中药复方中柴胡皂甙A和D的LC_MS_MS研究

第二军医大学学报　2009年8月第30卷第8期　htt p ://w w w.ajsmm Academic Journal of Second Military Medical University ,Aug.2009,Vol.30,No.8・941　・DOI :10.3724/SP.J.1008.2009.00941・论　著・采用HPLC 2T OF/MS 对中药复方小柴胡汤中化学成分的快速分析鉴别刘晓帆1△,娄子洋2△,朱臻宇1,张　海3,赵　亮3,柴逸峰131.第二军医大学药学院药物分析学教研室,上海2004332.第二军医大学药学院分析测试中心,上海2004333.第二军医大学东方肝胆外科医院药材科,上海200438[摘要]　目的:采用高效液相色谱2高分辨飞行时间质谱(HPL C 2TOF/MS )对中药复方小柴胡汤中的化学成分进行快速鉴别。

方法:色谱柱Agilent ZORBAX SB 2C 18(100mm ×3.0mm ,3.5μm ),甲醇与0.1%的甲酸水溶液梯度洗脱,柱温为25℃,进样体积4μl ,流速0.6ml/min ,检测器为飞行时间质谱,ESI 离子源,质量数扫描范围m/z 200～1500。

结果:一次性鉴别出小柴胡汤中38个化学成分。

结论:采用HPL C 2TOF/MS 对小柴胡汤中的化学成分进行了色谱表征,一次性在一张图谱上共表征出38个化学成分,这可为中药复方小柴胡汤中化学成分的体内代谢及作用机制的深入研究奠定基础。

[关键词]　小柴胡汤;HPL C 2TOF/MS ;中药化学成分[中图分类号]　R 284.1 [文献标志码]　A [文章编号]　02582879X (2009)0820941206HPLC 2TOF/MS in rapid identif ication of chemical compositions in Xiaochaihu decoctionL IU Xiao 2fan 1△,LOU Zi 2yang 2△,ZHU Zhen 2yu 1,ZHAN G Hai 3,ZHAO Liang 3,CHA I i 2feng 131.Department of Drug Analysis ,School of Pharmacy ,Second Military Medical University ,Shanghai 200433,China2.Center of Drug Analysis ,School of Pharmacy ,Second Military Medical University ,Shanghai 2004333.Department of Pharmacy ,Eastern Hepatobiliary Hospital ,Second Military Medical University ,Shanghai 200438[收稿日期]　2009201204 [接受日期]　2009205220[基金项目]　国家科技支撑计划(2006BAI08B03207),全军医药卫生科研基金(06MB205).Supported by National Key Technology R &D Program (2006BAI08B03207)and Foundation of Medical Research of PL A (06MB205).△共同第一作者(Co 2first aut hors ).[作者简介]　刘晓帆,硕士.E 2mail :liuxiaofan0208@ ;娄子洋,博士,副教授,硕士生导师.E 2mail :louziyang @3通讯作者(Corresponding aut hor ).Tel :021*********,E 2mail :yfchai @[ABSTRACT ]　Objective :T o rapidly identify the chemical components in a traditional Chinese herb Xiaochaihu decoction by high performance liquid chromatography 2time of flight mass spectrometry (HPLC 2TOF/MS ).Methods :An Agilent ZORBAX S B 2C 18column (100mm ×3.0mm ,3.5μm )was used for rapid separation and identification of chemical components in Xiaochaihu decoction ,with a mobile phase of methanol and 0.1%formic acid aqueous solvent in gradient elution.The flow rate was 0.6ml/min and the injection volume was 4μl.The detector was time 2of 2flight mass spectrometer with an ESI ion source.Scanning mass range was m/z 20021500.R esults :Thirty 2eight chemical compounds were identified from Xiaochaihu decoction in one run.C onclusion :Thirty 2eight chemical compounds have been identified in Xiaochaihu decoction by HPLC 2TOF/MS in one run ,which paves a way for further understanding the metabolism and mechanism of the chemical compounds in Xiaochaihu decoction.[KE Y WOR DS]　X iaochai hu decoction ;HPL C 2TOF/MS ;chemical principles (TCD )[Acad J Sec Mil Med Univ ,2009,30(8):9412946] 小柴胡汤出自东汉张仲景的《伤寒论》,是中医和解少阳的经典方剂,由柴胡、黄芩、人参、半夏、甘草、生姜和大枣七味药组成。

柴胡皂苷(saikosaponins，SS)是从伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC. 和狭叶柴胡 B. scozonerifolium Willd.的干燥根中获得的一类成分，是柴胡的主要化学和生物活性成分。

关于SS 的化学成分研究已经较为深入，至今为止，共研究了该属20多种柴胡，从柴胡属植物已分离出90 多种皂苷类成分，发现了30多种新化合物。

近10年分离鉴定的皂苷为43个，文献报道较多的是SSa，SSb，SSc，SSd等。

现代药理研究表明，SS 具有解热、镇静、抗炎、免疫调节、抗病毒、抗肝纤维化、抗肿瘤等药理活性，一般认为SSa和SSd为其主要活性成分，而尤以SSd 的药理活性最强[1]。

目前，国内外学者把SS 应用于肾病、肝纤维化、肿瘤等疾病治疗取得了显著疗效，但以保肝作用效果最佳，这也与传统中医记载柴胡疏肝解郁功效一致。

1、对肝脏的药理作用柴胡功善疏肝解郁，升举清气，历代医家常以其治肝郁气滞等症，临床疗效显著。

现代药理研究发现SS 保肝作用的特点为: ①降低细胞色素P450 的活性，对肝细胞坏死具有保护作用，同时还促进肝细胞再生; ②刺激垂体肾上腺皮质系统，使内原性糖皮质激素分泌增加;③降低细胞色素C还原酶的活性，使得脱氢酶活性下降，激素样副作用降低; ④使巨噬细胞活化，促进抗体、干扰素产生，增强NK 细胞和LAK细胞活性，调节免疫; ⑤促进蛋白合成，增加肝糖原，降低过氧化脂质，促进肝细胞再生。

近年来，在研究柴胡皂苷对肝脏的药理作用方面，主要进展为发现其具有对抗多种因素导致的肝损伤和肝纤维化。

1．1抗肝损伤作用SS对CCl4、D-氨基半乳糖、脂多糖及卡介苗致小鼠慢性肝损伤均有显著的修复保护作用，其有效成分是SS单体III，VI和XIII[2]，周世文等发现SS 对CCl4实验性肝损伤小鼠有保护和促进肝内脂质代谢的作用，使肝内过氧化脂质含量降低，ALT 和TG 含量降低，而GSH 含量升高;提示SS 通过减少氧及其他自由基对肝脏损伤和提高细胞色素P450等其他毒物结合酶系统，加强肝脏对毒物代谢而发挥保肝作用[3]。

春柴胡中柴胡皂苷a与d的含量测定目的测定春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量。

方法应用高效液相色谱（HPLC）法，色谱柱为DiamonsilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-水梯度洗脱，流速1mL·min-1，检测波长210 nm。

结果柴胡皂苷a在0.4018～6.027 μg （r=0.9990）范围内线性关系良好，平均回收率为91.19%，RSD为1.83%（n=6）；柴胡皂苷d在0.5238～7.857μg（r=0.9992）范围内线性关系良好，平均回收率为92.76%，RSD为1.43%（n=6）。

结论本研究建立的柴胡皂苷a、d的含量测定方法简便、结果準确。

标签：春柴胡；高效液相色谱法；柴胡皂苷a；柴胡皂苷d；含量测定柴胡是伞形科（Umbelliferae）柴胡属Bupleurum植物，为我国传统的中药，在《神农本草经》中被列为上品。

具有解表和里、疏肝解郁、升举阳气之功效，是治疗少阳证的首选用药，中国药典收载的柴胡为伞形科植物柴胡（Bupleurum chinense DC）.或狭叶柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.）的根[1]。

由于我国柴胡属植物品种众多.资源分布广泛，各地根据当地所产柴胡作为习惯用药的较为普遍，江苏省大部分地区即习用狭叶柴胡春季采挖带根的全草，又称“春柴胡”，（收录于《江苏省中药材标准》（1989年版））。

本院现在使用的即为此品种。

而2010年版药典新增了柴胡的含量测定标准，即含柴胡皂苷a和d的总量不得少于0.30%。

故本文运用HPLC法测定春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量，希望对地方用药的质量控制和规范用药提供借鉴[2～3]。

1 仪器与试药岛津LC-20AT高效液相色谱仪，Sartorius CP224S型电子分析天平。

甲醇、乙腈均为色谱纯，氨水为分析纯，重蒸馏水为自制。

柴胡皂苷a对照品（110777-200507），柴胡皂苷d对照品（110778-200506），均由中国药品生物制品检定所提供。

HPLC-MSMS测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷a与柴胡皂苷d 王嘉林;王斯坦【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2015(000)003【摘要】目的：建立小柴胡颗粒中柴胡皂苷 a 与柴胡皂苷 d 含量的 HPLC-MSMS 方法。

方法采用液相色谱电喷雾串联质谱对小柴胡颗粒中的柴胡皂苷 a 与柴胡皂苷 d 进行含量测定，采用 Agilent ZORBAX SB C18（4．6 mm ×100 mm，3．5μm）为色谱柱，流动相为乙腈—0．05％乙酸铵（40∶60），流速为0．4 mL·min －1，柱温为30℃，质谱条件：ESI（电喷雾离子源），采集模式：负模式，柴胡皂苷 a 定量定性离子对为779．4＞617．0，779．4＞145．0，柴胡皂苷 d 定量定性离子对为779．4＞617．1，779．4＞161．0。

结果柴胡皂苷a 线性范围为20～1000μg·L －1，平均加样回收率为99．1％（n ＝6），RSD ＝1．6％，柴胡皂苷 d 线性范围为20～1000μg·L －1，平均加样回收率为98．7％（n ＝6），RSD ＝1．4％。

结论该方法操作简单，迅速，能够控制小柴胡颗粒的质量。

【总页数】4页(P453-456)【作者】王嘉林;王斯坦【作者单位】河南省洛阳市食品药品检验所，河南洛阳 471023;无锡瑞年实业有限公司，江苏无锡 214092【正文语种】中文【相关文献】1.HPLC法测定小柴胡颗粒中柴胡皂苷a、d的含量 [J], 邵艳;浦锦宝2.HPLC-UV-ELSD法测定益肝乐颗粒中槲皮素、山柰素、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d [J], 谭雄斯3.HPLC法测定秦岭柴胡及其不同提取物中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d [J], 卫昊;刘清;卫伟光;崔春利;张倩4.HPLC-ELSD同时测定柴胡消瘿颗粒中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芍药苷、阿魏酸及橙皮苷的含量 [J], 周旭;翟延君5.HPLC法对不同产地柴胡根中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量测定 [J], 马泽刚;黄春花;钟辉云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

柴胡及其煎剂中皂苷类成份的高效液相指纹图谱研究【摘要】目的利用HPLC指纹图谱技术，全面揭露柴胡煎煮前后皂苷类成份的转变。

方式采纳Hypersil C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈 - 水, 梯度洗脱 [0 ～ 70 min: 乙腈 - 水(22∶78) → (50∶50) ]; 流速1.0 ml·min-1;柱温30 ℃;检测波长210，252 nm。

结果柴胡煎煮后的指纹图谱中显现了9个药材中不存在的新色谱峰。

结论对柴胡煎煮中新显现的皂苷类成份进行深切系统的研究，将有助于从中医角度揭露中药柴胡功效的物质基础。

【关键词】柴胡; 煎剂; 柴胡皂苷; 高效液相色谱; 指纹图谱Abstract：ObjectiveTo disclose the changes of saikosaponins between Radix Bupleuri and its water extract by HPLC fingerprint technology. MethodsThe HPLC fingerprint was performed on a Hypersil C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) with gradient elution of Acetonitrile - Water [0 - 70 min：Acetonitrile - Water (22∶78) → (50∶50)], the flow rate was 1.0 ml·min-1, the column temperature was set at 30 ℃, and the detection wavelength was 210 and 252 nm. ResultsNine peaks which did not exist in Radix Bupleuri were found in its water extract. ConclusionFurther research should be carried on the nine newcomponents appeared in the water extract of Radix Bupleuri to explain the functions of Saiko.Key words：Radix Bupleuri; Water extraction; Saikosaponin; HPLC; Fingerprint已有报导指出，柴胡在煎煮进程中皂苷类成份存在结构的转变[1]，可是人们在柴胡的提取工艺研究当中，往往采取各类方法来幸免这种转变的发生，如碱性溶剂提取[2]、低温浓缩[3]、渗漉等[3]，上述方法尽管提高了柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d的转移率，却致使了人们对柴胡煎剂中的皂苷成份，即转化的成份，缺乏深切系统的熟悉。

高效液相色谱法测定柴胡中柴胡皂苷a与柴胡皂苷d的含量王晓琳;张平;宋平顺
【期刊名称】《现代医药卫生》
【年(卷),期】2011(027)001
【摘要】目的:对中药柴胡有效成分柴胡皂苷a、柴胡皂苷d进行含量测定,比较10种不同产地的含量差异,为该药材质量标准制定提供依据.方法:采用高效液相色谱法(HPLC).伊利特Cis柱,以乙腈-水(40:60)为流动相,流速1.0mL·min-1,检测波长210 nm.结果:柴胡皂苷a在2.76～41.4 μg、柴胡皂苷d在3.32～49.8μg范围内,线性关系良好,平均回收率分别为101.39%、102.14%,RSD分别为2.7%、
2.8%(n=5).结论:该方法准确灵敏、稳定可靠.柴胡皂苷a、柴胡皂苷d可作为控制柴胡质量的指标性成分.
【总页数】2页(P56-57)
【作者】王晓琳;张平;宋平顺
【作者单位】甘肃省药品检验所,甘肃,兰州,730000
【正文语种】中文
【中图分类】R28
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定柴胡配方颗粒中柴胡皂苷a含量 [J], 缪希红;李晓燕;高君文;苏平菊
2.反相高效液相色谱法测定野生狭叶柴胡中柴胡皂苷a含量 [J], 麻明臣;刘娟;陈宇
峰;张亚娟;李世颂
3.高效液相色谱法测定甘肃野生与家种柴胡中柴胡皂苷ad的含量 [J], 闵云山;宋平顺
4.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定柴胡药材中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量 [J], 王光忠;李秋怡;张莲萍;刘焱文
5.高效液相色谱-蒸发光散射法测定柴胡中柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的含量 [J], 宋宏刚;许红辉;裴彩云;赵韶华;李文烈
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中药复方中的多种活性成分研究一、中药复方的基本概念中药复方是指在中药学中以两种及两种以上药物混合使用形成的药物，通常是通过中草药的配伍来实现药效的增强、副作用的减轻或者一些其他目的。

其与单一草药不同之处在于，同一方剂中含有多种中药，各种中药根据其性味、功效等特点相互协调配伍，形成一种协同增强的药效。

中药复方方便了临床应用，使患者可以轻松地服用多种药物，同时提高了治愈的成功率。

二、中药复方中的活性成分1. 药效成分中药复方中的活性成分主要是指那些具有治疗作用的化学物质，包括生物碱、黄酮类、鞣质、皂苷、挥发油等。

这些成分能够通过作用于生物分子，如酶、受体等，而产生生理作用。

临床实践表明，中药复方中的药效成分几乎都是存在于复方中每一个组分中的。

例如, 枸杞（Lycium barbarum L.）和麦冬（Ophiopogon japonicus (Thunb.) Ker-Gawl.）常常配伍使用，在枸杞中含有的LBP和Lcys和麦冬中含有的多糖和荷包牡丹苷，以及其他活性成分在配伍使用后，可以显著提高免疫功能、改善高脂血症等问题。

2. 互补成分中药复方中的互补成分主要是指方剂中不同组分之间的相互作用。

在药物学可发现这种相互作用通常是药物间互相增强药效的结果。

例如，中成药清热解毒口服液中就包含了黄芩总黄酮、连翘苷、草果黄酮等多种活性成分。

研究表明，这些成分可以相互作用，发挥出联合抑菌和增强酸林解毒等作用。

3. 对症成分中药复方中的对症成分主要是针对病情和症状而添加的成分。

可提高方剂的针对性，更好的治疗疾病。

例如，在治疗失眠以及产后抑郁症状时，医生常常会使用复方核桃仁颗粒（主要成分为核桃仁、胖大海、红枣等多种成分），里面还会配合不同的中药，以达到更好的治疗效果。

三、中药复方中的多种活性成分研究1. 离线计算对于中药复方中的多种活性成分研究，传统的研究方法是利用红外光谱法、HPLC-MS等离线技术。

在这些离线技术中，研究人员需要将复方药物进行提取，并以高效液相色谱及质谱等技术逐一分离各复方药物中的成分。

HPLC法同时测定柴胡中皂苷a和皂苷d含量朱鹤云;关皎;刘洋;赵厅;郝乘仪;冯波【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2016(037)006【摘要】Objective A HPLC method was established to determine the content of saikosaponin a and saikosaponin d in Bupleuri Radix.Methods Separation was achieved on Diamonsil C18(2) column (250 mm ×4.6 mm,5 μm). The mobile phase consisted of water(A) and acetonitrile(B) with gradient elution (0~30 min,25%~65%B) at a flow rate of 1.0 mL/min and the equilibration time was 3 min.The detecting wavelength was set at 210 nm and colum n temperature was maintained at 35 ℃,and injection volume was 20 μL.Results The linear ranges were 36~192μg/mL(R=0.999 3) for saikosaponin a and 36~192 μg/mL(R=0.999 1) for saikosaponind.Conclusion The method is simple,rapid stable and reproducible ,which can be used for the quality control of Bupleuri radix.%目的：建立高效液相色谱法同时测定柴胡中皂苷a和皂苷d含量的方法。