虎杖植物专用酶(白藜芦醇专用酶)

虎杖白藜芦醇Huzhang BaililuchunResveratrol from Polygonum Cuspidatum本品为以蓼科虎杖属植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根茎或根为原料提取得到的50%白藜芦醇含量的虎杖提取物为原料，用乙醇或甲醇和水一定比例混合溶液溶解，经树脂等纯化，重结晶得到的含量≥98%的反式白藜芦醇。

【性状】本品为白色至类白色的粉末；气特异，味淡。

本品难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂。

【鉴别】HPLC鉴别照高效液相色谱法（通则Y04）测定对照品溶液取反式白藜芦醇对照品适量，精密称定，置100mL棕色容量瓶中，加甲醇制成每1mL约含0.1mg的溶液。

供试品溶液取供试品适量，精密称定，置100mL棕色容量瓶中，加甲醇制成每1mL 约含0.1mg的溶液。

色谱系统十八烷基键合硅胶填充柱（4.6⨯250mm，5µm）或同类型柱；以乙腈:水（27:73，v/v）为流动相；检测波长为303nm，柱温为30℃。

理论塔板数按反式白藜芦醇峰计算应不低于7000。

测定吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。

供试品图谱中应呈现与对照品白藜芦醇色谱峰保留时间相同的色谱峰。

峰S对照溶液液相图谱【含量测定】照高效液相色谱法（通则Y04）测定对照品溶液 同HPLC 鉴别项下。

供试品溶液 同HPLC 鉴别项下。

色谱系统 同HPLC 鉴别项下。

测定 分别精密吸取照品溶液、供试品溶液各10μL 分别注入液相色谱仪，并记录色谱图。

按外标法计算出被测定供试品溶液中反式白藜芦醇组分浓度C ，供试品中待测组分含量以质量分数w 计，数值以%表示，按公式E.1计算。

%100⨯⨯=mV C w …………………………………（E.1） 式中：w ——供试品中反式白藜芦醇组分的质量分数（%）；C ——供试品溶液中反式白藜芦醇组分浓度（mg/mL ）；V ——供试品溶液A 的稀释体积（mL ）；m ——供试品的称样量（mg ）。

虎杖中白藜芦醇的分离纯化研究本研究通过详细的资料调研,以具有抗癌、抗心血管疾病等重要生理活性并具广阔市场前景的白藜芦醇为研究对象,以湖南湘西丰富而价廉的虎杖资源为原料,对虎杖中白藜芦醇的提取、分离纯化工艺进行了深入而系统的研究,确定了工艺流程、分析方法和分离纯化条件;本着开发高效的天然产物分离方法的原则,对分子印迹技术应用于白藜芦醇的分离纯化做了研究。

具体内容摘要如下: 1.研究了虎杖中药用活性成分的分析方法及稳定性。

建立了以甲醇-水为体系等度洗脱,同时测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇甙的HPLC分析方法及快速、准确测定大黄素的HPLC法;确定了定性分析虎杖中活性成分的TLC法,避免了使用氯仿等有毒试剂,方法简便,为后续实验研究提供了快速定性检测手段;对白藜芦醇的稳定性进行了研究,得出了具有指导意义的结果。

2.对虎杖中药用活性成分的提取工艺进行了研究。

建立了同时提取虎杖中白藜芦醇甙、白藜芦醇及大黄素三种活性成分的常规溶剂提取工艺,有利于虎杖资源的开发利用;针对活性成分的结构特点,筛选出一种植物精提复合酶,建立了酶法提取虎杖中白藜芦醇的工艺,与常规溶剂提取法相比,酶法提取使白藜芦醇得率由2.40mg/g提高到12.13mg/g,得率提高了5倍左右,且反应时间仅1.5h,较文献报道的方法具有酶解效率高、反应时间短等特点;对酶解后的工艺进行优化,同时考虑了白藜芦醇和大黄素的提取,结果表明,优化后的工艺具有省时、省能等特点,且产品在收率和质量上同时得到提高,从而进一步证明了酶法较常规溶剂提取法的优越性,这一研究对其它中草药的酶法提取具有一定的参考价值;探讨了酶解机制,建立了酶解动力学。

3.分离纯化虎杖提取液中白藜芦醇和大黄素的工艺研究。

对酶解-乙醇提取液通过预处理分离得到大黄素溶液,并采用硅胶柱层析技术进一步纯化,得到了纯度达95%的大黄素产品,确定了工艺条件;全面而系统地研究了采用大孔吸附树脂技术分离纯化白藜芦醇的工艺条件。

安徽科技学院学报,2010,24(6):19～24Journal of Anhui Science and Technol ogy University收稿日期:2010-07-20基金项目安徽科技学院人才专项(ZR 6)。

作者简介夏海武(5),男,山东省潍坊市人,博士,教授,主要从事植物生物技术研究。

虎杖芪合酶基因保守区的克隆及序列分析夏海武,赵　岩,苗永美,许　娜(安徽科技学院　生命科学学院,安徽　凤阳　233100)摘　要:芪合酶是白藜芦醇合成的关键酶。

本文分别以传统CT AB 法、传统S D S 法和改良S DS 法对虎杖基因组D NA 进行提取,获得符合分子生物学试验要求的高质量DNA 。

利用芪合酶基因保守区段的特异引物进行PCR 扩增,将获得的片段进行测序分析,长度为809bp,成功克隆出虎杖芪合酶基因的保守区段,为芪合酶基因工程奠定基础。

关键词:虎杖;芪合酶基因;白藜芦醇;克隆中图分类号:S567.23 文献标识码:A 文章编号:1673-8772(2010)06-0019-06C lon i ng and Ana lysis of Stilbene Syntha s e Gene C on ser vedFrag m en ts i n Polygonum cusp ida tumXI A Ha i -wu,Z HAO Yan,M I AO Y ong -m ei ,X U Na(College of Life Science,Anhui Sc ience and Technology Unive rsity,Fengyang 233100,China)Ab stra ct:Stilbene synthase is a key enzy m e in the resveratr ol synthesis .I n this pape r ,the author extrac ts the polygonum genom e DNA using both the tr aditional m ethod CT AB ,S DS and i m p r oved m ethod S DS t o get the high -quality D NA which accor ded with molecular bi ology experi m ent require m ent .By using the given p ri me rs of stil 2bene synthase gene conserva tive seg m ent f or PCR a mp lificati on,and analyzing the specific seg m ent .W hose length is 809bp ,the authe r successfully c l one s the c onservative seg ment of the polygonum stilbene synthase gene,laying the f oundation f or genetic engineering of stilbene syntha se .Key wor ds:Polygon u m cusp ida tum ;Stilbene synthase gene;Resveratr ol;C l oning白藜芦醇(R esveratr o1)是一种植物抗毒素[1],属非黄酮类多酚化合物。

虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定一、本文概述本文旨在探讨虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法及其含量测定技术。

虎杖作为一种具有广泛药用价值的天然植物，其中含有的白藜芦醇和白藜芦醇苷是其主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。

因此，研究虎杖中这两种成分的有效提取和准确测定方法对于深入理解虎杖的药理作用以及优化其临床应用具有重要意义。

本文将综述当前虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取技术，包括溶剂提取、超声波辅助提取、微波辅助提取等，并评价其优缺点。

本文还将介绍含量测定的常用方法，如高效液相色谱法、紫外可见分光光度法等，并探讨其准确性和可靠性。

通过本文的综述，旨在为虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的深入研究和应用提供有益的参考。

二、虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法虎杖，作为一种具有丰富生物活性的中草药，被广泛用于传统医学中。

其内含的白藜芦醇和白藜芦醇苷具有显著的抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生物活性，因此，对这两种成分的提取和含量测定具有重要的意义。

以下将详细介绍虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取方法。

我们需要新鲜的虎杖根茎，确保其来源清洁、无污染。

随后，将虎杖根茎进行清洗、干燥和粉碎，以便后续的提取操作。

由于白藜芦醇和白藜芦醇苷均具有一定的极性，因此，我们常选用极性溶剂如甲醇、乙醇等进行提取。

这些溶剂能够有效地溶解并提取出虎杖中的目标成分。

常用的提取方法包括浸泡提取、回流提取和超声波辅助提取等。

考虑到效率和提取效果，我们通常采用回流提取法。

具体操作如下：将粉碎后的虎杖粉末与提取溶剂混合，置于回流装置中，加热回流一定时间，使溶剂充分与原料接触，从而充分提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。

提取完成后，需要对提取液进行处理，以去除其中的杂质，提高目标成分的纯度。

常用的处理方法包括过滤、浓缩和干燥等。

通过以上步骤，我们可以有效地从虎杖中提取出白藜芦醇和白藜芦醇苷。

这为后续的含量测定和进一步研究提供了基础。

虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究虎杖中白藜芦醇苷是一种具有多种生物活性的天然化合物，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。

为了充分利用虎杖中的白藜芦醇苷并满足市场需求，研究人员进行了白藜芦醇苷的提取和分离工艺研究。

白藜芦醇苷是一种存在于植物中的多元醇类化合物，具有较低的溶解度，因而在提取和分离过程中需要采用适当的方法。

目前常用的提取方法有超声波辅助提取、浸泡提取、水蒸气蒸馏提取等。

其中，超声波辅助提取是一种较为高效的提取方法，它利用超声波的机械作用和热效应来破坏细胞壁，促进白藜芦醇苷的释放。

在超声波辅助提取过程中，首先需要将虎杖样品粉碎成适当的颗粒大小，以增加提取效率。

然后将虎杖样品与适量的溶剂（如乙醇、甲醇等）混合，放入超声波提取仪中进行提取。

超声波的作用下，虎杖中的白藜芦醇苷会逐渐释放到溶剂中。

提取时间和温度是影响提取效果的重要因素，一般来说，提取时间越长、温度越高，提取效果越好。

但是过长的提取时间和过高的温度可能会导致白藜芦醇苷的降解，因此需要找到适当的提取条件。

提取完成后，需要对提取液进行分离和纯化。

常用的分离方法有溶剂萃取、硅胶柱层析、凝胶渗透层析等。

其中，硅胶柱层析是一种常用的分离方法，它可以根据样品中化合物的亲疏水性来进行分离。

在硅胶柱层析过程中，首先需要将硅胶填料充分膨胀，然后将提取液加入硅胶柱中。

根据白藜芦醇苷和其他成分在硅胶上的亲疏水性差异，通过溶剂梯度洗脱的方法，将白藜芦醇苷从其他杂质中分离出来。

最后，通过溶剂的挥发或其他方法将白藜芦醇苷纯化得到。

还可以利用高效液相色谱（HPLC）等技术进一步提高白藜芦醇苷的纯度。

HPLC是一种基于溶液动力学的色谱技术，可以对复杂样品进行分离和检测。

在HPLC分离过程中，需要选择合适的色谱柱和流动相，通过控制流速和梯度洗脱的方法，将白藜芦醇苷从其他成分中分离出来。

最后，通过检测器对分离得到的白藜芦醇苷进行检测和定量。

虎杖中白藜芦醇苷的提取和分离工艺研究是为了充分利用这一天然药物资源并满足市场需求。

虎杖中白藜芦醇提取分离研究【摘要】目的考察虎杖中白藜芦醇苷的最佳提取分离工艺。

方法研究酶法提取虎杖中的白藜芦醇的工艺条件，从酶的种类、温度、pH值、酶解时间等方面分析。

结果最佳提取工艺为：采用植物水解酶，提取温度40℃，酶解pH值3.0，酶解时间7h，为最佳提取条件。

结论酶处理后，可显著提高虎杖中白藜芦醇的得率，且该提取工艺稳定性好且简便易行。

【关键词】虎杖；白藜芦醇；提取分离；研究虎杖为蓼科植物虎杖的根茎，主要含有[1]蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成份。

白藜芦醇和白黎芦醇苷是虎杖的主要功效成分。

白藜芦醇作为一类亲脂性多酚物质，具有抗血小板凝聚，保护肝脏，抗肿瘤活性等药理作用，特别是对心脑血管系统具有较强的药理活性。

本实验采用酶法实验，对虎杖中的白藜芦醇进行提取分离，本研究旨在为虎杖开发利用提供科学依据。

1仪器与试药1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪；AG285分析天平；KS-600d超声清洗器；Delta320pH计；HHW420型三用恒温水箱。

1.2试药虎杖粉末，批号：20060829；纤维素酶，批号：F20071116；植物水解酶、植物提取酶；白藜芦醇对照品（中国药品生物制品检定所，批号：1535-200001，纯度：99.5%；甲醇、乙醇、磷酸、磷酸二氢钾（分析纯）；乙腈（色谱纯）；蒸馏水。

2方法与结果2.1白藜芦醇的测定方法色谱条件色谱柱ODSC18；流动相乙腈∶水（0.02%磷酸）30∶70；流速1ml/min；柱温30℃；检测波长303nm；20μl进样环。

理论塔板数不低于3000；分离度大于1.5。

精密称取干燥白藜芦醇对照品330μg，置10ml容量瓶中加甲醇制成浓度33μg/ml的溶液作为对照品溶液[2]。

2.2单因素考察①试样的制取：精密称取虎杖粉末若干份，每份约0.1g，再每份加入pH=5.0缓冲盐溶液5ml。

摇匀，在45℃酶解18h后，加入20ml95%乙醇超声提取30min，取出放冷，定容至25ml，摇匀，过滤，取续滤液。