几种肉类的鉴别检验
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肉的新鲜度的检验方案肉类的新鲜度是指在一定时间内(通常以肉属于安全食用范围的时间为标准)由于与外界环境有关原因而产生的肉的各种特性的改变程度。
对于肉类的新鲜度检验,主要有以下几种方案:1.观察外观:肉类新鲜度的一种常用检查方法是通过外观进行判断。
新鲜的肉通常应具有明亮的红色、肌肉有弹性、表面光滑、无明显异味等特点。
若肉色呈暗黄、褐色,肉质松软,表面粘稠,或者有腐烂、发臭等异常情况,则说明肉类已不新鲜。
2.臭味检测:人的嗅觉对于肉类的变质具有一定的敏感性。
通过嗅觉的感觉,可以初步判断肉类的新鲜度。
新鲜的肉类应该具有无异味的特点,若出现刺鼻、腐臭等异常气味,则说明肉类已经变质。
3.PH值测定:肉类新鲜度与其PH值相关。
正常情况下,肉类的PH值应该为5.6-6.2之间。
当肉类变质时,由于蛋白质降解产生氨基酸和其他物质,使PH值发生变化,从而可以通过PH值的测定来判断肉类的新鲜度。
4.微生物检测:微生物的分解过程是导致肉类腐烂变质的主要原因之一、通过对肉类样本的微生物检测,可以确定是否存在肉类变质的微生物,并综合评估肉类的新鲜度。
常用的微生物检测指标包括总菌落数、大肠杆菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。
5.水分含量测定:肉类的水分含量是肉质保持新鲜度的重要因素之一、水分含量的变化可以用来判断肉类的新鲜程度。
一般来说,新鲜的肉类水分含量高于75%,若水分含量降低,则说明肉类已经变质。
6.检测肉类中的硫酸还原菌:硫酸还原菌是一种常见的腐败菌,在肉类的变质过程中起着重要的作用。
通过检测肉类中的硫酸还原菌,可以初步判断肉类的新鲜度。
需要注意的是,以上仅为常见的一些肉类新鲜度检验方案,针对不同类型的肉类,可能还需要结合具体的检验标准和方法来进行综合评估。
此外,新鲜度的评价还受到保存温度、湿度等因素的影响,因此在进行肉类新鲜度检验时,还需要综合考虑以上因素。
病害肉检测标准
病害肉的检测标准主要包括外观检查和化学指标的测定。
在外观检查方面,新鲜猪肉的皮肤应呈乳白色,脂肪洁白且有光泽。
瘦肉部分的红色均匀分布,手按下去会立即复原。
如果肉质出现问题,肌肉可能会暗红,脂肪带有血迹,脏器有肿胀或出血点。
这些都可以作为判断肉类是否新鲜的外观标准。
在化学指标方面,挥发性盐基氮和组胺是判断肉类新鲜度的关键指标。
国家标准规定,鲜(冻)猪肉、牛肉、羊肉、兔肉中挥发性盐基氮应
≤20mg/100g。
如果这些指标含量高,说明肉类的腐败程度越高,可以通过这些来判断肉类的新鲜度。
此外,pH值也是判断肉类新鲜度的一个重要指标。
pH值在以下时常为未经过排酸(迅速冷却)处理的肉;~之间为鲜肉;~之间为次鲜肉;以上时为有问题的肉,当pH值大于时,其肉体中的挥发性盐基氮一般都处于超标状态。
以上信息仅供参考,如有疑问或需要更专业的检测建议咨询食品检测机构或相关专家。
新鲜猪肉的鉴别食品安全问题是全人类共同关注的问题,食品安全直接关到人的身体健康和生命安全,关系到国家的健康发展,关系到社会的和谐稳定。
肉品的不新鲜能引起食物中毒,轻者腹泻,重者死亡。
在我国这样一个猪肉消费大国,人均消费肉类47kg,其中猪肉占31kg。
尽管近年来猪肉在肉食消费中的比例有所下降,但仍占肉类消费总量的65%一70%,是肉类生产和消费的主体。
那么我们在日常生活中要如何才能买到新鲜的猪肉呢?下面就介绍一些有关新鲜猪肉的感官鉴别方法。
猪肉的新鲜度一般可以分为三个等级:新鲜猪肉、次鲜猪肉、变质猪肉。
我们主要是通过看、摸、闻,从猪肉的外观、气味、弹性、脂肪等方面来判定肉的新鲜程度。
1、新鲜猪肉:表面有一层微干或微湿的外膜,呈淡红色,有光泽,切断面稍湿,不粘手,肉汁透明。
具有新鲜猪肉正常的气味。
质地紧密且富有弹性,用手指按压凹陷后会立即复原。
脂肪呈白色,具有光泽,有时呈肌肉红色,柔软而富有弹性。
2、次鲜猪肉:表面有一层风干或潮湿的外膜,呈暗灰色,无光泽,切断面的色泽比新鲜的肉暗,有粘性,肉汁混浊。
在肉的表层能嗅到轻微的氨味,酸味或酸霉味,但在肉的深层却没有这些气味。
质地比新鲜肉柔弱,弹性小,用手指按压凹陷后不能完全复原。
脂肪呈灰色,无光泽,容易粘手,有时略带油脂酸败味和哈喇味。
3、变质猪肉:表面外膜极度干燥或粘手,呈灰色或淡绿色,发粘并有霉变现象,切断面也呈暗灰色或淡色,很粘,肉汁严重浑浊。
其气味不论在肉的表层还是深层均有腐臭气味。
腐败变质肉由于自身被分解严重,组织失去原有的弹性而出现不同程度的腐败,用手指按压后凹陷,不但不能复原,有时手指还可以把肉剌穿。
脂肪表面污秽,有粘液,霉变呈浅绿色,脂肪组织很软,具有油酸腐败气味。
此外,在挑选生肉时,还要特别注意以下几种情况。
一是死猪肉,其胴体皮肤有淤血呈紫红色,脂肪灰红,肌肉暗红,血管中充满着黑红色的凝固血液,因死亡时间长短不同臭味也不同。
二是注水肉,这种肉由于含有多余的水分,致使肌肉色泽变淡,或呈淡灰红色,有的偏黄,从切面上看湿漉漉的。
实验二肉制品的卫生检验一、目的要求通过实验掌握灌肠、腊肠、火腿等的感官检验方法与标准,熟悉肉制品化学残留物的化学检验方法。
正确掌握肉制品的食用原则。
二、感官检验 〖HTK〗(一)肉类制品质量感官鉴别原则肉类制品包括灌肠(肚)类、酱卤肉类、烧烤肉类、肴肉、咸肉、腊肉火腿以及板鸭、烧鸡等。
以外观、色泽、组织状态、气味和滋味等感官指标为依据的,注意肉类制品的色泽是否鲜明,有无加入人工合成色素;肉质的坚实程度和弹性如何;有无异臭、异物、霉斑等;是否具有该类制品所特有的正常气味和滋味。
其中注意观察肉制品的颜色、光泽是否有变化,品尝其滋味是否鲜美,有无异臭异味等。
(二)几种肉制品感官检验标准1、香肠(腊肠)、香肚的质量卫生要求用于鲜(冻)猪肉切碎或绞碎后加入辅助材料灌进经加工的肠衣或膀胱,再晾晒或烘焙而成的肉制品。
肠衣(肠皮)干燥完整,并与内容物密切结合,坚实而有弹力,无粘液及霉斑。
切面坚实而湿润,肉呈均匀的蔷薇红色,脂肪为白色。
无腐臭,无酸败味。
2、广式腊味(腊肠、腊肉)广式腊味系指用鲜猪肉切成条状,经腌制(腊肉)或切碎腌制灌入肠衣(腊肠)后,经烘焙或晾晒而成的肉制品。
3、火腿的级别、质量鉴别与卫生标准火腿有三种类型:南腿(金华火腿)、北腿(苏北火腿)、云腿(榕峰火腿)其中以金华火腿最为著名。
不管何种火腿,其胚料要求屠宰时放血干净、不带毛、不吹气、腿肉新鲜、皮薄无损伤、无斑痕、腿爪细、腿心丰满、加工时需经修腿胚、腿形、腌制、浸腿、洗刷、晒腿、发酵等七个工序。
一级腿:腿样整洁、油头小。
二级腿:腿爪粗,皮稍厚、味稍次,式样整齐。
三级腿:腿爪粗,加工粗糙,稍有破伤并稍有味。
四级腿:也就是等级较差的火腿,有异味,加工粗糙,皮厚,骨外露,式样差。
最佳上品:每只腿重约2.5kg~4kg,皮整齐、腿爪细、腿心丰满、油头小、无裂缝、整腿式样美观、整洁。
质量优劣还应注意以下几个方面:外表火腿肉块的外面应干燥、清洁,无虫蛀现象,肉皮坚硬,肉质结实;若肉块表面显得湿润、松软、或有霉烂、虫蛀,皮上有粘液者,则为劣品。
4种肉类成分多重PCR的鉴定方法淑辉1,蔡军1,王忠才1,李舟1,王建昌2,王素华1(1.温州海关综合服务中心,浙州325027;2-庄海中心,河北庄050051)摘要:为建立4种肉类(牛肉、猪肉、鸡肉和马肉)成分的鉴别方法,本试验基于动物线粒体细胞色素b基因,设计1条通用正向引物CF,以牛、猪、鸡和马的特定DNA序列设计4条特异性反向引物R,优化反应条件,建立了多重PCR检测方法。
该方法对牛、猪、鸡和马肉的检测灵敏度为10x10Tng/$L,具有良好的特异性。
对80份市售肉制品样本进行检测,检出掺本31份,与本实验的荧PCR试剂盒结果一致$本试验建立的多重PCR方法能效地对牛、猪、鸡和马源性成分进行$关键词:多重PCR;&牛肉;猪肉;鸡肉&马肉中图分类号:TS251.5+5文献标志码:A文章编号:0529—6005(2020)11—0065—04A Multiplex PCR MetUod for tie Identification of Four Meat IngredientsYUAN Shu-hul1,CAI Jun1,WANG Zhong-cal1,LI Zhou1,WANG Jian-chang2,WANG Su-hua1(1.Synthesis Technique Service Center of Wenzhou Customs,Wenzhou325027,China;2.Technology Center of Shijiazhuang Customs,Shijiazhuang050051,China)Abstract:In order to establish a method to identiR4kinds of meat ingredient(beef,pork,chicken,horse),a multiplex PCR was established by designing a common fosvard pSmef(CF)based on the miRchond/ai cytochrome b gene and4species-specific reverse primers(R)based on specific DNA sequences of cattle,pig,chicken and horse.The sensitivity of beef,pork,chicken,horse was10x 10_3ng/$L,with good specificity.Eighty food samples were tested,of which31were adulterated samples.The test results were consistent with the qPCR kit used in our laboratory.The multiplex PCR can electively detect the ingredRnts of beef,pork,chicken and horse.Key words:multiplex PCR;identification;beef;pork;chicken;homeCorreseonding auttor:WANG Su-hua,E-mail:29801719@qq..om肉类食 范围内面临的问题, 2014年欧洲暴发的“马肉风波”揭露了多国肉的掺假现象。
2018 年第 6 期(下半月)Nong Min Zhi Fu Zhi You 农民致富之友191科研◎畜牧兽医公、母猪肉和肥猪肉的感官鉴别杨立军随着肉类消费的多样化发展,猪肉占肉类消费的比重逐步下降。
但到目前为止,猪肉消费仍占肉类消费的60%以上。
猪肉仍然是老百姓餐桌上消耗量最大的副食品,是老百姓生活中主要的日常消费品。
但是随着人民消费观念的更新、生活质量的提高,人们对猪肉的卫生质量要求也越来越高。
如何提高老百姓对劣质猪肉的认识水平和鉴别能力 ,是当今老百姓非常关心的话题。
但在集贸市场常常有公、母猪肉假充肥猪肉出售,以次充好;让消费者很难分辨,损害了消费者的利益。
现在就笔者多年来的工作经验,为消费者提供一些科学的感官鉴别方法。
1 皮肤:1.1 公猪肉的皮肤厚硬,粗糙,尤其是肩胛部皮肤最厚。
1.2 母猪肉的皮肤也厚硬、粗糙发黄,多有皱纹,组织结构松弛,无弹性,毛孔粗大而深,臀部皮肤有大如米粒,小如芝麻的凹陷(俗称沙眼),皮肉层次分离。
1.3 肥猪肉皮肤表面细腻,毛孔细而浅,皮肉结合紧密。
2 脂肪2.1 公猪肉脂肪色淡、皮下脂肪少,肌间脂肪几乎没有。
2.2 母猪肉皮下脂肪脆硬,呈青白色,触摸时粘附的脂肪少,有的母猪肉,在皮与皮下脂肪之间的一层脂肪呈粉红色(俗称红线)。
2.3 肥猪肉皮下脂肪细腻,呈白色,质硬粘稠,触摸时粘附的脂肪多。
肌间有薄脂肪。
3 肌肉:3.1 公、母猪肌肉呈深红色或暗红色,肌纤维较粗,纹路明显,弹性差,肉质硬实水分较少,断面颗粒大。
3.2 肥猪肌肉呈浅红色,纤维细,断面颗粒小含水量较多。
4 乳头4.1 母猪肉乳头长而硬,乳头基部大而松软,呈圆锥形,乳腺特别明显,呈淡粉红色,横切乳头,两乳池明显可见;纵切乳房部,可见到淡粉色海绵状乳腺,且偶有乳汁渗出。
有些出售的老母猪肉已切去乳房,在肉尸上有时见不到乳头。
4.2 肥猪肉乳头短而软,紧贴皮肤,乳腺孔小,不明显。
5 腹围:母猪腹部较肥猪宽阔6 肋骨:6.1 公、母猪肉肋骨扁而宽,隆起显著,附着肌肉少,骨膜中透黄,尤其是前五根肋骨更为明显。
几种肉类(猪、马、牛、羊和鸡)的鉴别检验1. 猪马牛羊鸡肉的特点1.1 猪肉(豚肉)新鲜猪肉肌肉红色均匀.有光泽,脂肪洁白。
外表微干或微湿润,不粘手。
指压后凹陷立即恢复。
具有鲜猪肉的正常气味。
肉汤透明澄清,脂肪团聚于表面.具有香味;次鲜猪肉的肌网色稍暗,脂肪缺乏光泽。
外表于燥或粘手,新切面湿润。
指压后的凹陷恢复或不能完全恢复。
有氨味或酸味。
肉汤稍有混浊,脂肪成小粒浮于表面,无鲜味。
肉质紧密,弹性好,皮薄。
膘肥嫩、色雪白,且有光泽。
瘦肉部分呈淡红色,有光泽,不发黏。
猪脂肪层厚度适宜(一般应占总量的33%左右)且是洁白色,没有黄膘色。
1.2 马肉马肉的色泽为暗红色或苍红色,如和空气接触较久,可发生微青色的光泽,肌纤维粗大,扁平呈椭圆形,排列疏松,质地松软,有一定粘腻感,切面颗粒感明显,肌间不夹杂脂肪,脂肪呈黄色或暗黄色,柔软且粘腻,具有马肉固有的微酸气味(煮后微酸味更浓)。
1.3 牛肉新鲜肉肌肉有光泽,红色均匀,脂肪洁白或呈蛋黄色;变质肉的肌肉色暗,无光泽,脂肪黄绿色。
外表微干或有风干膜,不黏手,弹性好;变质肉的外表黏手或极度干燥,新切面发黏,指压后凹陷不能恢复,留有明显压痕。
具有鲜肉味儿;变质肉有异味甚至臭味。
牛肉按照部位分为上脑、眼肉、里脊、外脊、臀肉、腱子等,并根据肉质鲜嫩、脂肪沉积分为S、A、B等级别。
胸肉熟后食之脆而嫩、肥而不腻;肋条筋肉丛生,熟后肉质松嫩。
1.4 羊肉新鲜羊肉肉色红而均匀,有光泽,肉质坚而细,有弹性,外表微干,不粘手,气味新鲜,气味独特具有羊膻味,无其他异味羊肉也有它独到的营养价值。
羊肉肉质细致,易于消化,味道可口。
营养价值很高,每100克羊肉平均含蛋白质13.5克,羊肉的生理价值很高,几乎全部都可以被人体消化和吸收利用,是肉类中营养丰富的理想食物。
由于羊肉"热性",发热量大,人们在严寒的冬天吃了羊肉之后,身上产生一种舒适的温暖感,可以增强人体的御寒能力,故羊肉能滋补身骨,还能清肝明日。
1.5 鸡肉嘴部新鲜的家禽,嘴部有光泽、干燥,有弹性,无异味。
不新鲜的家禽,嘴部无光泽,部分失去弹性,稍有腐败味。
腐败的家禽,嘴部暗淡,角质部软化,口角有粘液,有腐败味。
眼部新鲜家禽的眼部,眼球充满整个眼窝,角膜有光泽。
如眼球部分下陷,角膜无光为不太新鲜。
眼球下陷大,同时有粘液,角膜暗淡的说明已腐败。
皮肤新鲜的家禽皮肤呈淡黄色或淡白色,表面干燥,具有特有的气味。
不新鲜的家禽皮肤呈淡灰色或淡黄色,表面发潮,有轻腐败味。
腐败的家禽,皮肤灰黄,有的地方带淡绿色,表面湿润,有霉味或腐败味。
脂肪新鲜的家禽脂肪色2. 几种肉的对比鉴别2.1牛肉和猪肉检验鉴别牛肉和猪肉味差很多,也可以用眼睛看,牛肉肉丝较粗而且较硬,色泽较重。
可以用手指甲掐一下呀,牛肉是不容易被扯断的。
也可以用鼻子闻一下,有没有牛的味道。
对于猪肉和牛肉,我们可从色泽、气味、黏度、弹性等多个方面进行初步鉴别。
鲜牛肉肌肉呈均匀的红色,具有光泽,脂肪呈白色或乳黄色,比猪肉的脂肪明显要少。
鲜猪肉的肌肉有光泽,红色均匀,外表微干或微湿润,且有鲜猪肉特有的正常气味。
母猪肉肌肉纤维粗,横切面颗粒大,切割时韧性韧性大。
牛肉的纤维长度较长,肉质结构粗并紧凑;而猪肉的纤维长度较短,肉质结构细并松散;食用牛肉时感到肉老,食用猪肉时感到肉嫩。
2.2牛肉与马肉检验鉴别2.2.1 试验鉴别马肉牛肉2.2.2 肉的形态鉴别3.2.3 脂肪的检验马肉 牛肉 肉的脂肪 呈深黄色或黄色, 质地软而粘稠,剪一小片放在指间, 则稍熔并有粘液感 呈白色(幼龄牛和水牛)或微黄色, 在室温下呈硬固状, 手揉搓易碎散2.2.4骨骼的检查马: 肋骨18对, 较细, 肋窄圆, 肋间隙大, 第一颈椎无横突孔。
牛: 肋骨13对, 扁平, 宽阔, 肋间隙小, 水牛更小, 第一颈椎有横突孔。
2.2.5淋巴结检查马: 淋巴结不融合, 由多个大小不等的淋巴结合成淋巴团块, 呈扭结状。
牛: 淋巴结呈单个, 切面呈灰褐色。
2.3 绵羊肉与山羊肉的检验鉴别脂肪燃烧 取小块马的脂肪, 用火点燃后, 油珠滴到10℃ ~20℃凉水面上呈豆油珠样, 浮在水面上, 稍碰即成小的油状物,无凝集用同样方法点燃牛脂肪后,油珠滴到水面上呈大的蜡片状凝固块, 浮在水面上脂肪熔点试验 取小块马的脂肪放在水中, 加温至37℃~41℃ 时则熔化马肉牛的脂肪则不熔化肉的气味 取一小块肉片放置在酒精灯上烧灼散发出汗腥味取一小块肉片放置在酒精灯上烧灼,散发出膻味 手感手拍打新鲜的马肉, 手上粘有血迹和油脂 手拍打新鲜的牛肉, 则无任何物粘手马肉 牛肉 形态 肌肉粗糙, 横断面呈大颗粒, 质地松软,弹性差, 肌间很少夹杂脂肪 肌肉比较细, 横断面颗粒细,肌肉间夹有脂肪, 呈大理石样花纹肌肉色泽呈暗红色, 横断面呈淡紫色, 放置时间长, 变成黑色 呈淡棕红色, 活动大的组织部分肌肉色泽深1)看肌肉绵羊肉黏手,山羊肉发散,不黏手。
2)看肉上的毛形绵羊肉毛卷曲,山羊肉硬直。
3)看肌肉纤维绵羊肉纤维细短,山羊肉纤维粗长。
4)看肋骨绵羊的肋骨窄而短,山羊的则宽而长。
5)颜色绵羊肉肌肉呈暗红色,肉纤维细而软肌肉间夹有白色脂肪,脂肪较硬且脆。
山羊肉肉色较绵羊肉淡,有皮下脂肪,只在腹部有较多的脂肪,其肉有膻味。
6)看肉上未去净的羊毛形状绵羊肉毛卷曲,山羊肉毛硬直。
7)看肋骨绵羊肉肋骨窄而短,山羊肉肋骨宽而长。
从吃法上说,山羊肉更适合清炖和烤羊肉串。
近年来,由于山羊肉的胆固醇、脂肪含量低,还用它开发出了很多保健食品。
3. 肉的实验室鉴别——食品中几种肉类成分多重PCR的快速鉴别方法多重PCR(universal primers-multiplex PCR,UP-M-PCR)方法,使用DNeasy 试剂盒提取法、SDS-蛋白酶K 法和CTAB-蛋白酶K 法分别提取肉类中总DNA,通过比较提取效率和纯度,确定提取肉类中总DNA 的方法;基于动物线粒体细胞色素 b 基因的差异性位点,设计两组各 5 条长度不同的多重PCR 引物,建立并优化多重PCR 反应体系,通过电泳检测扩增产物分子量差异实现4 种肉类的快速鉴别。
3.1 试验方法3.1.1 肉制品中总DNA 的提取分别使用DNeasy组织细胞DNA提取试剂盒、SDS-蛋白酶K 法及CTAB-蛋白酶K法提取生鲜的猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉中的总DNA。
其中,DNeasy DNA 提取试剂盒法按说明书操作;CTAB-蛋白酶K法则参照Dooley 等的方法。
SDS-蛋白酶K法与CTAB法均使用氛/氯仿抽提进行核酸纯化。
50 mg样品的总DNA均溶解于100 μL TE缓冲液中,于OD测定吸光度值,计算DNA浓度和纯度。
260280/3.1.2 引物设计引物的设计与特异性位点的选择依照Matsunaga 等的方法并作适当修改。
根据猪、牛、山羊、绵羊、鸡线粒体细胞色素b 基因序列,采用正向引物共用、反向引物特异的策略,设计两套各5条多重PCR 引物,第一套引物长27—28 bp,第二套引物长18 —20 bp,两套引物使用相同的种属特异性位点,即第二套引物由第一套引物截短而得到。
两套引物在线粒体基因组中的结合位置见图1 ,引物序列、Tm值与扩增片段大小见表1 。
3.1.3 多重PCR的反应条件及优化在50μL的多重PCR反应体系中进行猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉4种肉类的鉴别。
反应MgCl(2.5 mmol·1-L)体系为:反应缓冲液(10 ×)5 μL,dNTP(2.5 mmol·1-L)4 μL,23 μL,Taq 酶0.5 μL,正向引物与4条反向引物(10 μmol·1-L,第一套或第二套)各1 μL,模板2 μL。
使用梯度PCR对退火温度进行优化,反应条件为:94 ℃3 min ;94℃30 s 、50—55 ℃30 s 、72℃45 s ,共30 个循环;72 ℃7 min。
取15 µL 反应产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。
3.1.4 两套引物特异性的验证与比较按照1.3.3 的反应体系及优化的反应条件,分别使用4 种目标肉类DNA及其两两等比例混合物、鱼肉、马肉、驴肉和大豆来源的DNA对两套引物的检测特异性进行验证与比较。
3.1.5 多重PCR 产物测序使用优化的多重PCR 方法对猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉4种目标肉类DNA进行扩增,物电泳后割胶回收纯化。
对纯化产物进行T 载体连接、转化、克隆筛选及鉴定,并委托测序。
测序结果与GenBank上的已知序列进行比对。
3.1.6 市售样本的实际检测使用优化的多重PCR2.2 多重PCR反应条件优化与引物特异性验证通过梯度PCR 试验,综合反应特异性与产物量,确定使用两套引物的最佳退火温度均为52 ℃。
分别使用4 种目标肉类DNA及其两两混合物、鱼肉、马肉、驴肉、大豆来源的DNA为模板,对两套引物进行特异性验证及比较(图2)。
由图 2 可见,使用两套引物针对4 种目标肉类DNA 进行检测,均在设计位置能观察到特异性条带,未见明显非特异性扩增,且与鱼肉、马肉、驴肉和大豆DNA均无交叉反应。
然而,第二套引物在检测目标肉类两两混合的DNA时,当牛肉DNA与羊肉或猪肉DNA中的一种混合,牛肉成分均未被检出。
这可能是由于第二套引物过短,与不同模板正确配对的碱基比例相差较大,在多重PCR 体系中优先与羊肉或猪肉DNA结合,从而影响了检测的特异性与稳定性。
对南京农业大学食品科技学院肉方法对市售的80 份各类肉制品进行的鉴定,验证方法的实用价值,并了解市场上肉类掺假的真实状况。
3.2 肉中总DNA的提取分别使用DNeasy试剂盒、经典的SDS-蛋白酶K法和CTAB-蛋白酶K 法提取猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉4 种肉类的总DNA。
表2列出了应用3 种方法对生鲜肉提取的结果。
SDS-蛋白酶K 法与DNeasy试剂盒法所提取的DNA浓度处于同一个数量级,SDS-蛋白酶K 法在浓度与纯度方面均略优。
CTAB-蛋白酶K法由于对肌肉组织消化效果较差,因此DNA提取效率显著偏低。
相比于SDS-蛋白酶K 法,DNeasy试剂盒大大节省了提取时间,且无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂,综合考虑提取效率及试验安全性,后续试验中均采用DNeasy 试剂盒提取食品中的总DNA。