QBHHS JC003-2013 发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测办法

发酵豆粕各项指标检测方法与标准发酵工艺2010-12-31 15:16:17 阅读86 评论0 字号：大中小订阅1、水份、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、灰份、钙和磷的分析方法全部采用国标法。

2、总有机酸测定采用氢氧化钠滴定的方法和乳酸测定采用气象色谱。

3、pH的测定采用玻璃电极pHS-3C型pH计测定。

4、可溶蛋白的测定方法5、小肽含量的测定水份的测定水份测定直接参见国标测定完水分后的样品需要测定其中的总有机酸的含量，其数值为A，并计算有机酸的挥发量。

水份含量的计算时应当扣除这部分有机酸的挥发量，否则会出现水分超标现象。

总有机酸检测试剂：NaOH标准溶液（邻苯二甲酸氢钾标定），酚酞指示剂仪器:磁力搅拌器离心机方法：（1）取发酵后鲜样品15g 置于150ml烧杯中加入溶于100ml去离子水，在磁力搅拌器上浸提30min。

（2）取部分浸提样离心10min(3000r/min)。

（3）取上清液15ml, 加30ml去离子水稀释（以消除底色的影响），加酚酞指示剂四滴，用0.1molNaOH 标准溶液滴定，并记录到终点消耗NaOH体积。

（终点到溶液呈现粉红）计算乳酸（％）＝N(NaOH)×V(NaOH) ×0.09008/15×115/15gN(NaOH):NaOH标准溶液的浓度；V(NaOH) ：消耗NaOH标准溶液体积；0.09008：乳酸的毫克当量。

0.1mol氢氧化钠的配制与标定1、配制：称取9.6g氢氧化钠，溶于100ml水中，摇匀，注入聚乙烯容器中，密闭放置至溶液清亮。

用塑料管虹吸5ml的上清液，注入2000ml无二氧化碳水中(将去离子水煮沸5分后冷却)，摇匀。

2、标定称取0.67g于105~110℃烘至恒重的基准的邻苯二甲酸氢钾，准确至0.0001g，溶于50ml的无二氧化碳水中，加4滴酚酞指示剂（0.1％），用配制好的氢氧化钠溶液滴定至溶液呈粉红色，同时作空白试验。

发酵豆粕检测方法（参考）目录1.检测用仪器简介 (2)2.变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳 (3)3.Elisa 大豆球蛋白（酶联免疫法） (6)4.小肽的检测（酸溶蛋白） (10)5.寡糖的检测——薄板层析法（TLC） (11)6.乳酸的检测 (12)7.蛋白溶解度的检测（PS） (13)8.发酵豆粕蛋白溶解度的检测（改良） (14)9.水溶性蛋白的检测 (15)10.挥发性盐基氮（VBN） (17)11.PH 值测定 (19)12.水苏糖含量的测定 (20)13.水分、粗蛋白、粗灰分、粗纤维、尿素酶活性的检测 (20)1、检测用仪器简介2、变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）电泳聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速而且可重复的方法。

通过对电泳条带的观察和分析，可以很明显的看出发酵前后或不同产品的抗原蛋白含量。

一、 原理SDS —聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE ）电泳主要依据蛋白质的分子量对豆粕中的抗原蛋白进行分离。

SDS 与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折迭结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。

SDS —蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。

由于在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。

SDS —PAGE 因易于操作和用途广泛， 成为许多研究领域中一种重要的分析技术。

二、 仪器 1、电泳仪及电泳槽 2、振荡器3、离心机（10000 转）4、移液枪（大、中、小）5、离心管（7ml 、5ml 或 1.5ml 、1ml ）三、 试剂： 1、单体母液： 100ml 丙烯酰胺（ACR ） 30g 甲叉双丙烯酰胺 0.8g去离子水定容至 100ml ，棕色瓶 4℃下存放。

可保存 3 个月。

2、分离胶缓冲液（（PH=8.8） 100mlTris-base （1.5mol/L ） 18.17gSDS 0.4g 浓 HCL 调节 PH 至 8.8，定容至 100ml ，过滤，4℃存放。

发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研究彭辉才1粱明振1’张宏福2(1广西大学动物科技学院,广西南宁530005;2北京畜牧兽医研究所营养学国家重点实验室, 北京海淀区100094摘要:豆粕中最主要的抗营养因子是胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原;本试验对8种发酵豆粕进行测定,前两者含量极低未检出。

用SDS-PAGE凝胶电泳定性检测大豆抗原中的B一伴大豆球蛋白(B--Conglycinin和大豆球蛋白(Glycinin,6种条带模糊,抗原消失,结果表明,生物发酵是一种有效的钝化抗营养因子的方法。

关健词:胰蛋白酶抑制因子凝集素13一伴大豆球蛋白大豆球蛋白测定发酵豆粕指是通过现代生物发酵技术对原料豆粕进行发酵处理后的产物。

发酵过程中可产生蛋白酶、非淀粉多糖酶和植酸酶等多种酶活,其目的就是消除抗营养因子,把大分子量的大豆蛋白质分解为多肽、寡肽、小肽,从而增加水溶性,提高消化率,利于动物消化吸收。

这些酶把纤维类物质分解为糖,部分糖被转化为乳酸,并产生大量有益微生物,使豆粕转化成高营养价值的功能性饲料。

发酵豆柏可替代日粮中血浆蛋白粉、鱼粉、肠膜蛋白和乳清粉等动物性饲料原料,可替代日粮中控制腹泻的预防性抗生素,大大降低生产成本,减少畜禽养殖对动物性饲料原料的依赖,杜绝动物性饲料原料所带来的疾病传播,提高养殖业的安全与效益。

大豆的抗营养因子有蛋白酶抑制因子(protease inhibitors,大豆凝集素(SBA、大豆抗原、非淀粉多糖(NSP、植酸(phytic acid、单宁、大豆寡糖、脲酶、.大豆异黄酮、大豆皂甙、致甲状腺肿因子、生氰糖甙等。

这些抗营养因子会导致人和动物胰腺肿大、过敏反应、生长缓慢、日粮养分利用率下降以及其他一些不良生理反应。

本试验测定起主要抗营养作用的胰蛋白酶抑制因子、凝集素及大豆抗原中的大豆球蛋白和B一伴大豆球蛋白。

1材料与方法1.1腮酶的测定脲酶活性测定参照国标GB8622--88执行。

豆粕发酵蛋白中抗原蛋白和不良寡糖的检测
李旺军;方华;季春源
【期刊名称】《粮食与饲料工业》
【年(卷),期】2013(000)004
【摘要】介绍了豆粕和发酵豆粕产品中抗原蛋白和不良寡糖的检测方法,并将从市场上收集到的不同生产厂家发酵豆粕产品,分别通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法和薄板层析法检测其中抗原蛋白和不良寡糖的降解情况,同时做了简要分析.结果表明:不同厂家生产的发酵豆粕产品有很大的差异,抗原蛋白和不良寡糖的降解情况参差不齐:部分产品中的抗原蛋白和不良寡糖与豆粕相当,完全没有降解；抗原蛋白和不良寡糖均完全降解的产品并不多.
【总页数】5页(P61-65)
【作者】李旺军;方华;季春源
【作者单位】上海源耀生物科技有限公司,上海201316
【正文语种】中文
【中图分类】S816.2;S816.42
【相关文献】
1.利用蛋白酶产生菌固态发酵去除豆粕中抗原蛋白
2.不同处理方法对豆粕中抗原蛋白和酸溶蛋白的影响
3.不同酶制剂对豆粕中抗原蛋白的影响
4.发酵豆粕抗原蛋白的客观评价方法
5.有效检测发酵豆粕中抗原蛋白的新方法
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发酵豆粕的品质评定作者：李旺，孙二刚，李建恩，等来源：《江西饲料》 2015年第4期李旺1,2孙二刚2李建恩2赵丽霞2程传红2（1. 河南科技大学动物科技学院洛阳471003；2. 河南宏翔生物科技有限公司汝州467500）摘要：本文就发酵豆粕评价的几个主要指标：粗蛋白、小肽、挥发性盐基氮、蛋白质溶解度、大豆抗原和总有机酸进行关联分析。

指出评价发酵豆粕的品质评定不能只关注几个指标，要对相关指标进行关联分析和综合评价才能全面客观确定发酵豆粕的品质。

关键词：动物营养；发酵豆粕；品质评定中图分类号：S816.17文献标识码：A文章编号：1008-6137（2015）04-0001-040 引言众所周知，蛋白质饲料是饲料原料中非常重要的一类，优质蛋白原料短缺是短期内无法解决的问题。

优质蛋白原料的缺乏，导致鱼粉、优质肉粉、乳清粉等动物性原料成为动物养殖业的奢侈品。

人们逐步考虑用植物性蛋白原料在特殊动物群体中（如仔猪）使用，大豆粕作为主要的蛋白原料在大部分动物饲料中使用，然而豆粕中含有多种抗营养因子，其蛋白质生物转化率较低。

目前已在豆粕中发现了10余种抗营养因子(ANFS)，这些特点决定了豆粕在幼龄动物中使用受到限制[1]。

微生物在生长繁殖过程中能够产生丰富的酶系，并且产生维生素、寡糖、氨基酸、脂肪酸等代谢产物，这些酶可以分解豆粕中的大分子蛋白变为小肽，代谢产物能够改善豆粕的风味和适口性，使豆粕的营养价值进一步提高[2]。

因此，国内外已有很多饲料原料企业开始发酵豆粕的生产和销售，虽然产品名称都是发酵豆粕，但产品营养成分差异很大、品质良莠不齐。

由于产品没有国家标准，现行的行业标准出台较晚，相应发酵指标的检测复杂，用户缺乏参考，在产品的选择上存在盲目性。

有些企业甚至为了美化主要指标而采用了添加无机氮、热处理、后加有机酸等手段迷惑市场。

本文围绕发酵豆粕的几个关键指标建立起几个指标的综合评定方法，确保全面完整的评定发酵豆粕的品质。

豆粕品质的检测方法一、评定指标1、1：抗胰蛋白酶的活性：Trypsin Inhibitor Activity TIA大豆粕在0。

01mol/LnaOH浸泡1h过滤,滤液用PBPA水解.测胰蛋白酶活性TIU.1、2：尿酶活性（Urease Activity UA）国际标准法（ISO）、PH增值法（ΔPH法）、扩散法、酚红法。

CHINA规定ΔPH《0。

4 在0.02-0.2之间是优质豆粕.UA与TAI几乎同步失活.在加热过度以前,TIA以全部失活.1、3:蛋白质溶解度:(Protein Solubility)美国乔治大学:Dale & Araba (1987)以检测豆粕是否加热过度.一定量的豆粕与0.2%NaOH溶液混合离心过滤,滤液凯氏测氮.PS<70%,则加热过度,70-80%为适宜,测时其灵敏度不够,粒度影响,当粒度在60-80目时方稳定.1、4：有效赖氨酸:赖与精氨酸属热敏性AA,高温时Lys与还原糖发生Maillard反应.测定法有:A染料结合法(DBL):二硝基氟苯(FDNB),三硝基磺酸(TNBS),酸性橙-12,茚三酮发生特异性呈色反应.B 高效液相色谱法(HPLC)1、5：蛋白质的水溶解度和氮的水溶解度：蛋的质的水溶解度（PDI）与氮的水溶解度（NSI），二者只是与水混合后的搅拌强度不一样。

PDI是8500r/min的速度搅拌10min，NDI是120r/min搅拌30min。

PDI测定豆粕的加热程度比UA和PS（NaOH）灵敏，NSI在7-27.8%是可以接受。

NSI低于10%则为加热过度。

Balloun & Hgymard(1959):加热时间延长，NSI降低，加热过度，则大大降低，鸡的增重与饲料报酬降低。

1、6考马氏亮蓝法：Kratzer(1989): 考马氏亮蓝对蛋白质考马氏亮蓝考马氏亮蓝显色对AA不显色并与PS相关度好但考法测的实际值大大低于凯氏法测的蛋白质溶解度。

1方法薄板层析法（TLC）。

2原理利用不同大小的糖分子在硅胶薄板上的扩散速度的大小不同，将发酵豆粕中的寡糖分开。

3仪器及试剂3.1硅胶板：10*10cm；3.2层析缸（可供放置硅胶板）与硅胶板配套；3.3烘箱；3.4移液枪(10μl)以及其配套枪头；3.5高速离心机；3.6250ml 具塞锥形瓶；3.7乙醇（分析纯）3.8正丙醇（分析纯）3.9乙酸（分析纯）3.10α-萘酚（分析纯）3.11正磷酸（分析纯）4试剂的配制4.1展开液：正丙醇：乙酸：水＝1:1:0.1(V/V/V)4.2显色液：α-萘酚1ml 正磷酸10ml 乙醇989ml 共1000ml5实验方法及步骤检测技术规范与标准方法编号：QB/HHS JC002-2013修订：第1版第1次修改发酵豆粕中不良寡糖的定性检测方法起草：赵丽霞审核：刘永垒批准：执行日期：2013年06月15日5.1寡糖标样：用豆粕代替。

5.2样品的预处理准确称取发酵豆粕样品5.0g于250mL三角瓶中，加入50.0mL80％的乙醇溶液，70℃水浴浸提1h。

取2mL浸提液，10000r/min离心10min，4℃保藏备用。

5.3样品的测定在预制硅胶板上点样，点样量为5μL，点样干燥后在展开液中展开，展开至离硅胶板前沿2cm处。

自然晾干后，喷淋显色液，在140℃下烘5min显色。

6结果判定对比硅胶层析板上，样品和标样的条带，直接判读发酵豆粕中寡糖的降解情况。

不同发酵豆粕样品的TLC图谱6.1样品中寡糖的定性检测结果：1-4号：++++5-6号：+++7号：—8号：++6.2定性判定标准如下：++++：完全没有降解；(图谱斑点与豆粕相同，表现为三个斑点)+++：基本没有降解；(除了豆粕中的三个斑点外，蔗糖上方还多了一个单糖)++：降解不完全；(与豆粕相同有三个斑点，但亮度较暗，如8号样品)+：基本降解；(对应豆粕中的三个样品亮度较暗或很浅)—：完全降解；(图谱上无斑点，表现为图谱中非常干净)。

蛋白源饲料新研究利用现代生物技术将豆粕转化为优质蛋白质饲料原料，是国际研究开发热点，产品问世不到十年，技术和产业化水平在国际上以丹麦最为突出。

我国在这方面的研究始于上世纪九十年代末，目前国内仍处于大规模产业化的初期，已有几十家企业生产发酵豆粕，但品质参差不齐，也没有统一标准，饲料企业在选择产品上缺乏科学的依据，因此制定发酵豆粕行业标准已成为必要。

1 豆粕发酵的目的明确豆粕发酵的目的，才能够确定评判发酵豆粕质量的主要指标。

豆粕经过发酵其主要目的有以下四个方面：1.1 破坏豆粕中抗营养因子豆粕中含有胰蛋白酶抑制因子、低聚糖、凝集素、植酸、脲酶等抗营养因子，发酵过程中通过微生物、酶及发酵产生的有机酸的作用，使得抗营养因子被降解或者钝化，从而得到破坏。

1.2 消除豆粕蛋白的抗原性豆粕中含有的7S和11S蛋白具有很强的抗原性，幼龄动物对其尤为敏感。

在发酵过程中，主要是通过将其降解而使其失去抗原性。

1.3 降解大分子蛋白质豆粕中11S和7S蛋白分子量分别为350KD和180KD，通过发酵酶解，被降解为氨基酸及各种多肽，有利于动物的吸收利用。

1.4 形成各种有益发酵产物目前豆粕发酵均采用枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌等安全菌株，产品发酵后往往含有较高数量的有益菌和有机酸、蛋白酶等代谢产物。

2 发酵豆粕评判程序对发酵豆粕的评判，可以按四个步骤进行，需要检测的指标如下：2.1 感官评判包括细度、色泽、粘度、气味。

2.2 常规理化分析包括蛋白含量、水分、灰分、酸度、TCA-N。

2.3 非常规理化分析包括SDS-PAGE电泳、挥发性盐基氮、胰蛋白酶抑制因子、脲酶活性、有益活菌数。

2.4 深度分析包括抗原定量、低聚糖（棉籽糖和水苏糖）、大豆凝集素、全氨基酸组成分析、蛋白酶活性、尿素氮等。

3 发酵豆粕评判指标的检测和判定3.1 色、香、味和粘度豆粕维持一定的温度经过发酵、干燥后颜色变深，国内外优质的发酵豆粕皆为棕黄色，如果颜色浅而与豆粕一致，有可能发酵程度不够或掺入其他浅色蛋白原料。

固态发酵豆粕蛋白质品质评价指标的研究
单达聪;王四新;季海峰;刘辉
【期刊名称】《饲料工业》
【年(卷),期】2012()21
【摘要】分别开展两个试验,从检测指标相关性和仔猪饲养效果两方面研究发酵豆粕蛋白质品质评价指标。

试验一:设置发酵工艺的不同参数获得8个发酵豆粕样品(每样品3个重复),检测蛋白质水解度及其系列产物指标,从指标相关性和替代性缩减并确定可用的蛋白质品质评价指标;试验二:设置仔猪饲养试验,分5组,每组12头,测定仔猪生产性能。

从检测指标对仔猪生产性能的影响关系,确定蛋白质品质评价指标。

结果表明:酸溶蛋白质(或蛋白质水解度)和挥发性盐基总氮含量可作为评价发酵豆粕蛋白质品质的主要指标。

【总页数】4页(P13-16)
【关键词】发酵豆粕;蛋白质品质;评价指标;酸溶蛋白;挥发性盐基总氮
【作者】单达聪;王四新;季海峰;刘辉
【作者单位】北京市农林科学院畜牧兽医研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S816.15
【相关文献】
1.五菌联合固态发酵生产高含量粗蛋白质豆粕的研究 [J], 王丽;宋贤良;谢茜怡;徐嘉颖
2.复合益生菌固态发酵对豆粕营养品质影响的研究 [J], 侯楠楠;谢全喜;雷春红;杨枭;谷巍
3.乳酸菌固态发酵酶解对豆粕、棉籽粕和菜籽粕粗蛋白质、pH、酸度及抗营养因子含量的影响 [J], 魏炳栋;党修利;邱玉朗;陈群;李林;刘海燕
4.三种益生菌发酵剂固态发酵对豆粕营养品质的影响 [J], 王梅; 谢全喜; 侯楠楠; 雷春红; 谷巍
5.固态发酵工艺对豆粕蛋白质降解度影响的研究 [J], 单达聪;王四新;季海峰;刘辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

发酵豆粕饲用品质的评定指标及其应用摘要植物肽蛋白饲料发酵豆粕用品质的评定指标主要有感官指标、常规理化指标、非常规理化指标与尝试检测指标等，本方就这些指标的应用及应注意的问题进行了讨论，指出要正确认识植物肽蛋白饲料发酵豆粕的饲用品质，必须从感观、抗营养因子去除程度、小分子蛋白含量、挥发性盐基氮及有益菌、乳酸含量等方面对其饲用品质进行综合的整体评定。

关键词植物肽蛋白发酵豆粕饲用品质评定指标应用植物肽蛋白饲料发酵豆粕的饲用品质评定指标主要有感官指标、常规理化指标、非常规理化指标与尝试检测指标等。

1.感官指标及其在植物肽蛋白饲料发酵豆粕饲用品质评定上的应用1.1正常植物肽蛋白饲料发酵的色、香、味与粘度色：植物肽蛋白饲料发酵皆为棕黄色，这是由于豆粕经过发酵干燥颜色变深所致。

如果颜色较浅且不均匀，或与豆粕一致，有可能发酵程度不够或掺入生豆粕或其它浅色蛋白原料。

此外，同一批产品颜色应一致，不同批的产品颜色也应一致或接近一致。

香：淡淡的酸香味，无异味与霉味。

加适量的水煮开后有很强且愉快的发酵酸香气，无氨臭。

掺入了载机酸的植物肽蛋白饲料发酵豆粕，酸味较刺激且不均匀。

味：品尝正常无异物感，略带酸涩味。

粘度：植物肽蛋白饲料发酵豆粕按1：1~2加水调和后可感觉其粘度。

水泡评定：将植物肽蛋白饲料发酵豆粕放置到透明烧杯中用水泡，如果溶液及固体植物颜色金黄或灰黄且均匀，又无发黑杂志和黒（硬颗粒则为未发酵或发酵不彻底的豆粕），表明烘干时加热均匀，没有烘干过度，对营养成分保存较好。

闻之有酸香味但无刺鼻感。

上浮的杂质中无赖皮及其它植物杂质，手捏揉觉柔软但无明显颗粒感。

用水不断轻柔冲洗发现水溶物质较多，最后剩下较少渣滓，则质量较好。

这样的豆粕发酵程度较深，经发酵的其高分子蛋白（﹥66.2ku）、中分子蛋白（25~66.2ku）减少，小分子蛋白（﹤25ku）提高，还有更小的物质如肽、氨基酸等，水解度提高，故手捏无硬物颗粒感。

1.2凭感官指标对植物肽蛋白饲料发酵饮用品质评定的局限性常见的植物肽蛋白饲料发酵掺假是往豆粕中掺入其它非豆粕蛋白原料，常见的有玉米蛋白、大米蛋白、棉粕、菜粕与花生粕等植物源蛋白，或肉骨粉、氨基酸菌体蛋白、水解羽毛粉、水解皮革粉与劣质蛋白胨等以提高蛋白含量，但却降低了植物肽蛋白饮料发酵豆粕的饲用品质。

饲用豆粕国家标准1 范围本标准规格了饲料用大豆粕（带皮大豆粕和去皮大豆粕）的技术指标、质量分级、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存。

2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

2.1 氢氧化钾蛋白质溶解度大豆粕样品在规定的条件下，可溶于0.2%氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量占样品中总的粗蛋白质含量的质量百分数。

3 要求3.1 感官性状本品呈浅黄褐色或浅黄色不规则的碎片状或粗粉状，色泽一致，无发酵、无霉变、结块、虫蛀及异味异臭。

3.2 夹杂物不得掺入饲料用大豆粕以外的物质，若加入抗氧剂、防霉剂、抗结块剂等添加剂时，要具体说明加入的品种和数量。

3.3技术指标及质量分级3.4 卫生标准应符合GB 13078中的有关规定。

4 实验方法4.1 感官性状和夹杂物的检验按GB/T 14698的规定进行。

4.2 水分的测定按GB/T 6435的规定进行。

4.3 粗蛋白质的测定按GB/T 6432的规定进行。

4.4 粗纤维的测定按GB/T 6434的规定进行。

4.5 粗灰分的测定按GB/T 6438的规定进行。

4.6 尿素酶活性的测定按GB/T 8622-1988的规定进行。

4.7 氢氧化钾蛋白质溶解度的测定4.7.1 方法原理氢氧化钾蛋白质溶解度可以反映大豆粕产品加热过度的情况。

不同加热成都的大豆粕，氢氧化钾蛋白质溶解度不同。

先测定大豆粕样品在规定的条件下，可溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量；再测定同一大豆粕样品中总的粗蛋白含量，计算出氢氧化钾蛋白质溶解度。

4.7.2 试剂除非另有说明，再分析中仅使用确认为分析纯的试剂，所用的水为按GB/T 6682中规定的三级水。

4.7.2.1 0.2%的氢氧化钾溶液：2.44g氢氧化钾溶解于水中，稀释并定容至1L。

4.7.3 仪器设备 4.7.3.1 实验室用样品粉碎机 4.7.3.2 样品筛：孔径0.25mm4.7.3.3 分析天平：感量0.0001g4.7.3.4 磁力搅拌器。

发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测——SDS-PAGE法1．适用范围本标准适用于测定发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测。

2．仪器设备2.1蛋白电泳仪：2.1.1 电泳仪；（建议使用：北京六一仪器DYY-2C型）2.1.2 电泳槽；（建议使用：美国伯乐公司的mini型）2.2 25μl微量进样器；2.3 制胶装置；（与电泳槽配套出售，包括玻璃板(厚度分别为1.0 mm和 1.5mm各一套)，梳子，拨胶板）2.4 移液枪(1000μl,200μl,10μl)以及其配套枪头；（属于常规实验耗材）3．试剂3.1 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED；（建议购至上海申能博彩，Chemisonic 进口分装，必须要进口的产品！国产做出来的结果很差）；分析纯；3.2 无水酒精，分析纯；3.3 甘氨酸，分析纯；3.4 Tris，分析纯；3.5 考马斯亮兰R250，分析纯；3.6甲醇，分析纯；3.7 冰醋酸，分析纯；3.8 甘油（丙三醇），分析纯；3.9 β-巯基乙醇，分析纯；3.10 溴酚蓝，分析纯；3.11 HCl，分析纯；4.试剂的配置4.1 SDS-PAGE溶液的配制：30%丙烯酰胺的配制：丙烯酰胺 30.0gN’N-甲叉双丙烯酰胺 0.8g去离子水定容至100ml4.2 10%过硫酸铵：将1g过硫酸铵溶于10.00ml去离子水中。

2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8)：称取Tris 121.14g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至8.8(要求准确)。

1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8)：称取Tris 60.57g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至6.8(要求准确)。

10%SDS：称取5gSDS溶于50ml蒸馏水中。

1.0% 溴酚兰：称取0.05g溴酚兰溶于5ml蒸馏水中。

4.3 染色液：考马斯亮兰R250 0.25g甲醇 45.40ml冰醋酸 9.20ml水 45.40ml4.4 脱色液：甲醇 456.0ml冰醋酸 72.0ml水 472.0ml4.5 4×分离胶缓冲液：2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8) 75ml10%SDS 4ml蒸馏水 21ml10%过硫酸铵 5ml4.6 4×堆积胶缓冲液：1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 50ml10%SDS 4ml蒸馏水 46ml10%过硫酸铵 5ml4.7 电泳缓冲液： Tris 3.0g甘氨酸 14.4gSDS 1.0g定容至1L，用HCl调节pH为8.3。

豆粕质量的检测要点及方法豆粕是大豆经过提取豆油后得到的一种副产品，按照提取的方法不同，可以分为一浸豆粕和二浸豆粕2种。

其中以浸提法提取豆油后的副产品为一浸豆粕，而先以压榨取油，再经过浸提取油后所得的副产品称为二浸豆粕。

在整个加工过程中对温度的控制极为重要，温度过高会影响到蛋白质含量，从而直接关系到豆粕的质量和使用。

温度过低会增加豆粕的水分含量，而水分含量高则会影响储存期内豆粕的质量，一浸豆粕的生产工艺较为先进，蛋白质含量高，是国内目前现货市场上流通的主要品种。

作为一种高蛋白质饲料，豆粕是制作牲畜与家禽饲料的主要原料，通常占饲料含量的15%，在我国饲料生产中占据重要的位置。

但是在实际生产中，生产厂家一般都只重视出油率的高低，而对大豆饼粕品质影响的研究甚少，经常出现豆粕饲料利用率低、蛋白质含量低、酸败、霉变、搀假等问题。

为此，本文就豆粕质量检测方面及解决方法作以下阐述。

1 豆粕的物理性质1.1 优质大豆粕的物理性质根据国家标准，优质大豆粕应具备以下特点。

颜色：浅黄色至褐色，颜色过深表示加热过度，太浅则表示加热不足。

整批豆粕色泽应基本一致。

味道：具有烤大豆香味，无酸败、霉变、焦化等异味，无生豆腥味。

质地：均匀流动性好，呈不规则碎片状、粉状或粒状，不含过量杂质。

1.2 存在的问题现在很多饲料公司在检查大豆粕的物理性质时，忽视对大豆粕原料的粒度检查。

粒度检查是大豆粕质量优劣的重要方面，它不仅是感官指标，同时也是质量指标。

首先，大豆粕的粒度、形状、颜色、气味等感官指标给人以质量好坏的直观感觉；其次，粒度的不均匀也就意味着品质的一致性差，通常大块豆粕中残油、残溶、尿素酶活性不能有效保证达到质量指标的要求；再则，粒度适当且均匀的豆粕可减小饲料生产中粉碎的负荷，容易与其他配料混合均匀，提高饲料的生产效果。

据李清晓报道，不同粉碎粒度豆粕的体内养分消化率差异较显著。

1.3 掺假鉴别1.3.1 掺入棉籽粕的鉴别取被检大豆粕于30～50倍显微镜下观察，如掺入棉籽饼可见样品中散布细短绒棉纤维，可见卷曲、半透明、有光泽、白色；混有少量深褐色或黑色的棉籽外壳碎片，壳厚且有韧性，在碎片断面有浅色和深褐色相交叠的色层。