沃氏葡萄球菌的分离与鉴定

青岛农业大学兽医微生物实验报告题目：葡萄球菌和链球菌的分离鉴定姓名：阿芳学院：动物科技学院专业：动物科学班级： 201X级X班学号：（201XXXXX）指导教师：任慧英完成日期 2014年3月22日葡萄球菌和链球菌的分离鉴定摘要目的：对实验提供的A、B两种细菌进行分离鉴定。

主要方法：通过对细菌的分离培养，形态的观察以及生化反应的现象等方法进行鉴定。

关键词：葡萄球菌；链球菌；分离鉴定引言1葡萄球菌是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。

多数为非致病菌，少数可导致疾病。

葡萄球菌是最常见的化脓性球菌。

无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧。

28～38℃均能生长，致病菌最适温度为37℃，PH为4.5～9.8，最适为7.4。

在琼脂平板上形成圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，不透明的菌落。

葡萄球菌在血琼脂平板上形成的菌落较大，有的菌株菌落周围形成明显的完全透明溶血环（β溶血），也有不发生溶血者。

多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。

致病性菌株能分解甘露醇。

葡萄球菌在自然界中分布很广，健康禽类的皮肤、羽毛、眼睑、粘膜、肠道等都有葡萄球菌存在。

链球菌是化脓性球菌的另一类常见的细菌，常排列成链状，无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，革兰氏染色阳性。

需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。

营养要求较高。

普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。

最适温度37℃，最适PH7.4～7.6，血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。

根据在血琼脂培养基上的溶血特征可分为三种不同类型：α型溶血性链球菌又称草绿色链球菌，菌落周围出现草绿色溶血环，致病力弱。

β型溶血性链球菌产生强烈的溶血毒素，在血琼脂培养基上，可使菌落周围出现宽2～4毫米、界限分明、无色透明的溶血环，致病力强。

鉴定葡萄球菌的方法葡萄球菌是一种常见的细菌，常常引起各种感染。

因此，准确鉴定葡萄球菌对于临床治疗和疾病控制至关重要。

本文介绍了几种常见的鉴定葡萄球菌的方法。

下面是本店铺为大家精心编写的5篇《鉴定葡萄球菌的方法》，供大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。

《鉴定葡萄球菌的方法》篇1一、生化试验生化试验是鉴定葡萄球菌的一种常用方法。

通过检测葡萄球菌的生化反应，可以初步鉴定其种类。

常见的生化试验包括:1. 葡萄糖发酵试验：葡萄球菌可以发酵葡萄糖，产生酸和气体。

将葡萄球菌接种到含有葡萄糖的培养基上，观察是否产生酸和气体，可以初步鉴定其是否为葡萄球菌。

2. 乳糖发酵试验：葡萄球菌不能发酵乳糖。

将葡萄球菌接种到含有乳糖的培养基上，观察是否产生酸和气体，可以进一步确认其是否为葡萄球菌。

3. 尿酸酶试验：葡萄球菌可以产生尿酸酶，将尿酸分解为尿酸盐和氨。

将葡萄球菌接种到含有尿酸的培养基上，观察是否产生尿酸盐和氨，可以进一步鉴定其种类。

二、药敏试验药敏试验是鉴定葡萄球菌的另一种常用方法。

通过检测葡萄球菌对不同抗生素的敏感性，可以初步鉴定其种类。

常见的药敏试验包括: 1. 盘状药敏试验：将葡萄球菌接种到含有不同抗生素的培养基上，观察葡萄球菌对不同抗生素的敏感性。

2. 纸片药敏试验：将含有不同抗生素的纸片贴在含有葡萄球菌的培养基上，观察葡萄球菌对不同抗生素的敏感性。

三、分子生物学方法近年来，分子生物学方法也被广泛应用于鉴定葡萄球菌。

常见的分子生物学方法包括:1. PCR 法：利用 PCR 技术，检测葡萄球菌的特异性基因，可以快速、准确地鉴定葡萄球菌。

2. 质谱法：利用质谱技术，检测葡萄球菌的蛋白质指纹，可以鉴定其种类。

鉴定葡萄球菌的方法有多种，包括生化试验、药敏试验和分子生物学方法等。

《鉴定葡萄球菌的方法》篇2鉴定葡萄球菌的方法包括直接镜检、分离培养、PCR 方法等。

直接镜检可通过革兰染色镜检，观察菌体形态和排列方式，判断是否为葡萄球菌。

葡萄球菌属的常规鉴定标准操作程序1 概述葡萄球菌属是一类触媒试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌，表面葡萄球菌、腐生葡萄球菌等32个种。

是临床最常见的化脓性球菌，广泛分布于自然界中，在人体表面鼻、咽、肠道也经常存在。

2 形态与染色革兰阳性球菌，直径0.4~1.2µm成单、双、短链或不规则状排列。

在液体培养基浓汁标本中，往往排列成双或短链状多数有鞭毛。

3 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上典型菌落为金黄色，周围有明显的透明（β）溶血环，部分菌落呈橙色，在高盐甘露醇平板上呈橙色菌落。

表皮葡萄球菌等其他葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，不溶血。

4 生化反应触酶试验阳性，多数能分解葡萄糖、麦蚜糖、蔗糖和甘露醇。

不分解棉籽糖和水杨苷，液化明胶，血浆凝固酶和DNA酶实验分阳性。

5 鉴别要点5.1 本菌属特征：触酶实验阳性，革兰阳性球菌，葡萄状排列，菌落中等大小，中等干燥。

5.2 与微球菌属的鉴别：触酶实验都为阳性，但O∕F试验葡萄球菌属为发酵型，而微球菌为氧化型或无反应，而且菌体较葡萄菌属更大，排列呈四联状为主。

5.3 与链球菌属的鉴别：葡萄球菌属触酶试验都为阳性，而链球菌为阴性，O∕F试验葡萄球菌属为发酵型而链球菌为氧化型。

5.4 凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别见下表。

结合型凝游离型凝鸟氨酸脱菌名PYP试验DNA试验VP试验固酶试验固酶试验羧酶实验金黄色葡萄球菌+ + - + + -中间型葡萄球菌- + + + - -施氏葡萄球菌+ - + + + -路邓葡萄球菌+ - + - + +注：“+”为90%以上菌株为阳性，“--”为90%以上菌株为阳性。

5.5 凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别见下表+腐生葡萄球菌——+ V + +—溶血葡萄球菌+ ——V + ——人型葡萄球菌——+ —+ ——华纳葡萄球菌——+ V + ——模仿葡萄球菌+ —+ + + ——头状葡萄球菌——V + + ——耳葡萄球菌V ———V ——施氏葡萄球菌+ + —————路邓葡萄球菌+ V V —+ —V注：“+"为90%以上菌株为阳性，“—”为90%以上菌株为阴性。

《化妆品中腐生葡萄球菌检验》行业标准编制说明一、工作简况：标准编写的依据、必要性，起草工作的主要过程，起草小组（或起草人）所做的工作1、标准编写任务来源和必要性2010年12月，美国FDA发布进口预警，在中国出口的手提套装的口红中发现腐生葡萄球菌，从而实施自动扣留，本标准基于此需求得以下达。

引起化妆品腐败的革兰氏阳性葡萄球菌不仅有致病性金黄色葡萄球菌，还包括腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、人葡萄球菌、中间葡萄球菌等重要的条件致病菌。

因此，为保障消费者安全，提高化妆品质量，制定腐生葡萄球菌的检测方法，加强对化妆品中易污染菌群的调查，丰富检验检疫行业标准体系，拓展化妆品安全卫生监控领域，具有十分重要的意义。

本项目由国家认证认可监督管理委员会2011年下达，项目编2011B121号，标准主要试验于2012年6月底结束，验证与标准草案编制同时进行，邀请质检系统5家化妆品检测专业单位进行方法验证，标准草案于9月初起草完成。

2、标准起草小组的工作情况标准起草小组包括江苏检验检疫局石建华、鞠慧萍、苏粉良（苏州局）分工负责平板培养法部分、邵景东研究员（张家港局）和祝长青研究员（江苏局）以及王毅谦博士分工负责分子检测技术（第二法实时荧光PCR法）研究、顾鸣研究员等（上海局）分工协助验证阶段工作，整个试验过程由蒋原研究员指导。

二、标准编写原则和确定标准主要内容（如技术指标、参数、性能要求、试验方法、检验规则等）的依据（包括试验、统计数据）。

葡萄球菌属（Staphylococcus）是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状。

多数为非致病菌，少数可导致疾病。

葡萄球菌是最常见的化脓性球菌，为适中温菌（mesophile），不产芽胞，本菌属主要三种菌为金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、腐生葡萄球菌（Staphylococcus saprophyticus）及表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis），后二者无毒力，但于特殊环境下，如有适当侵入口时，表皮葡萄球菌可为皮肤病灶与心内膜炎之致病原，而腐生葡萄球菌亦曾引起尿道感染。

动物源细菌分离和鉴定方法一、大肠杆菌、沙门氏菌的分离和鉴定1.范围本方法规定了用于耐药性测定的动物源大肠杆菌和沙门氏菌的分离和鉴定方法。

本方法适用于各种动物及其组织中大肠杆菌和沙门氏菌的分离和鉴定。

2.设备和材料2.1 冰箱：0℃-4℃和-20℃。

2.2 恒温培养箱：37℃±1℃和42℃。

2.3 显微镜：10×--100×。

2.4 采样管。

2.5 采样棉拭子、剪子。

2.6 灭菌试管。

2.7 平皿。

2.8 自动细菌鉴定仪。

2.9 API 20E试子条。

2.3 恒温摇床2.4 冻存管3.培养基和试剂3.1 运送培养基3.2 麦康凯琼脂3.3 沙门氏菌显色琼脂或XLT4琼脂3.4 营养肉汤3.5 鉴定用大肠杆菌、沙门氏菌阳性血清3.6 四硫磺酸盐增菌液（TTB）4.大肠杆菌和沙门氏菌分离和鉴定程序大肠杆菌和沙门氏菌的分离和鉴定程序见图1图1：大肠杆菌和沙门氏菌的分离和鉴定程序5.操作步骤5.1 采样到已选定的养殖场或屠宰场，用灭菌棉签采动物泄殖腔样品，置入1-2ml肉汤或运送培养基中0-4℃保存。

采发病动物组织时，用无菌操作取少量动物组织至于灭菌试管内，0-4℃保存，不超过48小时。

5.2 大肠杆菌的分离5.2.1 取泄殖腔拭子样品用接种棒直接接种于麦康凯琼脂平面，动物组织样品首先制成匀液，然后用接种棒接种于麦康凯琼脂平面，37℃培养18-24小时。

5.2.2 挑取粉红色、边缘光滑的大肠杆菌可疑菌落，用麦康凯培养基纯化一代，然后接种于营养琼脂平面37℃培养12-24小时，待进一步细菌鉴定。

5.3 沙门氏菌的分离5.3.1 将泄殖腔拭子或制成匀液的动物组织样品与增菌培养基按1:10的比例，接种于TTB增菌液中，42℃培养24小时。

5.3.2 将增菌液摇匀，用接种环接种于沙门氏菌显色培养基37℃培养22-24小时或XLT4琼脂上42℃培养22-24小时。

5.3.3 将沙门氏菌显色培养基上紫色的沙门氏菌可疑菌落或XLT4琼脂培养基上中央黑色边沿透明的沙门氏菌可疑菌落接种于营养琼脂平面37℃培养16-24小时，待进一步细菌鉴定。

化脓性球菌的鉴定流程化脓性球菌可是一群调皮的小坏蛋呢，要是在咱们身体里捣乱，那可就得好好把它们鉴定出来，然后想办法对付它们啦。

一、标本采集。

这就像是抓特务，得先找到它们的踪迹呀。

可以从不同的地方采集标本呢。

如果是皮肤上的化脓性感染，那就从脓汁入手呗。

要是怀疑是呼吸道感染跟化脓性球菌有关，那痰液就是我们要找的宝贝啦。

要是泌尿系统被它们盯上了，尿液标本可不能少。

采集标本的时候一定要小心哦，就像对待稀世珍宝一样，要是不小心污染了，那后面的鉴定可就麻烦啦。

二、直接涂片染色镜检。

把采集来的标本放在载玻片上，就像给小坏蛋们拍照一样。

革兰染色是个很常用的方法哦。

如果看到革兰阳性的球菌，而且是成串或者成堆排列的，那葡萄球菌就很可疑啦。

要是看到革兰阳性、成双排列的球菌，那肺炎链球菌可能就在其中哦。

还有革兰阴性的双球菌，像咖啡豆一样的，那脑膜炎奈瑟菌或者淋病奈瑟菌就有嫌疑啦。

这一步就像是初步筛选，把嫌疑最大的几个家伙先挑出来。

三、分离培养。

不管是哪种可疑的化脓性球菌，都得让它们在适合自己的环境里生长，这样才能看清楚它们的真面目。

不同的化脓性球菌对培养基的要求可不一样呢。

比如说葡萄球菌，在普通的琼脂培养基上就能长得很不错。

肺炎链球菌就有点挑啦，得在血琼脂培养基上，还得有5% - 10%的二氧化碳环境，就像它是个娇贵的小宝贝一样。

把标本接种到合适的培养基上，然后就等着它们长成一个个小菌落啦。

四、生化试验。

等菌落长出来之后，就要开始对它们进行更深入的了解啦。

这就像是跟它们聊天，问它们一些特别的问题，看看它们怎么回答。

对于葡萄球菌来说，凝固酶试验是很重要的哦。

如果凝固酶阳性，那就是致病性的葡萄球菌啦。

肺炎链球菌呢，可以做胆汁溶菌试验，要是阳性的话，就更能确定是它啦。

还有其他的化脓性球菌，也都有各自的生化反应特点，就像它们各自有独特的个性一样。

五、血清学试验。

有些化脓性球菌，我们还得通过血清学试验来确定它们的身份呢。

比如说脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，通过血清学的方法，可以准确地知道是哪种血清型在捣乱。

部分鸡场致病性葡萄球菌的分离鉴定药敏试验钱昌银;胡晓苗【摘要】[目的]从合肥地区部分养鸡场病鸡组织中分离葡萄球菌,并对其进行鉴定和药敏试验.[方法]从合肥地区部分养鸡场病鸡组织中分离葡萄球菌,并通过形态特征观察、溶血性试验、血浆凝固酶试验、生化试验对其进行鉴定,最后对其进行药敏试验.[结果]共分离到9株葡萄球菌.经鉴定,其中4株为金黄色葡萄球菌,在临床分离的葡萄球菌中为优势群株;在凝固酶阴性葡萄球菌中2株为头状葡萄球菌,孔氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌和沃氏葡萄球菌各1株.这说明金黄色葡萄球菌是合肥地区家禽养殖场中葡萄球菌类疾病的主要病原菌.药敏试验结果表明,所有分离菌株对12种临床常用抗生素均呈不同程度的耐药性,对青霉素、复方磺胺甲噁唑和恩诺沙星有较高的耐药性.凝固酶阴性葡萄球菌与金黄色葡萄球菌在抗药性方面存在差异.[结论]在用抗生素防治葡萄球菌病时需通过药敏试验进行药物筛选.该研究结果可为养鸡场用药提供参考.%[Objective] To isolate and identify staphylococcus in some chicken farms of Hefei,and make drug sensitivitytest.[Method]Staphylococcus was isolated from some chicken farms of Hefei and the isolated strains were identified by morphological observation,haemolytic test,plasma coagulase test and biochemical tests.And drug sensitivity test was made.[Result] 9 strains of staphylococcus were isolated.4 strains of them were identified as Staphylococcus aureus,which was dominant strains.Among negative staphylococcus strains in plasma coagulase test,there were 2 strains of Staphylococcus capitis,one strain of Staphylococcus cohnii,Staphylococcus simulans,Staphylococcus warneri.These results showed thatStaphylococcus aureus were main pathogen that caused Staphylococcus diseases in chicken farm of Hefei City.The drug sensitivity test results showed that all strains showed different tolerance to 12 common clinical antibiotics.All isolated strains showed higher drug tolerance to penicillin,compound sulfamethoxazole,enrofloxacin.The negative strains in plasma coagulase test and Staphylococcus aureus had difference drug tolerance.[Conclusion] Drugs should be screened out for preventing and controlling staphylococcus by drug sensitivity test.The research results can provide references for the drug administration in chicken farms.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2017(045)013【总页数】3页(P111-113)【关键词】葡萄球菌;分离;鉴定;耐药性;药敏试验【作者】钱昌银;胡晓苗【作者单位】合肥市动物疫病预防控制中心,安徽合肥230601;安徽农业科学院畜牧兽医研究所,安徽合肥230031【正文语种】中文【中图分类】S852.61葡萄球菌感染鸡后能引起关节炎、皮肤(包括翼尖)坏死、急性败血症状和雏鸡脐炎等。

猪肉和牛奶源葡萄球菌耐药性调查魏鸿堃;冯言言;刘健华;吕世明;曾振灵【摘要】2010年从贵州省猪肉和牛奶样品中分离鉴定出73株葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌50株,凝固酶阴性葡萄球菌23株.采用琼脂稀释法检测其对18种抗菌药物的敏感性,运用统计学方法比较分析金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的耐药性差异.结果显示,动物性食品源葡萄球菌耐药较严重,对临床上常用药物耐药率较高,且为多重耐药,其中乳源葡萄球菌的多重耐药现象较猪肉源葡萄球菌严重;猪肉源金黄色葡萄球菌主要对青霉素类、四环素和大环内酯类耐药,乳源金黄色葡萄球菌主要对青霉素类、头孢菌素类、大环内酯类、四环素、克林霉素、泰妙菌素及利福平耐药;猪肉源凝固酶阴性葡萄球菌主要对氨苄西林、苯唑西林和泰妙菌素耐药,乳源凝固酶阴性葡萄球菌的耐药谱与乳源金黄色葡萄球菌类似.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2013(040)010【总页数】4页(P203-206)【关键词】金黄色葡萄球菌;凝固酶阴性葡萄球菌;耐药性;猪肉;牛奶【作者】魏鸿堃;冯言言;刘健华;吕世明;曾振灵【作者单位】华南农业大学兽医学院,广东广州 510642;华南农业大学兽医学院,广东广州 510642;华南农业大学兽医学院,广东广州 510642;贵州大学动物科学学院,贵州贵阳 550025;华南农业大学兽医学院,广东广州 510642【正文语种】中文金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种能引起人类和动物感染的重要致病菌，也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一。

据报道，正常人群中金黄色葡萄球菌带菌率可达到30%～80%，并可通过多种途径和方式引起食品的污染，尤其是通过食品加工人员的手污染最为多见（贺连华等，2006），近年食源致病菌的耐药性问题引起重视。

食物链是细菌耐药性产生与散播的重要环节，研究结果表明，耐药菌可直接或通过食物链间接感染人，并具有将相同的抗药特性通过食物链转移给人体病原菌的潜在危险（Normanno等，2007）。

沃氏葡萄球菌VITEK鉴定分析沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，主要存在于环境及人与动物的皮肤和粘膜上，是一种革兰氏阳性的球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状。

有报道认为沃氏葡萄球菌与人类的动脉栓塞和牙周炎存在一定的关系，但有关沃氏葡萄球菌的研究较少。

VITRK全自动微生物鉴定分析系统是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一，已被许多国家定为细菌最终鉴定设备，并获美国食品药品管理局（FDA）认可。

本文采用VITEK对日常检测中分离到的7株沃氏葡萄球菌进行鉴定，旨在为沃氏葡萄球菌的进一步研究提供数据参考。

1 材料与方法1.1 试验材料试验中所需所有试剂均购自北京陆桥技术有限责任公司，VITEK 2 全自动微生物分析系统及相关配套试剂购自法国生物梅里埃公司。

1.2 方法挑取营养琼脂上的沃氏葡萄球菌，制成一定浓度的悬浊液，按照VITEK2操作说明进行上机检测。

2 结果VITEK 2全自动微生物鉴定系统判断结果均为沃氏葡萄球菌，生化编码分别为000004010060271（可能性为94%）、010046012270231（可能性为93%）、010006002660231（可能性为97%）、010002012661231（可能性为96%）、000004000260231（可能性为95%）、010006002670231（可能性为95%）和010006010060231（可能性为97%），但在43项生化指标中有12项存在差异，具体结果如下：生化名称 1 2 3 4 5 6 7 ADH1 精氨酸双水解酶1 - + + + - + + BGURr β-葡萄糖醛酸酶- + - - - - - PyrA 焦谷氨酸芳胺酶- + + + - + + BGUR β-D-葡萄糖醛酸酶+ + + - + + + URE 尿素酶+ + - + - - + dRIB D-核酸- (-) - - - (-) - ILATK L-乳糖盐产碱- + + + - + - dMAL D-麦芽糖- + + + + + - BACI 杆菌肽耐受- - + + - + - NOVO 新生霉素耐受- + - - - + - dMNE D-甘露糖- - - + - - - ADH2s 精氨酸双水解酶2 + - - - - - -3 分析与讨论沃氏葡萄球菌是金黄色葡萄球菌检测工作中的主要干扰菌之一，由于沃氏葡萄球菌与人类某些疾病存在一定的关系，对沃氏葡萄球菌进行研究非常重要。

对虾肠道中T-2毒素降解菌的分离纯化与鉴定周浪花;王雅玲;张春辉;孙力军;徐德峰;刘颖;毕思远【摘要】从新鲜健康的凡纳滨对虾肠道中分离筛选和鉴定降解T-2毒素微生物,为日后进一步研究T-2毒素(T-2)降解菌株的相关特性及其分布规律提供参考.取新鲜健康的凡纳滨对虾肠道,通过对该肠道菌群进行定性定量分析;从T-2与对虾肠道共培养液分离纯化得到6株优势菌株;将6株优势菌株分别和T-2在胰蛋白胨大豆(TSB)肉汤中进行共培养,采用LC-MS/MS法检测该培养液前后T-2含量,筛选得到T-2降解菌株,并用微生物鉴定仪VITEK2和16S rRNA鉴定目标菌株.TSB肉汤中检测T-2的标准曲线线性良好(R=0.9995),T-2加标回收率为91.5％～108.4％,检测限为0.01 ng/mL,相对标准偏差为0.0％～8.4％和精密度为94.5％～107％.对虾肠道中的蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)和阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)对T-2毒素降解率最高,分别达到91.8％和78.8％.%T-2 toxin (T-2)degradable microbes was to isolate and screen from fresh and healthy intestine of white prawn (Litopenaneus vannamei),to provide theoretical foundation for further study on its related features and distribu-tion law of T-2 toxin-degradable strains. Intestine of fresh healthy white prawn (L. vannamei)was taken,the intesti-nal microbial population was analyzed qualitatively and quantitatively:six ascendant strains were obtained by co-cul-tured in T-2 with the shrimp intestinal tract cultural liquid,the six ascendant strains were co-cultured in tryptone soy broth (TSB)with T-2 respectively;then adopted LC-MS/ MS method to detect T-2 content before and after cultiva-tion,and screened obtained the T-2 degradable strains. And identified the targeted strains with VITEK2 microorgan-ism identificationinstrument,and characterized by 16s rRNA sequencing. The results showed that the standard curve of T-2 had a good linear (R = 0. 9995)detected in TSB broth. Its fortified recoveries were at 91. 5％～ 108. 4％, limited detection was 0. 01 ng/ mL,the relative standard deviation was 0. 0％～ 8. 4％ and the accuracy was 94. 5％～107％ . Bacillus and Enterobacter cloacae in the shrimp intestine were the highest to degrade T-2,and reached up to 91. 8％ and 78. 8％,respectively.【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2017(037)006【总页数】7页(P50-56)【关键词】肠道细菌;T-2毒素;LC-MS/MS;生化特性【作者】周浪花;王雅玲;张春辉;孙力军;徐德峰;刘颖;毕思远【作者单位】广东海洋大学食品科技学院广东省水产品加工与安全重点实验室广东普通高等学校水产品深加工重点实验室,广东湛江 524088;广东海洋大学食品科技学院广东省水产品加工与安全重点实验室广东普通高等学校水产品深加工重点实验室,广东湛江 524088;广东海洋大学食品科技学院广东省水产品加工与安全重点实验室广东普通高等学校水产品深加工重点实验室,广东湛江 524088;广东海洋大学食品科技学院广东省水产品加工与安全重点实验室广东普通高等学校水产品深加工重点实验室,广东湛江 524088;广东海洋大学食品科技学院广东省水产品加工与安全重点实验室广东普通高等学校水产品深加工重点实验室,广东湛江524088;广东海洋大学食品科技学院广东省水产品加工与安全重点实验室广东普通高等学校水产品深加工重点实验室,广东湛江 524088;深圳市通量检测科技有限公司,广东深圳 518012【正文语种】中文【中图分类】Q93-331T-2毒素 (T-2) 属于单端孢霉烯族的A型化合物，是三线镰刀菌和拟枝孢镰刀菌的代谢产物[1]，毒性强，稳定性好，加热至沸腾数小时毒性不减。

实验二球菌的分离培养及微生物学鉴定病原性球菌主要指葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌及淋球菌。

这些细菌经常引起人类的化脓性疾病，故又称化脓性球菌。

在临床进行微生物学检查时，根据这些细菌各不相同的形态、染色、培养等特点，即可做出初步诊断。

当难以确定它们的致病性或耐药性时，则需作进一步的实验来鉴定。

几种病原性球菌的主要形态、培养特点见表2-1。

表2-1 病原性球菌的主要形态及培养1、葡萄球菌属（一）目的要求1．掌握葡萄球菌的鉴定方法。

2．熟悉葡萄球菌的生物学性状。

（二）器材和试剂1．菌种金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。

2．培养基普通琼脂平板、血琼脂平板、甘露醇发酵管、甲苯胺蓝核酸琼脂、10g ／L盐水琼脂，液体培养基。

3．试剂双氧水（H202）、革兰染色液。

4．其他新鲜兔血浆（或人血浆）、新生霉素纸片、标准肠毒素、幼猫、抗肠毒素血清。

（三）步骤和方法1．形态观察取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许与载玻片上生理盐水磨匀，革兰染色后镜检可见革兰阳性葡萄状排列的球菌。

2．菌落观察取三种葡萄球菌分别划线分离接种普通琼脂平板和血琼脂平板，35°C 孵育18～24h后观察菌落。

三种葡萄球菌在普通琼脂平板上形成中等大小、圆形、表面光滑、边缘整齐、不透明菌落，并可产生不同的脂溶性色素，如金黄色葡萄球菌呈现金黄色色素、表皮葡萄球菌大多呈白色色素、腐生葡萄球菌大多呈柠檬色素。

三种葡萄球菌在血琼脂平板上出现的菌落类似它们在普通琼脂平板上的菌落，但金黄色葡萄球菌菌落周围有明显溶血环，而表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌菌落周围无溶血环。

3．生化反应（1）血浆凝固酶试验：①原理：金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白，附着于细菌表面，在玻片上形成凝块；也可使试管中血浆发生凝固。

②方法：玻片法：取未稀释的兔血浆和生理盐水各－－滴分别滴于载玻片上，挑取金黄色葡萄球菌菌落少许分别与它们混合，立即观察结果。

牙膏中沃氏葡萄球菌的分离与鉴定摘要：采用金黄色葡萄球菌检测方法从牙膏中分离出一种葡萄球菌，应用VITEK 2全自动微生物分析系统鉴定为沃氏葡萄球菌，通过对其形态和生化特性进行鉴定，以期为今后沃氏葡萄球菌的深入研究提供参考依据。

关键词：葡萄球菌；分离；鉴定；生化鉴定葡萄球菌属广泛的分布于自然界，是一种革兰氏阳性的球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状，是医院感染的重要病原菌。

沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，有报道从人外伤分泌物中分离出沃氏葡萄球菌[1]，并有沃氏葡萄球菌致动脉栓塞的报道[2]。

但也有学者在难治性牙周炎的龈下菌丛中发现了沃氏葡萄球菌[ 3-4 ]，并认为沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，王艳等[6]应用PCR技术克隆了沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列。

但有关沃氏葡萄球菌的研究很少，本文在对牙膏进行金黄色葡萄球菌检测时，检出沃氏葡萄球菌，并对其生化特性进行研究，以期为今后沃氏葡萄球菌的研究提供参考。

1 材料与方法1.1 材料检验样品为旅游用牙膏（3g/支），来自送检样品，包装完好。

1.2 仪器和设备所有试验用培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司，VITEK 2 全自动微生物分析系统及相关配套试剂购自法国生物梅里埃公司。

1.2 方法检验方法依据《化妆品卫生规范》（2007版）中金黄色葡萄球菌检测方法进行。

操作步骤为：1.2.1 样品的制备称取10g样品，加到装有玻璃珠及90ml灭菌生理盐水的三角烧瓶中，充分振荡均匀，静置15min。

用其上清液作为1：10的检液。

1.2.2 增菌取1：10稀释的样品接种到90ml SCDLP液体培养基中，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2h。

1.2.3 分离从增菌液中取1-2接种环，划线接种在Baird Parker氏培养基，置36℃±1℃培养24h-48h。

1.2.4 纯化挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2h。

沃氏葡萄球菌VITEK鉴定分析沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，主要存在于环境及人与动物的皮肤和粘膜上，是一种革兰氏阳性的球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状。

有报道认为沃氏葡萄球菌与人类的动脉栓塞和牙周炎存在一定的关系，但有关沃氏葡萄球菌的研究较少。

VITRK全自动微生物鉴定分析系统是目前世界上最先进、自动化程度最高的细菌鉴定仪器之一，已被许多国家定为细菌最终鉴定设备，并获美国食品药品管理局（FDA）认可。

本文采用VITEK对日常检测中分离到的7株沃氏葡萄球菌进行鉴定，旨在为沃氏葡萄球菌的进一步研究提供数据参考。

1 材料与方法1.1 试验材料试验中所需所有试剂均购自北京陆桥技术有限责任公司，VITEK 2 全自动微生物分析系统及相关配套试剂购自法国生物梅里埃公司。

1.2 方法挑取营养琼脂上的沃氏葡萄球菌，制成一定浓度的悬浊液，按照VITEK2操作说明进行上机检测。

2 结果VITEK 2全自动微生物鉴定系统判断结果均为沃氏葡萄球菌，生化编码分别为000004010060271（可能性为94%）、010046012270231（可能性为93%）、010006002660231（可能性为97%）、010002012661231（可能性为96%）、000004000260231（可能性为95%）、010006002670231（可能性为95%）和010006010060231（可能性为97%），但在43项生化指标中有12项存在差异，具体结果如下：生化名称 1 2 3 4 5 6 7 ADH1 精氨酸双水解酶1 - + + + - + + BGURr β-葡萄糖醛酸酶- + - - - - - PyrA 焦谷氨酸芳胺酶- + + + - + + BGUR β-D-葡萄糖醛酸酶+ + + - + + + URE 尿素酶+ + - + - - + dRIB D-核酸- (-) - - - (-) - ILATK L-乳糖盐产碱- + + + - + - dMAL D-麦芽糖- + + + + + - BACI 杆菌肽耐受- - + + - + - NOVO 新生霉素耐受- + - - - + - dMNE D-甘露糖- - - + - - - ADH2s 精氨酸双水解酶2 + - - - - - -3 分析与讨论沃氏葡萄球菌是金黄色葡萄球菌检测工作中的主要干扰菌之一，由于沃氏葡萄球菌与人类某些疾病存在一定的关系，对沃氏葡萄球菌进行研究非常重要。