蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备

蟾蜍的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验报告实验名称蛙的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验目的要求学习并掌握坐骨神经—腓肠肌标本以及腓肠肌标本制备的方法；学习生理学实验基本的组织分离技术；观察刺激强度，刺激频率与肌肉收缩反应的关系；掌握引导神经干复合动作电位和测定其传导速度的基本原理和方法。

实验材料，仪器，试剂蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、玻璃分针等）、烧杯、培养皿、纱布、棉线、粗剪刀、蛙板、污物缸、滴管、生理信号采集系统、张力传感器、铁架台、计算机、任氏液等。

实验原理两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。

因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。

任氏液是—种比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长青蛙心脏在体外跳动时间、保持两栖类其他离体组织器官生理活性等。

腓肠肌由许多的纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。

当刺激强度过小时，不应期肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。

而能引起肌肉发生收缩的最小刺激强度，为阈刺激，但全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。

这时，即使再加大刺激强度，肌肉的收缩强度也不会随之而增大。

可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激。

肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速地收缩反应，即单收缩。

单收缩的过程分为三个时期，潜伏期、收缩期、舒张期。

刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。

在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。

若刺激频率较小，两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩和舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。

实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备一、实验目的1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别）2、离体标本实验（与在体标本实验的区别）3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理4、掌握离体标本的制备及手术训练5、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义二、实验原理1、急性动物实验与慢性动物实验，在体实验与离体实验急性动物实验可分为离体和在体实验两种方法。

离体实验：是从活着的或刚处死的动物身上取出所需要的器官、组织、细胞或细胞中的某些成分。

置于一个能保持其正常功能活动的人工环境中，观察某些人为的干预因素对其功能活动的影响。

例如，对离体蛙心或动物血管条进行灌流，可用于研究某些生物活性物质或药物对心肌或血管平滑肌收缩力的影响；应用膜片钳技术可研究细胞小片膜上单个离子通道的电流特性。

在体实验：是在动物麻醉条件下，手术暴露某些所需研究的部位，观察和记录某些生理功能在人为干预条件下的变化。

例如，以动脉插管记录动物血压，可用于观察某些神经或体液因素对血压的影响；将玻璃微电极插入脑内某些部位进行细胞外或细胞内记录，观察神经元在接受某些刺激时放电活动的变化，以了解这些神经元的生理功能。

急性动物实验的优点是实验条件比较简单，条件较易控制，便于进行直接的观察和细致的分析；离体实验则更能深入到细胞和分子水平，有助于揭示生命现象中最为本质的基本规律。

但急性动物实验的结果可能与生理条件下完整机体的功能活动有所不同，尤其是离体实验的结果，此时被研究的对象，如器官、组织、细胞或细胞中的某些成分已经脱离整体，它们所处的环境已发生很大的改变，实验结果与在整体中的真实情况相比，可能会有很大的差异。

慢性动物实验：慢性动物实验以完整、清醒的动物为研究对象，且尽可能保持外界环境接近于自然，以便能在较长时间内观察和记录某些生理功能的改变。

实验前一般需对动物作某些预处理，待动物康复后再进行观察。

例如，研究唾液的分泌调节时，可预先将唾液腺导管开口移至颊部体表，观察时就能方便地从体表收集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。

实验一 坐骨神经腓肠肌标本制备【实验目的】掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备技术，为以后有关实验打下基础。

【实验原理】两栖类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似， 而其离体组织所需的生活条件 比较简单，易于建立、控制和掌握。

因此在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观 察兴奋与兴奋性的一些规律以及骨骼肌的收缩特点等。

所以坐骨神经腓肠肌标本的制备是生 理实验的一项基本操作技术。

【实验对象】蟾蜍或蛙。

【实验材料】两栖类手术器械 1套(粗剪刀、组织剪、眼科剪、组织镊、眼科镊、金属探针、玻璃 分针、蛙板)、手术线、蛙尸缸、滴管、平皿、锌铜弓、任氏液。

【实验步骤】1． 破坏脑和脊髓取蟾蜍 1 只，用自来水冲洗干净。

左手握住蟾蜍，用拇指按压背部，食指按压头部 前端使其头部前俯，右手持金属探针在头前缘沿正中线向尾端触划，所触划到的头部后 端的凹陷处，即为枕骨大孔所在部位。

在此处将金属探针垂直刺入皮肤，有突破感后再 将金属探针折向前经枕骨大孔刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织；然后将金属探针回抽至 枕骨大孔处，转向后刺入脊椎管，反复提插捣毁脊髓。

此时如蟾蜍的四肢松软，呼吸运 动消失，表示脑和脊髓已完全破坏，否则应按上法再行捣毁。

2． 剪除躯干上部及内脏如图 1－1 所示，在骶髂关节位置用左手将蟾蜍提起，在骶髂关节水平以上 0.5～l 厘米处用粗剪刀剪断脊柱，然后将粗剪刀尖向下深入体腔沿躯干两侧剪开皮肤，使蟾蜍 头、上肢与内脏自然下垂，将其一并剪除弃去，仅留后肢、骶骨、脊柱及紧贴于脊柱两 侧的坐骨神经。

在整个剪除过程中注意勿损伤神经。

3． 剥皮左手用组织镊夹紧或用手直接捏住脊柱断端(注意：不要夹住或接触神经)，右手捏，将标本放在盛有任氏液 住其上的皮肤边缘，用力向下剥掉全部后肢皮肤（见图 1－2）的平皿中。

将手及用过的粗剪刀、组织镊等全部手术器械洗净，再进行下述步骤。

4． 分离两腿用镊子从背位夹住脊柱将标本提起，剪去向上突出的骶骨(注意勿损伤坐骨神经)，然后沿正中线用粗剪刀将脊柱分为两半，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，然后将分离的两条腿浸于盛有任氏液的平皿中备用。

生物实验报告姓名：班级：日期：同组者：实验序号：实验题目：坐骨神经-腓肠肌标本的制备实验目的：1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。

2．学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

实验原理：两栖类动物的离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。

因此在生理实验中常用蟾蜍的坐骨神经——腓肠肌标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激强度、刺激频率与肌肉收缩反应的一些规律以及骨骼肌的收缩特性等。

实验对象：蟾蜍实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线等。

实验方法及步骤：1、破坏脑脊髓部位枕骨大孔。

如果蟾蜍四肢松软，呼吸消失，表示脑脊髓已完全破坏，否则按上述方法再进行捣毁。

2、剪去躯干上部及内脏在骶髂关节前1 cm处用金冠剪（粗剪）剪断脊柱（可在下肢前端）。

沿脊柱切口向下剪开两侧腹部皮肤至耻骨处，将头、前肢、内脏及腹部软组织全部剪掉，放于污物盘，只保留下端脊柱和下肢。

在腹侧脊柱两旁可看到腰骶神经丛。

注意切勿触及或损伤坐骨神经。

3、剥后肢皮肤左手持镊子夹住脊髓断端，右手捏住断端边缘，剥掉全部后肢皮肤。

将标本放于盛有任氏液的培养皿内，将手和手术器械洗净。

4、分离两腿用金冠剪剪去尾骨杆（骶骨），沿脊椎中线将脊柱剪开，再沿耻骨联合正中央剪开两侧大腿，使两腿完全分离（切勿伤及神经），将两腿浸于任氏液中。

5、游离坐骨神经取一后肢，腹面向上（背位），固定于蛙板上，沿脊柱侧用玻璃分针轻轻勾起坐骨神经，逐一剪去神经分支至股端。

用金冠剪剪断脊柱，只保留一小段椎骨片与坐骨神经相连。

将标本改为背面向上（腹位）固定，用镊子提起梨状肌，剪断，用玻璃分针将坐骨神经小心勾至背部。

再沿坐骨神经沟（半膜肌和股二头肌的肌间缝）分离坐骨神经。

用镊子夹住与神经相连的脊椎骨，提起神经，用眼科剪将神经分支及结缔组织膜顺序剪断，将神经一直游离到腘窝处。

6、游离腓肠肌用镊子夹住脊椎骨，将神经搭在腓肠肌上，用剪刀将膝关节周围的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪将膝关节上方的股骨刮干净，暴露骨股并在距膝关节上1 cm处剪断，分离腓肠肌的跟腱，用线结扎，然后自跟腱的附着点剪断，提起跟腱，将腓肠肌分离至膝关节处，将小腿其余部分剪掉。

坐骨神经-腓肠肌标本的制备【实验目的】：掌握蛙类的捉拿和破坏脑脊髓的方法，掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备技术，了解神经-肌肉标本在实验中的应用。

【实验原理】：蛙或蟾蜍的一些基本生命活动与哺乳动物相似，其离体的神经-肌肉标本在一定时间内能保持其功能，体现活组织的某些共同的生理特性。

因此在生理学实验中常用坐骨神经-腓肠肌标本来观察兴奋性、刺激与反应的关系、骨骼肌的收缩形式等。

【实验对象】：蛙或蟾蜍【实验器材与药品】蛙类手术器械一套（粗剪刀、手术剪、眼科剪、镊子、金属探针、玻璃分针、蛙板与玻璃板、蛙钉、锌铜弓）、烧杯、培养皿、手术线、滴管、任氏液等。

【实验步骤与观察】1. 破坏脑和脊髓第一种破坏脑的方法：取蛙一只，用纱布包住蛙身，左手握蛙，右手持粗剪刀从口裂插入，沿两眼后缘剪去蛙头。

此法操作简单，但应注意止血。

第二种破坏脑的方法：左手握蛙，并用食指压其头部前端，使头前俯；然后右手持金属探针沿蛙头部的正中线下划，可触及一凹陷处即为枕骨大孔。

将探针从枕骨大孔垂直刺入1～2mm，再向前刺入颅腔，左右搅动破坏脑组织。

将探针刺入椎管，破坏脊髓。

此时蛙四肢松软，表示脑、脊髓已完全破坏（图2-1）。

图2-1 用探针损毁蟾蜍脑和脊髓图2-2 剪断脊柱2. 剪去躯干上部及内脏在蛙两腋稍下方的背部，用粗剪刀剪断脊柱（图2-2）。

左手握住蛙后肢，用拇指按压其骶骨，使蛙头和内脏自然下垂，沿背部两侧剪去其一切内脏和头胸部，仅保留一段脊柱及其两侧的坐骨神经和后肢（图2-3）。

剪除过程中注意勿损伤坐骨神经。

图2-3 剪除躯干上部和内脏3. 去皮左手用镊子夹住脊柱断端，右手握住断端边缘皮肤，向下剥去全部皮肤。

将标本放在盛有任氏液的培养皿中。

将手和用过的器材洗净。

4.分离两腿用镊子夹住脊柱标本背面，用粗剪刀沿脊柱正中至耻骨联合中央剪开分成两半（注意不要伤及坐骨神经），将一条腿浸入盛有任氏液的培养皿中。

5. 游离坐骨神经取一蛙腿放在玻璃板上，用蛙钉将标本的脊柱固定在蛙板上，趾蹼朝上拉直下肢后再用蛙钉固定在蛙板上。

实验1 坐骨神经-腓肠肌标本的制备一、实验目的1. 学习蛙类动物双毁髓的实验方法2. 学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法3. 通过本实验熟悉刺激、兴奋、兴奋性和可兴奋组织的概念。

二、实验原理蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。

因此，常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。

三、实验器材蟾蜍或蛙、常用手术器械（手术剪、手术镊、用术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针），蛙板，蛙钉，锌铜弓，培养皿，滴管，纱布，线，任氏液四、实验步骤1. 制备双毁髓蟾蜍（毁脑和脊髓）取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。

左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓。

彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉，此时的动物为双毁髓动物。

如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。

2. 剥制后肢标本剪除上肢和内脏在骶髂关节上0.5-1.0cm处用粗剪刀剪断脊柱。

用镊子夹住后端脊柱，以剪刀沿脊柱两侧剪除所有内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经。

剥皮左手用镊子或直接用手捏住脊柱断端（注意不要压迫神经），右手捏住断端边缘皮肤，向下剥去全部后肢皮肤，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。

将手和用过的器械洗净后再进行以下步骤。

3. 分离两后肢将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左侧，左手固定标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀，于耻骨联合处向下按压刀刃，切开耻骨联合。

然后用手托起标本，用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉组织，并纵向剪开脊柱(尾杆骨留在一侧)，使两后肢完全分离。

将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。