 利 用 非 目标 序 列 片 段 两 端 的 Ｃ 长 方 向重 复 序 列 在 退 火 时 产 生 类 似 发 卡 的 互 补 结 构 ， 无 法 作为 模 板 与 引 物 配 对 ， 择 性 地 抑 制 了非 目 的 基 因 片 选 段 的扩 增 。 在 经 济 消 减 杂 交 后 ， 据 复 性 动 力 学 原 理 ， 根 浓 度 高的单链 ｅＮ Ｄ Ａ分 子 迅 速 复 性 ， 度 低 的单 链 ｅ Ｎ 浓 Ｄ Ａ分 子 仍 以单 链 形 式 存 在 ， 得 杂 交 后 不 仅 目的 基 因 间 的 丰 使 度 差 异 基 本 消 除 ， 且 富 集 了差 异 表 达 基 因 。 而 其 基 本 过程 是 ： 提 两 种 不 同 细 胞 （ ｅｔ 和 ｄ ｖｒ 抽 Ｔｓ ｒ ｅ ｉ ｒｅ） 的 总 ｍＲ Ａ逆 转 录 转 成 ｃ Ｎ 用 Ｒ ａ 或 Ｈ ｅⅢ 限制 酶 切 Ｎ Ｄ Ａ， ｓ ｌ ａ 割 为 小 片段 。 将 ｔ ｔｒ Ｄ Ａ分 为 两 份 ， 别 连 接 不 同 的 ｅ ｅ Ｎ ｓ ｅ 分
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2008年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 杂交技术(ssh) 1 抑制性消减杂交 1 抑制性差减杂交 1 差异表达基因 1 大豆疫霉根腐病 1 大肠埃希菌 1 基因芯片 1 基因克隆 1 反式激活蛋白 1 前-s1蛋白 1 关节软骨 1 乙词 推荐指数 抑制性消减杂交 4 益气活血中药复方 3 病毒性心肌炎 3 抑制性消减杂交技术 3 骨髓基质细胞 1 趋化因子cxcl12 1 荧光定量pcr 1 绵毛优若藜 1 细胞色素c氧化酶亚基ⅱ 1 细胞色素c氧化酶亚基ⅰ 1 细胞周期 1 细粒棘球蚴 1 线粒体核糖体蛋白l51 1 粒细胞缺乏 1 白血病 1 猕猴模型 1 氧化胁迫 1 格雷夫斯病 1 抗差异表达达 1 基因 1 半定量rt-pcr 1 分枝杆菌,结核 1 冷胁迫 1 sash1 1 pms肝
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
科研热词 抑制性消减杂交 cdna 差异表达 乙型肝炎病毒 陆地棉 遗传 肾阴虚证 结核分枝杆菌 绒山羊 生长期 生物信息学 氡 次级毛囊 杂交 支气管 抑制消减杂交 抑制性消减杂交技术 抑制性消减杂交(ssh) 恶性转化 序列分析 差异表达基因 差异性表因 前-s1蛋白 休止期 个旧,矿粉 丙型肝炎病毒 上皮细胞 xtp6 ssr分子标记 ns5abp37 n+离子注入 iga肾病 dsn均一化技术 cdna微阵列
2014年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
2014年 科研热词 推荐指数 抑制性消减杂交 3 鳃丝 1 马氏珠母贝 1 表达序列标签(ests) 1 表达序列标签 1 纤维素酶 1 筛选 1 溶藻弧菌 1 抗感染免疫 1 抑制性消减杂交技术(ssh) 1 抑制性消减杂交(ssh)技术 1 差异基因 1 家蝇 1 实时定量荧光pcr 1 匍枝根霉(rhizopus stolonifer) 1 凡纳滨对虾 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29
科研热词 推荐指数 抑制性消减杂交 4 维氏气单胞菌 1 猪肺炎支原体性消减杂交(ssh) 1 抑制差减杂交 1 差异表达基因 1 家蝇幼虫 1 家蝇 1 嗜水气单胞菌 1 反向northern blot 1 反向northern 1 刺参 1 共生萌发 1 克隆 1 人支气管上皮细胞(16hbe) 1 乳腺癌 1 乌鳢 1 中华绒螯蟹 1 alb基因 1
推荐指数 8 3 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33
2011年
2012年 科研热词 推荐指数 序号 科研热词 推荐指数 抑制性消减杂交 4 1 抑制性消减杂交技术 3 益气活血中药复方 3 2 益气活血中药复方 2 病毒性心肌炎 3 3 病毒性心肌炎 2 抑制性消减杂交技技术(ssh) 2 6镍 1 香蕉 1 7 铁蛋白 1 连作障碍 1 8 连作障碍 1 辣椒 1 9 纤维强度 1 诱变育种 1 10 禽类 1 红笛鲷 1 11 热带假丝酵母木糖乙醇发酵相关基因 1 紫杉醇 1 12 深黄被孢霉 1 疫霉 1 13 消减杂交 1 烟草 1 14 次生壁 1 烟碱 1 15 棉花纤维 1 抗病 1 16 棉花 1 抑制性消减杂交(ssh) 1 17 核糖体蛋白l27a 1 抑制性pcr 1 18 抑制消减地黄 1 21 差异表达 1 反转录聚合酶链式反应(rt-pcr) 1 22 实时定量pcr 1 反向northern杂交 1 23 定量pcr 1 分子生物学 1 24 安氏伪镖水蚤 1 内生真菌 1 25 基 1 28 低温胁迫 1 small inducible cytokine a2(mcp-1/ccl2)、ribosomal 1 29 candida proteintropicalis s4 xylose fermentation 1 to ethanol nadh脱氢酶亚基2 1 30 atp6 1 nadh脱氢酶亚基1 1 est 1 cvb3 1