蟾蜍坐骨神经干标本的制备

注意事项
1.破坏脑脊髓要彻底，防止蟾酥射入操作者眼 中或污染实验标本。 2.操作时避免压挤、损伤和用力牵拉标本，不 可用金属器械触碰神经干。 3.操作过程中，应给神经和肌肉滴加任氏液， 防止表面干燥，以免影响标本的兴奋性。 4.标本制成后须放在任氏液中浸泡数分钟,使 标本兴奋性稳定,再开始实验效果会较好。
实验原理（三） 神经动作电位传导速度的测定
动作电位在神经干上传导具有一定的 速度蟾蜍的坐骨神经是混合神经，由许多 粗细不等的有髓和无髓神经纤维构成，其 中以Aɑ类纤维为主，传导速度约为35— 40m/s。
神经冲动的传导速度 （v）是指动作 电位在单位时间（t）内传导的距离（s）
仪器与器械（一）
（1）引导双相神经动作电位
点击“神经干 动作电位的引 导”，引导出 一个双相动作 电位。
（2）观察和测定双相动作电位
① 自动调节刺激强度，观
察动作电位波形的变化。读 出波宽为某一数值时的阈刺 激和最大刺激。
②仔细观察双相动作电位的
波形。读出最大刺激时双相 动作电位上下相的振幅和整 个动作电位持续时间数值。
注意事项
1.制备标本时，神经干应尽可能分离长一些，上自 脊柱附近的主干，下至踝关节附近。分离过程中 勿损伤神经组织，以免影响其兴奋性。
2.将神经干搭在引导电极上时，神经干不能与标本 盒壁相接触，尽量将其拉成水平线，不要下垂或 斜向放置。
3.刺激强度在开始时不要过强，先由弱强度开始， 逐步加大强度，以免剌激伤害神经标本。
4.经常滴加任氏液，保持神经标本湿润。 5.实验完毕神经糟应仔细清洗，擦干，以免残留的
盐液. 神经干动作电位与刺激强度有何关系？ 神经干动作电位符合“全或无”定律吗 ？ 为什么?
感谢聆

一、实验目的1. 观察蟾蜍神经系统的基本结构和功能。

2. 掌握蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

3. 学习神经兴奋传导和反射弧的实验技术。

4. 了解神经肌肉接头兴奋传递的机制。

二、实验原理蟾蜍作为两栖类动物，其神经系统结构与哺乳动物有相似之处，且其离体组织生活条件简单，易于控制和掌握。

本实验通过制备蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本，观察神经兴奋传导和反射弧的实验技术，了解神经肌肉接头兴奋传递的机制。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：蟾蜍、任氏液、生理盐水、剪刀、镊子、大头针、蛙板、玻璃分针、锌铜弓等。

2. 实验仪器：显微镜、刺激器、张力换能器、示波器、记录仪等。

四、实验方法1. 制备蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本- 用剪刀剪去蟾蜍的躯干和上肢，暴露腰骶丛神经。

- 游离大腿肌肉之间的坐骨神经及小腿的腓肠肌。

- 注意不要将胫神经与腓神经分离，神经端结扎后，剪去无关分支。

- 肌肉端结扎在肌腱上，将腓神经也一起结扎，结扎线留长。

- 保留膝关节，剪去腿骨，将标本离体。

- 将标本放入任氏液中，保持湿润。

2. 连接实验装置- 用大头针将标本的膝关节固定于标本盒R2和R3两记录电极之间的石蜡凹槽内。

- 神经中枢端接触刺激电极S1和S2，肌肉接触记录电极R3和R4，之间接触接地电极。

- 肌肉的结扎线从标本盒中穿出，连接张力换能器。

3. 观察神经兴奋传导- 用刺激器对坐骨神经进行电刺激，观察腓肠肌的收缩反应。

- 改变刺激强度和频率，观察腓肠肌收缩的变化。

4. 观察反射弧- 制备脊蛙，观察反射弧的结构和功能。

- 分别刺激感受器、传入神经、反射中枢、传出神经和效应器，观察反射活动的变化。

5. 观察神经肌肉接头兴奋传递- 在神经肌肉接头处滴加药物，观察肌肉收缩的变化。

五、实验结果与分析1. 观察到蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本在电刺激下产生收缩反应。

2. 随着刺激强度的增加，腓肠肌收缩力量逐渐增大。

3. 随着刺激频率的增加，腓肠肌收缩频率逐渐增大。

实验一蟾蜍坐骨神经--腓肠肌标本的制备〔目的要求〕1、学习蛙类动物双毁髓的实验方法。

2、学习并掌握坐骨神经--腓肠肌标本的制备。

〔动物与器材〕蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃解剖针、咬骨钳）、蜡盘、蛙板、玻璃板、蛙钉、铜锌弓、培养皿、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。

〔方法与步骤〕1、双毁髓方法：左手握蟾蜍，让蟾蜍趴在左手掌内，用食指按压其头部前端，拇指压住躯干背部，使头前俯；右手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后划触及两耳后腺间的凹陷处即枕骨大孔的位置。

将毁髓针垂直刺入，即进入枕骨大孔。

然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，捣毁脑组织。

此时的动物为单毁髓动物。

再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，捣毁脊髓。

此时动物四肢瘫软，为双毁髓动物。

如动物仍表现为四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新捣毁。

2、剥制后肢标本：将双毁髓的蟾蜍背面向上放入蜡盘内。

左手捏住背部的脊柱，右手持手术剪横向剪断脊柱。

左手持手术镊提起断开的脊柱后端，右手用手术剪沿脊柱两侧剪开体壁，再剪断下腹壁肌肉，自基部剪断内脏。

然后用蘸有任氏液的左手捏住断开的脊柱后端，右手向后方撕剥皮肤。

将剥干净的后肢放入盛有任氏液的培养皿中。

清洗手术器械。

3、分离两后肢：将去皮的后肢腹面向上放于玻璃板上，左手固定，右手持手术剪剪开耻骨联合。

将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。

4、分离坐骨神经：将一侧后肢标本的腹面向上，趾端向外侧反转，使足底向上，用固定针将标本固定在玻璃板下面的蛙板上。

用玻璃解剖针沿脊神经向后分离坐骨神经。

股部在股二头肌和半膜肌之间的裂缝找出坐骨神经。

坐骨神经基部有梨状肌盖住，用玻璃解剖针轻轻挑起此肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。

剪断梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连的脊神经。

用玻璃解剖针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的分支，将坐骨神经分离至腘窝处。

用剪刀剪去脊柱骨及肌肉，只保留坐骨神经发出部位的一小块脊柱骨。

1、破坏蟾蜍的脑和脊髓
从箱子里取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。

左手握蟾蜍，用食指按压其头部使其尽量前俯，右手用大头针自枕骨大穴垂直插入，向前刺入颅腔，左右搅动，毁坏其脑组织；将探针回撤向后刺入脊椎管，反复提插毁其脊髓。

如果蟾蜍四肢酸软，呼吸消失，说明其脑和脊髓被破坏的差不多，否则继续上述方法进行。

2、剪除蟾蜍的躯干上部和其内脏
沿着蟾蜍的上肢处将蟾蜍的头部剪去，继而沿脊柱两侧剪开腹壁，这时的内脏全部下垂，减除内脏。

此时，你可以在脊柱的两旁看见坐骨神经，注意剪除的过程中不要损伤坐骨神经！
3、剥皮
用镊子夹紧脊柱的断端，右手捏住蟾蜍的皮肤边缘，逐步向下剥离皮肤，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。

4、制备坐骨神经的小腿标本
用粗剪刀沿中线将脊柱剪成左右两半，从耻骨联合处剪开两侧的大腿，在这期间，注意不要损伤了坐骨神经。

将分离的标本放到盛有任氏液的培养皿中。

取一侧的下肢用大头针固定在蛙板上，用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经，于近脊柱侧结扎。

再循着坐股神经沟分离暴露出坐骨神经的大腿部分，直至胫腓神经分叉处。

自上向下剪断所有坐骨神经的分支，游离出坐骨神经。

将游离的坐骨神经搭于腓肠肌上，自膝关节周围向上剪除所有的大腿肌肉，在股骨的中部剪去上段股骨，保留部分即为坐骨神经小腿标本。

5、完成坐骨神经-腓肠肌标本
将上面所做的标本在跟腱处结扎后剪断，并逐步游离腓肠肌至膝关节处，将小腿的其余部分全部剪掉，这样就制成了坐骨神经-腓肠肌标本。

蟾蜍坐骨神经干标本的制备121140066 许克波 B3一、实验目的1、离体标本实验（与在体标本实验的区别）2、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理3、掌握离体标本的制备及手术训练4、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义二、实验原理1、锌铜弓的作用及原理锌铜弓：在生理学实验中，锌铜弓是检验标本机能活性最常用而简易的刺激器。

由铜片和锌片两种金属制成。

锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。

通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。

而在Zn的里面则形成负离子。

Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差——电极电位。

如果将Zn和Cu一端接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。

当锌铜弓接触组织时（注意：表面必须湿润），电流便沿Zn→可兴奋组织→Cu方向流动，而产生流动作用。

这样，锌铜弓好像一个电池，Zn如同其阳极，Cu好像阴极而发挥作用。

神经或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活性。

2、蟾蜍的毁髓及单毁髓和双毁髓及双毁髓的意义蟾蜍破坏脑脊髓：取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。

右手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，中指、无名指捏住两前腿，无名指以及小指捏住两后腿，左手持针，当触及到两耳中间的凹陷处时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。

左手持针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。

若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。

单毁髓：如毁髓针确在颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨。

双毁髓：再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。

彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉。

双毁髓的意义：这个实验主要是探讨神经纤维冲动产生、兴奋传递和肌肉收缩之间的关系，与神经中枢无关。

雄蟾
实验材料
1、实验动物（laboratory animal) • 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad）
2、药品(drug) • 任氏液
• 任氏液由无机盐和蒸馏水配置而成，每 升溶液含NaCl 6.5g、KCl 0.14g、CaCl2 0.12g,、NaHCO3 0.20g、NaH2PO4 0.01g。 任氏液的理化特性与蛙的组织液近似。 可用于蛙的组织、器官润湿和营养。
动作电位以局部电流的形式传导
实验原理
-动作电位传导速度的测定
刺激器
输入通道
+－
R1- Rr1+ R2- R2+
S
Δt
传导速度测定 υ= SAC
Δt
实验步骤
1、制备坐骨神经干
1
• 蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去
尾椎；
• 标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱
两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，
剪断神经；
• 将神经干从腹面移向背面。标本背面
刺激神经使神经细胞产生兴奋兴奋延神经纤维传到通过神经肌接头的化学传递使肌肉终板膜上产生终板电位终板电位可引起肌肉产生兴奋即动作电位传遍整个肌纤维再通过兴奋收缩偶联使肌纤维中粗细肌丝产生相对滑动宏观上表现为肌肉收缩
实验三 蟾蜍坐骨神经-腓 肠肌标本制备及骨骼肌收
缩性质观察
实验目的
• 掌握制备具有正常收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠 肌标本的基本操作技术。掌握蛙类手术器械的使 用方法，制备完好的坐骨神经-腓肠肌标本。
向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神 经。坐骨神经标本置任氏液中备用。
2
3
实验步骤
2、仪器连接和参数
• 神经干标本盒两对引导电极分别接微机生物信号处理系统1、 2通道。 开机，选择实验-肌肉神经-神经干兴奋传导速度测 定。仪器参数：1、2通道时间常数0.02s、滤波频率3KHz、 灵敏度5mV，采样频率：100KHz，扫描速度：0.2ms/div。 单刺激激方式，刺激幅度1.0V，刺激波宽0.1ms，延迟1ms， 同步触发。

实验5 坐骨神经腓肠肌标本的制备
实验目的：
掌握坐骨神经干标本的制备方法
实验原理：
选用蛙类作为实验对象其离体组织生存条件易于控制，因此常用于生理实验。肌肉是由神经支配的，向神经施加适当刺激，其支配的肌肉会收缩。
实验对象：蟾蜍或蛙
实验器材和药品：蛙手术器械 任氏液 电刺激器 示波器 标本盒
图l一1破坏蟾蜍脑脊髓的方法 图1—2剪除躯干上部及内脏
2.剪除躯干上部及内脏 在骶髂关节水平以上O.5—1.Ocm处横断脊柱，然后左手握蛙后肢，用拇指压住骶骨．使其头与前肢自然下垂，右手持粗剪刀，沿脊柱两侧剪除蛙的一切内脏及头胸部，注意不要伤及坐骨神经干。(图1—2)。
6.游离坐骨神经 用玻璃勾沿神经走行，经犁状肌及其附近的结缔组织、坐骨神经沟，游离神经至掴窝，用支持线轻轻提起神经，顺其走行方向剪去分支。
7.游离胫、腓神经 剪开掴窝处深筋膜，再游离神经直到足部。
8.清理标本 将标本置于大腿肌肉上，用棉花沾任氏液，轻轻擦去神经干上的残余组织。然后将制备好的标本浸入任氏液中数分钟，使其兴奋性稳定后开始实验。
实验对象：蛙
实验方法：
1.制备脊蛙
2.将脊蛙悬吊在万能支架上等待其稳定后完成下列项目。
（1）用1%盐酸刺激一侧足趾皮肤观察蛙的反应。
（2）用1%盐酸刺激另一侧足趾皮肤观察蛙的反应。
（3）剥去一侧足趾皮肤，重复（1）(2)观察蛙的反应。
（4）用1%的盐酸滤纸片放置于蛙的腹壁皮肤上观察蛙的反应。
实验方法与步骤
1.破坏脑脊髓 取蛙一只，用自来水冲洗干净。左手握住蛙，用食指压住其头部前端使头前俯(图1-1)，右手持探针从相当于枕骨大孔处垂直刺入，将探针向前刺入颅腔。左右搅动捣毁脑组织，然后将探针抽回原处，再向后刺入脊椎管捣毁脊髓。脑脊髓完全破坏的标志是蛙的四肢松软，呼吸消失，否则要依上法再行捣毁．

一、实验目的1. 了解神经干动作电位的基本原理和传导过程；2. 掌握神经干动作电位传导速度和不应期的测定方法；3. 分析神经干动作电位在不同条件下的变化规律。

二、实验原理神经干动作电位是指神经纤维在受到刺激时，产生的一系列电生理现象。

当神经纤维膜电位达到一定阈值时，钠离子内流，产生动作电位，进而引起邻近神经纤维的兴奋和传导。

本实验通过观察和测量神经干动作电位，了解其传导速度和不应期等参数。

三、实验材料1. 实验动物：蟾蜍；2. 实验器材：坐骨神经干标本、任氏液、刺激器、示波器、记录仪、玻璃分针、粗剪刀、眼科剪、眼科镊、培养皿、烧杯、滴管、蛙毁髓探针、BL-420N系统；3. 实验药品：2%普鲁卡因。

四、实验方法1. 制备坐骨神经干标本：将蟾蜍麻醉后，解剖出坐骨神经干，置于任氏液中，用玻璃分针轻轻挑起，去除周围组织；2. 安装电极：将刺激电极和记录电极分别固定在坐骨神经干的两端，连接BL-420N系统；3. 刺激和记录：启动刺激器，给予坐骨神经干一定强度的刺激，观察示波器上的波形，记录动作电位传导速度和不应期；4. 重复实验：改变刺激强度，重复实验，观察动作电位传导速度和不应期的变化规律。

五、实验结果1. 动作电位传导速度：在实验条件下，坐骨神经干动作电位传导速度约为15.2 m/s；2. 不应期：在实验条件下，坐骨神经干动作电位不应期约为0.5 ms；3. 刺激强度与传导速度的关系：随着刺激强度的增加，动作电位传导速度逐渐增加，但增加幅度逐渐减小；4. 刺激强度与不应期的关系：随着刺激强度的增加，动作电位不应期逐渐延长。

六、实验讨论1. 神经干动作电位传导速度的测定原理：神经干动作电位传导速度的测定原理是，通过测量动作电位在神经干上的传播距离和时间，计算出传导速度；2. 不应期的产生原因：神经干动作电位不应期的产生原因是，神经纤维在兴奋时，膜电位处于超极化状态，此时钠离子内流受到抑制，导致动作电位不能立即产生；3. 刺激强度与传导速度、不应期的关系：刺激强度与传导速度呈正相关，但并非线性关系；刺激强度与不应期呈正相关。

【实验方法和步骤】
1. 破坏脑脊髓 取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使 头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔（图 1-1），左右搅动捣毁脑组织，然 后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管 时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四 肢松软，呼吸消失。
5. 游离坐骨神经和剪断股骨 认清坐骨神经沟和腓肠肌的部位（图），用剪刀剪断梨状肌 及其周围的结缔组织，左手提着神经上的细线，右手持剪刀或玻璃分针沿坐骨神经沟细 心剥离，直至将坐骨神经剥离到腘窝。将游离干净的坐骨神经放在下腿上，沿膝关节的 周围将大腿的所有肌腱剪断，并用剪刀刮净股骨下段附着的肌肉，在股骨上三分之一处 剪去上段股骨及所附的肌肉，这样制成的称为坐骨神经下腿标本（图 1-4）。
图 1-1 破坏蟾蜍脑脊髓
图 1-2 剪除躯干和内脏
图 1-3 剥除后肢皮肤
4. 分离两腿 用玻璃分针沿脊柱两侧游离出两条坐骨神经，并于近脊柱处各扎一细线，然 后在扎线与脊柱之间剪断神经。提着神经上的细线，将两条坐骨神经分别置于两条大腿 上，左手持脊柱，将骶骨翘起，将下位脊柱全部剪除。捏着两侧骼骨向反方向分离，使 耻骨联合脱臼后，沿耻骨联合正中将两下肢剪开，将一条腿浸于任氏液中备用，另一条 置于浸有任氏液的玻璃板上。
6. 游离腓肠肌 在坐骨神经下腿标本的基础上，用剪刀将跟腱的下端剪断，在跟腱与肌肉 交界处扎一条细线，左手提线，右手用剪刀游离腓肠肌，直到膝关节。最后用粗剪刀在 膝关节下将小腿剪去，留下的即为坐骨神经腓肠肌标本（图 1-5）。做好的标肌立即收缩，表示标本的兴奋性良好，然后将标本 放入任氏液中，待其兴奋性稳定后再进行实验。
实验 1 蛙或蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备

山东大学人体机能学实验报告【实验名称】蟾蜍坐骨神经干动作电位传导速度和兴奋性不应期的测定【实验目的】加深理解兴奋传导的概念，掌握测定神经干动作电位传导速度的方法。

熟悉仪器设备的操作。

【实验对象】蟾蜍【实验药品和器材】蛙类手术器械，BL-410生物信号记录分析系统，神经屏蔽盒，任氏液等。

【实验步骤及方法】（详见书P57.P58）1.坐骨神经—腓神经标本的制备。

2.将标本放入神经屏蔽盒，（注意刺激电极端为神经干的中枢端）。

3.仪器连接。

4.BL-410的操作。

【实验结果】1.神经干动作电位的引导2.坐骨神经干动作电位传导速度V=(S2-S1)/(t2-t1)实验测得两对引导电极之间的距离为1.6cm，两个通道的动作电位波峰间的时间差为0.60ms。

计算得到传导速度V=26.7m/s3.二次刺激在兴奋周期之后相对不应期受到二次刺激绝对不应期受到二次刺激二次刺激没有出现相应的动作电位。

【实验结论】实验测得两对引导电极之间的距离为1.6cm，两个通道的动作电位波峰间的时间差为0.60ms。

计算得到传导速度V=26.7m/s【讨论与分析】1.神经干不能太干也不能太湿，剥离完整后在任氏液体中稳定15分钟左右，取出用滤纸吸干周围的任氏液。

2.神经干放置在引导电极上时，尽量拉直，不能使它下垂或斜向放置，以免影响神经干长度测量准确性。

3.神经干要尽可能长，两个引导电极之间的距离越远，测量的传导速度就越准确。

一、实验目的要求1．学习蟾蜍坐骨神经干标本的制备方法。

2．观察蛙坐骨神经干复合动作电位的波形，并了解其产生的基本原理。

二、实验原理1、神经干受到有效刺激后，可以产生动作电位，在另一端可以引导出双相的动作电位，如果在两个引导电极之间将神经麻醉或损坏，则引导出的动作电位即为单相动作电位。

2、坐骨神经干是以由很多不同类型的神经纤维组成的，所以，神经干的动作电位是复合动作电位。

复合动作电位的幅值在一定刺激强度下是随刺激强度的变化而变化的。

2、剪除躯干上部及内脏：在腋部用铁剪刀剪断脊柱， 将头、前肢和内脏一并弃去，仅保存一段脊柱和后肢。脊 柱的两旁可见坐骨神经丛。
用蛙针由凹陷处垂直刺入枕骨大孔，再向前伸入颅腔，捣毁脑；
向44、、后有 有插时时入标标椎住本本管兴兴，断奋奋3捣性性、端毁过过脊去边高高髓，，皮。缘可可放放：皮置置先２２肤００剪，mmiinn去向待待其其肛下稳 稳门定定剥后后周掉再再 围全皮部肤后，肢然皮后肤用。左标手本捏放住入脊盛柱有断林端格，液右的手小捏烧 两2、栖剪类除手躯术杯干器上械中部，及，培内养将脏皿：，手在任腋及氏部液用用，铁棉过剪刀的剪断器脊械柱，、将头蛙、板前肢洗和内净脏，一并以弃去免，皮仅保肤存一分段泌脊柱物和后污肢染。 神经-肌肉 标本。 5、游离坐骨神经：用玻璃分针在半膜肌和股二头肌之间分离出坐骨神经。 熟神悉经并 干掌，握又蟾要蜍避4坐免、骨金神属分经器离－械腓对标肠神肌经本标的为本不的必两制要备触部碰分。 ：沿脊柱正中线将标本均匀地分成左右两半， 神肉经，干 防，止又干分要燥避。别免作金属进器械一对步神经剥的不制必。要触碰。 322、、、避 游 游免离离蟾神神神蜍经经皮时时经肤，，5分切切、。泌勿勿游注物用用和玻玻离意血璃璃液分分坐分等针针骨污逆逆离染向向神时标剥剥本离离经要，，，：也以以仔不防防用细能损损用伤伤玻用璃剪分刀针剪在断半坐膜骨肌神和经股的二分头支肌，之勿间伤分神离经出干坐，骨前 4蛙、类有一时些标基面本本兴生分奋命性离活过动至高和，生脊可理放柱功置能２坐与０恒骨m温in神动待物其经相稳似定丛，后基其再离部体组，织向器官下所需分的离生活至条件膝比关较简节单，。并保且易留于控与制坐和掌骨握，神因经此在相生理试
线，玻璃分针，解剖盘，剪刀
2或、把剪铁除剪躯刀干插上入部6口及、裂内，分脏沿：离两在眼腋腓后部缘肠用剪铁肌去剪头刀：，剪再在断以脊跟蛙柱针，腱捣将毁上头脊、扎髓前。肢牢和一内脏线一并，弃提去，起仅保结存线一段，脊柱剪和断后肢结。 扎线外的跟 1、破坏脑腱脊髓，：左游手离持蛙腓，用肠食指肌下至压吻膝端，关拇节指按处压背，部将，使膝蛙头关前节俯；以下小腿其余部分全部剪去。至 此，标本制成。 3、去皮：先剪去肛门周围皮肤，然后用左手捏住脊柱断端，右手捏住断端边缘皮肤，向下剥掉全部后肢皮肤。

一、实验目的1. 观察蟾蜍肌肉神经的兴奋性及其收缩特性。

2. 掌握蟾蜍肌肉神经标本的制作方法。

3. 分析不同刺激强度、频率对肌肉收缩的影响。

二、实验原理蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本常用于观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩特点。

肌肉组织的兴奋主要表现为收缩活动，刺激强度、时间、强度时间变化三要素影响着肌肉的兴奋和收缩。

本实验通过观察蟾蜍肌肉神经的兴奋性及其收缩特性，分析不同刺激强度、频率对肌肉收缩的影响。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：蟾蜍、蛙板、剪刀、镊子、生理盐水、换能器、刺激电极、记录电极、多道生理信号采集处理系统、电子天平。

2. 实验仪器：立体显微镜、刺激器、张力换能器、信号采集处理系统。

四、实验方法1. 制备蟾蜍肌肉神经标本：取蟾蜍，用剪刀剪去头部和尾部，剥去皮肤，暴露腰骶丛神经，游离大腿肌肉之间的坐骨神经及小腿的腓肠肌。

将神经端结扎后，剪去无关分支，游离至膝关节处；肌肉端结扎在肌腱上，将腓神经也一起结扎，结扎线留长。

保留膝关节，剪去腿骨，将标本离体。

注意保持神经肌肉湿润。

2. 连接标本与仪器：将标本的膝关节固定于标本盒R2和R3两记录电极之间的石蜡凹槽内，保证神经、肌肉与电极充分接触。

神经中枢端接触刺激电极S1和S2，肌肉接触记录电极R3和R4，之间接触接地电极。

肌肉的结扎线从标本盒中穿出，连接张力换能器。

3. 实验操作：a. 调整刺激器参数，进行不同刺激强度、频率的实验，观察肌肉收缩情况。

b. 记录不同刺激强度、频率下肌肉收缩的潜伏期、缩短期、舒张期。

c. 分析不同刺激强度、频率对肌肉收缩的影响。

五、实验结果与分析1. 观察到蟾蜍肌肉神经标本在低刺激强度下，肌肉表现为单收缩；随着刺激强度增加，肌肉收缩幅度增大；当刺激强度达到一定程度时，肌肉收缩呈现强直收缩现象。

2. 观察到随着刺激频率的增加，肌肉收缩的潜伏期逐渐缩短，缩短期逐渐延长，舒张期逐渐缩短。

3. 分析结果表明，刺激强度和频率对蟾蜍肌肉神经的兴奋性和收缩特性有显著影响。

蟾蜍的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及刺激强度，刺激频率与肌肉收缩反应实验报告实验名称蛙的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验目的要求学习并掌握坐骨神经—腓肠肌标本以及腓肠肌标本制备的方法；在刺激时间、强度变化率恒定的条件下，不同强度和频率的电刺激对肌肉收缩的影响。

学习微机生物信号采集处理系统和换能器的使用。

实验材料，仪器，试剂蟾蜍:锌铜弓:探针;剪刀，镊子:玻璃分针:蛙板，蛙钉;结扎线;任氏液:培养皿:微调固定器，张力换能器，微机生物信号采集处理系统实验方法1.破坏脑和脊髓左手持蟾蜍，用食指压其头部前端，使头前俯。

右手持探针由头端沿正中线向后划，触到凹陷即为枕骨大孔，将探针由此垂直刺入。

再将探针折向前方，插入颅腔内并左右搅动捣毁脑组织。

再将探针退回至进针处，针尖转向后方，刺入椎管捣毁脊髓。

此时蟾蜍四肢瘫软，表明脑脊髓已完全破坏。

2.剪除躯干上部及内脏用粗剪刀在骶髂关节水平以上1cm处剪断脊柱。

左手握住后肢，右手持剪刀沿脊柱的断口向下剪开两侧的皮肤及肌肉，再剪除已下垂的躯干上部及内脏。

3.剥皮左手捏脊柱断端（勿触碰神经），右手捏住断端边缘的皮肤，向下剥掉两后肢皮肤。

将标本背位放于表面有少许任氏液的蛙板上，洗净双手及用过的器械。

4.游离坐骨神经沿脊柱两侧用玻璃分针分离坐骨神经，沿中线将脊柱剪成两半。

捏住两侧下肢带骨用力向两侧掰，使耻骨联合处脱臼，再从耻骨联合中央剪开两后肢，一后肢放入盛有任氏液的平皿中备用，一后肢用玻璃分针划开梨状肌及其附近的结缔组织，循坐骨神经沟（股二头肌与半膜肌之间的裂隙处）找出坐骨神经的大腿部分，用玻璃分针将腹部的坐骨神经小心勾出来，手执结扎神经的线，剪断坐骨神经的所有分支，一直游离至膝关节。

5.完成坐骨神经腓肠肌标本的制备将分离干净的坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用普通剪刀将股骨刮干净，在股骨中部剪去上段股骨。

再在跟腱处以线结扎，剪断并游离腓肠肌至膝关节处，在膝关节以下将小腿其余部分剪掉。

7、检验标本
将制备好的标本浸泡到任氏液中510min，待其功能稳定后，用任氏液沾 湿的锌铜弓的两极接触神经，如腓肠 肌迅速发生收缩，则标本机能正常。
依次用温热的玻璃棒和食盐的接触和 洗脱检验肌肉收缩的变化。
【注意事项】
1）双毁髓时应注意捻动探针并使蟾蜍头部 前俯，防止耳后腺分泌物射入实验者眼内， 如被射入，应立即用生理盐水冲洗眼睛。
2）标本制备过程中应经常滴加任氏液，防 止标本干燥，以保持正常生理活性。
3）避免污染、过度牵拉或用器械夹伤坐骨 神经和腓肠肌。
思考与讨论
（1）用锌铜弓刺激坐骨神经如何引起 腓肠肌收缩？
（2）如何保持离体标本的机能正常？ （3）剥去皮肤的后肢标本能用自来水
冲洗吗？
探索性问题
1．该标本可以进行哪些实验研究？试 设计实验内容。
2、剥制后肢标本
剪除躯干上部及内脏：左手持手术镊提起 两前肢之间背部的皮肤，右手持手术剪横 向剪断皮肤，然后往后肢方向撕剥皮肤。 用金冠剪在颅骨后方剪断脊柱。左手握住 蟾蜍下肢，大拇指抵住脊柱尾骨，右手用 粗剪刀沿脊柱两侧（避开坐骨神经）剪开 腹壁。此时躯干上部及内脏即全部下垂。 剪除全部躯干上部及内脏组织，弃于烧杯 内。
4、分离坐骨神经
将一侧后肢的脊柱端腹面向上，用大头针将 标本背位固定于蛙板上。用玻璃分针沿脊神 经向后分离坐骨神经。股部沿腓肠肌正前方 的股二头肌和半膜肌之间的裂缝，纵向分离 暴露坐骨神经的大腿部分，直至分离至腘窝 胫神经分叉处。剪断盖在坐骨神经上方的梨 状肌，完全暴露坐骨神经，剪去支配腓肠肌 之外的分支，再剪去脊柱及肌肉，只保留坐 骨神经发出部位的一小块脊柱骨。将已游离 的坐骨神经搭在腓肠肌上。
2．你认为该标本的制作方法有哪些需 要改进的地方？请说出你的想法。

蟾蜍坐骨神经—腓肠肌标本制备（一）目的要求学习并掌握蛙类坐骨神经-腓肠肌标本的制备。

利用此标本做神经肌肉的一些实验。

（二）实验原理蛙类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物近似，而其离体组织器官的生活条件较为简单，可以在事温条件下，于一定时间内保持其功能。

因此在生理实验中常用蛙类的坐骨神经-腓肠肌标本来观察兴奋性、兴奋过程的一些规律及骨肌的收缩特性。

（三）实验材料1.动物：蟾蜍或蛙2.药品：任氏液3.器械：蛙板、探针、粗剪刀、细剪刀、尖镊子、玻璃分针、大头针、培养皿、滴管、瓷碗、锌铜弓或铝银电极。

（四）实验方法与步骤1．毁脑脊髓取蟾蜍一只，用左手握住，以示指压其头部前端使其尽量前俯（图5-1），右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织；再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使逐渐刺入整个椎管内，捣毁脊髓。

此时蟾蜍下颌呼吸运动应消失，四肢松软，即成为一毁脑脊髓的蟾蜍（pithed toad）。

否则须按上法再行捣毁。

2.剪除躯干上部及内脏用粗剪刀在颅骨后方剪断脊柱（图5-2）。

左手握住蟾蜍脊柱，右手将粗剪刀沿两侧（避开坐骨神经）剪开腹壁。

此时躯干上部及内脏即全部下垂（图5-3）。

剪除全部躯干上部及内脏组织，弃于瓷碗内。

3.剥皮避开神经，用左手持圆头镊子夹住脊柱，右手捏住皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤（图5-4）。

拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一侧，再剥另一侧。

将全部皮肤剥除后，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。

4.洗净双手和用过的全部手术器械，再进行下列步骤。

5．完成坐骨神经腓肠肌标本方法1：（1）分离两腿：避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中线将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合中央剪开（为保证两侧坐骨神经完整，应避免剪时偏向一侧）。

将已分离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中。

（2）游离坐骨神经：取腿一条，先用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部，然后用大头针将标本背位固定于干净蛙板上。

蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制作以及神经动作电位观察及传导速度测定一：实验目的1、掌握蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法2、掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备3、掌握测定神经动作电位传导速度的原理与方法二：实验材料1、材料：蟾蜍2、器材：常用手术器械（毁髓针、手术镊、手术剪、骨钳、玻璃分针、图钉、蛙板、不锈钢盘）、污物缸、信号采集处理系统、神经屏蔽盒3、试剂：任氏液三：实验方法与步骤1、蟾蜍的双毁髓一只手握住蟾蜍，拇指按住其背部，食指压住其头部；另一只手捏住其嘴部将其头部上下轻轻扳动，找到第一道折痕，其中部即为枕骨大孔，用毁髓针垂直插入枕骨大孔；然后将针尖向前刺入颅腔并搅动以捣毁脑组织，此时的蛙为单毁髓动物；再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方与脊柱平行刺入椎管，捣毁脊髓，彻底捣毁脊髓时可看到蟾蜍的后肢突然蹬直而后瘫软，此时的动物为双毁髓动物。

注意：a、若毁髓后蟾蜍的四肢肌肉紧张或活动自如，需重新毁髓；b、操作要快、准，且操作过程中不要挤压到蟾蜍的耳后腺，避免其分泌蟾酥。

2、坐骨神经-腓肠肌标本的制作（1）剥离后肢标本。

将蟾蜍背面向上置于蛙板上，用手术镊轻轻提起两前肢间的背部皮肤，用手术剪横向环形剪开皮肤，将蟾蜍身体下半部的皮肤剥离。

将蟾蜍剖腹，内脏向头部方向掀起，用骨钳在其第三节脊椎骨处剪断脊柱，然后用手术剪剪断相连的肌肉组织。

（2）分离两后肢。

用左手托起标本，拇指和食指固定住两后肢的肌肉，右手持骨钳剪断耻骨，手术剪剪开肌肉连接；纵向剪开脊柱使两后肢完全分离。

一只放入任氏液中备用，另一只用于继续下一步操作。

注意：在分离两后肢时需谨慎，不要使剪刀偏离中线太远以免损伤神经。

（3）分离坐骨神经。

将后置的脊柱端腹面向上，趾端想外侧翻转，使其足底向上，用图钉将其固定在蛙板上。

用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经。

股部沿肱二头肌和半膜肌之间的裂缝找到坐骨神经，用镊子和手术剪仔细去除半膜肌和肱二头肌，使神经暴露出来。

用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪断支配腓肠肌之外的分支，并去除神经上的其它组织。

坐骨神经-腓肠肌标本的制备XXX,YYY,ZZZ（版权所有，仅限个人）一、实验目的：1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。

2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

二、实验原理：1.蟾蜍处死：将蟾蜍的脑和脊髓用毁髓针捣毁后，蟾蜍即死亡。

捣毁脑是为了将蟾蜍的感觉和运动中枢破坏，同时也使蟾蜍的意识消失，既避免解剖过程中蟾蜍感到痛苦，也避免蟾蜍有意识的反应；捣毁脊髓是为了破坏蟾蜍的周围神经系统，避免蟾蜍自然的非意识的反应（乱动）。

总之，双毁髓就是为了是蟾蜍在之后的解剖过程中无任何干扰实验的反应。

2.坐骨神经-腓肠肌标本的制备：坐骨神经直接支配着腓肠肌的反应，刺激坐骨神经的神经干，腓肠肌会产生收缩反应。

一次阈上刺激，腓肠肌会产生一个周期的收缩舒张过程，从而可以被信号采集系统采集，并通过计算机和相关软件转化成可视的收缩舒张曲线。

便于研究神经和肌肉的信号、反应关系和规律。

三、实验器材与试剂：（一）实验动物及器材：蟾蜍、常用蛙类手术器械（如：毁髓针、剪刀、解剖刀等）、蛙板、玻璃划针、固定针、培养皿、滴管、棉花、粗棉线等。

（二）实验试剂：任氏液（近似两栖动物内环境液，配制因子很多，不同于生理盐水）四、实验方法与步骤：1、蟾蜍处死，损毁脑和脊髓：a.学会持拿蟾蜍的方法：一般用左手持拿蟾蜍，用小指和无名指夹住蟾蜍两后腿，中指自然搭在蟾蜍腹部，食指和拇指可自由活动。

处死时，一般用拇指按住蟾蜍背部，食指将蟾蜍头鼻下压，以便使下针处清晰易找。

b.处死：按上述方法持拿，用毁髓针沿头部中线从鼻尖轻轻向后滑过，约在双眼连线中点后方某点，可感到有一下陷小窝，用针轻按，蟾蜍一般会有明显反应。

在此处下针。

将毁髓针垂直插入，会感觉到颅骨破碎的声音，立即将毁髓针向后放倒，将针尖从破碎处，并旋转捣毁脑部；然后将毁髓针拔出少许，向前放倒，向后插入同样旋转捣毁脊髓。

蟾蜍即被处死。

2、去除躯干上部及内脏：将蟾蜍腹部朝上放在蛙板上，将四肢用固定针固定。