EDTA依赖性血小板假性减少

EDTA依赖性假性血小板减少症1例乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)作为血细胞分析的抗凝剂已经国际血液学标准委员会(ICSH)认定及《全国临床检验操作规程》推荐使用，广泛应用于临床。

但临床发现EDTA可引起少数患者的血小板发生聚集，经血细胞自动分析仪检测可出现假性血小板减少(pseudothrombocytopenia，PTCP)，称为EDTA依赖性假性血小板减少(EDTA - PTCP)。

国内外已见多例报告1-3，我科近期发现一例EDTA-PTCP，报告如下。

1 病例资料患者，女，48岁。

主诉：发热、畏寒、咳嗽、咽痛。

无既往病史。

查体：体温39℃，咽部充血，四肢未见出血点及瘀斑，无牙龈出血。

拟诊为上感。

实验室检查：血常规全血细胞计数分析仪分析显示白细胞计数10.1×109/L，血小板计数37×109/L（EDTA-K2抗凝全血）。

凝血酶原时间(PT) 11.5s, 国际标准化比值0.91, 部分凝血活酶时间(APTT) 29.4s, 凝血酶时间(TT) 16.2s, 纤维蛋白原( FIB )2.5g/L。

疑为PTCP。

2 材料与方法2.1 血小板计数手工法末梢血目视计数：20μl末梢血加入3.8ml的1% 草酸铵稀释液中，混匀后计数。

血细胞自动分析仪分析：使用仪器Coulter-HMX血细胞全自动分析仪，EDTA-K2抗凝全血及枸橼酸钠（CTAD）抗凝全血混匀后上机分析。

2.2 血涂片瑞氏染色镜检：参照《全国临床检验操作规程》4进行操作。

3 结果EDTA抗凝全血标本血细胞自动分析仪分析血小板计数结果显著低于CTAD抗凝全血标本血细胞自动分析仪分析血小板计数结果及末梢血手工计数法结果，见表1。

EDTA及CTAD法采血后10分钟分析与1小时后分析血小板计数结果间无显著差异。

EDTA抗凝标本血涂片瑞氏染色后镜下见血小板凝集，CTAD标本血小板镜下未见凝集。

表格 1 不同抗凝剂及放置时间下的血小板计数结果血小板计数(×109 L-1)EDTACTAD手工法t=10m37145149t=1h391424 讨论PTCP常由血标本中的EDTA抗凝剂引起，导致EDTA-PTCP。

EDTA致血小板计数假性减少的分析摘要目的:了解EDTA盐依赖性假性血小板减少的原因及意义。

方法:用EDTA-K2抗凝真空管采集静脉血,在自动血液分析仪上检测,4例血小板计数明显减少者改用枸橼酸钠抗凝真空管采集静脉血在血液分析仪上重新检测,同时做血涂片检查,采末梢血手工计数血小板。

结果:4例EDTA-K2抗凝计数血小板显著减少者,血涂片见血小板聚集成团,而用枸橼酸钠抗凝及手工计数者血小板均在正常范围内。

结论:EDTA作为血液分析仪的抗凝剂,有时会导致血小板计数假性减少,应引起临床的足够重视。

关键词EDTA 血小板计数血小板聚集资料与方法2007年2月～2009年3月住院患者4例,年龄分别为55岁、65岁、68岁、72岁,男1例,女3例。

仪器与试剂:日本光电MEK-6318K血液分析仪及配套试剂;Olmpus显微镜;草酸铵血小板稀释液(按操作规程[1]配制);EDTA-K2真空抗凝管与枸橼酸钠真空抗凝管;瑞氏染色液。

方法:仪器法为病房护士晨起按要求采集静脉血于EDTA-K2真空抗凝管内至2ml刻度处,检验科收到标本后,在自动旋转式混匀器上混匀,上机检测,发现血小板明显减少者重新采集血液于枸橼酸钠真空抗凝管内,上机检测,同时按操作规程[1]采集末稍血手工计数血小板。

对2种抗凝剂全血进行涂片瑞氏染色显微镜检查。

结果结果见表1。

讨论血小板在体内主要参与止血与血栓形成,此外在动脉粥样硬化和炎症反应中起着重要的作用。

血小板数量的检测是临床上最常用的检测项目之一,EDTA所导致的血小板假性减少如未及时发现,会给病人的诊断和治疗带来很多麻烦,增加不必要的其他检查或治疗,甚至引起医疗纠纷。

因此,检验科工作人员在工作过程中如发现血小板计数明显减少时,必须进行复查及涂片染色显微镜检查,看血小板是否假性减少,涂片是否有血小板成堆现象。

EDTA抗凝原理是与血液中的凝血因子Ⅳ(钙离子)结合成螯合物,使其失去凝血作用,从而阻止血液凝固。

EDTA依赖性假性血小板减少症实验室分析【关键词】EDTA-K2 假性血小板减少；血小板计数；血小板聚集EDTA盐(EDTA-K2)作为血细胞分析的抗凝剂是国际血液标准化委员会认定并得到广泛使用，目前血小板计数实验室普遍采用的是全自动血细胞分析仪[1]，操作方便,重复性好,准确度高等优点已被普及应用，通常情况下使用EDTA二钾作为抗凝剂，对血细胞和血小板计数的影响较小，但临床发现EDTA盐有时会引起少数患者的血小板聚集导致血细胞分析仪在血小板计数出现假性偏低的现象，检测时需要实验室结合临床、排除干扰因素、选择科学可行的检测方法，才能正确报告血小板计数结果。

以防差错事故的发生，以免给临床医生带来困扰，防止医疗纠纷。

1.资料和方法1.1临床资料：患者，女18岁主诉发热、头痛、鼻塞、咳嗽、咽干咽痛等上呼吸道症状。

查体：体温38.2度、咽部充血、扁桃体无肿大，乡镇卫生院拟定为上感进行系列检查，实验室检查:白细胞10.8x109/L,红细胞3.47x1012、血红蛋白115 g／L、血小板计数为27x109/L(EDTA抗凝全血)既往健康、医生建议来上级医院院复查。

我院再次实验室检查：白细胞10.5x109/L、红细胞 3.54x1012、血红蛋白117 g／L、血小板21x109、凝血酶原时间:12.8s、活化部分凝血活酶时间:25.4s、凝血酶时间：12.5s、纤维蛋白原:2.48s、患者平日经期血量正常，无皮肤黏膜出血倾向，四肢未见出血点瘀斑。

怀疑为EDTA依赖性假性血小板减少症。

1.2方法1.2.1仪器与材料：采用希森美康XS500i全自动血液分析仪进行分析，试剂(溶血剂、稀释液、清洗液)为仪器配套试剂。

EDTA-K2抗凝剂和枸橼酸钠抗凝剂。

仪器采用专用校准品进行校准,每日室内质控均在控，参加卫生部室间质评亦在控。

1．8 mg／ml的EDTA-K2真空采血管、109 mmol／L的枸橼酸钠真空采血管均有河北超然医疗器械有限公司提供。

血小板假性减少怎么办？常见血小板假性减少的原因通常为：标本凝集、EDTA依赖性假性血小板减少、冷凝集、大血小板。

一、标本凝集主要包括：（1）采血不顺利，包括技术不熟和患者血管难以采集，造成采集时间过长，使组织因子进入血标本中而产生肉眼看不见的微小凝块；（2）颠倒混匀不充分，影响抗凝效果，从而造成凝块产生或血小板聚集；（3）抽血量与抗凝剂比例不当，造成血小板被稀释或抗凝效果不好。

此时重新采血一般能解决问题。

二、EDTA依赖性假性血小板减少由于用EDTA盐（EDTA盐干粉抗凝剂，乙二胺四乙酸）干粉抗凝剂，在作为免疫介导的血液中，可出现的冷抗血小板自身抗体，使血小板互相凝集现象。

这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体，直接作用于血小板膜糖蛋白IIb/IIIa上。

同时，这种与血小板结合的自身抗体Fc 端可与单核细胞或淋巴细胞膜上Fc受体结合，出现卫星现象。

引起血小板聚集卫星现象后，在全自动血细胞计数仪上检测时，发生假性血小板计数减少的现象。

1、更换抗凝剂：用枸橼酸钠抗凝（凝血象）或肝素抗凝重新采血检测；2、毛细血管发采集末梢血，用预稀释模式检测；3、显微镜计数：采集未抗凝的末梢血20µl，加入到380µl草酸铵稀释液中，计数中央大方格四角及正中五个小方格血小板是数量；三、冷凝集冷凝集：是指由自身抗体引起的，红细胞在冷环境中的凝集成团的现象，采血管壁可见细沙样凝集颗粒。

冷凝集反应一般出现在31℃以下，在0～4℃时最强，红细胞凝集最明显；随温度的升高，抗原抗体复合物逐渐解离，凝块消失。

1、将标本立即放在37℃水浴中，约半小时后，立即机测定；2、将患者带到实验室内，在血球仪仪器旁抽静脉血，在数秒钟内立即上机测定；3、用等量生理盐水置换血浆，将标本离心后，去掉血浆，加入等量生理盐水后上机检测；4、毛细血管发采集末梢血，用预稀释模式检测；5、显微镜计数：将37℃孵育的血液10ul 加入到2.0ml的37℃温盐水中，混合均匀，滴到计数板上计数（可预先将计数板放37℃水浴中加温）。

EDTA依赖假性血小板减少症临床表现、发生机制、怀疑情况及处理措施EDTA依赖假性血小板减少症乙二胺四乙酸是国际血液学标准化委员会推荐进行全血细胞计数时首选的抗凝剂。

EDTA具有对血液样本中的细胞形态和计数影响非常小等优点，目前在临床广泛使用。

但在少数情况下，EDTA可以引起血小板聚集，在血细胞分析仪上进行检测时，造成血小板计数的假性减低，这种现象被称为EDTA依赖性假性血小板减少。

疾病发生率约为0.09%—0.21%。

EDTA依赖假性血小板减少症的发生机制目前还不明确，普遍认为可能与EDTA诱导血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa复合物中隐藏抗原的暴露或对其进行修饰，导致自身抗体的产生有关。

可以确定发生EDTA依赖假性血小板减少症的原因之一是在EDTA盐作为抗凝剂的前提下，出现的免疫介导的冷抗血小板自身抗体。

EDTA依赖假性血小板减少怀疑情况1、血小板计数<100 X 109 /L。

2、室温下EDTA抗凝的标本发生血小板减少，由其他抗凝剂抗凝的标本或是将标本保存在37摄氏度，能大大削减血小板减少程度。

3、随标本采集到检测时间的延长，血小板计数越来越低。

4、血涂片显示或血球仪提示有血小板聚集。

5、缺乏血小板减少的临床症状和表现，如出血。

处理措施1、仪器法。

重新采样，用肝素抗凝管或枸橼酸盐抗凝管等非EDTA-K2分别抽取静脉血2ml，充分混匀，在10min内完成测定。

2.手工计数法。

采新鲜指血20ul，稀释后由专业检验人员计数两次并取均值。

3、无任何抗凝剂抽血立即上机，血小板结果也是可以供参考。

4、瑞氏染色涂片镜检看血小板的聚集情况再估算其数量。

5、预稀释仪器法:采新鲜指血20ul，加入稀释液120ul，进行1:7稀释后，在1h内用预稀释法进行测定。

6、对这类患者采血之前抗凝剂中添加阿米卡星纠正。

EDTA依赖性假性血小板减少标签：EDTA依赖性假性血小板减少症；EDTA随着全自动血细胞分析仪的广泛应用，乙二胺四乙酸盐(EDTA)因其对血细胞影响较小，在临床得到广泛使用。

但国外文献1980年已有报道表明，EDTA 可引起血小板聚集、黏附，导致EDTA依赖性假性血小板减少症(EDTA-dependent pseudo thrombocytopenia，PTCP)发生。

PTCP是一种由EDTA诱导，发生于体外的非稳固性血小板凝聚，临床主要表现为重型假性血小板减少症，且无出血现象［1］。

PTCP产生的假性血小板计数减少会导致患者临床辅助检查增多,严重时易导致临床错误诊治。

因此，PTCP应该在临床检验工作中得到广泛重视。

1资料与方法1.1一般资料回顾性分析30例临床检验过程中发生EDTA依赖性假性血小板减少症患者的门诊或住院资料，其中男17例，女13例，年龄20~68岁，平均(41.6 18.3)岁。

1.2检验方法笔者所在医院检验科采用多种方法为患者进行血小板计数检测，以避免计数结果错误。

（1)全自动细胞分析仪法:使用EDTA盐、枸橼酸钠抗凝管分别采集患者外周静脉血2.0 ml，采血后0、10、30、60、120 min分别用全自动血细胞分析仪及配套试剂进行血常规检测。

（2）手工计数法:根据《全血临床检验操作规程》第3版规程行手工计数,0.38 ml许汝和氏稀释液中置入患者指血20 μl，充分混匀后行血小板显微镜计数。

（3）血涂片瑞氏-姬姆萨染色法:使用EDTA盐、枸橼酸钠抗凝管分别采集患者外周静脉血，在采血后0及60 min 后各涂片1张,常规晾干后瑞氏-姬姆萨染色,显微镜下行血小板计数。

2结果2.1全自动细胞分析仪法不同时间点血小板计数结果EDTA管血小板计数在（10~142）×109/L，随患者血液标本抽取时间的延长而持续下降，10 min后已显著降至正常值以下；而枸橼酸钠管血小板计数则则无明显下降。

EDTA依赖性假性血小板减少现象和纠正方法分析摘要目的探讨乙二胺四乙酸（EDTA）依赖性假性血小板减少现象和纠正方法。

方法15例EDTA所致血小板减少患者作为研究对象，对其血液标本采用不同抗凝剂后进行血小板计数。

结果乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝血的血小板计数结果为（53.2±20.0）×109/L，分别与枸橼酸钠抗凝血的血小板计数结果（150.5±49.6）×109/L、手工计数血小板的结果（153.0±48.6）×109/L比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而枸橼酸钠抗凝血的血小板计数值与手工计数血小板的结果比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

结论枸橼酸钠抗凝剂无导致血小板聚集的作用，在一定的条件下，可替代EDTA-K2抗凝静脉血进行血小板计数。

关键词乙二胺四乙酸；枸橼酸钠；血小板计数随着科学技术的飞速发展，血液分析仪的自动化程度越来越高。

在临床诊断、治疗及合理用药方面，血小板数量的正确计算具有十分重要的意义。

血小板计数的抗凝剂通常是EDTA-K2，它为国内外自动血液分析仪所常用。

然而在少数情况下，它可能导致假性的血小板减少症，如EDTA依赖性假性血小板减少症[1]。

如果在临床工作中此种现象未及时发现，往往容易引起误诊误治，增加患者心理和经济负担，甚至会引起医疗纠纷。

EDTA引起的假性血小板减少的标本在日常检测标本中的比例很低，国内报告其发生率约为0.09%～0.20%[2，3]。

检验人员如何能排除干扰，及时发现并纠正，如何保证检验结果的准确性显得至关重要。

为了能有效解决因EDTA抗凝剂依赖引起的假性血小板减少这一问题，翻阅《全国临床检验操作规程》等若干相关文献，找到了一种简便可行、血小板结果可靠的纠正方法，即枸橼酸钠抗凝血。

1 资料与方法1. 1 一般资料选取本院2015年12月～2016年5月住院的EDTA所致血小板減少患者15例作为研究对象，所有患者的皮肤均没有瘀点和瘀斑，也没有鼻出血、胃肠道和泌尿道的出血病症等。

血小板减少的假性之说有根据吗假性血小板减少,通过实验和科学分析，在血小板检测中偶有假性血小板减少发现并需澄清以下事实：1、使用血细胞分析仪时会有假性血小板减少发生，其原因：1) EDTA依赖性假性血小板减少(PTCT)。

由于用EDTA盐(EDTA盐干粉抗凝剂，乙二胺四乙酸)干粉抗凝剂，在作为免疫介导的血液中，可出现的冷抗血小板自身抗体，使血小板互相凝集现象。

这种EDTA依赖的冷抗血小板自身抗体，直接作用于血小板膜糖蛋白IIb/IIIa 上。

同时，这种与血小板结合的自身抗体Fc端可与单核细胞或淋巴细胞膜上Fc受体结合，出现卫星现象。

引起血小板聚集卫星现象后，在全自动血细胞计数仪上检测时，发生假性血小板计数减少的现象。

2)EDTA诱导"血小板卫星现象"(platelet satellitism)，引起假性血小板减少。

EDTA依赖性血小板减少症(PTCP)应该受到广泛重视。

PTCP的临床发生率约为0.09%-0.21%-0.77%，血小板卫星现象3) 血小板体积偏大引起的血小板假性减少。

4) 高镁血症引起的血小板假性减少。

2、EDTA依赖性假性血小板减少(PTCP)的原因与血小板表面存在某种隐匿性抗原有关。

1)EDTA可引起血小板糖膜(GP)发生改变，即血小板形态发生变化，由正常的圆盘状变为圆球形，改变了血小板膜表面某种隐匿性抗原构象。

2)部分病人血浆中存在的某种自身抗体与这种改变构象的抗原结合后的抗原抗体复合物激活了细胞膜中的磷酯酶，使血小板膜水解并释放AA、ADP、5-TH、胶原、凝血酶原等血小板活性物质。

3)这些血小板活性物质都能不同程度的活化血小板纤维蛋白原受体(FIR-B)，促使血小板与纤维蛋白原受体结合后聚集成团，导致血小板假性减少。

3、高胆固醇和高甘油三酯血症时血小板聚集性增高，可引起假性血小板减少;糖尿病、高血压病患者由于血管内皮易损，致血小板容易聚集不容易解散，常导致机测血小板偏低。

关于血细胞分析中EDTA依赖性假性血小板减少的结果分析及处理方法的专题报告随着医学技术的不断发展，血细胞分析即我们常说的血常规检测已经成为医学检验科最基本、最常用的检测项目之一。

全自动血细胞分析仪的普及和使用使血细胞分析更加的快速、准确、便捷，但在实际工作中常有一些异常因素的影响，使结果受到干扰。

下面就平时工作中遇到的EDTA依赖性血小板聚集引起的假性血小板减少所产生的影响和解决办法作一专题报告，望能给大家提供参考。

研究对象：为探讨假性血小板减少的影响因素，选取xxxx.xx-xxxx.xx 期间本科室Symex-xxxx全自动血细胞分析仪检测出血小板偏低，但仪器结果提示存在血小板凝集或异常分布，分析血小板直方图合散点图考虑血小板凝集的标本，提示可能存在血小板假性减少，对这类标本进行涂片染色镜检及血小板手工计数进行复检。

研究方法：血小板计数假性偏低可存在多种因素的影响，包括采血不顺、标本未及时混匀、存在自身血小板抗体等。

首先，检查标本是否合格，抽血试管是否存在错管、标本量不足等问题，排除标本有无凝块。

其次，检查仪器自身是否失控，查看仪器质控结果，发现仪器在控，排除仪器自身原因造成血小板结果波动较大，查看仪器结果提示存在血小板凝集或异常分布，分析血小板直方图考虑血常规凝集，然后进行人工镜检。

取标本进行推片瑞氏染色后镜检，高倍镜下可见片尾及两侧可见血小板成堆成簇聚集，初步估算血小板实际并不少，可判断血细胞分析仪检测结果与镜检不符，人工[1]计数可见境下血小板聚集成堆，血小板检测结果为假性血小板减少，怀疑为EDTA依赖性血小板聚集引起的假性血小板减少。

EDTA依赖性血小板凝集能够引起血小板检测结果假性偏低。

血小板平均体积MPV明显增高，PCT可无明显的异常，血小板分布宽度改变。

当血小板出现不明原因的减低，血小板直方图提示分布异常时，要及时手工涂片染色观察是否有血小板的聚集，还要进行手工计数。

为避免误诊，建议患者重新抽血复查：重新采样，用EDTA和枸橼酸钠抗凝负压管同时采血2mL，混匀后血细胞分析仪10min内完成检测，同时采取患者末梢血20ul稀释后进行计数板计数，取两次计数均值。