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·论 著·基因芯片技术分析斑蝥素对肝癌细胞细胞毒作用的分子机制胡和平1*,张俊平2,应 康3,肖振宇2,吴红梅3,毛裕民3,吴孟超1(1.第二军医大学东方肝胆外科医院消化内科,上海200438; 2.第二军医大学药学院药理学教研室,上海200433; 3.复旦大学生命科学院遗传工程国家重点实验室,上海200433)[摘要] 目的:研究抗癌药斑蝥素对肝癌细胞细胞毒作用的分子机制。
方法:应用基因芯片技术检测12.5 mo l/L斑蝥素作用于肝癌Q GY7703细胞24h后基因表达谱的变化。
结果:斑蝥素抑制细胞表达参与细胞周期进程基因(如p27、ref-1、D N A p olymer ase delta、X RCC9等)、能量代谢基因(如malate dehy drog enase、A D P/A T P tr anslocase等)、致瘤活性基因(如c-my c、tre等)以及肿瘤特异表达基因(如bladder cancer r elated p rotein等)。
相反,斑蝥素促进了多种细胞生长抑制基因(如B CRA2、BT G2、dual-sp ecif icity p rotein p hosp hatase等)以及凋亡相关基因(如A T L-derived P M A-r esp onsive p ep tide等)的表达。
结论:斑蝥素改变调控细胞周期进程、细胞增殖、能量代谢以及凋亡级联反应的基因表达可能是其细胞毒作用的机制。
[关键词] 斑蝥素;基因表达谱;基因芯片;肝癌;Q GY7703细胞[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 0258-879X(2003)06-0645-05Gene microarrays in detecting molecular mechanisms of cantharidin-mediated cytotoxicity on human hepatic cancer cellsHU He-P ing1*,ZHAN G Jun-Ping2,Y IN G K ang3,XI AO Z hen-Yu2,WU Hong-M ei3,M A O Yu-M in3,WU M eng-Cha o1 (1.D epar tment o f G ast ro ent ero lo gy,Eastern Hepato biliar y Sur g er y Hospita l,Second M ilitar y M edical U niver sity,Shang hai 200438,China; 2.Depart ment o f Phar macolog y,Schoo l o f Phar macy,Seco nd M ilitar y M edical U niver sity,Shang hai200433;3.State K ey L abo rato ry of G enetic Engineer ing,Scho ol of Life Science,Fudan U niver sity,Shanghai200433)[ABSTRAC T] Obj ective:T o study the molecular mechanisms o f antit umo r agent canthar idin on human cancer cells.Meth-ods:Gene expr essio n pr ofile w as identified by cDN A micro arr ays in hepat ic cancer Q G Y-7703cells ex po sed to ca nthar idin (12.5 mo l/L)fo r24h.Results:Cant haridin-treat ed cells had decreased ex pr ession o f g enes co ding fo r pr ot eins invo lv ed in cell cycle pr og ress(p27,D N A p oly mer ase delta,X RCC,ref-1),ener gy metabolism(malate dehy dr ogenase,A DP/A T P tr anslo-case),o nco genic activation(c-my c,tr e)and tumo r-specific ex pr ession(bladder cancer r elated p r otein).In co ntra st,these t reated cells o ver expr essed sev eral genes enco ding intr acellular gr ow th-inhibito ry pr oteins(BCRA2,BT G2,d ual-sp ecif icity p r otein p hosp hatase)and pro apo ptotic g enes(A T L-derived PM A-r esp onsive p ep tide).C onclusion:T hese findings sug g est that alter-atio ns in specific genes invo lv ed in mo dulating the cell cy cle pro gr ess,cell pr o lifer ation,ener gy metabolism,and apo ptosis cas-ca des may be r espo nsible for cantharidin-mediated cy tot ox icit y.[KEY WORDS] canthar idin;hepatic cancer;cells;gene ex pr ession pro filing;cDN A micro arr ay;Q GY7703cells[A cad J Sec M il M ed U niv,2003,24(6):645-649] 斑蝥素(cantharidin,CT D)为传统中药斑蝥的活性成分,临床上对多种肿瘤有疗效,特别是肝癌和白血病,具有升高白细胞而无骨髓抑制的特点[1,2]。
激光生物学报ACTA LASER BIOLOGY SINICAVol. 32 No. 3June . 2023第32卷第3期2023年6月收稿日期：2023-03-20 ；修回日期：2023-04-07。
作者简介：李毅，主治医师，主要从事骨外科相关疾病诊疗的研究。
* 通信作者：赵维彪，主任医师，主要从事骨外科相关疾病诊疗的研究。
E-mail: zqian 0709@ 。
槲皮素阻滞JAK2/STAT3信号通路对软骨肉瘤细胞迁移、侵袭和EMT 的抑制作用研究李 毅1，张 恒2，赵维彪1*（1. 辽宁省金秋医院骨外科，沈阳 110016；2. 中国医科大学附属第一医院病理科，沈阳 110001）摘 要：为探究槲皮素对人软骨肉瘤细胞迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT ）的影响及对Janus 激酶2/信号转导和转录启动因子3（JAK 2/STAT 3）信号通路的调控作用，体外培养人软骨肉瘤SW-1353细胞，用不同浓度槲皮素干预SW-1353细胞24 h ，细胞计数试剂盒（CCK-8）法筛选出最适浓度（50.0 μmol/L ）槲皮素进行后续试验。
将细胞分为对照组（不做干预）、槲皮素组（50.0 μmol/L 槲皮素）、阳性药物组（6.0 μmol/L 阿霉素）、抑制剂组（50.0 μmol/L 槲皮素＋50.0 μmol/L JAK 2/STAT 3通路抑制剂AG 490）和激活剂组（50.0 μmol/L 槲皮素＋0.5 μmol/L JAK 2/STAT 3通路激活剂colivelin ），干预24 h 后，用倒置显微镜、Transwell 小室及Western blot 法对细胞形态、迁移、侵袭及JAK 2/STAT 3通路和EMT 相关蛋白的表达水平进行分析。
试验结果显示：CCK-8法确定槲皮素最适作用浓度为50.0 μmol/L ；与对照组比较，槲皮素组和阳性药物组细胞生长受到抑制，细胞迁移数、侵袭数、N-钙黏蛋白（N-cadherin ）、波形蛋白（Vimentin ）、纤连蛋白（FN ）、p-JAK 2和p-STAT 3表达水平降低（P <0.05），E-钙黏蛋白（E-cadherin ）表达水平升高（P <0.05）；与槲皮素组相比，抑制剂组上述指标变化趋势更为显著（P <0.05），激活剂组则扭转了这些指标的变化（P <0.05）。
《用于β-半乳糖苷酶时间分辨发光检测的镧系配合物发光探针的设计与合成》一、引言在生物分析和生物医学研究中，β-半乳糖苷酶作为一种重要的生物标志物，其活性的检测对于疾病诊断和治疗监测具有重要意义。
时间分辨发光检测技术因其高灵敏度、低背景干扰等优点，在生物分析领域得到了广泛应用。
镧系元素配合物因具有优异的发光性能和稳定的化学性质，被广泛应用于时间分辨发光检测中。
本文旨在设计并合成一种用于β-半乳糖苷酶时间分辨发光检测的镧系配合物发光探针，以期提高检测的准确性和灵敏度。
二、镧系配合物发光探针的设计1. 选配镧系元素镧系元素因其独特的电子结构和丰富的能级，具有优异的发光性能。
在本文中，我们选择铕（Eu3+）作为配合物的中心离子，因其f-f跃迁能级较低，易发生荧光发射，且其发射光谱与β-半乳糖苷酶的反应产物具有良好的匹配性。
2. 设计配体为了获得高效的发光性能，我们设计了一种具有良好配位能力和较大共轭体系的有机配体。
该配体具有多个氮、氧等供电子基团，能够与镧系元素形成稳定的配合物。
此外，该配体还具有与β-半乳糖苷酶反应产物结合的能力，有利于实现时间分辨发光检测。
三、镧系配合物发光探针的合成1. 合成有机配体按照一定的合成步骤，我们成功合成了所设计的有机配体。
通过核磁共振、红外光谱等手段对配体进行表征，确认其结构正确。
2. 合成镧系配合物发光探针将合成的有机配体与铕离子在水溶液中反应，得到镧系配合物发光探针。
通过紫外-可见吸收光谱、荧光光谱等手段对配合物进行表征，确认其结构及发光性能。
四、性能测试与结果分析1. 时间分辨发光性能测试将合成的镧系配合物发光探针应用于β-半乳糖苷酶的时间分辨发光检测。
通过改变酶浓度、反应时间等条件，测试探针的时间分辨发光性能。
结果表明，该探针具有优异的时间分辨发光性能，能够实现对β-半乳糖苷酶的高灵敏度检测。
2. 选择性及抗干扰能力测试为了评估探针的选择性及抗干扰能力，我们测试了探针在其他常见生物分子存在下的时间分辨发光性能。
CK2介导幽门螺杆菌CagA蛋白诱导人胃腺癌上皮细胞内IL-8表达的机制研究顾岚; 陈颖; 周仁民; 林琼【期刊名称】《《癌症进展》》【年(卷),期】2019(017)022【总页数】4页(P2652-2655)【关键词】细胞毒素相关基因A蛋白; 蛋白激酶CK2; 核因子κB; 白细胞介素-8【作者】顾岚; 陈颖; 周仁民; 林琼【作者单位】无锡市儿童医院消化科江苏无锡 2140000【正文语种】中文【中图分类】R735.2幽门螺杆菌（helicobacter pylori，Hp）是一种革兰阴性螺杆菌，主要在儿童时期经粪-口、口-口、胃-口等途径感染，感染后可引起胃黏膜急慢性炎症、消化性溃疡、胃癌等疾病[1-3]。
细胞毒素相关基因A（cytotoxin associated gene A，CagA）编码的CagA蛋白是Hp重要的毒力因素之一，而白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）作为Hp感染后急性胃炎的重要调节因子，与CagA的关系较为密切[4-6]。
核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）参与机体的炎症反应过程，Hp感染可促进NF-κB活化，进而促进多种炎症因子的表达，包括IL-8[7-8]。
研究表明，多种激酶可调节NF-κB p65的磷酸化，包括蛋白激酶CK2[9-10]。
CK2是一种多功能信使非依赖性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可参与细胞增殖、癌基因调节及信号转导，与自身免疫性疾病、病毒及寄生虫感染和各种恶性肿瘤有关[11-13]。
许多细胞系研究中已经证实，CK2与NF-κB激活及趋化因子表达有关[10-13]。
本研究探讨了CK2介导CagA蛋白诱导人胃腺癌上皮细胞（human gastric adenocarcinoma cell，AGS）内IL-8表达的可能机制，现报道如下。
1 材料与方法1.1 材料与试剂人AGS细胞购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，F12K培养基购自美国赛默飞世尔科技公司，胎牛血清、双抗（青霉素/链霉素）混合液均购自美国Gibco公司，重组Hp CagA蛋白、p65、p65-p ser529兔单克隆抗体均购自英国Abcam公司，芹菜素（apigenin）购自英国Tocris公司，人IL-8酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒购自美国R&D公司，p65 siRNA购自美国SantaCruz公司，β-肌动蛋白（β-actin）购自美国CST公司，山羊抗兔二抗购自美国Jackson公司；聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜、电化学发光（electrochemiluminescence，ECL）液购自美国Millipore公司，Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司，RIPA裂解液、5×蛋白上样缓冲液、pNF-kB-luc质粒、pRLSV40-C质粒及双萤光素酶报告基因检测试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司。
FDA授予CX-4945治疗肝小胆管癌的罕见病药设计认可黄世杰
【期刊名称】《国际药学研究杂志》
【年(卷),期】2017(44)2
【摘要】Senhwa生物科学公司宣布FDA授予CX-4945治疗晚期肝小胆管癌的罕见病药设计认可。
该药是新一代小分子药物，抑制蛋白激酶CK2，在癌细胞DNA损害的修复机制中具有重要作用。
【总页数】1页(P94-94)
【关键词】罕见病药;胆管癌;FDA;设计;治疗;蛋白激酶CK2;肝;小分子药物
【作者】黄世杰
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R95
【相关文献】
1.Olinciguat被FDA授予治疗镰状细胞病孤儿药资格 [J],
2.Olinciguat被FDA授予治疗镰状细胞病孤儿药资格 [J], 本刊讯;
3.FDA授予抗瘤酮为罕见病药品 [J], 罗恒
4.FDA认定妥卡替尼为治疗脑转移乳腺癌的罕见病药 [J],
5.FDA授予治疗黏多糖贮积症小分子药物odiparcil罕见病药资格 [J], 黄世杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
分子量349.77
溶解性（25°C）
DMSO 16 mg/mL
分子式C H ClN O Water <1 mg/mL
CAS号1009820-21-6Ethanol <1 mg/mL
储存条件3年 -20°C 粉末状
生物活性
CX-4945 (Silmitasertib)是一种有效的，选择性CK2(casein kinase 2)抑制剂，IC50为1 nM，对Flt3， Pim1和CDK1作用效果稍弱(在细胞实验中无活性)。
CX-4945是CK2特异的抑制剂，它只抑制238种激酶中的7种并且在0.5 μM浓度时它的抑制率超过90%，这是CK2的IC50的500多倍。
虽然在无细胞系统中CX-4945抑制FLT3, PIM1和CDK1的IC50分别为35 nM, 46 nM和56 nM，但是在细胞基础上的功能实验中10 μM的CX-4945对FLT3, PIM1和 CDK1抑制作用不强。
CX-4945有广谱的抗恶性细胞增生活性。
实验操作来自于公开的文献，仅供参考
细胞实验
细胞系BT-474 (breast) or BxPC-3 (pancreatic) cancer or HUVEC cells
方法 A 5 mmol/L stock solution in dimethyl sulfoxide was prepared and stored at - 70 ℃. The drug was diluted directly into growth media immediately prior to use.Various cell lines were seeded at a density of 3,000 cells per well 24 hours prior to treatment, in appropriate
media, and then treated with indicated concentrations of CX-4945. Suspensions cells were seeded and treated on the same
day.Following 4 days of incubation, Alamar Blue (20 mL, 10% of volume per well) was added and the cells were further incubated at
37 C for 4–5 hours. Fluorescence with excitation wavelength at 530–560 nm and emission wavelength at 590 nm was measured.
浓度0, 0.1, 1.0, 5.0, 10 µM
处理时间24 h
动物实验
动物模型Female immunocompromised mice CrTac:Ncr-Foxn1nu (5–7 weeks old) BT474 or BxPC-3 cells Xenografts
配制Solubilized in DMSO and diluted with PBS containing 10% dimethylacetamide (Sigma-Aldrich) and 6% Solutol (Sigma-Aldrich).
剂量twice daily at 25 or 75 mg/kg for 31 and 35 consecutive days
给药处理oral gavage
不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（数据来源于FDA指南）
小鼠大鼠兔豚鼠仓鼠狗
重量 (kg)0.020.15 1.80.40.0810
体表面积 (m)0.0070.0250.150.050.020.5
K系数36128520
动物 A (mg/kg) = 动物 B (mg/kg) ×
动物 B的K系数
动物 A的K系数
例如，依据体表面积折算法，将白藜芦醇用于小鼠的剂量22.4 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将22.4 mg/kg 乘以小鼠的K系数（3），再除以大鼠的K系数（6），得到白藜芦醇用于大鼠的等效剂量为11.2 mg/kg。
参考文献
CX-4945 目录号M1861
化学数据
191232
2
m
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m m
CK2 inhibitor CX-4945 suppresses DNA repair response triggered by DNA-targeted anticancer drugs and augments efficacy: mechanistic rationale for drug combination therapy.
Siddiqui-Jain et al. Mol Cancer Ther. 2012 Apr;11(4):994-1005. PMID: 22267551.
Pre-clinical characterization of CX-4945, a potent and selective small molecule inhibitor of CK2 for the treatment of cancer.
Pierre et al. Mol Cell Biochem. 2011 Oct;356(1-2):37-43. PMID: 21755459.
Structural basis of CX-4945 binding to human protein kinase CK2.
Ferguson et al. FEBS Lett. 2011 Jan 3;585(1):104-10. PMID: 21093442.。
