大豆抗原蛋白elisa试剂盒使用方法

大豆抗原蛋白elisa试剂盒使用方法检测范围：96T2 ng/L -48 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中大豆抗原蛋白含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大豆抗原蛋白水平。

用纯化的大豆抗原蛋白抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入大豆抗原蛋白，再与HRP标记的大豆抗原蛋白抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的大豆抗原蛋白呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大豆抗原蛋白浓度。

试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测和定量分析抗原或抗体的存在。

本文档旨在提供一份详细的ELISA操作规程，以确保实验的准确性和可重复性。

二、材料和试剂1. 微孔板：96孔的聚合物微孔板。

2. 洗涤缓冲液：含有洗涤剂的磷酸盐缓冲液。

3. 标准品：已知浓度的抗原或抗体。

4. 样品：待测的抗原或抗体。

5. 酶标记的二抗：与待测物特异性结合的酶标记二抗。

6. 底物溶液：含有酶底物的缓冲液。

7. 停止溶液：停止底物反应的溶液。

三、实验步骤1. 预处理a. 将微孔板中的96孔填满洗涤缓冲液，轻轻摇动，倒掉液体。

b. 重复上述步骤三次，以确保孔内的洗涤剂充分清洗。

c. 将微孔板倒置在吸水纸上，用纸巾轻轻拍干。

2. 标准曲线制备a. 取出标准品，按照不同浓度分别加入微孔板中的孔中，每个浓度加入3个孔。

b. 加入相同体积的洗涤缓冲液作为空白对照组，每个浓度加入3个孔。

c. 将微孔板盖上密封膜，孵育一段时间（根据实验需求而定）。

d. 将密封膜去除，倒掉孔内液体。

3. 样品处理a. 取出待测样品，根据实验需求适当稀释。

b. 将样品加入微孔板中的孔中，每个样品加入3个孔。

c. 将微孔板盖上密封膜，孵育一段时间（根据实验需求而定）。

d. 将密封膜去除，倒掉孔内液体。

4. 酶标记二抗添加a. 取出酶标记的二抗，按照实验需求适当稀释。

b. 将酶标记二抗加入微孔板中的孔中，每个孔加入相同体积的二抗。

c. 将微孔板盖上密封膜，孵育一段时间（根据实验需求而定）。

d. 将密封膜去除，倒掉孔内液体。

5. 底物反应a. 取出底物溶液，加入微孔板中的孔中，每个孔加入相同体积的底物溶液。

b. 将微孔板盖上密封膜，孵育一段时间（根据实验需求而定）。

6. 反应停止a. 取出停止溶液，加入微孔板中的孔中，每个孔加入相同体积的停止溶液。

b. 轻轻摇动微孔板，确保溶液混合均匀。

7. 测量和分析a. 使用ELISA阅读器测量每个孔的吸光度值。

ELISA试剂盒操作方法ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学试验技术，用于检测体内或体外的蛋白质、抗体、抗原等物质。

ELISA试剂盒是用于进行ELISA实验的一种常见装置。

下面将为您介绍ELISA试剂盒的操作方法。

1.准备工作a.预热-将试剂盒中的所有试剂预热到适当的温度，通常为室温至37°C之间。

b.样品处理-准备好待测样品，可以是血清、细胞上清液、组织提取物等。

如果样品中含有大量的蛋白质或杂质，可以进行样品处理，如稀释、蛋白质去除等。

c.标准品准备-试剂盒通常包含一系列浓度已知的标准品，用于制作标准曲线。

按照说明书的要求，用缓冲液或适当的稀释液将标准品稀释为不同浓度的工作液。

2.涂膜板的处理a.涂膜板选择-根据实验需求选择合适的涂膜板，通常有96孔、384孔等。

b.板钉定位-使用板钉或其他适当的方法将涂膜板固定在适当的工作台上。

c.预涂底物溶液加入-将试剂盒提供的预涂底物溶液加入涂膜板的孔中，注意保持各孔液面平整。

3.样品与试剂添加a.标准品和样品加入-按照实验设计的需要，将标准品和待测样品分别加入涂膜板的孔中。

b.阳性对照和阴性对照加入-根据试剂盒的要求，加入阳性对照和阴性对照。

c.洗涤液加入-在每次试剂或样品加入后，使用专用的洗涤液将孔洗涤，以清除无关物质。

4.反应与显色a.结合抗体加入-按照试剂盒说明书要求，加入适当的结合抗体，用于与待测物质结合形成复合物。

b.二抗加入-加入带有底物标记的二抗，与结合抗体结合形成复合物。

c.显色底物加入-加入含有适当底物的显色底物试剂，使底物与酶结合并发出信号。

5.反应停止与测量a.反应停止液加入-在适当的时间点，根据试剂盒的说明，加入反应停止液，停止底物的酶反应。

b.光密封膜或保护板加盖-加盖光密封膜或保护板，防止溶液蒸发或污染。

6.读取和数据处理a.读取吸光度-使用ELISA读板仪读取各孔的吸光度值。

ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或抗体在样本中的存在量。

本操作规程旨在提供详细的ELISA实验步骤，确保实验的准确性和可重复性。

二、材料和试剂准备1. 微孔板：96孔或其他规格的微孔板。

2. 抗原或抗体：根据实验需求选择适当的抗原或抗体。

3. 样本：待测样本，如血清、尿液等。

4. 酶标记抗体：选择与待测抗原或抗体特异性结合的酶标记抗体。

5. 酶标记底物：选择适当的酶标记底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。

6. 停止液：选择适当的停止液，如硫酸。

三、实验步骤1. 预处理a. 将微孔板的孔洗净，并将待测样本、阳性对照和阴性对照分别加入孔中。

b. 将微孔板密封或覆盖，孵育一定时间，使抗原或抗体与样本中的特定成分结合。

c. 弃去孔中液体，将孔洗净。

2. 添加酶标记抗体a. 将酶标记抗体加入每个孔中，使其与已结合在孔中的抗原或抗体结合。

b. 将微孔板密封或覆盖，孵育一定时间，使酶标记抗体与抗原或抗体结合。

3. 洗涤a. 弃去孔中液体，将孔洗净，重复2-3次，以去除未结合的酶标记抗体。

4. 添加酶标记底物a. 将酶标记底物加入每个孔中，使其与酶标记抗体结合。

b. 将微孔板密封或覆盖，孵育一定时间，使底物与酶反应产生显色。

5. 反应停止a. 加入适量的停止液，停止底物与酶的反应，防止进一步显色。

b. 使用酶标仪测量吸光度，记录各孔的光密度值。

6. 数据分析a. 根据实验设计和标准曲线，计算待测样本中特定抗原或抗体的浓度。

b. 统计数据并进行统计学分析，如平均值、标准差、t检验等。

四、实验注意事项1. 所有操作都应在洁净的实验室环境中进行，避免污染。

2. 严格按照实验步骤和操作规程进行，确保实验的准确性和可重复性。

3. 注意使用适当的阴性对照和阳性对照，以验证实验结果的准确性。

4. 注意控制实验条件，如温度、时间等，以保证实验结果的可比性。

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和浓度。

ELISA检测试剂盒是用于进行ELISA实验的组合套装，包括抗体或抗原、酶标记物、底物、缓冲液等。

本文将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，以帮助用户顺利进行ELISA实验。

1.准备实验材料：-ELISA检测试剂盒：根据实验需要选择适当的ELISA检测试剂盒，确保其在储存和运输过程中无损坏。

-样本：准备需要检测的样本，如血清、尿液、组织提取物等。

确保样本的质量和浓度满足实验要求。

-微孔板：根据试剂盒的要求选择合适的微孔板，同时注意其质量有无污染。

-基本实验设备：如计量器、洗板机、显微镜等。

2.实验步骤：-取出储存在4℃的试剂，确保其达到室温（一般为20-25℃），再根据实验步骤进行下一步操作。

-预处理样本：根据试剂盒的说明书，进行样本的预处理，包括稀释、纯化、稳定化等步骤。

-加样：将样本按照试剂盒要求的体积加入微孔板中，通常每个孔需要加入100-200μL的样品。

-洗板：使用洗板机或手工操作，将孔中的杂质洗净。

洗板时应注意洗涤缓冲液的使用浓度和洗涤次数。

-加入特异性抗体：根据试剂盒的说明书，将稀释好的特异性抗体加入各孔中，确保操作的准确性和每孔的稀释倍数。

-洗板：重复第4步的操作，将未结合的抗体洗净。

-加入酶标记物：根据试剂盒的说明书，将稀释好的酶标记物加入各孔中，确保加入的量准确无误。

-洗板：重复第4步的操作，将未结合的酶标记物洗净。

-加入底物：将稀释好的底物加入各孔中，使其与酶标记物反应，生成可视化的颜色。

-终止反应：根据试剂盒的要求，在一定的反应时间后，加入终止剂停止反应。

终止剂的选择需符合试剂盒的要求。

-检测结果：使用酶标仪或目视观察检测孔中的颜色变化，通过测量吸光度或颜色强度来确定样本中目标物的浓度。

3.数据分析：-计算样本的结果：根据试剂盒的说明书，根据吸光度或颜色强度测量结果，计算样本中目标物的浓度。

定量测定人血清中幽门螺杆菌（Hp）IgG抗体
ELISA检测试剂盒操作流程
一、操作流程：
1.根据需要，将若干孔德条带放置在支架上；
2.将标本、阴性质控、阳性质控以及标准品作1：200稀释（将５μｌ样品加稀
释液稀释到1ml，混匀）；
3.取100μl已稀释的血清样品、标准品和阴性质控、阳性质控加入相应得孔板
内（质控和标准品至少需做两孔），A1孔不加液体作为空白底色；
4.在37℃温箱中放置30分钟；
5.到时间后将孔被液体甩去，并用1X洗涤液反复清洗4次，最后用蒸馏水洗
一次；
6.在每孔内加100μl酶结合物（需按比例稀释，除A1孔外），轻微混匀；
7.在37℃温箱中放置30分钟；
8.甩去孔内酶结合物，用1X洗涤液反复清洗4次，最后用蒸馏水洗一次；
9.在每孔内加100μlTMB（使用前混合Ａ液和Ｂ液）（包括A1孔也加），轻微
混匀；
10.37℃放置15分钟；
11.每孔加50μl 1N硫酸终止液（包括A1孔），轻微混匀；
12.在15分钟内，用酶标仪在450nm处读取吸光度值（OD值）（将酶标仪A1
孔设定为空白孔）。

二、结果换算：
以标准样品的OD值为轴，标准样品的数值为X轴，在方格纸或计算机上作出标准曲线，然后根据标本的OD值读数在标准曲线上读出相应的IgG抗体浓度。

三、结果判定：
阴性：抗体浓度≤20u/ml为正常
阳性：抗体浓度＞20u/ml为阳性。

ELISA操作规程一、实验目的本实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）的操作，检测目标物质的存在与浓度，以实现对生物样本中特定抗原或抗体的定量分析。

二、实验材料1. 96孔ELISA板2. 目标抗原或抗体样本3. 特异性一抗和二抗4. 辅助试剂：洗涤缓冲液、稀释缓冲液、底物和停止液5. 高精度微量移液器和相应的移液器头6. 高精度电子天平7. 显微镜和酶标仪三、实验步骤1. 预处理：将96孔ELISA板放置在实验台上，加入稀释缓冲液，轻轻震荡混合，然后倒掉液体。

重复此步骤3次。

2. 样本添加：将待测样本加入96孔ELISA板中，每孔加入相同体积的样本。

3. 孵育：将ELISA板盖上密封膜，置于恒温箱中孵育一定时间，使样本中的抗原或抗体与固相特异性一抗结合。

4. 洗涤：将洗涤缓冲液加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后倒掉液体。

重复此步骤3次，以洗去未结合的物质。

5. 二抗结合：将特异性二抗加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后盖上密封膜，继续孵育一定时间，使二抗与固相特异性一抗结合。

6. 洗涤：重复步骤4。

7. 底物添加：将底物加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后暗处孵育一定时间，使底物与二抗结合的酶发生反应。

8. 反应停止：加入停止液，终止底物与酶的反应。

9. 测量：将96孔ELISA板放入酶标仪中，根据实验要求选择相应波长进行测量。

记录各孔的吸光度值。

10. 数据分析：根据实验目的，利用标准曲线或其他方法，计算出目标物质的浓度。

四、实验注意事项1. 实验前需准备好所有试剂和材料，确保实验环境清洁和无尘。

2. 操作过程中需佩戴手套，避免污染样本和试剂。

3. 洗涤步骤中，确保洗涤缓冲液充分覆盖每个孔，且每次洗涤液倒掉后，孔内无残留液体。

4. 孵育和暗处孵育步骤中，需控制好时间和温度，以确保反应的充分进行。

5. 底物和停止液需按照说明书的要求配制和使用，避免使用过期或变质的试剂。

家用抗原试剂盒使用方法
1、采样前：通常在做抗原检测前需注意确认试剂盒的有效期，从试剂盒中取出内容物，一般包含说明书、检测卡、拭子、样本提取液、样本提取管。

且使用前要阅读说明书，不同品牌操作可能有细微区别。

另外，在采样前应注意洗手或用75%酒精等快速消毒。

把样本提取液打开后全部倒入样本提取管内。

打开检测卡包装，取出检测卡。

检测结果出来前，尽量不要再触碰检测卡，以免污染，影响检测结果。

如果鼻腔内分泌物较多，在测试前可以擤鼻涕。

2、采样中：取出拭子，注意不要触碰到拭子头。

头部向后抬高，将拭子贴着鼻内壁慢慢推进1厘米-1.5厘米，一直推到看不见拭子头为止，贴着鼻腔黏膜轻轻转动4圈，停留15秒，这主要是为了在采样时增加接触面和采样的量。

然后将同一拭子在另一鼻孔采样，也是转动4圈，停留足15秒。

将拭子放入样本提取管内，拭子头浸入提取液内，边挤压边转动拭子15秒。

将拭子放入原来的包装袋中，不再使用，避免污染周围环境。

将样本提取管的盖子盖紧。

将提取管翻转过来，从盖口处滴3滴提取液到检测卡上。

等待10-15分钟后即可判断结果，期间不要触碰检测卡。

3、采样后：若C和T处均显示出红色或紫色条带，则为阳性。

C处显示出红色或紫色条带，而T处未显示条带，则为阴性。

C处若不显示红色条带，则提示检测无效。

ELISA试剂盒操作方法1.准备工作-将所需试剂和物质取出，并按照使用说明书中的要求进行储存和保存。

确保试剂完整无损，并严格遵守保存条件。

2.样品处理-根据试剂盒的要求，处理待测样品。

这可能涉及到稀释、离心、过滤等步骤，以确保样品符合试剂盒的要求。

注意避免样品的污染和损坏。

3.准备试剂和标准曲线-根据试剂盒的要求，准备所需的试剂和标准曲线。

试剂通常由酶标板和洗涤缓冲液组成。

标准曲线是用于确定未知浓度样品的参考标准。

4.酶标板涂层-先加入涂层抗体或抗原到酶标板的孔中，然后将其在室温下孵育一段时间。

这会使孔中形成抗原或抗体的层，以便后续的反应。

5.吸附溶液去除-将酶标板颠倒并用纸巾轻轻拍干，以将未吸收的溶液去除。

6.样品和标准品加入-根据试剂盒的要求，将样品和标准品加入到孔中。

同时留有几个孔作为空白对照。

注意将样品和标准品加入到正确的孔中，避免交叉污染。

7.孵育和洗涤-放置酶标板在孵育箱中（一般在37摄氏度）孵育一段时间，以促使样品中的目标物质与酶标记的抗体结合。

然后将液体从孔中洗涤掉，以去除未结合的物质。

8.酶标记的二抗加入-加入酶标记的二抗（通常是抗人IgG的辣根过氧化物酶）到酶标板中的每个孔中，使其与目标物质结合。

9.孵育和洗涤-将酶标板重新放回孵育箱中孵育，然后再次进行洗涤，以去除未结合的物质。

10.底物添加-向每个孔中加入底物，使其与酶发生反应，产生颜色的变化。

反应时间根据试剂盒的要求进行控制。

11.反应终止-加入反应停止液，停止酶的反应，防止进一步的颜色变化。

具体的反应停止方法要根据试剂盒的要求进行。

12.颜色的测定-使用酶标仪或光度计测量各个孔中颜色的强度，并将其与标准曲线上的标准值进行比较，以确定样品中目标物质的浓度。

以上是ELISA试剂盒的基本操作步骤。

不同的试剂盒可能略有不同的要求和步骤，因此在操作之前务必仔细阅读和遵守试剂盒的使用说明书。