TMB配方

ELISA测定中TMB显色体系的优化及其稳定性研究李红梅;陈佳;徐斐;曹慧;Maria Eugenia【摘要】通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚砜(DMSO)配制四甲基联苯胺(TMB)浓度为0.3 mg/mL的溶液为A液,pH5.5,0.2 mol/L磷酸氢二钠与0.1 moL/L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为0.74 mg/mL的溶液为B液,两者按一定比例混合后使用.试验结果表明,此显色体系在25-40℃内进行都可得到较为准确的结果,且A、B液混合后在室温下放置4 h仍可使用.A液及B液分别在4℃放置60 d后混合使用仍不影响测定结果.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2010(000)002【总页数】5页(P126-130)【关键词】酶联免疫测定;显色;辣根过氧化物酶;TMB【作者】李红梅;陈佳;徐斐;曹慧;Maria Eugenia【作者单位】上海理工大学医疗器械与食品学院,上海,200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海,200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海,200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海,200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海,200093【正文语种】中文酶联免疫测定法(EL ISA)是基于抗原抗体结合的高度特异性及酶的高效催化性的一种免疫分析法[1],由于动物机体天然存在产生各种抗体的能力,因此,根据抗原抗体特异性结合原理设计的这种免疫分析方法,几乎可以应用于所有的可溶性抗原的检测。

并且,随着单克隆抗体技术的发展应用,EL ISA已广泛应用于临床医学、动物检疫、食品科学、植物病毒、药物残留、病虫害防治等领域,它的最小可测值可达到ng甚至pg水平[2,3]。

与放射性免疫测定(R IA)相比,酶免疫测定中待测物的含量是通过酶标记物的酶催化显色反应来判断的,其优点是标记试剂比较稳定,且无放射性的危害,能够客观的显示结果,因此其应用范围更广。

W-TMB显色试剂产品编号：PW025包装规格：5 membranes产品简介TMB的全称为3,3，,5,5，-四甲基联苯胺，为无色物质，作为供氢体，在辣根过氧化物酶作用下，被氧化的情况下，产生有兰色的产物,在特殊试剂的作用下,沉淀在膜上，主要吸收峰在370 nm和652nm，比色方便，是HRP结合物最常用的底物，在免疫组织化学，原位杂交,western blot ，southernblot等膜显色中应用比较广泛, 也可以用于原位检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。

运输和保存条件常温下运输，收到后，将所有溶液 2-8°C情况下保存，保质期为一年。

组成本试剂用于免疫组织化学，原位杂交,western blot ，southernblot等膜显色,由底物溶液A, 底物溶液B和缓冲液C三部分构成:能够使用5次成份PW025PW025-1底物溶液A 2.60 mlPW025-2底物溶液B 0.10 mlPW025-3缓冲液C 50 ml使用方法1. 在免疫印迹(western blot)实验中,先将相应的HRP（辣根过氧化氢酶）标记的二抗覆盖膜后,在37°C的情况下,于震荡器上,震荡一个半小时左右,再用TBST或者PBST洗涤膜3~4次, 最后一次用TBS或PBS洗涤膜,将膜转移到阴暗处.2. 显色前,先将膜浸泡在10 ml的缓冲液C中十分钟，再加入0.5 ml左右的底物溶液A,底物溶液B 4ul,混匀。

3. 在阴暗处，在37°C的情况下,反应5-30分钟即可.这时兰色的产物条带出现.4. 照像记录实验结果.注意事项1. 缓冲液C在使用前充分震荡混匀。

2. 请在使用前按照上述比例配置所需溶液。

现配现用，如果有多余，当颜色变蓝时，应该丢弃。

3. 请使用完后，将分析液A,分析液B和缓冲液C的盖子旋紧,以防止溶液挥发和与空气中的成分发生化学反应。

4. 如果所使用的膜较大,请适当增加所配试剂的量,以便完全覆盖膜。

PH0410|TMB显色液(沉淀型，组化或膜HRP显色用)TMB Color Development Solution for IHC or BlottingCatalog No：PH0410Size：☐100mL|500mL Storage：Store@4℃◆产品简介TMB，即3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶（HRP）的常用底物。

在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB会产生蓝色产物。

Phygene的TMB显色液（沉淀型，组化或膜HRP显色用，TMB Color Development Solution for IHC or Blotting）采用最新的单一溶液的TMB显色技术，用于Western或免疫组化等HRP的显色检测，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。

本显色液具有高灵敏性，与HRP反应后产生蓝紫色沉淀，沉淀吸附于印迹膜上，不会脱落，方便显色结果的保存和观察。

由于产生的是沉淀型蓝色产物，不适用于ELISA检测。

*用于免疫组化检测时，如果每个样品的显色液用量为0.1ml，则可以检测1000个样品；对于膜的显色检测，如果每次使用2.5ml显色液，则可以检测40次。

特点：方便：无需其他试剂,直接使用;也无需特别的设备，能直接观察；灵敏：独特的配方,显色时间短,对超微量的HRP都能检测，不像4-CN等那样会褪色；安全：不含任何有机溶剂，也无需用有机溶剂稀释；稳定：4℃避光保存至少1年有效。

◆产品保存4℃避光保存；一年有效。

◆使用参考如果发现TMB显色液出现混浊或颜色变成蓝色，应该停止使用。

一.免疫组化检测：1.参考免疫组化的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液（如PBS）洗涤3-5次，每次3-5分钟。

2.洗涤完毕后，去除洗涤液，滴加约100微升TMB显色液。

3.室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可在湿盒中显色过夜)，直至显色至预期深浅。

TMB（3,3',5,5'-四甲基苯胺）是一种有机化合物，拥有很强的氧化性能。

在合成多孔碳材料的过程中，TMB起着重要的作用。

以下是TMB在多孔碳合成中的几个作用：
1.模板剂作用：TMB作为模板剂，被引入到多孔碳材料合成体系中。

在一些方法中，TMB可以作为模板剂通过热解过程产生气体，形成孔道的结构，从而控制多孔碳材料的孔结构和孔径分布。

2.热解源：在多孔碳合成过程中，TMB可以被热解为气态产物，如苯气体。

这些气体在高温条件下被分解，产生碳原子，进而形成多孔碳结构。

因此，TMB在多孔碳合成过程中起到提供碳源的作用。

3.表面活性剂：TMB在多孔碳合成过程中，可以产生大量的有机气体，这些气体在反应过程中与热解产物相互作用，有助于聚集和排列形成多孔结构。

总而言之，TMB在多孔碳合成过程中具有模板剂、热解源和表面活性剂等多种作用。

它能够控制多孔碳材料的孔结构和孔径分布，提供碳源以形成多孔结构，并引导有机气体的聚集和排列。

这些作用有助于实现对多孔碳材料的精确控制和定制，从而拓宽多孔碳材料的应用领域，例如催化、吸附、能源储存等。

需注意，合成多孔碳材料的具体方法和条件还需要根据具体实验设计进行优化和调整。

碘苯二乙酸氧化机理碘苯二乙酸氧化机理碘苯二乙酸（TMB）是一种有效的有机氧化剂，可用于氧化醇、芳香族化合物和环醚等有机物。

TMB的分子式为C14H10O4I2，其分子结构中含有两个碘原子和两个邻位有机酸基团，这使得TMB具有了很强的氧化性能。

以下就从分类角度来探讨TMB的氧化机理。

一、碘苯二乙酸的自身氧化机理TMB的自身氧化过程主要涉及到两个步骤：首先，TMB失去其中一个酸基团，形成中间体TMB-（即TMB的负离子形式），这也就是TMB 可作为酸性试剂的原因。

其次，TMB-将产生自由基中间体，随后会继续进行一连串的反应，最终生成远低于TMB的碳酸盐产物。

二、碘苯二乙酸氧化有机醇氧化醇是TMB最常见的反应应用之一。

TMB能够通过攫取醇中的氢原子实现其氧化。

TMB将酯层分子打破，形成醛和酸的混合物，并最终生成酸。

这个过程中TMB发挥了一个氧化剂的角色，使得醇的氧化过程变得更为容易。

三、碘苯二乙酸氧化芳香族化合物TMB也具有氧化芳香族化合物的功能，其中最常见的反应是对苯二甲酸（TPA）与TMB的反应。

当TPA存在于反应中时，会受到TMB中的酸成分的引导，并在其中产生自由基中间体。

其中间体还会进一步发生进一步的反应，产生TPA++-TMB相交链。

这些链结构是TMB成为高效氧化剂的主要原因。

四、碘苯二乙酸氧化环醚对于氧化环醚，TMB最常用的反应是对2,6-二甲基四氢呋喃（DMTHF）的氧化。

DMTHF的氧化过程中，TMB的负离子很可能与它中的另一个氧原子形成一个配位键，这导致了DMTHF中的质子移位，最终拉开了氧化反应的帷幕。

综上所述，碘苯二乙酸的氧化机理多种多样，其中可能涉及到酸碱、自由基、配位等多种反应机制。

作为有机氧化剂，TMB在有机合成化学领域中的应用十分广泛，为有机化学领域研究提供了更多的理论与实验基础，也丰富了人们对反应机理的认识。

tetramethylbenzidine分子结构式-回复关于tetramethylbenzidine（四甲基苯胺）分子的结构式，并以此为主题，下面将为您一步一步地回答。

第一步：初步介绍tetramethylbenzidine（简称TMB）是一种常用的有机化合物，化学式为C16H20N2，其分子结构式如下所示：[请注意，由于此文本为纯文本，我无法直接插入图像，请您参考附件中的结构式图片]TMB具有四个甲基基团和一个苯环，其中两个氨基团位于苯环上。

这个分子具有许多有趣的化学性质，因此在许多领域中都有广泛的应用。

第二步：TMB的制备方法TMB通常通过苯胺的改性反应来合成。

该方法涉及到对苯胺的四个氢原子进行甲基化，得到四个甲基苯胺基团的化合物。

下面是一种常用的制备方法：1. 将苯胺置于反应容器中，并在低温下加热。

2. 向反应容器中加入甲烷（CH4）和碘甲烷（CH3I）的混合物，作为甲基化试剂。

3. 在较高温度下进行反应，通常使用还原剂（如亚砜氯化铜）作为催化剂。

4. 进行反应一定的时间，以确保足够的甲基化反应发生。

5. 反应结束后，通过冷却反应容器，经过滤、结晶等步骤，可以得到纯度较高的tetramethylbenzidine产物。

第三步：TMB的化学性质TMB具有一系列的化学性质，其中最重要的性质之一是其氧化还原性。

它常被用作电化学分析试剂，以测定某些物质的浓度或检测某些反应的进行。

其氧化还原性源于分子中氨基团的电子供体性质和苯环的共轭结构。

第四步：TMB的应用1. 生化分析：TMB可以用作潜在的生物学指示剂。

它可以通过与酶底物反应产生可见的颜色变化，从而用于检测特定酶的活性。

因此，TMB在酶学研究、分子生物学和生物医学领域中被广泛使用。

2. 化学染色：TMB也可以用作有机化合物的染色试剂。

它可以与特定化学物质反应，产生明亮的颜色。

这个特性使得TMB成为一种常用的染色剂，在化学分析和材料研究等领域中得到了应用。

达科为生物工程有限公司 ELISA 说明书深圳市达科为生物工程有限公司 地址：深圳市桃源街道光前工业区20栋四楼C 区 邮编：518055Tel ：0755-******** Fax ：0755-******** Web ： E-mail ：RD@ 1/1单组分显色底物TMB类型: 试剂目录号: DKW12-T010规格: 10 mL[描述] 单组分TMB 过氧化物酶底物与辣根过氧化物酶连接物反应时产生一种深蓝色的产物，适用于定量以及定性分析的酶联免疫分析当中，但不适用于膜染色或者是免疫组织化学染色。

单组分TMB 过氧化物酶底物正常情况下无色或者是淡蓝色。

底物溶液在650 nm 时检测OD 值小于0.04。

[组成及稳定性] 组成：TMB 过氧化物酶底物是单组分的溶液，不含有机溶剂。

保存：2-8°C ，请勿冷冻。

稳定性：2-8°C 条件下，不少于6个月。

[使用方法] 使用之前，倒出适量单组分TMB 底物溶液，待溶液达到室温即可使用。

加液：加完HRP 结合物并温育一定时间后，洗板3-5次，每孔加TMB 底物100uL ，可温育5-30分钟，根据孔内颜色的深浅（深蓝色）来判定终止反应。

通常显色10-20分钟可以达到很好的效果。

终止：加等体积的1N 的HCl 或者2N 的H 2SO 4来终止反应。

酶标孔中反应液从蓝色变为黄色。

读数：终止反应后，10分钟内在450 nm 处读数。

[注意] TMB 对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免金属接触影响结果。

避免皮肤接触！降低底物强度：如果出现高的反应背景和/或沉淀，表明TMB 底物反应过于强烈。

为了避免产生沉淀，可以在加入终止液后马上读数；另外，可以进一步稀释一抗和/或HRP 结合物。

为了降低非特异性背景颜色，推荐进一步降低一抗和/或HRP 结合物的浓度，尽量避免降低底物浓度。

动力学检测：TMB 单组分底物在与过氧化物酶反应时产生一种蓝色，可以在加底物后620-650 nm 处读数，不需终止反应。

5-Br在3,4,5-三甲氧基苯甲醛（TMB）中的检测量一、TMB含量及有关物质的检测方法：（使用的色谱柱为HP-5，其他条件未变）Related substancesExamine by gas chromatography as described under Assay.Test preparation: dissolve 0.3g of the substance to be examined in ethylacetate to make 6 ml.Reference preparation: dissolve 0.3g of 3，4-dimethoxy-5-B r-benzaldehyde in ethylacetate to make 6 ml.Inject the 0.4 µl of the each preparation and record the chromatogram. Calculate the content of 3，4-dimethoxy-5-B r-benzaldehyde by external standard method. The percentage content of 3，4-dimethoxy-5-B r-benzaldehyde is not more than 0.2%，that of any other impurity is not more than 0.1% and that of the total impurities are not more than 0.8% by normalization method.AssayExamine by gas chromatography.(GC:Agilent 7820A)Column: HP-5 30m×0.32mm×0.25umDetector: FID.Carrier gas: N2 gas at a flow rate of 30ml/min.Reference (a): Air at a flow rate of 400ml/min.Reference (b): Hydrogen at a flow rate of 35ml/min.Temperature of the column: 190℃.Temperature of the injection port: 250℃.Temperature of the detector: 220℃.Injection: 0.4 µl.Test preparation: dissolve 0.3 g of the substance to be examined in ethylacetate to make 3 ml.Calculate the content of 3,4,5-trimethoxybenzaldehyde in the sample by area normalization method.二、5-Br的检测限精密称定5-Br标准品0.0064g,置50mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，精密移取1mL，置50mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，再精密移取5mL，置10mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀。