扫描电镜细胞样品制备

扫描电子显微镜(SEM)常规样品制备技术SEM常规制样方法（一）——试样的取材、固定、脱水和置换一、实验目的掌握扫描电镜制样过程：从取材、固定、脱水、置换、干燥、喷涂这一过程中样品怎样保持生活状态，从而得出接近生活状态的样品。

二、实验原理不论动物或植物组织，要求取材时操作必须快速，组织表面要清洁，必要时需超声波清洗，原理同TEM取材，但需强调的是SEM观察表面结构，所以应注意表面结构的清洁、完整和电镜下反应真实的形貌。

取材时动作要快、轻、准、大小在1mm-1cm之间，所用的器械要锋利、洁静，避免任何牵拉和挤揉样品表面的损伤，常用的固定剂有2-4%戊二醛和1%锇酸。

三、实验器材样品（动物或植物）、双面刀片、培养皿、l.5ml离心管、牙签、2-4%戊二醛、1%锇酸、0. 1M PBS缓冲液，乙醇、乙酸异戊酯。

四、实验步骤1、取材要求动作轻、迅速、准确，为了保持生活状态，应在固定前清洗掉表面杂质，即，迅速将标本放在PBS缓冲液中冲洗，也可超声波器中超10s-30s，使样品所带的污物除去（如：气管内壁上的粘液、植物叶上的灰尘等）。

2、固定（前固定）经过清洗的样品迅速投入2-4%戊二醛囤定液中，间歇振荡且室温固定约2-4小时即可。

样品固定的目的：使样品细胞的微细结构完整真实地保存下来。

如果样品没有很好地固定，那么样品在脱水时可能变形，破坏了样品的生活状态，也就是说，固定不好的材料，电镜下不能反映真实结构，所以这一步很重要。

3、冲洗0. 1M PH7.2 PBS缓冲液洗：30分钟中间换3-4次，因戊二醛与锇酸反应生成细微的沉淀，所以在后固定之前，用0. IM PBS缓冲液洗去多余的戊二醛之后，样品才可能进入锇酸固定液。

4、后固定：1%四氧化锇后固定1-2小时。

5、冲洗：重蒸水冲洗30分钟中间换3-4次，因四氧化锇与乙醇反应，所以在脱水前充分洗去残留的四氧化锇，样品才能进行脱水。

6、脱水脱水剂为乙醇，室温进行为了减少人工损伤，需要梯度脱水：30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%，每级15-20分钟，如果是动物样品，脱水时间可5-10分钟，脱水要充分完全地进行直到除尽样品中的水份为止，最后100%乙醇要重复2-3次，保证样品绝对无水。

扫描电镜细胞样品制备步骤嘿，咱今儿就来讲讲扫描电镜细胞样品制备那些事儿哈！
你想想看，细胞那么小的玩意儿，咱要想好好观察研究它们，可得下一番功夫呢！就像咱要给一个小娃娃打扮得漂漂亮亮去参加重要活动一样。

首先呢，得把细胞好好地收集起来。

这就好比去果园摘果子，得小心翼翼地把果子从树上摘下来，不能弄伤了它们。

咱得用合适的方法把细胞从它们生长的地方轻轻地取出来，可不能太粗鲁啦！
然后呢，就是给细胞洗个澡啦！把它们身上那些不需要的杂质啥的都洗掉，让它们干干净净的。

这就像是咱自己洗澡一样，把身上的脏东西都洗掉，清清爽爽的。

接下来，就是固定啦！这可重要得很呢！就好像给细胞穿上了一件坚固的铠甲，让它们能保持住自己的形态，不会东倒西歪的。

不然等会儿咱观察的时候，它们都变形了，那可咋整呀！
再之后，就是脱水啦！把细胞里面多余的水分都去掉，就像咱把湿漉漉的衣服晾干一样。

这一步可得仔细着点儿，不能让细胞受损哦！
接着呢，是干燥啦！让细胞处在一个干燥舒适的环境里，这样它们才能好好地被我们观察呀！
再往下，就是镀膜啦！这就好像给细胞披上了一层神秘的外衣，让它们在电镜下能更好地显现出来。

最后，就可以把制备好的细胞样品放到扫描电镜里面去观察啦！哇塞，你能想象到吗，通过电镜看到细胞的那一刻，就好像打开了一个微观世界的大门，里面有着无数的奥秘等着我们去探索呢！
你说这是不是很神奇呀？咱通过这一步步的操作，就能看到细胞的各种奇妙之处啦！所以呀，可别小瞧了这扫描电镜细胞样品制备的步骤哦，每一步都马虎不得呢！咱得像对待宝贝一样精心地去处理这些细胞，这样才能得到最准确、最有价值的观察结果呀！这可不是闹着玩的事儿呢！大家可得认真对待哟！。

细菌样品冷冻干燥制样方法
1) 取样：取大量样品离心（转速3000r~4000r），去除上清液，加入适当PH（7.2~7.4）的0.1 M PBS清洗三遍；清洗时菌体温柔悬浮。

2) 固定：2.5%戊二醛固定3h（此步时间非绝对，1~12h都可），用PBS清洗两遍，每遍10min。

再用纯水清洗两遍。

3) 梯度脱水：用乙醇的水溶液按30%、50%、70%、80%、90%的浓度梯度对样品进行脱水，每步15min，之后在100%乙醇的水溶液中脱水15min×2 次；再将样品置于乙醇和叔丁醇1:1混合液中15min；最后置样品于叔丁醇中15min×2次。

（此步也可以尝试不做）4) 冷冻干燥：滴加处理好的样品于5*5 mm的盖玻片上，置-80度冰箱冷冻后放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥。

5) 电镜观察：样品充分干燥后，进行扫描电镜观察。

2.5%戊二醛：
Step 1:
0.2M磷酸缓冲液的配制：（0.1M的就是稀释2倍）取50mL定容100mL
---------------------
磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6克
磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29克
双蒸馏水加至500毫升
pH调至7.4
Step 2:
戊二醛固定液的配制：
---------------------
25% 戊二醛1ml
双蒸馏水4ml
0.2mol/L磷酸缓冲液5ml
戊二醛最终浓度 2.5%
pH值7.3-7.4。

扫描电镜的样品制备
扫描电镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种高分辨率的显微镜，对于复杂的样品结构、微观形态和表面形貌的分析非常有用。

然而，要获得良好的扫描电镜显像效果，样品的制备至关重要。

下面将介绍几种常用的扫描电镜样品制备技术。

1. 金属喷涂法
金属喷涂法是扫描电镜样品制备的经典方法。

该方法使用金属喷涂仪将金属颗粒喷在样品表面，使其形成一层均匀、导电性良好的金属膜，以便在扫描电镜中观察样品的表面结构。

该方法适用于非导电样品，如细胞、生物组织、聚合物等。

2. 离子切割法
离子切割法利用离子切割机将样品切割成纤细的薄片，以便于在扫描电镜中观察。

这种方法适用于非常薄的样品，如材料薄片、芯片等。

它可以提供非常高分辨率的图像，并且可以通过纵向切割获得样品的三维结构。

3. 冷冻切片法
冷冻切片法是一种用于生物样品的扫描电镜制备方法。

该方法使用超低温技术将样品冻结，并使用超薄刀片切割成极薄的切片，通常为50~200纳米。

这可以保留样品的水感性和原始形态，并使其在扫描电镜中观察更加清晰。

4. 化学蚀刻法
化学蚀刻法是用于金属样品的扫描电镜制备方法。

该方法使用酸或碱对样品表面进行蚀刻，以去除不需要观察的材料，形成清晰的样品结构。

该方法适用于金属薄膜、晶体和合金等金属材料。

总之，良好的扫描电镜样品制备是获得高品质扫描电镜图像的关键。

每种样品都有其独特的制备方法，为了获得最好的结果，在选择合适的制备方法时需要谨慎选择。

扫描电子显微镜生物样品制备与观察细胞生物学实验报告实验目的：通过使用扫描电子显微镜（SEM），观察并比较不同生物样品的细胞结构和形态特征。

实验材料：-不同种类的生物样品（如植物叶片、昆虫翅膀、细菌培养物）-10%磷酸盐缓冲液（PBS）-2.5%葡萄糖溶液-电镜显微镜台-SEM样品支架-SEM扫描电镜实验步骤：1.收集各种生物样品，并用PBS润湿样品表面，以去除杂质。

2.将样品放置在SEM样品支架上，用细菌镊子小心地将样品固定在支架上。

3.将SEM样品支架放入SEM扫描电镜中，并调节扫描电镜的参数，如电子束的加速电压和信号放大倍数。

4.将SEM样品支架移动到扫描电镜中心位置，并确保样品表面与电子束的垂直距离适当。

5.打开电子束，在视野范围内找到有代表性的细胞区域，并通过调整焦距和扫描速度来获取清晰的图像。

6.在观察过程中，可以尝试不同的电子束参数，以获得最佳的样品成像效果。

7.观察并记录每个样品的细胞结构和形态特征，注意细胞的大小、形状和细胞器的位置等。

实验结果与讨论：通过SEM观察，我们可以清晰地看到植物叶片的气孔细胞和叶绿体的内部结构。

气孔细胞呈现出多边形的形状，并且表面布满微小的细管，这些细管是用于气体交换的通道。

叶绿体则呈现出椭圆形，并且具有叶绿素颗粒的特征，这些颗粒是光合作用中的关键结构。

昆虫翅膀的观察结果显示，翅膀表面有许多微小的鳞片组成，这些鳞片具有复杂的纹理和形状。

昆虫通过这些鳞片可以完成特定的功能，如飞行和保护。

SEM的使用使我们能够更加详细地观察到翅膀表面的微观结构。

细菌样品的观察结果显示，细菌呈现出不规则形状的胞体，表面光滑且有不规则的突起。

通过SEM的高放大倍数，可以看到细菌细胞壁的纹理和孔隙结构，这些结构可能与细菌的生长和代谢有关。

通过SEM观察不同生物样品的细胞结构和形态特征，可以增进我们对细胞生物学的理解。

SEM的高分辨率能力使我们能够观察到细胞的微观结构，从而对细胞的功能和相互作用有更深入的认识。

悬浮细胞扫描电镜的标本的制备
悬浮细胞扫描电镜的标本制备是一个关键的步骤，它需要精确
的操作和耐心。

首先，我们需要准备一个含有悬浮细胞的样品。

这
些悬浮细胞可以来自培养物中的细胞，或者从组织中分离出来。

接
下来，我们需要将这些悬浮细胞固定在一个适当的载玻片上。

固定
的方法通常包括用乙醛或氧化铂等化学物质进行固定，或者使用冷
冻固定技术。

固定后，样品需要进行脱水处理，通常使用乙醇浓度
逐渐升高的方法。

然后，样品需要被干燥，可以通过自然干燥或者
使用临界点干燥法。

接下来是金属涂覆，通常使用金属如金或铂进
行喷涂，以增加样品的导电性。

最后，样品可以被放入扫描电镜中
进行观察和成像。

在整个制备过程中，需要严格控制各个步骤的时
间和条件，以确保最终的标本能够展现出清晰的细胞结构和形态特征。

此外，在操作过程中需要注意安全，避免对人体和环境造成伤害。

总的来说，悬浮细胞扫描电镜的标本制备需要细致的操作和严
格的控制，以确保最终观察到的细胞结构和形态信息是准确可靠的。

细胞电镜步骤一、引言细胞电镜（electron microscopy）是一种利用电子束代替光束进行显微观察的技术。

相比传统的光学显微镜，细胞电镜具有更高的分辨率和放大倍率，能够观察到更细微的细胞结构，为细胞学研究提供了重要的工具。

本文将介绍细胞电镜的主要步骤。

二、样品制备1. 固定要观察细胞的内部结构，首先需要将细胞固定在样品上。

常用的固定剂包括戊二醛、冰醋酸、乙醛等。

固定剂可以杀死细胞并保持其形态和结构。

2. 切片将固定的细胞组织进行切片，常用的切片工具有超薄切片机、刮刀等。

切片的厚度通常在50-100纳米之间。

3. 上膜将切片转移到铜或金网膜上，以便在电镜中观察。

上膜时需要小心操作，避免切片的损坏。

三、脱水和浸渍1. 脱水为了观察细胞的内部结构，需要将样品中的水分逐渐去除。

通常会使用一系列浓度递增的乙醇溶液进行脱水处理。

2. 浸渍脱水后，为了使样品能够在电镜中导电，并增加样品的稳定性，需要进行浸渍处理。

常用的浸渍剂有丙酮、环氧树脂等。

四、显微观察1. 扫描电镜（SEM）扫描电镜主要用于观察样品表面的形态结构。

在扫描电镜中，电子束通过扫描样品表面，与样品反射的二次电子或反射电子相互作用，形成图像。

通过调整电子束的扫描方式和参数，可以获得不同放大倍率和清晰度的图像。

2. 透射电镜（TEM）透射电镜主要用于观察样品的内部结构。

在透射电镜中，电子束穿过样品，与样品内部的结构相互作用，形成投影图像。

通过调整电子束的聚焦和对比度，可以获得高分辨率的细胞内部结构图像。

五、图像处理和分析1. 图像获取使用电镜观察样品后，需要将观察到的图像记录下来。

可以使用相机或数字图像采集系统将图像转换为数字信号，保存在计算机中。

2. 图像处理对于采集到的图像，可以使用图像处理软件进行处理和增强。

常见的处理方法包括去噪、增加对比度、调整亮度等。

3. 图像分析通过对处理后的图像进行分析，可以获取细胞内部结构的定量信息。

常见的分析方法包括测量细胞器的大小、计算细胞器的分布密度等。