TMB配方大全

粉末显现法：静电吸附原理。

手印物质与粉末的强亲和力来自于静电势，但这种静电势并不是恒定的，对手印来说时间越长，水分等流失越多，电阻率上升，静电位下降，手印与粉末间吸附力降低。

磁性粉末：一种和成粉末，主体是铁，外包碳粉。

400目左右即可。

主要由能被磁力吸引的金属粉末和其他粉末。

使用方法：直接显现法、撒粉显现法、抖粉显现法、磁性粉显现法适用于光滑非渗透性客体表面。

如陶瓷、玻璃、金属等！502胶显现法：a-氰基丙烯酸乙酯为主体，患有少量对苯二酚和二氧化硫阻聚剂的粘合剂。

显现原理：由于含有很强的吸电子基氰基和酯基的存在，它的单体很容易在水和弱碱的引导下进行阴离子聚合。

单体挥发后在水和氨基酸的作用下发生阴离子聚合最终生成固体聚合物使手印显出。

即是挥发后遇到手印部位发生聚合，显出手印。

适用客体：非渗透性客体上的新鲜汗潜手印，如塑料金属等。

对于陈旧手印要用甲胺处理后才能显现。

最佳显现条件：湿度80%、温度显现方法：自然熏显、加温熏显、加温加湿熏显（熏显柜、大型密闭空间熏显系统）、滤纸贴附法、真空熏显法、真空加温加湿熏显法。

后处理方法：加荧光试剂、加碘熏显、烟熏、粉末染色、化学试剂染色法。

优点：1灵敏度高，可用于陈旧手印、也可以用于显现皮肤、皮革、细纺织品等2适用范围广，所有非渗透性客体和部分半渗透性客体3显现纹线清晰，不易破坏，可长久保存。

4价格低廉5英国的大型熏显系统可用于大空间和大客体，而且有活性炭部分环保。

小微粒悬浮液法:主要针对非渗透性客体上的油脂手印，油脂在水中不溶解而且对小微粒具有吸附作用达到显现效果。

高真空镀膜法（vmd）主要针对黑色塑料袋渗透性客体上潜在手印显现茚三酮显现法：氨基酸检测试剂。

针对汗潜手印。

反应原理：茚三酮反应很复杂，主要是与氨基酸反应。

茚三酮水合物与氨基酸反应失去2分子水，产物再水解，再与茚三酮水合物反应失水然后互变异构得紫色化合物，即鲁赫曼紫。

鲁赫曼紫易溶于水，应保存在干燥环境中。

ELISA试剂及溶液配制①包被液：0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)0.75g碳酸钠,1.46g碳酸氢钠,加去离子水定容至500ml。

②0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)0.2g磷酸二氢钾，2.90g磷酸氢二钠，8g氯化钠，加去离子水定容到1000ml。

③抗体稀释液：0.02mol/L PBS(pH7.4)+0.2%BSA0.2gBSA加配好的0.02mol/L磷酸盐缓冲液溶解定量至100g。

④封闭液：0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)+2.0%BSA2.0gBSA加配好的0.05mol/L碳酸盐缓冲液溶解定量至100g。

⑤洗涤液：0.02mol/L PBS(pH7.4)+0.05%Tween-20将50ulTween-20溶入100ml0.02mol/L磷酸盐缓冲液中，震荡混匀。

⑥显色液：TMB-过氧化氢尿素溶液A液(3，3’，5，5’-四甲基联苯胺，TMB):称取TMB20mg溶于10ml无水乙醇中，完全溶解后，加双蒸水至100ml。

B液(0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液，pH5.0-5.4):称取Na2HPO4·12H2O14.34g，柠檬酸1.87g溶于180ml双蒸水，加0.75%过氧化氢尿素1.28ml，定容至200ml，调pH至5.0-5.4。

将A液和B液按1：l混合后即成TMB-过氧化氢尿素应用液。

⑦终止液：2mol/L H2SO4溶液10ml98%浓硫酸加入60ml双蒸水中，定容至100ml，室温保存。

⑧酶标二抗：HRP标记的羊抗兔 IgG，应用时用抗体稀释液稀释3000倍。

2.2.6 抗血清的分离采集血液后，去掉针头，缓慢注入已经灭菌的三角烧瓶中，待凝固后用灭菌滴管将血液沿边缘剥离，室温放置1小时，再放入4℃冰箱过夜(不能冰冻，否则产生溶血)，使血清充分析出。

第二天取出后以4℃3000r/min离心30min，取上清，分装后-20℃保存备用。

WB试剂配方SDS-上样缓冲液(2X) 100ml （100 mM Tris-Cl (pH 6.8)；4% (w/v) SDS；0.2% (w/v) bromophenol blue；20% (v/v) glycerol；200mM DTT (dithiothreitol)Tris-base 1.2114gSDS 4gbromophenol blue 0.2gglycerol 20mlddH2O 定容至80ml1M DTT 20mlStore the SDS gel-loading buffer without DTT at room temperature. Add DTT from a 1 M stock just before the buffer is used.配胶：30%丙烯酰胺（商品化29:1）Tris-HCl：（1）分离胶（PH8.8）1.5M称取Tris-base（MW121.14）91.855 g，先ddH2O 400ml，用盐酸调pH=8.8后，定容至500ml（2）浓缩胶（PH6.8）1M称取Tris-base（MW121.14）60.57 g，先ddH2O400ml，用盐酸调pH=6.8后，定容至500ml 10% SDS称取10g SDS粉末，溶于入100ml ddH2O即可，可80℃水浴加热，易于溶解。

10%APS（过硫酸铵）: 称取1 g过硫酸铵；加入10 ml的ddH2O，将固体粉末彻底溶解；贮存于4℃。

TEMED（商品化）SDS-PAGE电泳缓冲液（25mM Tris, 192mM Glycine, 0.1%SDS）25℃，pH约为8.6Tris-base(MW121.14) 3.03gGlycine(MW75.07) 14.41gSDS 1g加ddH2O定容至1000ml转移缓冲液称取14.3g Glycine，2.9g Tris.base，200ml 甲醇定容至1L，存于4℃10x 丽春红染液丽春红S 2g三氯乙酸30g磺基水杨酸30g加ddH2O定容至100ml用时稀释10倍10x TBS母液（1L）20mM Tris-base 24.228g150mM NaCl 87.75g先溶于800ml ddH2O，用浓HCl调pH=7.2-7.4，后定容至1L用时先稀释成1xTBS，并补加入1‰Tween-20后配成1xTBS-T封闭液5% milk：称取5g脱脂奶粉，溶于100ml 1xTBST；3% BSA：称取3g BSA粉末，溶于100ml 1xTBST发色液ECL Plus western blottingdetection system 和Advance ECL western blotting detection system，以及SuperSignal West Pico Chemiluminescent（等级强度Advance>ECL Plus> west pico）。

各种TLC显色剂及其配制方法各种显色剂及其配制方法1碘：不饱和或者芳香族化合物配制方法 :在100ml广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。

或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅胶 2紫外灯含共厄基团的化合物，芳香化合物3硫酸铈：生物碱配制方法:10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液4氯化铁苯酚类化合物配制方法 1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.5桑色素(羟基黄酮) 广谱, 有荧光活性配制方法 :0.1% 桑色素+甲醇6茚三酮氨基酸配制方法 :1.5g 茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸7二硝基苯肼(DNP) 醛和酮配制方法 :12g二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸 + 80mL 水 + 200mL 乙醇8香草醛(香兰素) 广谱配制方法 :15g 香草醛 + 250mL 乙醇 +2.5mL 浓硫酸9高锰酸钾含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛配制方法 :1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH + 200mL 水. 使用期3个月10溴甲酚绿羧酸，pKa<=5.0配制方法:在100ml乙醇中，加入0.04g溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH水溶液，刚好出现蓝色即至。

11钼酸铈广谱配制方法:235 mL 水 + 12 g 钼酸氨 + 0.5 g 钼酸铈氨 + 15 mL 浓硫酸12茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1 广谱配制方法:135 乙醇 + 5 mL 浓硫酸 + 1.5 mL of 冰醋酸 + 3.7 mL 茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.13茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2 萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine) 配制方法:茴香醛:HClO4:丙酮:水 (1:10:20:80)14磷钼酸(PMA) 广谱配制方法 :10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇。

36种常用微生物培养基配制汇总之欧阳理创编微生物培养基是用于培养和繁殖微生物的营养液或固体基质。

不同的微生物对于营养成分的需求有所不同，因此有多种不同类型的培养基适用于不同的微生物。

以下是36种常用的微生物培养基的配制总结。

一、普通营养基1.爱德华氏琼脂培养基(Edward's Agar Medium)配方：纯培养基成分：蛋白胨10g，蔗糖10g，酵母提取物5g，琼脂15g，蒸馏水1L。

pH7.2-7.42.LB培养基(LB Medium)配方：纯培养基成分：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl10g，琼脂15g，蒸馏水1L。

pH7.0。

3.NB培养基(NB Medium)配方：纯培养基成分：牛肉精20g，酵母浸膏10g，蔗糖10g，琼脂15g，蒸馏水1L。

pH7.2二、选择性培养基1.MacConkey琼脂培养基(MacConkey Agar Medium)配方：纯培养基成分：蛋白胨17g，胆盐16g，中性红紫晶1g，酸性红3.6g，琼脂15g，蒸馏水1L。

pH7.1-7.52.VR琼脂培养基(VR Agar Medium)配方：纯培养基成分：蛋白胨10g，蔗糖10g，酵母浸膏10g，苏木素2.5g，酚红0.025g，碳酸钠10g，氧化钴0.0025g，碳酸锌0.025g，维生素B10.025g，琼脂15g，蒸馏水1L。

pH6.83.XLD琼脂培养基(XLD Agar Medium)配方：纯培养基成分：蛋白胨3g，胆盐2g，蔗糖7.5g，腺苷鳖1g，素含色素蓝0.008g，溴酸钠0.0125g，菌落素1.5g，氧化铋1.5g，精盐75g，麦芽葡糖糖1g，琼脂15g，蒸馏水1L。

pH7.4三、富营养基1.TSA琼脂培养基(Tryptic Soy Agar Medium)配方：纯培养基成分：蛋白胨15g，酵母提取物5g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水1L。

pH7.32.BHI琼脂培养基(Brain Heart Infusion Agar Medium)配方：纯培养基成分：牛心脏粉15g，牛脑粉8g，葡萄糖2g，酵母浸膏5g，琼脂15g，蒸馏水1L。

百日咳（毒素、血凝素、粘附素）ELISA双抗夹心操作规程1试剂（试剂配方见附录）1.1包被液：1M PH9.6碳酸盐缓冲溶液1.2洗液：含0.05%Tween-20的1×PBS溶液（PBST）1.3封闭液：含1%小牛血清的0.01M PH7.4磷酸盐缓冲溶液1.4样品稀释液：PBS(0.01M,PH7.4)1.5TMB底物液A、底物液B1.6终止液：2M硫酸溶液2设备/仪器2.1酶标板：2.2电热恒温培养箱：上海福玛DPX-927213-22.3酶标仪：Molecular Devices Versa Max2.4洗板机：BioTek ELx4053操作步骤3.1包被：用1M，PH9.6碳酸盐缓冲溶液将包被抗体稀释至包被浓度，100uL/孔，4℃孵育过夜或37°孵育1小时。

3.2封闭：清空酶标板，洗液洗2次；加封闭液200uL/孔，4℃孵育过夜或37°孵育1小时后洗液洗2次，备用。

3.3样品及阴性对照品预稀释：将待检测的PT,FHA,Prn原液用原倍0.01M,PH7.4磷酸盐缓冲溶液稀释至所需浓度，阴性样品使用原倍0.01M, PH7.4磷酸盐缓冲溶液。

3.4加样：将上述稀释好的样品振荡混匀，100ul/孔，每稀释度两个平行，阴性样品使用原倍PH7.4磷酸盐缓冲溶液，100ul/孔。

37℃孵育60分钟。

洗液洗2次。

3.5一抗血清：用0.01M PH7.4PBST将抗PT/FHA/Prn血清洗液洗2次。

3.6二抗：使用0.01M,PH7.4磷酸盐缓冲溶液按说明书倍数稀释，每孔加100uL，37℃孵育60分钟。

洗液洗4次。

3.7显色：每孔加底物液A和底物液B各50uL，室温避光静置5-20min。

3.8终止：每孔加终止液50uL，450nm处检测各孔的吸光度。

附录：1：1M，PH9.6碳酸盐缓冲液配制方法：无水碳酸钠3.18g/L，NaHCO3碳酸氢钠5.68g/L。

2：洗液PBST配制方法：10×PBS：0.1M的Na2HPO4·12H2O+1.5M的NaCl，PBST：原倍PBS+0.05%Tween。

一、做ELISA确定抗原最佳包被浓度，做方阵滴定具体怎么做呢？选择好一份已知为阳性和阴性背景的标本，将你的抗原用1*CB PH=9.6或1*PB PH=7.4进行倍比稀释（8个条件）后加入96孔板每孔100ul。

（一般包被浓度100ng抗原或抗体/孔，最优包被条件需进行试验选择）4度过夜取出后甩干，加入20%NBS封闭每孔200ul。

37度2h热封，甩去后拍干即可。

将你HRP或AP标记的抗原或二抗用酶标稀释液进行稀释（倍比稀释4个梯度）即可。

棋盘滴定就是板酶交叉,同时带上阳性、阴性通过试验确定最佳P/N的包被搭配E 的试验2．抗原和抗体最佳工作浓度的确定抗原抗体反应要求在最适比例条件下进行，ELISA反应试剂多，其工作浓度不同对结果影响较大，因此必须对包被抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)进行最佳工作浓度的滴定和选择，以达到最佳的测定条件。

1）方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原的工作浓度用包被液将抗原作一系列稀释(1:50～l:800)后，按行进行包被、洗涤。

按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照)，保温，洗涤。

加工作浓度酶标抗体，洗涤，加底物显色，加酸终止反应后读取A值。

选择强阳性参考血清A值；为0．8左右，阴性参考血清A值<0．1的包被抗原稀释度为工作浓度。

方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度将抗体用包被液稀释为10mg／L、lmg／L、0.1mg／L三个浓度按行包被，每一个浓度包被三行(每行3孔)，分别在每个浓度包被的第一、二、三行中分别加入强阳性抗原，弱阳性抗原和阴性对照，将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:l 000、l:5000、l:10000三个浓度，分别加入每个浓度包被的第一、二、三列中。

加底物显色，加酸终止反应，分别读取A值。

以强阳性抗原液A值在0.8左右，阴性参考A值<0.1的条件为最适条件。

据此选择包被抗体和酶标抗体的最佳工作浓度。

Elisa 相关试剂的配制1、抗体或免疫球蛋白稀释液0.01mol/L pH7.2PBSNaH2PO4·2H2O——0.39克；Na2HPO4——1.27克；NaCl——0.85克；NaN3——200 mg；H2O（蒸馏水）至1000ml2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液PH7.4，PBSTNaCl——2.0克；KH2PO4——0.2克；Na2HPO4·12H2O——2.9克；KCl——0.2克；NaN3——0.2克；H2O至1000ml 吐温（Tween）20 0.5ml；4°C保存备用3、包被液（简称CB）pH9.6Na2CO3——1.59克；NaHCO3——2.93克；NaN3——0.2克；H2O至1000ml 密封盖好，4°C存放备用4、ELISA底物液（可溶性底物）磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.00.1mol/L柠檬酸（21.014克/100ML）——24.3ml；0.2mol/L Na2 HPO4（28.4克/L)——25.7ml；H2O ——50ml；4°C存放备用5、DAB底物液（不溶性底物，组化病理等）0.05mol/L pH7.6 tris-HCLTris——6.05克；HCL(36%)——3.15克（约2.7ml浓HCL）；H2O 至1000ml DAB为3´，3´二氧基联苯胺，不溶性底物，呈棕红色ELISA试剂配制及实验流程是酶联接免疫吸附剂测定(( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。

以双抗体夹心法举例说明。

试剂配制：(1) 包被缓冲液(PH9.6 +0.2 0.05M碳酸盐缓冲液)： Na2CO3——1.59g ;NaHCO3 ——2.93g ；加蒸馏水至1000ml。

（用时稀释成1x，加0.1%BSA）(2)洗涤缓冲液(PH7.4 0.15M PBST)：0.05%Tween-20——0.5ml；加在PBS缓冲液1000ml 中。

表活胶束配方
月桂酰胺丙基甜菜碱（LABS）：作为主表面活性剂，占总重量的0.3%～0.6%。

十二烷基硫酸钠（SDS）：作为辅助表面活性剂，占总重量的0.1%～0.2%。

纳米二氧化硅溶胶：作为稳定剂和增稠剂，占总重量的0.3%～1.0%。

氯化钠：作为盐调节剂，占总重量的2%～4%。

水：作为溶剂，其余量为水。

具体配方需要根据实际需求进行调整，以达到最佳的表活胶束效果。

此外，该配方中各组分的重量百分含量之和为100%，需要按照比例进行混合。

表活胶束配方具有广泛的应用前景，可以用于化妆品、个人护理用品、农药、石油、采矿等领域。

该配方具有高表面活性、低临界胶束浓度、低毒性和良好的生物降解性等优点，因此在许多领域中都具有广泛的应用前景。

在制备表活胶束时，需要注意以下几点：
选择合适的表面活性剂和稳定剂，以确保表活胶束的稳定性和性能。

确定各组分的最佳配比，以获得最佳的表活胶束效果。

注意温度、搅拌速度等工艺条件对表活胶束的影响。

对制备好的表活胶束进行质量检测，确保其符合相关标准和要求。

注意储存和运输过程中的安全问题，避免发生事故。

总之，表活胶束配方是一种具有广泛应用前景的新型表面活性剂，可以用于多个领域中。

通过不断的研究和改进，相信该配方的性能和应用范围会得到进一步拓展。