蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本的制备

一、实验目的1. 掌握蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

2. 观察并分析坐骨神经刺激对腓肠肌收缩反应的影响。

3. 探究不同刺激强度和频率对腓肠肌收缩的影响。

二、实验原理坐骨神经是人体最大的混合神经，由腰骶神经根合并而成，主要负责下肢的感觉和运动功能。

腓肠肌是人体下肢的主要肌肉之一，负责小腿的屈曲和踝关节的屈伸。

本实验通过刺激坐骨神经，观察腓肠肌的收缩反应，探讨神经肌肉的兴奋性和收缩机制。

三、实验材料与仪器1. 实验动物：蟾蜍2. 实验仪器：刺激器、放大器、示波器、张力传感器、计算机、剪刀、镊子、电极、玻璃皿、任氏液等四、实验方法1. 制备坐骨神经-腓肠肌标本：将蟾蜍处死后，剥去皮肤，暴露腰骶丛神经，游离大腿肌肉之间的坐骨神经及小腿的腓肠肌。

将神经和肌肉两端结扎，剪去无关分支，保留膝关节，剪去腿骨，将标本离体。

将标本置于任氏液中，保持湿润。

2. 连接实验装置：将坐骨神经连接刺激器输出端，腓肠肌连接张力传感器，张力传感器连接放大器，放大器连接示波器和计算机。

3. 设置刺激参数：根据实验需求设置刺激强度、频率和持续时间。

4. 进行实验：刺激坐骨神经，观察腓肠肌的收缩反应，记录张力变化。

5. 数据分析：分析不同刺激强度和频率下腓肠肌的收缩反应，探讨神经肌肉的兴奋性和收缩机制。

五、实验结果1. 在不同刺激强度下，腓肠肌的收缩反应随着刺激强度的增加而增强，直至达到最大收缩。

2. 在不同刺激频率下，腓肠肌的收缩反应随着刺激频率的增加而增强，直至出现不完全强直收缩。

3. 当刺激强度和频率同时增加时，腓肠肌的收缩反应更为明显。

六、实验结论1. 坐骨神经刺激可以引起腓肠肌的收缩反应，说明神经肌肉之间存在兴奋传递。

2. 不同刺激强度和频率对腓肠肌的收缩反应有显著影响，说明神经肌肉的兴奋性和收缩机制与刺激参数密切相关。

3. 本实验结果为研究神经肌肉的兴奋性和收缩机制提供了实验依据。

七、实验讨论1. 本实验中，刺激坐骨神经可以引起腓肠肌的收缩反应，说明神经肌肉之间存在兴奋传递。

实验材料与方法2.1 实验材料2.1.1实验动物：蟾蜍，由医大二院实验动物中心提供，雌雄不限，体重40±5g，实验前于实验室饲养，室温20±2.0℃。

2.1.2实验药品：0.0825mg/ml的三唑磷溶液，0.165mg/ml的三唑磷溶液，0.33mg/ml的三唑磷溶液，实验前由广谱用三唑磷杀虫剂配置。

任氏液，实验前配置好。

2.1.3实验器材：⑴SMUPP-E型生物信号处理系统(Model SMUP-E.Bio-electric Signals Processing System 复旦大学上海医学院生理与病理生理学研制)。

⑵张力换能器⑶hp caserjet 1000型打印机⑷常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针和玻璃针）。

⑸其他：肌动器、腊盘、蛙板、玻璃板、固定针、培养皿、污物缸、滴管、1ml注射器、细棉线。

2.2 试验方法2.2.1实验内容实验分四组进行：第一组，为对照实验，在不用三唑磷溶液处理的情况下，测量蟾蜍腓肠肌的单收缩，并记录测量单收缩过程的潜伏期、收缩期、舒张期的时间,收缩幅度, 最大收缩力；第二组，用0.0825mg/ml的三唑磷溶液环境影响蟾蜍一段时间后制备腓肠肌标本，第三组用0.165mg/ml的三唑磷溶液环境影响蟾蜍一段时间并制备腓肠肌标本，第四组用0.33mg/ml的三唑磷溶液环境影响蟾蜍一段时间并制备腓肠肌标本，分别测量记录单收缩过程的潜伏期（ms）,收缩期（ms）,舒张期的时间（ms）,最大收缩力（收缩幅度）(g)；并计算:收缩速率=收缩幅度/收缩时间(g/ms),舒张速率=收缩幅度/舒张时间(g/ms);然后分别求出加三唑磷溶液前和用三唑磷溶液影响后4个单收缩曲线的最大收缩力、收缩速率、舒张速率的平均值;最后通过生物统计学软件数据处理，进行对比分析，得出实验结果。

2.2.2实验过程⑴破坏蟾蜍脑脊髓取蟾蜍一只用自来水冲洗干净,左手握蟾蜍,小指和无名指夹住后肢,拇指按压背部,中指放在胸腹部,用食指下压头部前端使头前俯,右手持金属探针由枕骨沿正中线向脊柱端触划,当触到凹陷处即枕骨大孔处,可将探针由此垂直刺入皮肤,入枕骨大孔后将针折向前方插入颅腔并左右搅动捣毁脑组织,而后退针至刺入点皮下,针尖向后刺入脊椎管捣毁脊髓,当四肢松软,呼吸消失则表示脑脊髓完全毁坏,否则应按上法重复操作。

实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备一、实验目的1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别）2、离体标本实验（与在体标本实验的区别）3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理4、掌握离体标本的制备及手术训练5、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义二、实验原理1、急性动物实验与慢性动物实验，在体实验与离体实验急性动物实验可分为离体和在体实验两种方法。

离体实验：是从活着的或刚处死的动物身上取出所需要的器官、组织、细胞或细胞中的某些成分。

置于一个能保持其正常功能活动的人工环境中，观察某些人为的干预因素对其功能活动的影响。

例如，对离体蛙心或动物血管条进行灌流，可用于研究某些生物活性物质或药物对心肌或血管平滑肌收缩力的影响；应用膜片钳技术可研究细胞小片膜上单个离子通道的电流特性。

在体实验：是在动物麻醉条件下，手术暴露某些所需研究的部位，观察和记录某些生理功能在人为干预条件下的变化。

例如，以动脉插管记录动物血压，可用于观察某些神经或体液因素对血压的影响；将玻璃微电极插入脑内某些部位进行细胞外或细胞内记录，观察神经元在接受某些刺激时放电活动的变化，以了解这些神经元的生理功能。

急性动物实验的优点是实验条件比较简单，条件较易控制，便于进行直接的观察和细致的分析；离体实验则更能深入到细胞和分子水平，有助于揭示生命现象中最为本质的基本规律。

但急性动物实验的结果可能与生理条件下完整机体的功能活动有所不同，尤其是离体实验的结果，此时被研究的对象，如器官、组织、细胞或细胞中的某些成分已经脱离整体，它们所处的环境已发生很大的改变，实验结果与在整体中的真实情况相比，可能会有很大的差异。

慢性动物实验：慢性动物实验以完整、清醒的动物为研究对象，且尽可能保持外界环境接近于自然，以便能在较长时间内观察和记录某些生理功能的改变。

实验前一般需对动物作某些预处理，待动物康复后再进行观察。

例如，研究唾液的分泌调节时，可预先将唾液腺导管开口移至颊部体表，观察时就能方便地从体表收集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。

第1篇一、实验目的1. 熟悉蟾蜍腓肠肌标本的制备方法。

2. 掌握刺激强度、频率对肌肉收缩的影响。

3. 观察神经肌肉接头兴奋传递和骨骼肌兴奋的电变化与收缩之间的时间关系及其各自特点。

4. 理解神经肌肉兴奋性的生理机制。

二、实验原理蟾蜍腓肠肌标本是生理学实验中常用的实验材料，因其离体组织生活条件易于掌握，且与哺乳类动物生理功能相似。

通过观察蟾蜍腓肠肌在不同刺激强度、频率下的收缩反应，可以了解神经肌肉兴奋性的生理机制，以及刺激与反应之间的关系。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：蟾蜍、任氏液、生理盐水、手术刀、剪刀、镊子、电刺激器、换能器、记录仪等。

2. 实验仪器：显微镜、电刺激器、换能器、记录仪、生理盐水浴槽等。

四、实验步骤1. 制备蟾蜍腓肠肌标本：a. 将蟾蜍处死，用生理盐水冲洗干净。

b. 用手术刀沿脊柱两侧剪开皮肤，暴露腰骶丛神经。

c. 游离坐骨神经和腓肠肌，剪去无关分支。

d. 将腓肠肌和坐骨神经分别结扎，用生理盐水浸泡。

2. 连接仪器：a. 将坐骨神经连接到电刺激器。

b. 将腓肠肌连接到换能器。

c. 将换能器连接到记录仪。

3. 观察刺激强度对肌肉收缩的影响：a. 调整电刺激器的输出强度，从低到高依次刺激坐骨神经。

b. 观察并记录腓肠肌的收缩反应，分析刺激强度与肌肉收缩之间的关系。

4. 观察刺激频率对肌肉收缩的影响：a. 调整电刺激器的输出频率，从低到高依次刺激坐骨神经。

b. 观察并记录腓肠肌的收缩反应，分析刺激频率与肌肉收缩之间的关系。

5. 观察神经肌肉接头兴奋传递和骨骼肌兴奋的电变化与收缩之间的时间关系：a. 观察并记录腓肠肌在刺激前后的电位变化。

b. 分析电位变化与肌肉收缩之间的关系。

五、实验结果与分析1. 刺激强度与肌肉收缩的关系：实验结果显示，随着刺激强度的增加，腓肠肌的收缩幅度也随之增加。

当刺激强度达到一定阈值时，肌肉收缩达到最大幅度。

当刺激强度继续增加时，肌肉收缩幅度不再增加。

2. 刺激频率与肌肉收缩的关系：实验结果显示，随着刺激频率的增加，腓肠肌的收缩幅度逐渐减小。

蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制作以及神经动作电位观察及传导速度测定一：实验目的1、掌握蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法2、掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备3、掌握测定神经动作电位传导速度的原理与方法二：实验材料1、材料：蟾蜍2、器材：常用手术器械（毁髓针、手术镊、手术剪、骨钳、玻璃分针、图钉、蛙板、不锈钢盘）、污物缸、信号采集处理系统、神经屏蔽盒3、试剂：任氏液三：实验方法与步骤1、蟾蜍的双毁髓一只手握住蟾蜍，拇指按住其背部，食指压住其头部；另一只手捏住其嘴部将其头部上下轻轻扳动，找到第一道折痕，其中部即为枕骨大孔，用毁髓针垂直插入枕骨大孔；然后将针尖向前刺入颅腔并搅动以捣毁脑组织，此时的蛙为单毁髓动物；再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方与脊柱平行刺入椎管，捣毁脊髓，彻底捣毁脊髓时可看到蟾蜍的后肢突然蹬直而后瘫软，此时的动物为双毁髓动物。

注意：a、若毁髓后蟾蜍的四肢肌肉紧张或活动自如，需重新毁髓；b、操作要快、准，且操作过程中不要挤压到蟾蜍的耳后腺，避免其分泌蟾酥。

2、坐骨神经-腓肠肌标本的制作（1）剥离后肢标本。

将蟾蜍背面向上置于蛙板上，用手术镊轻轻提起两前肢间的背部皮肤，用手术剪横向环形剪开皮肤，将蟾蜍身体下半部的皮肤剥离。

将蟾蜍剖腹，内脏向头部方向掀起，用骨钳在其第三节脊椎骨处剪断脊柱，然后用手术剪剪断相连的肌肉组织。

（2）分离两后肢。

用左手托起标本，拇指和食指固定住两后肢的肌肉，右手持骨钳剪断耻骨，手术剪剪开肌肉连接；纵向剪开脊柱使两后肢完全分离。

一只放入任氏液中备用，另一只用于继续下一步操作。

注意：在分离两后肢时需谨慎，不要使剪刀偏离中线太远以免损伤神经。

（3）分离坐骨神经。

将后置的脊柱端腹面向上，趾端想外侧翻转，使其足底向上，用图钉将其固定在蛙板上。

用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经。

股部沿肱二头肌和半膜肌之间的裂缝找到坐骨神经，用镊子和手术剪仔细去除半膜肌和肱二头肌，使神经暴露出来。

用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪断支配腓肠肌之外的分支，并去除神经上的其它组织。

坐骨神经-腓肠肌标本的制备XXX,YYY,ZZZ（版权所有，仅限个人）一、实验目的：1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。

2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

二、实验原理：1.蟾蜍处死：将蟾蜍的脑和脊髓用毁髓针捣毁后，蟾蜍即死亡。

捣毁脑是为了将蟾蜍的感觉和运动中枢破坏，同时也使蟾蜍的意识消失，既避免解剖过程中蟾蜍感到痛苦，也避免蟾蜍有意识的反应；捣毁脊髓是为了破坏蟾蜍的周围神经系统，避免蟾蜍自然的非意识的反应（乱动）。

总之，双毁髓就是为了是蟾蜍在之后的解剖过程中无任何干扰实验的反应。

2.坐骨神经-腓肠肌标本的制备：坐骨神经直接支配着腓肠肌的反应，刺激坐骨神经的神经干，腓肠肌会产生收缩反应。

一次阈上刺激，腓肠肌会产生一个周期的收缩舒张过程，从而可以被信号采集系统采集，并通过计算机和相关软件转化成可视的收缩舒张曲线。

便于研究神经和肌肉的信号、反应关系和规律。

三、实验器材与试剂：（一）实验动物及器材：蟾蜍、常用蛙类手术器械（如：毁髓针、剪刀、解剖刀等）、蛙板、玻璃划针、固定针、培养皿、滴管、棉花、粗棉线等。

（二）实验试剂：任氏液（近似两栖动物内环境液，配制因子很多，不同于生理盐水）四、实验方法与步骤：1、蟾蜍处死，损毁脑和脊髓：a.学会持拿蟾蜍的方法：一般用左手持拿蟾蜍，用小指和无名指夹住蟾蜍两后腿，中指自然搭在蟾蜍腹部，食指和拇指可自由活动。

处死时，一般用拇指按住蟾蜍背部，食指将蟾蜍头鼻下压，以便使下针处清晰易找。

b.处死：按上述方法持拿，用毁髓针沿头部中线从鼻尖轻轻向后滑过，约在双眼连线中点后方某点，可感到有一下陷小窝，用针轻按，蟾蜍一般会有明显反应。

在此处下针。

将毁髓针垂直插入，会感觉到颅骨破碎的声音，立即将毁髓针向后放倒，将针尖从破碎处，并旋转捣毁脑部；然后将毁髓针拔出少许，向前放倒，向后插入同样旋转捣毁脊髓。

蟾蜍即被处死。

2、去除躯干上部及内脏：将蟾蜍腹部朝上放在蛙板上，将四肢用固定针固定。