重组GAD清酒酵母合成GABA条件优化与稳定
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酿酒酵母DL28转化产γ-氨基丁酸主要影响因子的筛选乌云达来;郭雪娜;张博润;王肇悦【摘要】[目的]筛选出对酿酒酵母重组菌转化产生γ-氨基丁酸(GABA)具有影响的主要因素.[方法]利用Plackett-Burman试验设计对谷氨酸脱羧酶基因(GAD1)高效表达重组菌Saccharomyces cerevisiae D128转化产GABA的主要影响因子,如菌体浓度、底物浓度、转化温度、转速、转化时间及起始pH等进行研究,筛选出主要影响因素.[结果]试验表明,菌体浓度(P =0.012 3)、转化时间(P=0.0475)及起始pH(P=0.001 9)对转化产生GABA具有显著影响.[结论]研究可为进一步优化菌株DL28产GABA转化条件提供理论依据与实践基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)023【总页数】4页(P258-260,263)【关键词】酿酒酵母;γ-氨基丁酸;发酵条件;影响因素;筛选【作者】乌云达来;郭雪娜;张博润;王肇悦【作者单位】内蒙古农业大学食品科学与工程学院,内蒙古呼和浩特010018;中国科学院微生物研究所,北京100101;中国科学院微生物研究所,北京100101;中国科学院微生物研究所,北京100101;中国科学院微生物研究所,北京100101【正文语种】中文【中图分类】S509.9γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid)简称 GABA,是谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD,EC 4.1.1.15)生物催化L-谷氨酸或钠盐α-羧基脱羧反应而产生的非蛋白质组成的天然氨基酸[1-2],为哺乳动物中枢神经系统的一种主要的抑制性神经递质[3],广泛存在于从单细胞生物到哺乳动物的各种有机体活细胞中[4],具有许多重要的生理功能,如降血压[5]、镇痛[6]、治疗哮喘[7]等。
近年来,GABA 相关功能性食品的开发引人关注,其中植物富集法(米胚、米糠、绿茶等)和微生物发酵法(乳酸菌、酵母)制得的富含GABA食品都获得了良好的社会价值和经济效益。
酵母菌发酵生产糙米酵素条件优化的研究侯利娟;邱志超;王俊玲;唐富丽;刘丹;王春雨;宋金潞;张慧娟【期刊名称】《黑龙江科学》【年(卷),期】2016(007)015【摘要】Production technology of brown rice enzyme fermented by saccharomycetes was studied, γ- aminobutyric acid (GABA) was enriched through soaking and anaerobic treatment with brown rice. Protease and γ- aminobutyric acid (GABA) content were taken as the indicator, brown rice enzyme fermented by using saccharomycetes has provided a theoretical basis for manufacturing technique of brown rice enzyme.%对酵母菌发酵糙米酵素的生产工艺进行了研究,通过浸泡和厌氧处理糙米,富集其中的γ-氨基丁酸(GABA)。
以蛋白酶活和γ-氨基丁酸(GABA)含量为指标,利用酵母菌发酵生产糙米酵素,为糙米酵素生产工艺提供理论依据。
【总页数】2页(P6-7)【作者】侯利娟;邱志超;王俊玲;唐富丽;刘丹;王春雨;宋金潞;张慧娟【作者单位】吉林农业科技学院生物工程学院,吉林吉林 132101;吉林农业科技学院生物工程学院,吉林吉林 132101;吉林农业科技学院生物工程学院,吉林吉林 132101;吉林农业科技学院生物工程学院,吉林吉林 132101;吉林农业科技学院生物工程学院,吉林吉林 132101;吉林农业科技学院生物工程学院,吉林吉林132101;吉林农业科技学院生物工程学院,吉林吉林 132101;吉林农业科技学院生物工程学院,吉林吉林 132101【正文语种】中文【中图分类】TS210.9;TQ920.6【相关文献】1.有色糙米酵素发酵工艺条件研究 [J], 袁周率;苏小军;廖晰晰;许静雅;郭时印2.糙米酵素混菌发酵工艺优化 [J], 张旭普;白俊岩;刘腾云;吴荣荣;程书梅3.不同发酵条件对糙米酵素中活性成分的影响 [J], 李飞;隋新;苏红;代娇阳;刘佳;张国峰4.酵母菌发酵制备葛根酵素的工艺优化 [J], 朱德艳5.糙米酵素发酵工艺条件的研究 [J], 李志江;牛广财;鹿保鑫;李兴革;左锋;李雷刚因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
重组蛋白质稳定性的保护与优化技术蛋白质是生物体内重要的功能分子,常用于制药、农业和生物工程等领域。
然而,蛋白质的稳定性一直是一个重要的挑战,因为它们容易受到环境的影响而失活或降解。
为了克服这个问题,科学家们开发了一系列技术来保护和优化重组蛋白质的稳定性。
一种常用的技术是改变蛋白质的氨基酸序列,以提高其稳定性。
这可以通过替换易受到蛋白质降解酶作用的特定位点上的氨基酸,或者增加具有保护性的氨基酸残基来实现。
例如,研究人员曾经成功地使用天冬酰胺(Proline)替代易降解的苯丙氨酸(Phenylalanine)残基,从而增加了蛋白质的稳定性。
此外,还可以添加二硫键、引入稳定性较高的蛋白质结构域等方法来改善蛋白质的稳定性。
另一种保护蛋白质稳定性的技术是通过改变环境条件来创造一个有利于蛋白质稳定的环境。
其中最常见的方法是使用保护剂和稳定剂。
保护剂,如甘油、蔗糖和聚乙二醇等,可以在蛋白质溶液中形成保护性的层,降低蛋白质的失活率。
稳定剂,如甲醇和丙醇等,可以增加蛋白质与水分子之间的相互作用,提高蛋白质的稳定性。
此外,调节pH值、离子浓度和温度等环境参数也是一种常用的方法来优化蛋白质的稳定性。
除了上述方法,重组蛋白质的稳定性还可以通过加工和储存技术来保护。
例如,冷冻干燥(冻干)是一种常见的保护蛋白质的方法,它通过去除水分来防止蛋白质的降解和失活。
此外,封装和微胶囊化技术也可以用来保护蛋白质,这样可以形成一个稳定的包裹层,防止蛋白质与外部环境接触。
此外,正确的储存条件和容器选择也对蛋白质的稳定性有重要影响。
虽然已经有多种技术可以用来保护和优化重组蛋白质的稳定性,但是每种技术都有其局限性和适用范围。
因此,科学家们仍然在不断努力寻找更好的方法来提高蛋白质的稳定性。
未来的发展趋势之一是利用蛋白质工程技术来设计和开发更稳定的蛋白质。
蛋白质工程可以通过改变蛋白质的结构和性质,进一步提高蛋白质的稳定性。
例如,可以利用计算机模拟和分子动力学模拟技术预测氨基酸残基之间的相互作用,从而设计出更稳定的蛋白质结构。
产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及其发酵条件优化
马莉;刘慧燕;方海田;辛世华;李一鸣;贺捷群
【期刊名称】《中国酿造》
【年(卷),期】2022(41)7
【摘要】以浆水作为菌株分离源,分离筛选产γ-氨基丁酸(GABA)乳酸菌,采用薄层层析法和高效液相色谱法定性定量分析GABA,并对筛选菌株进行形态学观察、生理生化试验及分子生物学种属鉴定、发酵特性分析及发酵条件优化。
结果表明,共分离筛选出21株乳酸菌,具有产GABA能力的有6株,经鉴定其中5株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),1株为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentans)。
选取GABA产量最高的一株植物乳杆菌,编号为2,通过单因素试验及响应面试验确定其最适发酵条件为:初始pH值5.8,发酵温度36℃,发酵时间60 h。
在此优化条件下,GABA产量可达0.78 g/L,比优化前产量(0.22 g/L)提高约3.5倍。
【总页数】7页(P94-100)
【作者】马莉;刘慧燕;方海田;辛世华;李一鸣;贺捷群
【作者单位】宁夏大学食品与葡萄酒学院宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室;宁夏工商职业技术学院旅游管理系
【正文语种】中文
【中图分类】Q93
【相关文献】
1.产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及发酵条件初步优化
2.产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及发酵条件优化
3.乳酸菌SK 005发酵产GABA(γ-氨基丁酸)的条件优化
4.乳酸菌L-SZ303发酵产γ-氨基丁酸条件的优化
5.糟鱼中乳酸菌的分离鉴定及鳓鱼发酵条件优化
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重组谷氨酸脱羧酶大肠杆菌合成γ-氨基丁酸条件的优化陈琳;张充;吕凤霞;别小妹;赵海珍;陆兆新【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2015(036)001【摘要】研究重组谷氨酸脱羧酶大肠杆菌合成γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的适宜条件.检测温度、pH值、表面活性剂、金属离子、底物与菌体质量比以及反应体系体积对GABA转化效率的影响.结果表明:最优转化条件为:转化体系5mL、底物L-谷氨酸钠浓度0.1 mol/L、重组大肠杆菌细胞6.4 mg(干质量)、Triton-100体积分数0.06%、Ca2+浓度0.6 mmol/L,转化温度45℃、反应体系pH 4.5.在该体系下反应7h,GABA合成量达到26.1 g/L,GABA转化效率在1h时达到最高,为13.8g/(g·h),较优化前提高1.5倍.【总页数】6页(P158-163)【作者】陈琳;张充;吕凤霞;别小妹;赵海珍;陆兆新【作者单位】南京农业大学食品科技学院,江苏南京 210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京 210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京 210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京 210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京210095;南京农业大学食品科技学院,江苏南京 210095【正文语种】中文【中图分类】Q939.9【相关文献】1.响应面法优化重组大肠杆菌生物合成别藻蓝蛋白(holo-apcA)的发酵条件 [J], 周孙林;陈华新;姜鹏;李富超;唐东山2.重组谷氨酸脱羧酶制备γ-氨基丁酸的工艺条件优化 [J], 黄燕;宿玲恰;吴敬3.响应面分析法优化重组大肠杆菌生物合成谷胱甘肽的条件 [J], 廖鲜艳;朱至;陈坚;堵国成4.重组大肠杆菌合成左旋多巴条件的优化 [J], 李华钟;孙伟;王树英;陈坚5.重组大肠杆菌产乙酰乳酸合成酶发酵条件优化 [J], 赵婷;黄礼清;金紫阳;袁思棋;刘君因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
收稿日期:2007-12-28作者简介:张徐兰(1980-),女,山东烟台人,在读硕士研究生,研究方向:生物转化。
通讯作者:吴天祥。
MP1104固态发酵啤酒糟生产GABA的初步优化培养张徐兰,郑岩,吴天祥,黄小玲,陈岩(贵州大学化工学院,贵州贵阳550003)摘要:从市售腐乳中筛选出红曲霉菌种MP1104,发现其在啤酒糟中有较好的产GABA能力。
初步研究了MP1104在啤酒糟中生产GABA的发酵条件并进行了条件参数优化,得出最佳的发酵条件,为装瓶量35g、发酵温度26℃、发酵周期8.08d,预测的GABA最佳条件下的产量为0.1743mg/g。
关键词:啤酒糟;MP1104;GABA;固态发酵;优化中图分类号:TS262.5;TS261.4;X797文献标识码:B文章编号:1001-9286(2008)05-0105-03OptimizationofSolidFermentationConditionsofMP1104inBeerDregstoProduceGABAZHANGXu-lan,ZHENGYan,WUTian-xiang,HUANGXiao-lingandCHENYan(ChemicalEngineeringDepartmentofGuizhouUniverdity,Guiyang,Guizhou550003,China)Abstract:ItwasfoundthatMonascuspurpureus(MP1104),screenedfromsoycheese(soldinthemarketinGuizhou),couldproduceGABAinbeerdregs.ThefermentationconditionsofMP1104inbeerdregstoproduceGABAwerestudiedandthentherelativetechnicalparameterswereoptimizedasfollows:35gflaskfillingquantity,fermentationtemperatureat26℃,and8.08dfermentationperiod.Undertheaboveconditions,theoutpoutofGABAwouldreach0.1743mg/g.Keywords:beerdregs;MP1104;GABA;solidfermentation;optimizationγ-氨基丁酸(GABA)是一种天然的非蛋白氨基酸,是存在于哺乳动物中枢神经系统一种重要的抑制性神经递质,具有降血压、镇静安神、治疗癫痫、增强记忆力、调节激素分泌、控制哮喘及活化肝肾功能等生理活性。
周俊萍,徐玉娟,温靖,等. γ-氨基丁酸(GABA )的研究进展[J]. 食品工业科技,2024,45(5):393−401. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023050004ZHOU Junping, XU Yujuan, WEN Jing, et al. Research Progress of γ-Aminobutyric Acid (GABA)[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(5): 393−401. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023050004· 专题综述 ·γ-氨基丁酸(GABA )的研究进展周俊萍1,2,徐玉娟1,温 靖1, *,吴继军1,余元善1,李楚源3,翁少全3,赵 敏3(1.广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所,农业农村部功能食品重点实验室,广东省农产品加工重点实验室,广东广州 510610;2.华南农业大学食品学院,广东广州 510642;3.广州王老吉大健康产业有限公司,广东广州 510623)摘 要:γ-氨基丁酸(GABA )是一种广泛分布于动、植物和微生物体内的非蛋白氨基酸,于2009年被我国卫健委批准为“新资源食品”,在食品、医药、饲料等领域具有十分广阔的应用前景,近年来有关GABA 的研究也逐渐成为热点。
本文阐述了GABA 的生物合成与代谢途径,归纳了GABA 的化学合成、植物富集方法及目前常用的GABA 检测技术,并对比分析其优缺点。
此外,本文对GABA 的主要生理功能及其作用机制进行总结,并对GABA 的未来研究和发展趋势进行展望,以期为今后GABA 的研究与应用提供参考。
关键词:γ-氨基丁酸,代谢途径,富集,检测方法,生物活性本文网刊:中图分类号:TS201.2 文献标识码:A 文章编号:1002−0306(2024)05−0393−09DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2023050004Research Progress of γ-Aminobutyric Acid (GABA)ZHOU Junping 1,2,XU Yujuan 1,WEN Jing 1, *,WU Jijun 1,YU Yuanshan 1,LI Chuyuan 3,WENG Shaoquan 3,ZHAO Min 3(1.Sericultural & Agri-Food Research Institute Guangdong Academy of Agricultural Sciences, Key Laboratory of Functional Foods, Ministry of Agriculture, Guangdong Key Laboratory of Agricultural Products Processing,Guangzhou 510610, China ;2.College of Food Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China ;3.Guangzhou Wanglaoji Lychee Industry Development Company Co., Ltd., Guangzhou 510623, China )Abstract :γ-aminobutyric acid (GABA) is a non-protein amino acid discovered in animals, plants, and microorganisms that was approved as the "new resource food" by the National Health Commission of the People's Republic of China (NHC) in 2009. It has a wide range of applications in food, medicine, feed, and other industries, and the research has grown increasingly popular in recent years. The paper reviews the bio-synthesis and metabolic processes of GABA, summarizes the methods of chemical synthesis, plant enrichment, and present GABA detection techniques, and discusses their advantages and limitations. Furthermore, the main physiological functions and mechanism of GABA are summarized, and GABA’s research and development trend is also presented, in order to provide reference for future research and application of GABA.Key words :γ-aminobutyric acid ;metabolic pathways ;enrichment ;detection method ;bioactivityγ-氨基丁酸(GABA )又称4-氨基丁酸,氨基取代基位于C-4位置,分子式为NH 2(CH 2)3COOH ,结构式如图1,其相对分子量为103.12,熔点202 ℃,白色至浅黄色结晶物质,易溶于水,不溶于或难溶于有收稿日期:2023−05−04基金项目:国家荔枝龙眼产业技术体系(CARS-32-13);广东省农业科技创新及推广项目(2023KJ107-3);茂名市荔枝现代贮运保鲜关键技术研究项目(2021S0061);广东荔枝跨县集群产业园(茂名)项目;广东省农业科学院学科团队建设项目(202109TD )。
第59卷第3期2021年6月Jun.2021・1・化肥设计Chemical Fertilizer Design丫-氨基丁酸(GABA)在农业生产中的应用燕子红&,赵彦梁&,范东升&,苗志伟$!•喀什大学化学与环境科学学院,新疆喀什?44006;2.南开大学化学学院元素有机化学国家重点实验室,天津300071)摘要厂氨基丁酸在植物生长过程中发挥重要作用。
综述了厂氨基丁酸的性质及其合成方法,介绍了厂氨基丁酸作为植物生长调节剂在农业生产中的应用,分析了!-氨基丁酸在逆境条件下对农作物生长发育的促进作用,为推动!-氨基丁酸在农业生产的应用提供参考。
关键词!-氨基丁酸;合成方法;在农业生产中的应用doi:10.3969/j.issn.1004—8901.2021.03.001中图分类号S816.73文献标识码A文章编号1004—8901(2021)03—0001—04Application of y-Aminobutyric Acid(GABA)in Agricultural ProductionYAN Zi-hon g1,ZHAO Yan-liang1,FAN Don g-shen g1,MIAO Zhi-wei2(1.School of Chemistry and Environmental Sciences of Kashi University,Kashi Xinjiang844006,China;2.State Key Laboratory of Elemento~organic Chemistry of Nankai University,Tianjin300071,China)Abstract:y-aminobutyric acid plays a key role in plant growth.This paper reviews the properties and synthesis methods of y-aminobutyric acid, introduces its application as plant growth regulator in agricultural production and analyzes its promotion to the growth and development of crops under adverse conditions,so as to provide references for the application of y-aminobutyric acid in agricultural production.Keywords:y-aminobutyric acid;synthesis methods;agricultural production;applicationdoi:10.3969(.issn.1004-8901.2021.03.001-氨基丁酸是一种四碳非蛋白质氨基酸,化学名称是4-氨基丁酸,英文名称是y-aminobutyric acid,缩写为GABA。
酵母高产γ-氨基丁酸发酵条件的优化STUDIES ON FERMENTATION CONDITIONS FOR THEPRODUCTION OF GABA FROM SACCHAROMYCES CEREVISIAE STRAIN目录摘要 (1)关键词 (1)1前言 (2)2材料和方法 (4)2.1材料 (4)2.1.1菌种 (4)2.1.2培养基 (4)2.1.3主要的药品和设备 (4)2.2实验方法 (4)2.2.1菌种活化 (4)2.2.2种子培养 (4)2.2.3发酵液中γ- 氨基丁酸的含量测定 (5)2.2.4培养基优化 (5)2.2.5发酵条件优化 (5)3结果与分析 (6)3.1发酵液中γ-氨基丁酸的含量测定 (6)3.2培养基的优化 (6)3.2.1碳源对菌体发酵的影响 (6)3.2.2有机氮源对菌株发酵的影响 (7)3.2.3无机氮源对菌株发酵的影响 (8)3.2.4无机盐对菌体发酵的影响 (9)3.2.5培养基组成的优化 (10)3.3发酵条件的优化 (11)3.3.1初始pH对发酵 (11)3.3.2培养温度对发酵的影响 (11)3.3.3摇床转速对发酵的影响 (12)3.3.4种龄对发酵的影响 (12)3.3.5接种量对发酵的影响 (13)3.3.6培养时间对发酵的影响 (13)3.3.7优化发酵条件下菌株产γ- 氨基丁酸特性鉴定 (14)4讨论 (14)5结论 (15)参考文献 (15)致谢 (17)酵母产γ-氨基丁酸发酵条件的研究学生:吴辉指导老师:黄丽华(湖南农业大学东方科技学院,长沙410128)摘要:γ-氨基丁酸(GABA)是一种具有许多生理功能的非蛋白氨基酸,主要通过微生物发酵生产。
本论文以诱变获得的高产γ—氨基丁酸酵母菌株为材料,对其发酵生产γ—氨基丁酸的培养基成分和培养条件进行了探讨。
结果表明,发酵的合适培养基为3%葡萄糖,3%蛋白胨,0.3%(NH4)2SO4和0.1%KH2PO4;适宜的摇瓶发酵条件为:培养温度30℃,培养基起始pH值为5.5,摇床转速220r/min,接种量4%,种龄为2d的种子菌,培养时间4d。
重组谷氨酸脱羧酶大肠杆菌合成Y-氨基丁酸条件的优化(南京农业大学食品科技学院,江苏南京210095)摘要:研究重组谷氨酸脱羧酶大肠杆菌合成、Y-氨基丁酸(y-aminobutyric acid GABA)的适宜条件。
检测温度、pH值、表面活性剂、金属离子、底物与菌体质量比以及反应体系体积对GABA转化效率的影响。
结果表明:最优转化条件为:转化体系5 mL、底物L-谷氨酸钠浓度0. 1mol/L、重组大肠杆菌细胞6.4mg(干质量)、Triton-100体积分数0.06%。
Ca2+浓度0.6mmol /L,转化温度45℃、反应体系pH4.5。
在该体系下反应7 h, GABA合成量达到26.1 g/L, GABA转化效率在1h时达到最高,为13.8 g/ <g.h),较优化前提高1.5倍。
关键词:Y-氨基丁酸;谷氨酸脱羧酶;转化条件;优化Y-氨基丁酸(y-aminobutyric acid GABA)是哺乳动物中枢神经系统一种主要的抑制性神经递质。
GABA具有许多重要的生理功能,如降血压[1}、预防癫痫[2]、抗抑郁[3]、抗疲劳[4]l、控制哮喘[5]和促进激素分泌等。
山于GAGA具有诸多重要的生理功能,已经发展成为一种新型的功能性因子,正逐渐被广泛应用于食品保健、医药、化工及饲料[6]等领域。
目前,国内外都在积极研发富含GAGA的食品,己成功研发的有茶饮料、米胚芽、功能性饮料、乳制品和大豆发酵制品[7-9]。
微生物法制备GAGA的优点很多,如安全性较高、反应条件温和、生产成本较低以及较好的商业化开发应用前景等,因此,近年来微生物法制备GAGA受到国内外学者广泛的关注,其中大肠杆菌、红曲霉、酿酒酵母、乳酸菌等GABA生产菌种研究较为深入。
已有很多研究证明乳酸菌具有合成GAGA的能力[10-13],乳酸菌作为一种有保健作用的益生菌,用其合成GAGA越来越受到人们的青睐,目前用乳酸菌合成GAGA的研究主要集中在菌株的筛选、传统诱变方法以及发酵条件优化上,但是,山于乳酸菌具有发酵周期较长以及培养条件较难制等缺点,在生产强度上处于劣势,而借助基因工程手段构建高拷贝重组质粒,导入宿主菌,可以使谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)表达量提高,获得高GAD活性的基因工程菌,从而缩短生产周期,提高生产强度。
乳酸菌SK 005发酵产GABA(γ-氨基丁酸)的条件优化崔晓俊;江波;冯骉【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2005(026)006【摘要】GABA(γ-氨基丁酸)是一种天然存在的功能性氨基酸,具有降低血压、改善脑功能、镇静、增强长期记忆及提高肝、肾机能等生理活性.通过对乳酸菌SK 005发酵产GABA的条件设计了一系列优化实验,得到了最佳的发酵条件.以一次回归正交设计实验,运用方差分析确定了最佳的发酵温度,发酵时间,培养基起始pH.安排五水平正交实验研究豆粕粉,玉米浆粉,酵母味素,葡萄糖,K2PHO4,MSG对发酵产GABA的影响,逐步回归法找出主要影响因子:豆粕粉,玉米浆粉,MSG.利用中心组合设计与响应面分析进一步考察这三个主要影响因子,确定了最佳培养基的组成及浓度.乳酸菌SK 005发酵产GABA的优化发酵条件为发酵温度30℃,发酵时间2 d,培养基起始pH 6.8,培养基成分葡萄糖5g/L,豆粕粉21.5 g/L,玉米浆粉21.8g/L,MSG 9.5g/L,实验结果有良好的重现性,GABA产量达5.4g/L.【总页数】6页(P64-69)【作者】崔晓俊;江波;冯骉【作者单位】江南大学,食品科学与安全教育部重点实验室,无锡,214036;江南大学,食品科学与安全教育部重点实验室,无锡,214036;江南大学,食品学院,无锡,214036【正文语种】中文【中图分类】TS2【相关文献】1.产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及发酵条件初步优化 [J], 王超凯;刘绪;张磊;刘念;彭奎;潘建军;黎贤书2.产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及发酵条件优化 [J], 王兴洁;魏超;廖光敏;雷承延;李霜;胡露;刘书亮3.乳酸菌SK1.002产L-阿拉伯糖异构酶培养基优化及发酵条件 [J], 翁玮慧;张华;江波4.乳酸菌L-SZ303发酵产γ-氨基丁酸条件的优化 [J], WANG Bing-cong;WU Qiong;CHI Yan-ping5.产GABA乳酸菌的筛选鉴定及其发酵条件研究 [J], 李欢;潘道东;吴振;曾小群;吴爱娟因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
5株生物合成GABA酵母菌株的分离、筛选和鉴定徐晓波,蒋冬花*,李杰(浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004)摘要从水果表皮、果园土、酒曲、泡菜等场所分离筛选到5株产生C-氨基丁酸(GABA)酵母菌菌株,其中4#酵母菌株的GABA产量最高,为3.653g/L。
通过形态特征观察和生理生化特征测定,5株酵母菌株分别鉴定为3#属于酿酒酵母(Saccharomy ces cerevisi ae),4#和L J3属于葡萄汁酵母(Saccharo m yces uvaru m),MQ属于红冬孢酵母(Rhodosp ori d i um toruloi des),J Q属于红酵母(Rhodotoru l a glutinis)。
关键词C-氨基丁酸(GA BA);酵母菌;筛选;鉴定中图分类号T S201.3文献标识码A文章编号1005-7021(2009)01-0055-05Isolation,Screen i ng,and Identificati on ofFive GABA Produci ng Y east StrainsXU X iao-bo,JI A NG Dong-hua,LI jie(C oll.of Che m.&L i fe S ci.,Z heji ang N or ma l Un i v.,Jinhua321004)A bstrac t F i ve C-a m i nobu t y ric ac i d(GABA)produc i ng yeast stra i ns w ere i solated from fruit surface,fru i t garden so i,l distiller.s yeast,and p ick l ed v ege tab l e.Am ong t he m t he y ield o f GAB A by stra i n4#was the hi ghest and reached up t o3.653g/L.O bservati on through m orpho log ical and physioche m ica l characters the fi ve y east strains w ereidentifi ed3#as Saccharo my ces cerevis i ae,4#and L J3as Sacc haromy ces uvaru m,M Q as Rhodosp ori d iu m torulo i des, and J Q as Rhodo torula g l u tinis.K eywords C-a m i nobu t y ric ac i d(GABA);yeast;screeni ng;i dentifica tionC-氨基丁酸(C-Am i n obutyric ac i d,GAB A)是由谷氨酸脱羧生成的一种氨基酸。
工程菌产酶制备GABA测定条件的优化张珂;薛正莲【期刊名称】《安徽工程大学学报》【年(卷),期】2012(027)001【摘要】基于Berthelot显色反应,采用正交设计法优化了测定大肠杆菌工程菌谷氨酸脱羧酶转化L-谷氨酸生成γ-氨基丁酸含量的条件.实验确定的最佳测定条件为:2.0mL 0.2mol/L pH6.0的醋酸缓冲液(内含0.1mmol/L的PLP,0.2mol/L的L-谷氨酸,稀释70倍),再依次加0.2mmol/L的硼酸缓冲液(pH9.0)1.0mL,0.5mL 6.0%重蒸苯酚和5.0mL 10%次氯酸钠,沸水浴加热10min后,迅速冰浴20min,待溶液出现蓝绿色后,加入60%(v/v)乙醇溶液4.0mL在640nm测定吸光值,绘制出标准曲线来计算GABA的含量.结果表明,该方法简便实用,相对误差小,适合实验室样品的快速检测.%Based on the Berthelot color reaction,the orthogonal method was used to determinate the content of γ-aminobutyric acid produced form recombinant E.coli Glutamate decarboxylase transformation of L-Glutamate.The optimum conditions were determined as follows:2.0 mL 0.2 mol/L pH 6.0 acetate buffer(containing 0.1 mmol/L of PLP,0.2 mol/L of L-Glutamate,diluted 70 times),incremented by 0.2 mmol/L of borate buffer(pH 9.0) 1.0 mL,0.5 mL 6.0% distilled phenol and 5.0 mL 10% sodium hypochlorite,boiling water bath heating for 10 minutes,being put in ice water immediately for 20 minutes,waiting for the solution to appear blue-green,adding to 60%(v/v) ethanol solution by 4.0 mL,determining at 640 nm and drawing a standard curve to calculatethe content of GABA.The results showed that the method was simple and practical,the relative error was very small and suitable for rapid detection of laboratory samples.【总页数】4页(P29-31,35)【作者】张珂;薛正莲【作者单位】安徽工程大学生物与化学工程学院,安徽芜湖241000;安徽工程大学生物与化学工程学院,安徽芜湖241000【正文语种】中文【中图分类】Q93-33;Q939.97【相关文献】1.脂肪酶基因工程菌NJY-1-69产脂肪酶在制备生物柴油中的应用 [J], 闫丽娟;赵春雷;王金浩;王应中;雷宇;陈丹2.利用产脂肪酶B的毕赤酵母工程菌生物拆分制备西司他丁关键手性中间体的体系优化 [J], 郑磊;何军邀;黄金;王普3.基因工程菌EGs2产β-葡聚糖酶条件优化及产酶特性 [J], 李青青;陈启和;蒋孝燕;张秀艳;李婷;何国庆4.工程菌产酶制备GABA测定条件的优化 [J], 张珂;薛正莲5.产腈水解酶基因工程菌的产酶诱导条件及培养基优化 [J], 唐璐敏;薛建萍因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
γ-氨基丁酸产生菌的分离及发酵条件优化汪祥燕;徐海燕;辛国芹;汪孟娟;董佩佩;赵影;谷巍【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2016(000)004【摘要】γ-氨基丁酸(GABA)是哺乳动物体内的一种抑制性神经递质,具有许多重要的生理功能。
利用酸菜、酸奶等食品进行乳酸菌的分离,通过纸层析法筛选得到1株产 GABA 量较高的菌株 Y-3,经16SrDNA 鉴定该菌株为短乳杆菌。
单因素试验和正交试验确定的菌株 Y-3最佳发酵条件为:葡萄糖1.5%、酵母膏0.5%、胰蛋白胨1.5%、L-谷氨酸钠1.0%、丁二酸钠0.5%,初始 pH 为6.0,接种量6%,37℃静置培养48 h,GABA 产量达12 g/L 以上,比优化前产量提高了近5倍。
%γ-amino butyric acid(GABA)as a putative inhibitory in the vertebrate nervous system,has many important physiological ing filter paper chromatography method,a lacto-bacteria Y-3 highly yielding GABA was isolated from different foods such as pickled vegetable and yoghourt.Y-3 was identified as Lactobacillus brevis by its cultural characteristics,morphological characteristics and 16S rDNA sequence.The optimal fermentation medium composition by single factor and orthogonal test showed as follows:glucose 1.5%,yeast extract0.5%,tryptone 1.5%,L-sodium glutamate 1.0%,sodium succinate 0.5%.The better fermentation conditions were as follows:initial pH 6.0,inoculation amount 6%, temperature 37 ℃,fermentation 48 ing this optimizationconditions,the GABA yield was over 12 g/L,which increased nearly 5 times than that before optimization.【总页数】5页(P27-31)【作者】汪祥燕;徐海燕;辛国芹;汪孟娟;董佩佩;赵影;谷巍【作者单位】山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安 271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安 271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安 271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安 271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安 271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安 271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安 271000【正文语种】中文【中图分类】S816.7【相关文献】1.脂肪酶产生菌的分离、鉴定及其发酵条件优化 [J], 伍康荣;邓璐璐;杨锐旺;陈碧韶;李惠君;冯飞2.产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及发酵条件优化 [J], 王兴洁;魏超;廖光敏;雷承延;李霜;胡露;刘书亮3.γ-氨基丁酸产生菌的选育及发酵条件优化 [J], 卢彦梅;张伟国4.γ-氨基丁酸产生菌分离筛选及发酵培养基初步优化 [J], 冯志彬;程显好;陈笑;张玉香;李玉芳;李玲;史会帅;孙喆5.耐碱性β-甘露聚糖酶产生菌的分离鉴定及发酵条件优化 [J], 汪梦昀;缪礼鸿;励飞;刘蒲临;廖卫芳因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
重组GAD清酒酵母合成GABA条件优化与稳定Y-氨基丁酸(GABA)在生物体内天然存在并且分布较广,一般动物植物等有机体内都可以检测到。
研究发现,Y-氨基丁酸在生理方面有很多重要的功能。
在哺乳动物脑和脊髓内发现γ-氨基丁酸的存在,并能够产生多种作用效果:可对组织内心血管的收缩与舒张有一定的改善效果;也可以通过对神经系统的作用特定治疗某些神经型疾病,对于神经性疾病的治疗效果较之其它种类药物,使用GABA治疗效果较好;在调节内分泌系统的分泌过程中有着不可替代的作用;有效的调节并且改善肝功能与肾功能,有保肝利肾功效。
在实际应用中,发现通过在饲料中添加一定量的γ-氨基丁酸能够使得畜禽对于周围环境的刺激作用有一定的耐受性,就是常说的抗应激作用。
在GABA作用下,可以有效的使家禽的生长发育良好,促进机体生长。
基于γ-氨基丁酸以上的特殊作用,人们会对它进行更加深入的研究,并且将会成为今后药物研发,食品开发以及饲料添加剂等方面的热点。
谷氨酸脱羧酶(GAD)能够作用于底物谷氨酸,使谷氨酸被催化发生脱羧反应,得到Y-氨基丁酸。
谷氨酸脱羧酶的实质是一种蛋白质酶,而酶类作为一种催化剂有高效性以及专一性。
所以谷氨酸脱羧酶也具有这些酶的通性。
由于谷氨酸脱羧酶反应效率较高,可以利用菌体的内源性谷氨酸脱羧酶加以研究并利用它进行制备Y-氨基丁酸。
本研究的基础在于找出基因中操控表达谷氨酸脱羧酶的基因片段,并利用分子生物学技术对目标菌种的基因进行构建与重组。
本论文研究的目的是:通过诱导培养或转化培养使得重组酵母菌内谷氨酸脱羧酶的表达水平得以提升。
选择最适宜重组酵母菌发生转化反应的条件,使谷氨酸为底物的脱羧反应更
加易于转化生成γ-氨基丁酸。
为了达到以上的目标,首先克隆操控谷氨酸脱羧酶表达的基因片段,将该片段重组在BG1805简易载体中并加以培养表达。
这个前期工作是与日本友人完成。
本论文所涉及到的内容基本可以概括为以下几个方面:对构建的含有基因GAD 1的重组酵母进行激活培养与诱导培养;在这种重组酵母加以培养过程中添加不同诱导剂,培养后对其翻译表达出的物质进行分离、纯化;使用不同诱导条件的培养给谷氨酸脱羧酶的影响进行分析;通过外部因素控制,如温度调节不同以及一些添加剂外部因素对于该酶表达活力的影响,研究了此产物的酶活性的特点,筛选出可以提高重组酵母产生该酶的量与活性的有利因素。
通过添加不同活性剂或者化学试剂,研究了其对酶活性影响。
探究利用转化法得到GABA过程中,给予不同条件对该种重组酵母菌的活性调节机理,寻找最利于转化法发生的条件。
发酵法与转化法各有利弊,在利用菌体直接转化底物生成γ-氨基丁酸时,通过调节人工可控培养条件,对该反应最适合发生的条件进行控制,使其达到该种重组酵母最大程度转化成为Y-氨基丁酸的效果。
为了使重组酵母菌菌内谷氨酸脱羧酶的富集以及提高γ-氨基丁酸产量的目标得以实现,进行了研究性试验,尝试利用重组酵母菌菌内的谷氨酸脱羧酶经过催化反应合成Y-氨基丁酸的量提高提供了理论与物质基础。
判定的指标可以利用改良版纸层析法测得生成丫-氨基丁酸的量。
在转化的过程中确定γ-氨基丁酸含量与底物谷氨酸的含量,计算摩尔转化率以及负流量。
GAD的诱导、分离、纯化的结果:添加不同浓度的棉籽糖(raffinose)与半乳糖(galactose),进行激活与诱导的培养重组GAD1基因载体菌。
激活培养45h
后, SC-URA 2% raffinose培养液0D值为3.65, SC-URA 2% galactose培养液OD值为0.21。
OD值越大,则证明产生的菌体数量越多,凭借的就是紫外分光光度计的作用
原理。
分析说明了添加raffinose的培养基有利于菌种的激活。
在诱导培养的过程中测得3XYP+ 6% raffinose培养液0D值为16.5,3×YP+6% galactose培养液0D值为8.1,则证明3XYP+6% raffinose液体培养基时诱导培养该重组酵母产生菌种数量较多。
将培养出来的重组酵母菌进行超声波破碎,使含有酶的液体经过低压液相色谱纯化仪进行蛋白的分离与纯化,纯化蛋白质利用凝胶电泳测定分子量,并检测不同诱导条件生成谷氨酸脱羧酶的量。
结果显示,在3×YP+6% raffinose培养基中分离到0.008g/mL,3×YP+6% galactose培养基分离到0.06g/mL,分子量为67kD。
添加raffinose的培养基可以培养的菌种数量虽然较多,但是表达GAD的效果并不理想。
所以选择添加galactose作为诱导剂效果较好。
对酶活性的测定结果:纯化获得的谷氨酸脱羧酶加入到含有底物谷氨酸的培养基中,经过3h后,使用改良纸层析法检测γ-氨基丁酸的产量。
添加galactose诱导产生的GAD使得1.75mg/4mL谷氨酸减少到0.25mg/4mL,而Y-氨基丁酸由0变为1.35mg/4mL。
添加raffinose诱导产生的GAD使
1.75mg/4mL谷氨酸减少到1.5mg/4mL,而γ-氨基丁酸由0变为0.25mg/4mL。
结果说明YP+6% galactose培养条件诱导得到谷氨酸脱羧酶酶活性较好,催化谷氨酸的效率高。
影响酶活性因子的测定结果:通过添加磷酸吡哆醛(PLP)、吡哆醇、吡哆醛三种辅酶因子,对比它们对谷氨酸脱羧酶活性影响,PLP能够促使催化谷氨酸生成GABA,并且效果好。
在温度、pH值、作用时间最优的条件下γ-氨基丁酸产量最佳时消耗PLP的量,为2.4μmol/4ml。
pH值对酶活性的影响,最适值测定结果约为4.8上下。
温度影响酶活性得出最优温度40℃。
与活性剂的作用和化学物质的作用知道异戊醇与Mn2+可使谷氨酸脱羧酶活性增高。
转化法合成GABA的优化结果:通过对转化谷氨酸产生Y-氨基丁酸这个反应所需要的条件进行研究,寻找到重组酵母发生该反应的最佳条件。
使得发生该反应最适合的温度条件应该控制在37℃,pH值约为5.0,选择使用乙酸-乙酸钠缓冲液,添加底物量为0.lmol/L,,添加菌体浓度为6%,摇床培养转速为200r/min,转化的时间约12h,这些有利条件共同作用下,菌体的转化谷氨酸的能力可以达到最理想,并且转化的效果基本稳定。
产生副反应的机会较小,可实现提高GABA的产量。
为大规模生产γ-氨基丁酸提供理论依据。