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柴胡有效成分提取分离方法的研究进展陈朝;伍小燕【摘要】柴胡为伞形科柴胡属植物柴胡.或狭叶柴胡的根,始载于《神农本草经》,原名茈胡、地薰,列为上品,宋代《图经本草》始易其名为柴胡[1].其味苦,性微寒.具和解表里、疏肝、升阳之功效,药理学研究证明柴胡具有解热、镇痛、镇静、抗炎、免疫增强、保肝利胆、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等作用,是常用中药之一.柴胡中含有柴胡皂苷、挥发油、柴胡多糖、黄酮等多种有效成分,柴胡有效成分的提取分离多样化,如溶剂提取法、超临界流体萃取法(SFE)、高效液相色谱法(HPLC)、固相微萃取法(SPME)等,作者对柴胡有效成分提取分离方法的研究进展做一综述,以利进一步的研究与开发利用.【期刊名称】《实用临床医药杂志》【年(卷),期】2011(015)019【总页数】3页(P190-192)【关键词】柴胡;有效成分;提取分离【作者】陈朝;伍小燕【作者单位】广西中医学院第一附属医院药学部,广西南宁,530023;广西中医学院第一附属医院药学部,广西南宁,530023【正文语种】中文【中图分类】R93柴胡为伞形科柴胡属植物柴胡.或狭叶柴胡的根,始载于《神农本草经》,原名茈胡、地薰,列为上品,宋代《图经本草》始易其名为柴胡[1]。
其味苦,性微寒。
具和解表里、疏肝、升阳之功效,药理学研究证明柴胡具有解热、镇痛、镇静、抗炎、免疫增强、保肝利胆、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等作用,是常用中药之一。
柴胡中含有柴胡皂苷、挥发油、柴胡多糖、黄酮等多种有效成分,柴胡有效成分的提取分离多样化,如溶剂提取法、超临界流体萃取法(SFE)、高效液相色谱法(HPLC)、固相微萃取法(SPME)等,作者对柴胡有效成分提取分离方法的研究进展做一综述,以利进一步的研究与开发利用。
1 柴胡皂苷的提取分离方法柴胡皂苷为柴胡的主要有效成分,其结构均为五环三萜类齐墩果烷型衍生物,兼有亲水性(糖链)和亲脂性部分(苷元等)。
主要的提取分离方法有溶剂提取法、超临界CO2萃取法,大孔吸附树脂法等。
春柴胡中柴胡皂苷a与d的含量测定目的测定春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量。
方法应用高效液相色谱（HPLC）法，色谱柱为DiamonsilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-水梯度洗脱，流速1mL·min-1，检测波长210 nm。
结果柴胡皂苷a在0.4018～6.027 μg （r=0.9990）范围内线性关系良好，平均回收率为91.19%，RSD为1.83%（n=6）；柴胡皂苷d在0.5238～7.857μg（r=0.9992）范围内线性关系良好，平均回收率为92.76%，RSD为1.43%（n=6）。
结论本研究建立的柴胡皂苷a、d的含量测定方法简便、结果準确。
标签：春柴胡；高效液相色谱法；柴胡皂苷a；柴胡皂苷d；含量测定柴胡是伞形科（Umbelliferae）柴胡属Bupleurum植物，为我国传统的中药，在《神农本草经》中被列为上品。
具有解表和里、疏肝解郁、升举阳气之功效，是治疗少阳证的首选用药，中国药典收载的柴胡为伞形科植物柴胡（Bupleurum chinense DC）.或狭叶柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.）的根[1]。
由于我国柴胡属植物品种众多.资源分布广泛，各地根据当地所产柴胡作为习惯用药的较为普遍，江苏省大部分地区即习用狭叶柴胡春季采挖带根的全草，又称“春柴胡”，（收录于《江苏省中药材标准》（1989年版））。
本院现在使用的即为此品种。
而2010年版药典新增了柴胡的含量测定标准，即含柴胡皂苷a和d的总量不得少于0.30%。
故本文运用HPLC法测定春柴胡中柴胡皂苷a、d的含量，希望对地方用药的质量控制和规范用药提供借鉴[2～3]。
1 仪器与试药岛津LC-20AT高效液相色谱仪，Sartorius CP224S型电子分析天平。
甲醇、乙腈均为色谱纯，氨水为分析纯，重蒸馏水为自制。
柴胡皂苷a对照品（110777-200507），柴胡皂苷d对照品（110778-200506），均由中国药品生物制品检定所提供。
小柴胡片提取工艺的研究摘要：目的优选小柴胡片提取工艺最佳条件。
方法：采用正交实验，以提取率、柴胡皂苷a含量和干膏收率为指标，进行综合评分，筛选出最佳提取工艺。
结果：药材以10倍量水煎煮3次，每次60分钟，为最佳提取条件。
关键词：小柴胡片；正交实验；最佳提取工艺小柴胡片方出自张仲景《伤寒论》的“小柴胡汤”名方，现收载于国家标准《中国药典》2020年版一部[1]，处方由柴胡445g、姜半夏222g、黄芩167g、党参167g、甘草167g、生姜167g、大枣167g组成，为临床常用中成药，具有解表散热，疏肝和胃的作用，全方寒温并用，升降协调，有疏利三焦，通达上下，宣通内外之功[2]。
现代药理研究也显示柴胡、黄芩有显著的抗炎及抗病毒作用，柴胡[3]中柴胡皂苷a具有抗炎、调节免疫等作用[4]，是小柴胡片治疗外感病，邪犯少阳证的物质基础。
因此，建立本品中柴胡皂苷a的含量测定方法，有助于更好的控制本品的质量。
本文采用正交实验的方法，对小柴胡片提取工艺条件进行考察研究。
1 仪器与试药1.1 仪器电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂，型号规格101-4AS）；电子天平CP114（奥豪斯仪器上海有限公司制造）；高效液相色谱仪（包括四元梯度泵，自动进样器，二极管阵列检测器，柱温箱，型号：UltiMate3000，DIONEX，U.S）；色谱柱C18（4.6mm×250mm，5μm， S/N:0J7U73 ，Kromat Universil）；SK2200HP超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；分析天平（型号AB265-SMETTLER TOLEDO, Switzerland，0.00001g）1.2 材料乙腈和甲醇均为色谱纯（美国Tedia公司），柴胡皂苷A对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，编号：VIP(AL)0202），乙醇，纯化水，其他均为分析纯。
柴胡、党参、大枣、姜半夏、甘草、黄芩、生姜经云南中医学院中药鉴定教研室杨竹雅老师鉴定，符合《中国药典》2020年版（一部）的要求。
实验五、柴胡中皂苷类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的1.掌握柴胡中总皂苷的提取分离方法及操作2.熟悉三萜皂苷类化合物的检识及鉴定方法二、实验原理柴胡是伞形科柴胡属植物柴胡干燥的根，是我国传统中药中重要和常用的药材。
我国药典规定北柴胡(Bupleurum chinenseDC．)和狭叶柴胡(Bupleurumscorzonerifolium Willd．)为正品供药用。
我国柴胡资源极其丰富，主要分布于我国的陕西、内蒙古、甘肃、青海、宁夏、河北等地。
柴胡是柴胡滴丸，小柴胡汤等中药产品的主要成分。
研究发现柴胡皂苷具有解表和里疏肝解郁、升举阳气之功效。
一、柴胡化学成分柴胡的化学成分比较复杂，除含皂苷、挥发油，尚含有黄酮、多元醇、植物甾醇、香豆素、脂肪酸成分1等有效成分，尤其以柴胡皂苷为主。
迄今为止，从柴胡根、种子的不同部位中已分离到50多种单体皂苷成分。
这些皂苷成分有a、c、d、b1、b2、b3、b4等，其中以皂苷a、d的生物活性最为显著。
（柴胡中主要含有柴胡皂苷a、c、d）1.皂苷a（C42H68O13）物理性质：本品为结晶粉末，易溶于水，稀醇，特别是热水和热醇，在丁醇和戊醇中溶解性大，难溶或不溶于苯，乙醚，氯仿等溶剂。
化学反应：Molish 反应阳性，Lieberman-Burchard 反应产生紫色。
2.皂苷c（C48H78O17 ）物理性质：易溶于水，稀醇，特别是热水和热醇，在丁醇和戊醇中溶解性大，难溶或不溶于苯，乙醚，氯仿等溶剂。
化学性质：Molish 反应阳性，Lieberman-Burchard 反应产生紫色。
3.皂苷d（C42H68O13 ）物理性质：白色粉末，易溶于热水、稀醇、热甲醇和热乙醇。
化学性质：Molish 反应阳性，Lieberman-Burchard 反应产生紫色三萜皂苷类，由于糖分子的引入，使极性增大，可溶于水，易溶于热水、稀醇、热甲醇和热乙醇中，几乎不溶于或难溶于丙酮、乙醚以及石油醚等极性小的有机溶剂。
实验五柴胡中皂苷类成分的提取分离和鉴定引言：柴胡是一种传统中药，在中医学中广泛应用。
柴胡中的皂苷类成分具有广泛的药理活性，对于抗炎、镇痛、抗肿瘤等具有显著的疗效。
本实验旨在提取、分离和鉴定柴胡中的皂苷类成分。
材料与方法：材料：柴胡片、乙醇、正己烷、二甲基亚砜、石油醚、甲醇、氯仿、醋酸乙酯、硅胶、碘化钾、浓盐酸等。
方法：Step 1: 提取柴胡中的皂苷类成分1.将柴胡片研磨成粉末状；2.取适量的柴胡片粉末，用乙醇进行粉碎提取，反复浸提2次；3.将乙醇提取液浓缩至干燥，得到柴胡粗提物。
Step 2: 分离皂苷类成分1.将柴胡粗提物溶解在正己烷中，得到类皂苷的正己烷溶液；2.将正己烷溶液与等量的二甲基亚砜混合，振荡均匀；3.分液，得到上层的正己烷相和下层的二甲基亚砜相；4.重复步骤2和步骤3，直到得到等体积的正己烷相。
Step 3: 鉴定皂苷类成分1.取等体积的正己烷相，用石油醚进行溶解；2.取少量石油醚溶液，加入甲醇和硅胶，搅拌均匀，制备薄层色谱板；3.将制备好的薄层色谱板置于色谱槽中，加入溶剂系统（如正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水），进行上样和上色；4.开始显色后，取出色谱板，用碘化钾溶液进行喷雾显色；5.观察色谱板上形成的斑点，用紫外光进行观察；6.依据斑点的颜色、相对迁移率等特征，进行鉴定。
结果与讨论：通过上述方法，我们成功地提取、分离和鉴定了柴胡中的皂苷类成分。
在薄层色谱鉴定中，观察到柴胡中皂苷类成分的斑点呈现为紫色。
根据斑点的相对迁移率，可以初步判断柴胡中所含的皂苷类成分种类。
结论：本实验成功提取、分离和鉴定了柴胡中的皂苷类成分。
通过本实验的结果，我们可以进一步研究柴胡的药理活性以及其作用机制，为柴胡的临床应用提供科学依据。
![柴胡中柴胡皂苷a提取条件探讨[1]](https://uimg.taocdn.com/d59e8c69b84ae45c3b358c8a.webp)
朱兰1，黄东萍1，宋英21成都中医药大学药学院，四川成都 （610075）2成都中医药大学附属医院，四川成都（610072）E-mail：zhuzhu3227◎摘要：目的：考察柴胡中柴胡皂苷a提取率的影响因素。
方法：考察提取溶媒，提取时间，粉碎程度等对柴胡皂苷a提取率的影响。
结果：提取溶媒的影响最大。
结论：柴胡皂苷a结构中的氧环易断裂，但采用碱醇提取能抑止其断裂，提取率高。
关键词：柴胡 柴胡皂苷a 提取中图分类号：R281.引言柴胡为伞形科植物柴胡(Bupleurum chinense DC.)和狭叶柴胡(B.scorzonerifoliunz Willd.)干燥根，具有疏散退热，疏肝解郁，升阳举陷之功效。
柴胡皂苷a、d被认为是柴胡的主要药效成分，对整个药物的疗效起着举足轻重的作用。
所以，在含有柴胡制剂的工艺研究过程中，应该以柴胡皂苷的含量为指标，找出影响其提取率的主要因素，确保制剂疗效，提高药材的利用度。
柴胡皂苷a、d具有13，28－氧环的结构，氧环不稳定，在酸的作用下醚键可能会断裂生成人工产物异环或同环双烯结构。
所以，在柴胡皂苷a、d在提取过程中，受植物体内酸性成分的影响，转变为柴胡皂苷b1、b2[1]。
又有人认为加热提取时间对柴胡皂苷a的含量影响较大，水提加热提取8h柴胡皂甙A已损失殆尽[2]。
故笔者针对这些因素，对柴胡的提取工艺进行了考察。
2.材料和仪器2.1试药与试剂乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
柴胡皂苷a对照品，纯度>98％，由江西本草天工科技有限责任公司提供。
2.2 仪器HP1100型高效液相色谱仪(美国惠普公司)，二极管阵列检测器。
3.柴胡皂苷a的含量测定3.1色谱条件色谱柱，Diamond C18柱(5μm,4.6×250mm)流动相：乙腈：水：甲醇（40：45：15），流速- 1 -图1 柴胡皂苷a对照品（A）、柴胡药材样品（B）3.2标准曲线及线性范围准确称取柴胡皂a标准品约5mg.分别置于10m1容量瓶中.用甲醇溶解后稀释至刻度。
柴胡皂苷提取和含量测定方法研究柴胡皂苷是从中草药柴胡中提取出来的一种生物活性物质，具有广泛的药理活性和广泛的应用前景。
在本文中，我们将讨论柴胡皂苷的提取和含量测定方法的研究进展。
目前，柴胡皂苷的提取方法主要分为水提取和有机溶剂提取两种。
1.水提取法水提取法是目前最常用的柴胡皂苷提取方法之一。
一般情况下，将粉碎的柴胡草加入适量的水中，然后通过不同的温度和时间来提取柴胡皂苷。
这种方法简单方便、成本低廉，但提取效率相对较低。
2.有机溶剂提取法有机溶剂提取法是另一种常用的柴胡皂苷提取方法。
通常使用的有机溶剂如乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等，其中最常使用的是乙醇提取。
在该方法中，将粉碎的柴胡草加入适量的有机溶剂中，然后进行浸提和过滤等步骤。
这种提取方法可以提高提取效率，但需要考虑到有机溶剂的毒性和环保问题。
柴胡皂苷的含量测定也是研究的一个重要方面，目前主要采用以下几种方法。
1.高效液相色谱法高效液相色谱法是目前最常用的柴胡皂苷含量测定方法之一。
该方法通过分离和检测柴胡皂苷的分子结构，具有高分辨率和精确度。
这种方法的缺点在于需要昂贵的仪器和大量的有机溶剂，成本相对较高。
2.紫外分光光度法紫外分光光度法通过测试柴胡皂苷在特定波长下的吸收光强度，从而测定其含量。
该方法操作简单，成本低廉，适用于快速定量测定柴胡皂苷的含量。
3.荧光光谱法荧光光谱法是一种敏感的柴胡皂苷含量测定方法。
该方法利用柴胡皂苷的固有荧光特性，进行荧光光谱分析，从而测定其含量。
该方法操作简单，可以同时测定多种柴胡皂苷的含量。
总结：综上所述，柴胡皂苷的提取和含量测定方法研究是柴胡草活性成分研究的关键环节，不同的提取和测定方法有其各自的优缺点和适用范围。
因此，在选取和应用柴胡皂苷的提取和含量测定方法时，需要考虑不同的因素，并根据实际情况进行合理的选择。
柴胡皂苷提取与含量测定方法研究目的：探讨柴胡中有效成分柴胡总皂苷和皂苷d的提取及含量测定方法，并对样品中成分进行含量测定。
方法：以柴胡总皂苷与柴胡皂苷d为指标，分别采用紫外-可见分光光度法、HPLC法测定样品中柴胡总皂苷及皂苷d的含量。
结果：经过测定，结果显示样品柴胡总皂苷含量均在65%以上，测定波长为536nm；皂苷d含量均在11%以上，最大吸收波长为204nm。
结论：本实验所建立的提取及含量测定方法，操作简便，精密度良好，回收率合格，测定结果准确，可较好地用于柴胡皂苷的质量控制。
标签：柴胡；皂苷；提取；含量测定柴胡是临床常用中药，属和解剂，临床主要用于少阳证，即寒热往来，胸闷口苦等，具清热解表，和解少阳之功，有南北柴胡之分，前者为狭叶柴胡的干燥根，后者是伞形科植物柴胡的干燥根[1]。
有实验研究证明[2]，柴胡根中的有效成分为柴胡皂苷，以及含有挥发油、植物甾醇等，相关的实验证实柴胡皂苷具有解热、镇痛、消炎等作用。
因此，提高柴胡制剂中柴胡有效成分的含量对提高临床疗效具有重大的指导意义。
近年来，随着科技的进步，多数实验采用各种新方法进行柴胡皂苷的提取及测定，有文献报道柴胡皂苷的主要组成为皂苷a、d、b1、b2等[3]，其中，前两者具有明显抗炎作用和降低血清胆固醇及甘油三酯的作用。
故本文主要以柴胡总皂苷与柴胡皂苷d为指标，进行柴胡皂苷的提取研究，并采用紫外-可见分光光度法及HPLC法对其含量进行测定，为提高柴胡制剂的有效成分含量及提高临床疗效打下科研基础。
现将研究情况报告如下。
实验材料试药：柴胡：购于安徽省亳州市药材公司，经相关专家鉴定为伞形科植物柴胡的干燥根（北柴胡）；柴胡皂苷d对照品：购于中国食品药品鉴定研究院；屈臣氏纯净水；乙腈（色谱纯，Fisher公司）；其他试剂为分析纯（甲醇、乙醇、氨水）。
柴胡总皂苷的含量测定：①检测波长：精密吸取200μL上述柴胡皂苷d 对照品溶液置于小试管中，加入100μL的对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液（0.1%），水浴（70℃）反应10min，待自然冷却后，加入4.0mL磷酸，继续反应30min。
柴胡总皂苷的提取与柴胡中柴胡皂苷a, d 的含量测定摘要:报道了大孔吸附层析分离提取柴胡总皂苷及采用高效液相色谱法测定柴胡中柴胡皂苷a, d 的含量的实验研究。
关键词:皂苷提取；柴胡皂苷；大孔吸附树脂；柴胡皂苷a, d；含量测定；高效液相色谱法Extraction of saikosaponin and Determination of the content of saikosaponin a and saikosaponin d.Key words :saponin extraction ; saikosaponin ;macroporous absorbitive resins;saikosaponin a ; saikosaponin d ;determination of the content;HLPCAbstract :This paper reports the experiment of saikosaponin extraction using macroporous absorbitive resin and the use of the method of HLPC to determine the content of saikosaponin a and saikosaponin d.柴胡在我国作为药用已有2000 多年的历史。
我国药典规定北柴胡( B upleu rum Chi nese DC. )和狭叶柴胡(又称南柴胡, B . scorzonrifoleium Willd. ) 为中药正品原植物。
柴胡主要有效成分是柴胡皂苷,柴胡皂苷具有抗炎、保肝、降低血中胆固醇和调节内分泌等生理活性,这已被医药界广泛接受。
目前已从柴胡及同属植物中分离并鉴定了50 余种柴胡皂苷,其中2 个糖基的柴胡皂苷a 、d 和b1、b2的含量较高,其结构式如图1 所示。
国内外学者对柴胡的药理活性、柴胡挥发油成分及柴胡皂苷含量测定研究较多,但是有关柴胡皂苷提取工艺的报道很少。
实验五、柴胡中皂昔类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的1.掌握柴胡中总皂昔的提取分离方法及操作2.熟悉三菇皂甘类化合物的检识及鉴定方法二、实验原理柴胡是伞形科柴胡属植物柴胡干燥的根，是我国传统中药中重要和常用的药材。
我国药典规定北柴胡(Bupleurum chinenseDC .)和狭叶柴胡(Bupleurumscorzonerifolium Willd .) 为正品供药用。
我国柴胡资源极其丰富，主要分布于我国的陕西、内蒙古、甘肃、青海、宁夏、河北等地。
柴胡是柴胡滴丸，小柴胡汤等中药产品的主要成分。
研究发现柴胡皂昔具有解表和里疏肝解郁、升举阳气之功效。
一、柴胡化学成分柴胡的化学成分比较复杂，除含皂甘、挥发油，尚含有黄酮、多元醇、植物番醇、香豆素、脂肪酸成分1等有效成分，尤其以柴胡皂昔为主。
迄今为止，从柴胡根、种子的不同部位中已分离到50多种单体皂昔成分。
这些皂昔成分有a、c、d、bl、b2、b3、b4等，其中以皂昔a、d的生物活性最为显著。
(柴胡中主要含有柴胡皂甘a、c、d)R1R5RaOH P-CH fuc ( J11)9k先期帚H P-CH-水(6-1) gk [4-L]rho0H a CH1.皂昔 a (C42H68O13物理性质：本品为结晶粉末，易溶于水，稀醇，特别是热水和热醇，在丁醇和戊醇中溶解性大，难溶或不溶于苯，乙醛，氯仿等溶剂。
化学反应：Molish 反应阳性，Lieberman-Burchard 反应产生紫色。
2.皂昔 c (C48H78O17 )物理性质：易溶于水，稀醇，特别是热水和热醇，在丁醇和戊醇中溶解性大，难溶或不溶于苯，乙醚，氯仿等溶剂。
化学性质： Molish 反应阳性，Lieberman-Burchard 反应产生紫色。
3. 皂苷 d（ C42H68O13 ）物理性质：白色粉末，易溶于热水、稀醇、热甲醇和热乙醇。
化学性质： Molish 反应阳性，Lieberman-Burchard 反应产生紫色三萜皂苷类，由于糖分子的引入，使极性增大，可溶于水，易溶于热水、稀醇、热甲醇和热乙醇中，几乎不溶于或难溶于丙酮、乙醚以及石油醚等极性小的有机溶剂。
实验五柴胡中皂苷类成分的提取分离和鉴定柴胡（Radix Bupleuri）一般是作为中药植物出药使用，含有大量的皂苷类成分，具有清热解毒、消肿止痛、祛风湿的功效，对病毒性乙型肝炎具有明显的疗效。
皂苷是柴胡的重要活性成分，也是药物开发的重要目标，尤其是皂甙类成分，因其抗氧化、降血脂、抗肿瘤等活性非常强大，对疾病的预防和缓解都具有重要的疗效。
柴胡中皂苷类成分的提取、分离和鉴定是柴胡药物的重要课题，其中包括的步骤有：
一、柴胡中皂苷类成分的提取。
提取柴胡中的皂苷类成分，可以采用溶剂萃取法进行提取，其中最常用的是乙醇提取法和乙醚提取法，两种方法的原理都是利用不同溶剂提取植物中的物质，乙醇提取法可以从中萃取出一定比例的匝碱型皂苷，而乙醚提取法能够对柴胡中的酯型皂苷效果更好。
二、柴胡中皂苷类成分的分离。
在提取的基础上，利用色谱技术对其中的匝碱型皂苷和酯型皂苷进行分离，这种色谱技术可以利用不同分子的溶剂和层析特性，对柴胡中的皂苷进行相互分离。
此外，为了提高皂苷分离的精度和效率，还可以使用其他的分离技术，如凝胶电泳、离子交换色谱，等等。
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710867932.X(22)申请日 2017.09.22(71)申请人 山西中医药大学地址 030619 山西省晋中市榆次区大学街121号(72)发明人 王瑞 刘瑞 张强 俞越童 闫玺镁 (74)专利代理机构 北京志霖恒远知识产权代理事务所(普通合伙) 11435代理人 申绍中(51)Int.Cl.C07J 63/00(2006.01)G01N 30/02(2006.01)(54)发明名称一种柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的提取方法(57)摘要本发明涉及柴胡药材技术领域，更具体而言，涉及一种柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的提取方法；包括以下步骤：利用单因素和正交试验，确定同时提取柴胡皂苷a、c、d的方法；将柴胡粉末置于具塞锥形瓶中，加入10%氨水甲醇溶液，超声提取40min，重复提取两次，得到包含柴胡皂苷a、c、d的提取液；并用高效液相色谱测定了提取液中柴胡皂苷a、c、d的含量；本发明提供的同时提取柴胡皂苷a、c、d的方法，以柴胡为研究对象，采用单因素和正交试验得到柴胡皂苷a、c、d含量相对都较高的提取方法，为工业提取柴胡皂苷a、c、d提供了理论参考。
权利要求书2页 说明书8页 附图2页CN 107629108 A 2018.01.26C N 107629108A1.一种柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：进行单因素试验，得出各因素对同一柴胡药材中柴胡皂苷a、c、d提取效果的影响；进行正交试验，根据同一柴胡药材中同时提取柴胡皂苷a、c、d这三种皂苷含量的大小，确定提取条件；根据上述确定的提取条件，将柴胡药材粉碎成粉末，过四号筛，精密称取0.5g；将称取后的粉末放置在具塞锥形瓶中，加入氨水甲醇溶液；将具塞锥形瓶放入超声提取器中进行超声提取，将超声提取后的溶液进行过滤，得到滤液；重复步骤（5）提取；将所得滤液合并，得到包含柴胡皂苷a、c、d的提取液。
柴胡半夏汤中柴胡的提取工艺研究摘要目的：优选柴胡半夏汤中柴胡的提取工艺。
方法：采用正交试验法，以柴胡皂苷a 、干膏收率等多指标综合评分筛选柴胡最佳提取工艺。
结果：关键词柴胡；柴胡皂苷a；正交试验；提取工艺柴胡半夏汤为常用汤剂，处方源于《医学入门》卷四，由柴胡、半夏、陈皮、甘草、黄芩、白术、麦门冬7味中药经提取精制而成，具有治疗伤风发热恶寒、头痛无汗咳嗽等的功效，在临床应用中效果显著。
处方中柴胡为君药，主要有效成分为柴胡皂苷和挥发油，本文以柴胡皂苷a、干膏回收率作为考核指标，用正交试验法对柴胡半夏汤中柴胡的提取工艺进行优选，从而确定最佳提取工艺方案。
1 材料1.1仪器721型紫外可见分光光度计，电子天平，恒温水浴锅，电热恒温干燥箱等。
1.2试药柴胡皂苷a对照品，水为重蒸水，0.1%对二甲氨基苯甲醛、甲醇等均为分析纯。
柴胡、半夏、陈皮、甘草、黄芩、白术等药材均由江西中医学院提供，按《中国药典》2010版一部相关项下要求鉴定，符合要求。
2 提取工艺优选2.1正交试验采用水浴提取法提取柴胡，温度设置在100℃，选择加水量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）3个指标作为考察因素，每个因素选取3水平，因素水平(34) 正交表进行试验，每次取药材46.5g进行提取，提取详见表1。
选择择L9减压浓缩定容至100ml，备用。
表1 因素水平表Tab1 Levels of factors水平因素加水量（倍）提取时间（min）提取次数（次）（A）（B）（C）1 2 3 6 30 1 8 60 2 10 90 32.2柴胡皂苷a的含量测定2.2.1 对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a对照品3.6mg，置于10ml量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.36mg的对照品溶液，摇匀，即得。
2.2.2 标准曲线的绘制[1] 精密吸取上述对照品溶液1.2、2.5、5.0、7.5、10.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，精密吸取0.2 ml，分别加入0.1%对二甲氨基苯甲醛乙醇液0.1ml，70℃温热10 min。
朱兰1，黄东萍1，宋英2
1成都中医药大学药学院，四川成都 （610075）
2成都中医药大学附属医院，四川成都（610072）
E-mail：zhuzhu3227◎
摘要：目的：考察柴胡中柴胡皂苷a提取率的影响因素。
方法：考察提取溶媒，提取时间，粉碎程度等对柴胡皂苷a提取率的影响。
结果：提取溶媒的影响最大。
结论：柴胡皂苷a结构中的氧环易断裂，但采用碱醇提取能抑止其断裂，提取率高。
关键词：柴胡 柴胡皂苷a 提取
中图分类号：R28
1.引言
柴胡为伞形科植物柴胡(Bupleurum chinense DC.)和狭叶柴胡(B.scorzonerifoliunz Willd.)干燥根，具有疏散退热，疏肝解郁，升阳举陷之功效。
柴胡皂苷a、d被认为是柴胡的主要药效成分，对整个药物的疗效起着举足轻重的作用。
所以，在含有柴胡制剂的工艺研究过程中，应该以柴胡皂苷的含量为指标，找出影响其提取率的主要因素，确保制剂疗效，提高药材的利用度。
柴胡皂苷a、d具有13，28－氧环的结构，氧环不稳定，在酸的作用下醚键可能会断裂生成人工产物异环或同环双烯结构。
所以，在柴胡皂苷a、d在提取过程中，受植物体内酸性成分的影响，转变为柴胡皂苷b1、b2[1]。
又有人认为加热提取时间对柴胡皂苷a的含量影响较大，水提加热提取8h柴胡皂甙A已损失殆尽[2]。
故笔者针对这些因素，对柴胡的提取工艺进行了考察。
2.材料和仪器
2.1试药与试剂
乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
柴胡皂苷a对照品，纯度>98％，由江西本草天工科技有限责任公司提供。
2.2 仪器
HP1100型高效液相色谱仪(美国惠普公司)，二极管阵列检测器。
3.柴胡皂苷a的含量测定
3.1色谱条件
色谱柱，Diamond C18柱(5μm,4.6×250mm)流动相：乙腈：水：甲醇（40：45：15），流速
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图1 柴胡皂苷a对照品（A）、柴胡药材样品（B）
3.2标准曲线及线性范围
准确称取柴胡皂a标准品约5mg.分别置于10m1容量瓶中.用甲醇溶解后稀释至刻度。
混匀后分别进样2u1、5u1、10u1、15u1、20u1，按上述色谱条件作HPLC分析。
以对照品含量对峰面积积分值作图，得到一条直线。
结果表明，1.10 ~10.96µg范围内，线形关系良好，回归方程为：3.4215×105＋2.0532×106（r＝0.9999）。
4提取条件探讨
4.1提取溶剂的考察
称取柴胡粗粉3份（每份20g），分别以水、70％乙醇、70％乙醇（1‰Na2CO3）回流提取2次，每次1.5h，滤过，合并滤液。
取上述滤液各10ml，60～70℃水浴挥干溶剂，残渣加甲醇溶解并定容到5ml。
临用前过0. 45 µm滤膜，作供试品溶液，测定柴胡皂苷a，计算提取率，见表1。
结果表明加了1‰Na2CO3的70％乙醇溶液提取率最高。
表1不同溶媒提取柴胡皂苷a的提取率
提取溶剂水 70％乙醇
70％乙醇（1‰Na2CO3）
柴胡皂苷Amg.g-1 2.99 5.38 7.31 4.2粉碎与否的考察
称取柴胡饮片和粗粉各20g，加入70％乙醇（1‰Na2CO3）回流提取2次，每次1.5小
时h，滤过，合并滤液。
取滤液各10ml，60～70℃水浴挥干溶剂，残渣加甲醇溶解并定容
到5ml。
临用前过0. 45 µm滤膜，作供试品溶液，测定柴胡皂苷a，计算提取率，见表2。
结果表明柴胡粉碎成粗颗粒后提取率高。
表2不同药材形式柴胡皂苷a的提取率
药材形式饮片粗粉
柴胡皂苷Amg.g-1 2.98 7.31
4.3提取时间的考察
称取柴胡粗粉4份（每份20g），加70％乙醇（1‰Na2CO3）分别提取2小时、3小时、
4小时、6小时。
滤过，合并滤液。
取上述滤液各10ml，60～70℃水浴挥干溶剂，残渣加甲
醇溶解并定容到5ml。
临用前过0. 45 µm滤膜，作供试品溶液，测定柴胡皂苷a，计算提取
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表3不同提取时间柴胡皂苷a的提取率
提取时间2小时3小时4小时6小时
提取率mg/g 6.65 6.23 5.78 5.04
5结论
柴胡采用碱醇的提取率明显高于醇提和水提，且粉碎后能够大大的增加提取率。
加热对柴胡皂苷有一定的影响，在本实验中加了碱提的条件下，损失的比文献报道的小的多，故认为对柴胡皂苷a提取率影响最大的是PH值，并不是加热时间。
6讨论
6.1在柴胡皂苷HPLC含量测定流动相的选择中，我们首先选择的是资料中常用的方法，乙腈：水（40：60）[3]。
在柴胡的提取溶媒为甲醇时，柴胡皂苷a与其他峰分离度好，但以乙醇溶液或水为提取溶媒时则不能与其他峰分开，经过几番实验，最后选定乙腈：水：甲醇（40：45：15），柴胡皂苷a的峰与其他峰有良好的分离。
6.2柴胡皂苷a、c、d由于有13，28－氧环的结构，在酸性条件下容易出现如下反应：
故在提取过程中，加少量的碱能够中和柴胡中的一些酸性成分，增加此类柴胡皂苷的提取率。
据文献道醚键断裂后得到的次生皂苷并不具有原皂苷的一些药理作用[4]，但加碱后是否影响了其他有效成分的提取，提取物是否能保证柴胡的药效，仍然需要药效学实验来证明。
6.3实验过程中，我们使用了甲醇为提取溶媒提取柴胡皂苷a，提取效率为4.8mg/g左右，较乙醇提取率低得多，其原因可能是：甲氧基较乙氧基亲核性强，故较易发生如下反应：
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6.4自古以来，临床上多以其不同炮制品入药应用。
2005版中国药典柴胡项下收载了生柴胡和醋柴胡。
柴胡生品升散作用较强，多用于解表退热：醋炙品其升散之性缓和，疏肝止痛的作用增强。
多用于肝郁气滞的胁肋胀痈，腹痛及月经不调等症。
如治疗肝气郁结的柴胡疏肝散，治肝郁血虚，月经不调的消遥散[5]。
由于柴胡皂苷a等的不稳定性，醋炙以后柴胡皂苷a的含量降低，在此类制剂中，如果仍然采用柴胡皂苷a为工艺控制和质量标准指标，难免有些矛盾。
参考文献
[1] 宋晓凯主编.天然药物化学［M］.北京：化学工业出版社，2004：182;
[2] 张玲时延增徐新刚等. 加热提取时间对柴胡皂甙A含量的影响［J］.中草药，1997，28（4）：212～
214;
[3] 于健东，杨青，王钢力等. HPLC法测定柴胡中柴胡皂苷的含量及皂苷类成分指纹图谱初步研究［J］. 中
国中医药信息杂志.2004，11（2）：137～138;
[4] 杨秀伟主编.中药成分代谢分析［M］.北京：中国医药科技出版社，2009：416；
[5] 龚千锋主编.中药炮制学［M］.北京：中国中医药出版社，2002：199;
Studies on extraction Influence factor of Saikosaponin a
from Bupleurum Chinese
ZHU Lan 1，HUANG Dongping1，SONG Ying 2
1.Chengdu University of T.C.M, Chendu 610072,Sichuan province, China
2.Affiliated Hospital of Chendu University of T.C.M,Chendu 610072,Sichuan province, China
Abstract
OBJECTIVE:To study extraction Influence factor of Saikosaponin a from Bupleurum Chinese.METHODS: The effect of extraction menstruum，extraction time，comminution on Saikosaponin a 's extraction is Studied ed .RESULTS: Extraction menstruum is the biggest Influence factor. CONCLUSION : Saikosaponin a has weak chemic configuration, Use alkali ethanol to extract Saikosaponin a can prevent it's translation.
Keywords: Bupleurum Chinese; Saikosaponin a; extraction.
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