3,3,5,5-四甲基联苯胺的合成研究

1 。

称取TMB １７．２mg(固体），加ＤＭＳＯ１ml 溶解，然后加醋酸钠缓冲液（０．１ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ５．５）６６ml，此为底物A底物B ,取双蒸水100ml，加３０％H2O2１７微升使用时A：B 液等体积混匀即可．称取TMB 20mg(固体），先用无水乙醇10ml 溶解，充分振荡（试剂瓶要干净，干燥），加双蒸水定容到100 ml，此为底物A底物B ,取1水柠檬酸 2.1g，无水Na2HPO4 2.82g，0.75%的过氧化氢尿素0.64ml，双蒸水定容至100ml(无须调PH值，应在4.5-5.0范围。

使用时A：B 各取5ml 混匀，可用于一块96孔板显色。

过氧化氢脲比H2O2稳定，不必如H2O2现用现配，都起供氢体的作用。

2TMB(10mg/5ml无水l乙醇) 0.5ml底物缓冲液10ml0.75%过氧化氢32ul底物缓冲液:0.2M磷酸氢二钠25.7ml0.1M柠檬酸24.3ml加蒸馏水50mlTMB使用液：TMB （10mg/5ml，无水乙醇）0.5ml底物缓冲液10ml0.75% H2O2 32 Ul3.TMB加入2.5ml无水酒精中,可加热至37℃～40℃直到TMB完全溶解。

将TMB配成1%浓度，4 ℃保存半年以内使用。

使用前，用pH5.0磷酸—柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml（1mgTMB）1%TMB液，再按每毫升TMB加入30% H2O21ul混匀后立即使用。

2NH2SO4终止后，450nm测定OD值。

4.HRP的底物：A液：0.02%H2O2 ；用0.1M柠檬酸-0.2M磷酸氢二钠，PH4.5～5.0稀释。

B液：TMB-HCl：0.4‰；用50mM柠檬酸钠，浓HCl调PH值为2.8的溶液溶解。

A液，B液各50ul使用。

可使用起来显色比较缓慢，OD值较PIERCE的底物稍偏低一点。

5.1、TMB粉末，溶于N，N－二甲基甲酰胺，配成10mg/mL。

2、底物缓冲液：0.2Mol/LNa2HPO4 25.7mL0.1Mol/L柠檬酸24.3mL水50mL3、H2O2用时10mg/mL TMB 165uL底物缓冲液11mLH2O2 3.3uL酶标板中每孔加100Ul。

檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲殘殘殘殘分析监测3，3'，5，5'－四甲基联苯胺比色法测定总氯方法研究孟宪献，汤振华（天津市自来水集团有限公司，天津300040）摘要：针对3，3'，5，5'－四甲基联苯胺目视比色法测定水中的总氯存在样品显色后溶液的颜色与永久性余氯标准色列不一致，以及高浓度样品检测结果准确性差的问题，从提高水浴温度、增加显色剂用量和延长反应时间等三个方面进行改善。

结果表明，水浴温度由原来的30ħ提高到60ħ以及显色时间由原来的10min 延长至6h ，均可有效减少样品显色后与永久性余氯标准色列之间存在的色差，可以提高样品检测结果的准确性。

但是，延长反应时间会造成检测时间过长，不易于操作。

关键词：3，3'，5，5'－四甲基联苯胺；比色法；总氯；水浴温度中图分类号：O657文献标志码：C 文章编号：1673－9353（2013）02－0052－04doi ：10．3969/j．issn．1673－9353．2013．02．014总氯又称为总余氯，即游离氯和氯胺、有机氯胺类等化合氯的总称。

游离氯与化合氯能同时存在于水中。

水中氯的来源主要是饮用水或污水中加氯以杀灭或抑制微生物。

氯化作用可使含酚的水产生氯酚，还可生成有机氯化物，对人体十分有害，同时也会因为存在化合氯而对某些水生物产生有害作用［1］。

以前国内广泛采用邻联甲苯胺比色法（OT 法）测定总氯，但邻联甲苯胺对动物具有强致癌作用，对人也疑似是致癌物［2］。

3，3'，5，5'－四甲基联苯胺是20世纪80年代推出的一种无致癌性、无致突变性的色原试剂。

目前已在逐步取代强致癌物联苯胺及其他有害的联苯胺衍生物，在临床化验、法医检验和化学分析等领域获得了广泛应用［2］。

2006年颁布的《生活饮用水卫生标准检验方法》（GB /T 5750．11—2006）中用3，3'，5，5'－四甲基联苯胺取代了邻联甲苯胺进行余氯的检测，故笔者研究了3，3'，5，5'－四甲基联苯胺比色法测定总氯的方法，并对该方法检测的准确性进行了研究。

3，3+，5，5’一四甲基联苯胺的合成研究摘要:以2,6-二甲基苯胺起始原料,经过碘化、偶联反应合成了3,3′,5,5′-四甲基联苯胺,2步反应总收率63.49%。

产品经1HNMR表征。

该方法具有操作简单、成本低、步骤少等优点,适合工业化生产。

关键词:2,6-二甲基苯胺碘化偶联3,3′,5,5′-四甲基联苯胺3,3′,5,5′-四甲基联苯胺是一种新型安全的色原试剂,与传统的色原试剂如联苯胺、邻联甲苯胺及邻苯二胺等相比较,具有检测灵敏度高、稳定性好等优点,而且使用安全,无致癌、致突变作用。

目前3,3′,5,5′-四甲基联苯胺已在逐步取代强致癌物联苯胺和其他致癌性的联苯胺衍生物,应用于临床化验、法医检验、刑事侦破及环境监测领域。

尤其在临床生化检验方面,3,3′,5,5′-四甲基联苯胺作为过氧化酶的新底物,在酶免疫分析法(EIA)和酶联免疫吸附检验法(ELISA)中获得了广泛的应用。

但是其价格昂贵,因此研究它的合成方法具有非常重要的意义。

目前,国内外关于3,3′,5,5′-四甲基联苯胺的合成研究有一些报道。

综合国内外文献报道的情况,其合成方法主要有:(1)廖联安[1]等报道以2,6-二甲基苯胺为原料,经过酰化、溴化、去保护和偶联制得3,3′,5,5′-四甲基联苯胺,总产率16%;(2)路文超[2]等报道以2,6-二甲基苯胺为原料,以四水合硫酸铈经氧化偶联反应制得3,3′,5,5′-四甲基联苯胺,收率20%;(3)黄斌[3]等报道以2,6-二甲基苯胺为原料,经过成盐、溴化、水解和偶联制得3,3′,5,5′-四甲基联苯胺,收率43.56%。

以上方法都存在收率不高,产品分离困难等缺点。

笔者从原料来源、工业可操作性、收率和成本等因素出发,选择2,6-二甲基苯胺为原料,经过碘化反应得到4-碘-2,6-二甲基苯胺,然后在Pd/C催化作用下,以甲酰肼为还原剂,还原偶联合成3,3′,5,5′-四甲基联苯胺。

该路线具有工艺简单、反应步骤少、收率高等优点,适合工业化生产。

HRP氧化TMB后吸收波长1. 介绍HRP（horse radish peroxidase）是一种常用的酶标记物，在生物医学研究和临床诊断中广泛应用。

TMB（3,3’,5,5’-四甲基联苯胺）是一种常用的底物，可以通过HRP催化氧化反应生成蓝色产物。

本文将探讨HRP氧化TMB后的吸收波长。

2. HRP氧化TMB反应原理HRP氧化TMB反应是一种经典的酶标记反应。

在这个反应中，HRP作为催化剂，利用氢过氧化物（H2O2）将TMB氧化为蓝色产物。

该反应的化学方程式如下：TMB + H2O2 + HRP → 蓝色产物 + H2O蓝色产物是由氧化后的TMB形成的，其吸收波长与产物的结构有关。

3. TMB的吸收波长TMB在HRP催化下氧化生成的蓝色产物具有一个特定的吸收波长。

根据文献报道，TMB氧化后的产物在650 nm左右具有最大吸收波长。

这个吸收波长的确定是通过分光光度计测量得到的。

在实验中，将反应体系中的蓝色产物溶液转移到光量管中，然后使用分光光度计测量光量管中的吸光度。

通过扫描不同波长下的吸光度，可以确定TMB氧化产物的最大吸收波长。

4. 影响TMB吸收波长的因素TMB氧化产物的吸收波长可以受到多种因素的影响。

其中一些重要的因素包括：4.1 pH值pH值对TMB氧化产物的吸收波长有一定影响。

根据研究，较低的pH值（酸性条件）下，TMB氧化产物的吸收波长会向红移，即波长增加。

而较高的pH值（碱性条件）下，吸收波长会向蓝移，即波长减小。

因此，在实验中，需要根据具体的研究目的和条件来选择合适的pH值。

4.2 反应时间TMB氧化反应的时间也会对吸收波长产生影响。

一般来说，随着反应时间的延长，TMB氧化产物的吸收波长会逐渐稳定在一个特定的值。

因此，在实验中，需要确定适当的反应时间，以确保吸收波长的准确测量。

4.3 底物和催化剂浓度底物和催化剂的浓度也会对TMB氧化产物的吸收波长产生影响。

一般来说，较高的底物和催化剂浓度会导致吸收波长的增加。

新型显色剂33’，55’－四甲基联苯胺比色法测定水中余氯刘莲华;杨皓琦;李新新;褚兆洪
【期刊名称】《中国公共卫生》
【年(卷),期】1994(10)1
【摘要】用新型氧化还原剂３·３’，５·５’－四甲基联苯胺（ＴＭＢ）比色法测定水中余氯（目测），与目前使用的传统显色剂邻联甲苯胺（ＤＭＢ）比较，灵敏度高，显色稳定，准确性好，使用安全，适用于饮用水及一般水源水中余氯的测定。

【总页数】3页(P25-27)
【关键词】显色剂;余氯;水卫生;比色法
【作者】刘莲华;杨皓琦;李新新;褚兆洪
【作者单位】江苏省苏州市卫生防疫站,苏州市平江区卫生防疫站
【正文语种】中文
【中图分类】R123.6
【相关文献】
1.3，3’，5，5’-四甲基联苯胺比色法检测水中游离余氯的探究 [J], 初亚琴
2.3,3′,5,5′-四甲基联苯胺比色法测定饮用水中余氯 [J], 康苏花
3.新型显色剂3,3,5,5′-四甲基联苯胺分光光度法测定余氯的研究 [J], 项苏留;蔡肇夏;李文遐;张志兰
4.用四甲基联苯胺分光光度法测定水中余氯 [J], 张丽萍;沈建敏;平伯年
5.3，3’，5，5’-四甲基联苯胺比色法检测水中游离余氯的探究 [J], 初亚琴
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3 , 3 ′, 5 , 5 ′-四甲基联苯胺| 54827-17-7|显现法及应用注意事项摘要：血手印是有色的手印,经常出现于杀人、抢劫、强奸等重特大暴力性案件中,通常情况下清晰的血手印是无须再行显现处理的,但有些潜血手印则需要进行处理,增强反差和显现。

实际工作中我们常用的是四甲基联苯胺。

关键词：3,3′,5,5′-四甲基联苯胺（TMB），3 , 3 ′, 5 , 5 ′- 四甲基联苯胺显现法，应用注意事项前言3,3′,5,5′-四甲基联苯胺，白色或浅黄色结晶，熔点168.0-171.0℃，CAS：54827-17-7，[1]是一种新型安全的色原试剂,与传统的色原试剂如联苯胺、邻联甲苯胺及邻苯二胺等相比较,具有检测灵敏度高、稳定性好等优点,而且使用安全,无致癌、致突变作用。

目前3,3′,5,5′-四甲基联苯胺已在逐步取代强致癌物联苯胺和其他致癌性的联苯胺衍生物,应用于临床化验、法医检验、刑事侦破及环境监测领域。

尤其在临床生化检验方面,3,3′,5,5′-四甲基联苯胺作为过氧化酶的新底物,在酶免疫分析法(EIA)和酶联免疫吸附检验法(ELISA)中获得了广泛的应用。

1 3 , 3 ′, 5 , 5 ′- 四甲基联苯胺显现法[2]刑事案件现场上经常遇到因盗窃、强奸、抢劫、绑架等原因发生的行凶杀人案, 在这些手段残忍、性质恶劣、影响极坏的杀人命案中, 在被害人的常用品、衣物、周围环境以及作案工具上经常会遗留下犯罪嫌疑人的血手印或潜血手印,这就给我们在现场勘查中提取血手印提供了可能。

近年来, 各地在重、特大案件现场进行潜血手印的显现处理时, 都普遍采用了低毒安全的四甲基联苯胺显现法。

通常我们大都采用无水乙醇作为溶剂配制四甲基联苯胺显现液, 通常的配方为: 甲液: 四甲基联苯胺1- 1.2g, 无水乙醇100ml; 乙液: 3%过氧化氢(H2O2)。

配制浓度: 甲: 乙= 5: 1, 即甲液100ml, 乙液20ml。

3,3',5,5'-四甲基联苯胺是一种常见的有机化合物，其化学式为C16H19N。

在该分子中，有四个甲基基团分别连接在苯环的3号和5号位以及苯胺的3'号和5'号位上。

底物的选择对氧化过程非常重要，因为不同的底物可能导致不同的氧化产物。

在3,3',5,5'-四甲基联苯胺的氧化过程中，产生的氧化产物可能会受到配体的影响，产物的结构式可能会发生变化。

下面将对3,3',5,5'-四甲基联苯胺氧化后的结构式进行分析。

1. 氧化反应3,3',5,5'-四甲基联苯胺在氧化反应中可能会发生苯环的氧化，也可能发生苯胺的氧化。

这取决于氧化剂和反应条件。

常见的氧化剂包括过氧化氢、高锰酸钾、三氧化二碘等。

在不同的氧化条件下，3,3',5,5'-四甲基联苯胺可能出现不同的氧化产物，包括亚甲基苯酮、联苯二酮、双肟酮等。

不同的产物具有不同的结构式，对氧化条件进行优化可以选择出理想的产物。

2. 结构式分析对于3,3',5,5'-四甲基联苯胺氧化后的产物，可以通过质谱、核磁共振等手段对其进行结构鉴定。

通过这些手段可以确定氧化产物的结构式，包括碳骨架的结构以及官能团的位置。

通过结构式分析可以进一步确定3,3',5,5'-四甲基联苯胺氧化反应的机理，为该反应的优化提供理论依据。

3. 氧化反应优化针对3,3',5,5'-四甲基联苯胺的氧化反应，可以通过调整反应条件、改变氧化剂和催化剂等手段来优化反应条件，以获取高产率和高选择性的氧化产物。

优化反应条件需要进行多次实验，通过不断调整反应条件，逐步确定最佳反应参数。

在优化反应条件的过程中，结构式分析是必不可少的手段，可以通过结构式分析来确认氧化产物的结构，确定氧化反应的方向。

4. 应用前景3,3',5,5'-四甲基联苯胺及其氧化产物在有机合成、药物合成等领域具有重要的应用前景。